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Medicine

2 पोत रोड़ा / Hypotension: ग्लोबल मस्तिष्क ischemia की चूहा मॉडल

Published: June 22, 2013 doi: 10.3791/50173
Automatic Translation
1,2,3, 2,3
1Department of Emergency Medicine, Wayne State University School of Medicine, 2Cardiovascular Research Institute, Wayne State University School of Medicine, 3Department of Physiology, Wayne State University School of Medicine

Summary

प्रणालीगत हाइपोटेंशन के साथ मिलकर द्विपक्षीय मन्या रोड़ा प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य गंभीरता के साथ हिप्पोकैम्पस को नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप, चूहे में वैश्विक मस्तिष्क ischemia के उत्पादन करता है. पशु विषयों मस्तिष्क क्षति की उम्मीद के मुताबिक पैटर्न के साथ प्रभावित कर रहे हैं, वे जल्दी से ठीक हो, और मृत्यु दर अपेक्षाकृत कम होता है.

Introduction

हृदय की गिरफ्तारी और स्ट्रोक का एक परिणाम के रूप में मस्तिष्क क्षति मृत्यु और लंबी अवधि विकलांगता का एक प्रमुख कारण है. हृदय की गिरफ्तारी के शिकार लोगों के लिए हृदय पुनर्जीवन इन रोगियों के 60% के बाद अस्पताल में मर जाते हैं तो कम से कम व्यापक मस्तिष्क क्षति का एक परिणाम के रूप में अमेरिका 7,8 में प्रति वर्ष लगभग 70,000 रोगियों में सहज संचलन बहाल करने में सफल होता है और जबकि केवल 3-10% पुनर्जीवित रोगियों की 9,10 अपने पूर्व जीवन शैली को फिर से शुरू कर सकते हैं. जाहिर है, वैश्विक मस्तिष्क ischemia के बाद और तंत्रिका संबंधी आघात को कम करने के लिए उपचारात्मक उपायों डिजाइनिंग मस्तिष्क क्षति के लिए नेतृत्व कि तंत्र को समझने के महत्व का है.

मस्तिष्क ischemia के कई तरीकों का उपयोग मॉडलिंग की जा सकती. सबसे अधिक, मस्तिष्क ischemia के इस तरह एक केंद्र इस्कीमिक स्ट्रोक 11,12 उत्पादन, मस्तिष्क, मध्य मस्तिष्क धमनी में एक प्रमुख रक्त वाहिका occluding द्वारा कृंतक में उत्पादन किया है. नैदानिक ​​महत्वपूर्ण जबकि,फोकल मस्तिष्क ischemia के हृदय की गिरफ्तारी / पुनर्जीवन द्वारा उत्पादित मस्तिष्क क्षति का अध्ययन करने का सही तरीका नहीं है. इस नैदानिक ​​प्रतिमान मॉडल को पूरे मस्तिष्क इस्कीमिक रक्त प्रवाह के reintroduction द्वारा पीछा किया जाना चाहिए. बारीकी से इस नैदानिक ​​प्रस्तुति की नकल करने के लिए, जांचकर्ताओं प्रयोगात्मक सीपीआर और defibrillation 13,14 साथ पुनर्जीवन द्वारा पीछा हृदय की गिरफ्तारी प्रेरित. इस मॉडल नैदानिक ​​प्रासंगिक है, लेकिन अप्रत्याशित पुनर्जीवन बार परिवर्तनशीलता को बढ़ा सकते हैं और व्याख्या करने के लिए डेटा विश्लेषण कठिन बना सकता है. इसके अतिरिक्त, इस मॉडल के आगे एक परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए आवश्यक पशु संख्या बढ़ रही है, एक उच्च मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है. एक अधिक, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य संगत, और survivable अपमान में वैश्विक ischemia और / या reperfusion के लिए मस्तिष्क की प्रतिक्रिया की जांच कर पसंद किया जा सकता.

प्रणालीबद्ध कुछ रक्त के प्रवाह को बनाए रखने, जबकि ग्लोबल ischemia के मस्तिष्क में प्रेरित किया जा सकता है. Investigatio अनुमति देता है, जबकि मृत्यु दर को कम कर देता हैएन मस्तिष्क 2 में ऊतकों को नुकसान के तंत्र की. वैश्विक मस्तिष्क ischemia के उत्पादन के लिए, यह बीच में या बहुत मस्तिष्क, आंतरिक मन्या धमनियों और कशेरुका धमनियों की आपूर्ति करने वाले सभी चार जहाजों में प्रवाह को सीमित करने के लिए आवश्यक है. इन जहाजों में एक anastomotic पाश रूपों जो विलिस के सर्किल नामक एक संवहनी संरचना के माध्यम से रक्त के प्रवाह के साथ मस्तिष्क की आपूर्ति. इस संवहनी वास्तुकला मस्तिष्क समीपस्थ संवहनी रोड़ा की घटना में छिड़काव बनाए रखने के लिए अनुमति देता है. इसलिए, सभी अंशदायी वाहिकाओं के माध्यम से मस्तिष्क, रक्त प्रवाह की पूरी ischemia के लिए प्रेरित करना चाहिए होते हैं. कैरोटिड धमनी रोड़ा एक वांछित अवधि के लिए धमनीविस्फार क्लिप का एक न्यूनतम इनवेसिव उदर गर्दन कट नीचे और अनुप्रयोग का उपयोग कर पूरा किया जा सकता है. वे कशेरुका स्तंभ की अनुप्रस्थ foramina में incased रहे हैं कशेरुका धमनियों के माध्यम से रक्त के प्रवाह में रुकावट, मुश्किल हो सकता है. जांचकर्ता मन्या से पहले कशेरुका धमनियों 24-48 घंटा electrocauterizing द्वारा इस को संबोधित कियारोड़ा और मस्तिष्क ischemia (4VO मॉडल) 15. इस दृष्टिकोण के विपरीत, स्मिथ एट अल. को कम करने से वैश्विक मस्तिष्क ischemia के उत्प्रेरण रक्त प्रवाह 2 खो दिया है या बहुत कम है जहां एक मुद्दे पर कशेरुका धमनियों के माध्यम से छिड़काव कम करने के लिए 40 mmHg को प्रणालीबद्ध धमनी रक्तचाप (एमएपी) मतलब है की एक विधि विकसित . मन्या रोड़ा साथ युग्मित, इस विधि का बारीकी से हृदय की गिरफ्तारी के बचे कि mimics कि मस्तिष्क क्षति की एक पद्धति है, जिसके परिणामस्वरूप अग्रमस्तिष्क भर ischemia के उत्पादन करता है. इस पद्धति का एक और शोधन में, हम यहां उपस्थित मॉडल 30 mmHg पर तंग एमएपी विनियमन ± 1mHg ischemia के पूरे 8 मिनट के दौरान की आवश्यकता है. हम स्मिथ एट अल द्वारा डिजाइन मूल तकनीक का कम मृत्यु दर के संरक्षण, जबकि इस परिवर्तन के इस मॉडल से प्रेरित मस्तिष्क क्षति के reproducibility बेहतर बनाता पाया.

कोशिका मृत्यु और ऊतकों को नुकसान की समग्र सीमा के सटीक फेनोटाइप के कारणयहाँ प्रस्तुत मॉडल इस्कीमिक अवधि 16 पर सीधे निर्भर हैं. सीए 1 न्यूरॉन्स reperfusion की चरण 15,17 दौरान चिकित्सकीय हस्तक्षेप के लिए एक अस्थायी खिड़की है, सुझाव है कि कोशिका मृत्यु में देरी, ischemia के 8 मिनट एक्ज़िबिट बाद. Reperfusion के शुरुआत में, न्यूरॉन्स जल्दी समारोह पाने और कोई तत्काल कोशिका मृत्यु 18 detectable है. हालांकि इस अपमान का कारण बनता है कोशिका मृत्यु cascades की प्रेरण (apoptosis) के उस reperfusion की 3,19 के 4-6 घंटे के बीच साइटोक्रोम ग, सहित माइटोकांड्रिया से apoptogenic प्रोटीन की रिहाई में culminate. Reperfusion के घंटा 6 और 24 के बीच, सीए 1 हिप्पोकैम्पस के न्यूरॉन्स सेल निधन के लिए प्रतिबद्ध है, और apoptotic सेल मौत कार्यक्रम 19 को मार डाला है. यह इस्कीमिक चोट के लिए जिम्मेदार कोशिका मृत्यु फेनोटाइप बेहद विवादास्पद है कि ध्यान दिया जाना चाहिए. अन्य दूसरों apopt रिपोर्ट जबकि प्रारंभिक अध्ययन, परिगलन प्राथमिक कोशिका मृत्यु फेनोटाइप 20,21 है सुझाव दिया हैप्रिंसिपल तंत्र 22,23 रूप Osis. कुल में, मौजूदा सबूत कोशिकाओं क्लासिक apoptosis से नेक्रोसिस को लेकर सेल मौत phenotypes की एक स्पेक्ट्रम के मरने का सुझाव है कि. कोशिका मृत्यु के विशिष्ट विधा प्रत्येक phenotype के योगदान की डिग्री अन्य कारकों 24,25 बीच, अपमान की गंभीरता पर निर्भर करता है के साथ, कई कारकों पर निर्भर है. Reperfusion के 24 घंटे से, मर कोशिकाओं pyknotic नाभिक, एकत्रित सेलुलर सामग्री के स्पष्ट सबूत के साथ संघनित साइटोसॉल, और कार्यात्मक मितोचोन्द्रिअल आकारिकी की हानि होती है. मृत कोशिकाओं को आगे, टूट ऐसी मैक्रोफेज और / या microglia के रूप में प्रतिरक्षा कोशिकाओं से घिरा हुआ है, और सीए 1 हिप्पोकैम्पस क्षेत्र से मंजूरी दे दी है. Reperfusion के 4-7 दिनों तक, मृत कोशिकाओं को निकाल दिया, और सब कि रहता भड़काऊ कोशिकाओं रहे हैं और glial कोशिकाओं 17,26 सक्रिय कर रहे हैं. इसलिए, reperfusion के 7 दिनों सीए 1 हिप्पोकैम्पस neuronal मौत में सरल, गैर विशिष्ट सेल दाग का उपयोग मात्रा निर्धारित किया जा सकता है जहां एक इष्टतम समय का प्रतिनिधित्व करता हैcresyl बैंगनी या hemotoxylin-eosin समेत और शब्द के भागों शामिल किए जाने के मानदंडों के आधार पर गिना. यह देर से reperfusion के अंतराल में शेष कोशिकाओं को इस प्रकार मस्तिष्क क्षति की एक सूची प्रदान करते हैं, जीवित कोशिकाओं के रूप में गिना जा सकता है.

इस मॉडल उपचारात्मक उपायों का परीक्षण करने के लिए उपयोग किया जा रहा है, यह प्रयोगात्मक डिजाइन सीढ़ी मापदंड (स्ट्रोक थेरेपी शैक्षणिक उद्योग गोलमेज) 27 पालन का सुझाव दिया है. डिजाइन और एक अध्ययन का आयोजन होता है जब इन दिशानिर्देशों का पालन किया जाना चाहिए, लेकिन यहाँ पर चर्चा नहीं कर रहे हैं.

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Protocol

1. तैयारी

सभी पशु प्रयोगों संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुरूप है और पहले दीक्षा के लिए एक संबंधित जानवरों की देखभाल समिति से अनुमोदन प्राप्त करना चाहिए. यहाँ प्रस्तुत सभी प्रक्रियाओं वेन स्टेट यूनिवर्सिटी संस्थागत पशु की देखभाल द्वारा अनुमोदित और प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए और के लिए अमेरिकी सरकार ने सिद्धांतों के लिए गाइड में आगे डाल के रूप में उपयोग समिति और जानवरों की नैतिक उपचार पर दिशा निर्देशों का पालन किया गया है परीक्षण, अनुसंधान और प्रशिक्षण में प्रयुक्त हड्डीवाला जानवरों के उपयोग और देखभाल. सर्जरी शुरू करने से पहले, आवश्यक शल्य चिकित्सा सामग्री और एक सर्जरी वसूली के पिंजरे तैयार करते हैं. यह प्रक्रिया एक अस्तित्व सर्जरी है और यह इसलिए बाँझ तकनीक का अभ्यास करने के लिए आवश्यक है.

  1. एक संवहनी कैथेटर बनाने के लिए, पॉलीथीन 50 (PE50) टयूबिंग की एक 8 इंच की लंबाई में कटौती और एक अंत में एक पा 23 गेज सुई डालने. कैथेटर्स पूर्व निष्फल या ख में खरीदा व्यक्तिगत रूप से खरीदा जा सकता हैजरूरत के रूप में ulk और फिर इथाइलीन ग्लाइकॉल साथ निष्फल.
  2. एक तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी के एक बंदरगाह पर इस सुई को सुरक्षित और विपरीत बंदरगाह पर एक और तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी जगह है. के माध्यम से हेपरिन खारा समाधान चलाकर stopcocks और कैथेटर Heparinize. पानी निकलने की टोंटी सीधा और कैथेटर के लिए बाहर पर एक 10 मिलीलीटर खारा सिरिंज कनेक्ट. दबाव transducer ट्यूब कैथेटर को बाहर का पानी निकलने की टोंटी कनेक्ट, नमक के साथ सिस्टम को भरने के लिए और किसी भी हवाई बुलबुले को दूर.
  3. पशु उपयोग के नियमों के अनुसार वसूली के पिंजरे सेटअप. वसूली के कमरे शांत हो सकता है और कम यातायात होनी चाहिए. vaporized isoflurane के फिल्टर करने के लिए डाउनड्राफ्ट मेज या इसी तरह गैस सफाई व्यवस्था पर महत्वपूर्ण मोड़ शुरुआत सर्जरी से पहले.

2. सर्जिकल तैयारी

Sprague-Dawley चूहों (300-350 ग्राम) वैश्विक अग्रमस्तिष्क ischemia के 2VOH मॉडल में इस्तेमाल किया जाता है. संज्ञाहरण प्रेरित किया और बनाए रखा isoflurane के साथ और समर्थन कर रहा हैketamine के एक उप अलग करनेवाला खुराक के साथ plemented. हम अकेले isoflurane के द्वारा बनाए रखा संज्ञाहरण बाद सेशन वसूली के दौरान जब्ती की एक वृद्धि की घटना का कारण बनता है कि देखा है. बरामदगी इस मॉडल के reproducibility प्रभाव होगा जो तंत्रिका क्षति और मृत्यु दर में योगदान कर सकते हैं. Ketamine के साथ संज्ञाहरण सप्लीमेंट isoflurane की बहुत कम मात्रा संज्ञाहरण के एक शल्य ग्रेड तक पहुँचने के लिए अनुमति देता है. एक homeostatic थर्मल कंबल का प्रयोग कोर तापमान की सख्त नियमन की अनुमति देता है. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया मन्या धमनी कट नीचे और अलगाव, और ऊरु धमनी कट नीचे और केन्युलेशन जरूरत पर जोर देता.

यह प्रत्येक व्यक्ति शल्य प्रक्रिया के दौरान विस्तृत रिकॉर्ड रखने के लिए महत्वपूर्ण है ध्यान दें. कोर तापमान, रक्तचाप, या सर्जरी करने के दौरान या पहले होती है कि अन्य शारीरिक चर में परिवर्तन तेजी से परिणाम बदल सकता है, और रिकॉर्ड व्यक्तियों और समूहों के बीच प्रक्रियात्मक निरंतरता है सुनिश्चित करने के लिए विश्लेषण किया जा सकता है. स्थिरतापशु की शारीरिक मापदंडों में सर्जरी से पहले जानवरों के उपवास से सुधार किया जा सकता है. प्रयोगकर्ता सबसे लगातार पूर्व संचालित hemodynamics और अपनी पढ़ाई के लिए सीरम ग्लूकोज एकाग्रता में परिणाम है कि विधि का निर्धारण करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है.

  1. एक प्रेरण कक्ष में चूहा रखकर संज्ञाहरण प्रेरित और 5 isoflurane% पर एक 30% oxygen/70% नाइट्रस ऑक्साइड के मिश्रण के साथ भरें. 2.5 isoflurane% से 30% oxygen/70% नाइट्रस ऑक्साइड के मिश्रण के साथ एक कृंतक कंठदर्शी और हवादार का उपयोग कर, एक 12 गेज कैथेटर के साथ नली लगाना. वेंटिलेशन दर सांस प्रति 2.5 मिलीग्राम प्रति मिनट 80 साँस होना चाहिए.
  2. खारा में ketamine के एक अंतर peritoneal इंजेक्शन (20 मिग्रा / किग्रा) दीजिए और 1.5% की isoflurane कम. महत्वपूर्ण यह संज्ञाहरण के पर्याप्त शल्य विमान सुनिश्चित करने की प्रक्रिया के दौरान संज्ञाहरण के स्तर पर नजर रखने के लिए आवश्यक है. पेडल पलटा निगरानी रखते हुए, हिंद अंग अंकों के बीच संज्ञाहरण, चुटकी का गहराई से जांच करने के लिए. पलटा हैअनुपस्थित, संज्ञाहरण पर्याप्त है. ऊरु धमनी की केन्युलेशन के बाद, रक्तचाप संज्ञाहरण स्तर का एक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. बाद इस्कीमिक बरामदगी की क्षमता को कम करने के लिए संज्ञाहरण के एक शल्य चिकित्सा विमान जबकि बनाए रखने के रूप में कम के रूप में isoflurane की खुराक संभव रखें.
  3. चीरों गर्दन पर और श्रोणि क्षेत्र में बनाया जाएगा. जांघ पेट से मिलता है जहां गर्दन और सही श्रोणि, दाढ़ी. ओरिएंट समस्थिति थर्मामीटरों कंबल पर एक लापरवाह स्थिति में चूहे और शल्य चिकनाई का प्रयोग गुदा थर्मामीटर डालें. सुरक्षात्मक नेत्र स्नेहक लागू करें. एक 60 वाट के बल्ब के तापमान को नियंत्रित कर सकते हैं. बल्ब पशु से 8 इंच के करीब से कभी नहीं होना चाहिए. सामान्य शारीरिक तापमान ऊपर या नीचे महत्वपूर्ण तापमान (37 डिग्री सेल्सियस) बहुत अंतिम तंत्रिका संबंधी क्षति को प्रभावित कर सकते हैं. 37 में कोर तापमान बनाए रखने डिग्री सेल्सियस ± 0.5 डिग्री सेल्सियस
  4. Betadine के साथ चीरा क्षेत्रों रगड़ो और 70% इथेनॉल के साथ कुल्ला. इस tw दोहराएँअधिक बार ओ. चूहे पर एक शल्य चिकित्सा क्षेत्र, जगह और चीरा क्षेत्रों का पर्दाफाश करने के लिए छेद में कटौती. महत्वपूर्ण मन्या और ऊरु धमनियों वसूली और पोस्ट ऑपरेटिव analgesia के लिए कम से कम बाद में जरूरत के सुधार होगा जो आसपास मांसलता, के लिए किसी भी आघात के कारण के बिना अलग किया जा सकता है.
  5. पर्याप्त संज्ञाहरण अपूर्ण, दो टूक sternohyoid मांसपेशी, श्वासनली को कवर प्रमुख midline पेशी समूह तक पहुँचने तक लार ग्रंथियों के बीच काटना hemostats का उपयोग कर रहा है, तो, गर्दन के साथ एक midline चीरा बनाने के लिए स्केलपेल एक नहीं 10 का उपयोग करें. फिर सावधान कुंद विच्छेदन तकनीक का उपयोग, द्विपक्षीय, sternomastoid से sternohyoid की प्रमुख मांसपेशी समूहों को अलग. इन दो समूहों की मांसपेशी कैरोटिड धमनी जिसमें neurovascular बंडल का पता लगाने के लिए एक मील का पत्थर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है जो एक त्रिकोणीय खरोज के रूप में. आंतरिक और बाह्य मन्या धमनियों में आम मन्या शाखाओं. द्वि को समीपस्थ आम मन्या धमनी को अलगविशाखन.
  6. धीरे इन दोनों की मांसपेशियों को अलग और मन्या धमनी खोजें. एक नाड़ी के लिए इस पोत देखो की पहचान में मदद करने के लिए. पोत के नीचे 3-0 रेशम सीवन के एक ~ 5 इंच लंबाई गुजर द्वारा दोनों पक्षों पर मन्या धमनियों अलग. . जहाजों से प्रावरणी स्पष्ट दूर वेगस तंत्रिका और सहानुभूति जंजीरों ग्रीवा neurovascular बंडल में शामिल हैं सावधानी और देखभाल कैरोटिड धमनी अलग है जब यह करने के लिए नुकसान के कारण से बचने के लिए लिया जाना चाहिए.
  7. हिंद अंग जांघ की मांसपेशियों पेट से मिलता है जहां खरोज के साथ, कमर पर एक दूसरे चीरा बनाने के लिए कैंची का प्रयोग करें. आप वंक्षण बंधन तक पहुंचने तक जांघ की मांसपेशियों के साथ, पेट की मांसपेशियों के नीचे काटना. इस ऊरु neurovascular बंडल का खुलासा होगा. ध्यान से पोत के नीचे 3-0 रेशम सीवन के एक ~ 5 इंच लंबाई पारित करके ऊरु धमनी को अलग. उजागर पोत के 5-7 मिमी छोड़ने प्रावरणी स्पष्ट दूर.
  8. उजागर धमनी के बाहर अंत में एक स्थायी गाँठ बाँध.
  9. सिखाया टांके खींच कर, रक्त के प्रवाह को रोक देना धमनी के समीपस्थ अंत में सीवन पर कर्षण लागू करें. नेत्र कैंची से पोत के ऊपरी भाग में एक छोटा सा चीरा. पोत पर अपर्याप्त कर्षण भारी कर्षण लगाने से रोका जा सकता है, जो खून बह रहा में परिणाम होगा. पानी निकलने की टोंटी में कैथेटर बंद करें.
  10. एक संवहनी परिचयकर्ता का प्रयोग, पोत चीरा अतीत और midline ओर, बर्तन में 7-9 मिमी कैथेटर टयूबिंग डालें. कैथेटर वांछित दूरी पर रखा जाता है, तो यह जगह में सुरक्षित करने के लिए पोत और कैथेटर के आसपास ढीली गाँठ बाँध. पोत से कर्षण निकालें और यह स्वाभाविक रूप से झूठ बोलने के लिए अनुमति देते हैं.
  11. नसों के 0.3 मिलीलीटर हेपरिन (खारा में 100U/ml), प्रशासन. किसी भी फ्लशथक्के रोकने के लिए नमक की एक छोटी राशि के साथ कैथेटर के खून बाहर. प्रेशर मॉनीटर पर बारी और जांच उपकरणों. ट्रांसड्यूसर रक्तचाप का पता लगाने के लिए अनुमति देने के लिए stopcocks खोलें. रक्तचाप की सटीक मापन प्राप्त करने के लिए, व्यवस्था की स्थिति अंशांकन के बाद बदला नहीं जाना चाहिए.
  12. Isoflurane खुराक 130 mmHg को 110 mmHg के एक मतलब धमनी रक्तचाप (एमएपी) उपज के लिए समायोजित किया जाना चाहिए. इस नक्शे संज्ञाहरण के पर्याप्त शल्य चिकित्सा विमान का संकेत किया जाना चाहिए.

3. Ischemia प्रोटोकॉल

जैसा कि पहले उल्लेख, चार जहाजों मस्तिष्क के लिए छिड़काव की आपूर्ति. कशेरुका धमनियों विलिस के सर्किल के माध्यम से क्षतिपूर्ति करेगा क्योंकि दो मन्या धमनियों के समीपस्थ रोड़ा मस्तिष्क ischemia में परिणाम नहीं होगा. यह प्रेरित प्रणालीगत हाइपोटेंशन के साथ मिलकर मन्या रोड़ा, मस्तिष्क ischemia में जिसके परिणामस्वरूप कशेरुका धमनियों के माध्यम से छिड़काव सीमित कर देगा कि दिखाया गया है. यहाँ हम descrहाइपोटेंशन निर्माण करने के लिए रक्त वापस लेने और नियंत्रित, प्रतिवर्ती ischemia के उत्पादन के लिए मन्या धमनियों clamping के लिए प्रोटोकॉल IBE. चित्रा 1 देखें.

रक्त ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड, ग्लूकोज एकाग्रता और पीएच नमूना समूह में व्यक्तियों के बीच भिन्न है और चोट में भिन्नता हो सकती है. इन शारीरिक चर निगरानी रोधगलन की परिवर्तनशीलता को कम कर सकते हैं. कहा गया है, तापमान छिड़काव बहुत प्रयोगात्मक ischemia के 28 के दौरान प्रतिबंधित है, के रूप में, विनियमित करने के लिए लेकिन मस्तिष्क तापमान कोर तापमान के अनुरूप नहीं है महत्वपूर्ण है जो एक और पैरामीटर है. मस्तिष्क में तापमान परिवर्तन में हमारी विशिष्ट शल्य सेटअप परिणाम है कि ischemia के दौरान कोर तापमान में दर्पण परिवर्तन. हालांकि, यह thermocouples के साथ या प्रक्रिया का मानकीकरण करने के लिए अन्य तरीकों से मस्तिष्क के तापमान की निगरानी के द्वारा इस अनुभव से निर्धारित करने के लिए प्रयोगकर्ता के लिए महत्वपूर्ण है. कोर तापमान मस्तिष्क मंदिर आईना नहीं है, तोतापमान, यह कोर तापमान की परवाह किए बगैर पूरी प्रक्रिया के दौरान मस्तिष्क तापमान normothermic बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है.

Randomization सर्जन इस बिंदु पर ischemia या दिखावा संचालित नियंत्रण समूह के लिए पशु randomizes पैदा करती है कि. शाम सर्जरी रक्तचाप और मन्या धमनी आड़ में किसी भी कमी को छोड़कर इस्कीमिक जानवरों के रूप में बिल्कुल एक ही सभी प्रक्रियाओं का पालन करेंगे. यह दिखावा संचालित नियंत्रण इस्कीमिक जानवरों की है कि मैच एक अवधि के लिए संज्ञाहरण की एक ही खुराक के तहत किया जाना जरूरी है. Ischemia के पहले या बाद में संज्ञाहरण की आवश्यकता है जो शामिल एक उपचार समूह, अगर वहाँ है, दिखावा और अनुपचारित ischemia के समूहों संज्ञाहरण खुराक और उपचार समूह की अवधि से मेल खाना चाहिए.

  1. तैयार hemostatic क्लिप और क्लिप applicator के. क्लिप्स पूरी तरह से किसी भी आघात के कारण के बिना पोत रोक देना चाहिए. Hemodynamics लगातार हो गए जब ischemia प्रेरित किया जा सकता है. एक 10 मिलीलीटर heparinized Syri कनेक्टपानी निकलने की टोंटी, सीधा और कैथेटर को समीपस्थ पर अराजपत्रित कर्मचारी. वापस ले लिया रक्त के जमाव को रोकने के लिए सिरिंज के अंदर heparinized खारा के 0.3 मिलीलीटर (30 इकाइयों) होना चाहिए.
  2. 1 मिनट के लिए एक टाइमर सेट और heparinized सिरिंज से पानी निकलने की टोंटी खोलते हैं, रक्त वापस लिया जा सकता है.
  3. सिरिंज सवार पर खींच कर खून वापस ले लें. बहुत ज्यादा शोषण लागू किया जाता है, तो पोत पतन या कैथेटर खोलने के खिलाफ सील और कोई खून तैयार हो जाएगा होगा. यह 1 मिनट में खून की 7-9 मिलीलीटर निकालने के लिए संभव होना चाहिए. इस मामले में ऐसा नहीं है, तो धमनी में आगे कैथेटर उन्नत और पुन: प्रयास करें. हम रक्त के 7-9 मिलीलीटर 30 एमएमएचजी, ischemia के लक्ष्य को हासिल करने के लिए लक्ष्य रक्तचाप के पास मानचित्र को कम करने के लिए हटा दिया जाना चाहिए कि लगता है. महत्वपूर्ण वापस ले लिया रक्त डिग्री सेल्सियस रक्त reinfusion दौरान ठंडा करने से बचने के लिए 37 में रखा जाता है सुनिश्चित करें.
  4. एक मिनट के रक्त आकर्षित (7-9 रक्त की मिलीलीटर वापस लिया जाना चाहिए), मन्या धमनियों को hemostatic क्लिप लागू करते हैं और एक शुरू करने के बाद8 मिनट के लिए टाइमर. तुरंत ब्लड प्रेशर की जांच. एमएपी 30 mmHg में नहीं है, तो पानी में डालना या धीरे धीरे 30 mmHg ± 1 mmHg प्राप्त करने के लिए रक्त वापस ले लें. 30 mmHg के मानचित्र बनाए रखने के लिए ischemia के दौरान इस अभ्यास जारी रखें. पूरे ischemia के प्रोटोकॉल भर में महत्वपूर्ण रिकार्ड रक्तचाप. 30 mmHg से रक्तचाप को कम करने में विफलता इशेमिया सीमित कर सकता है. मॉनिटर कोर और / या मस्तिष्क तापमान बारीकी से बढ़ जाती है या तापमान में कमी के रूप में reinfusion दौरान मस्तिष्क क्षति को प्रभावित कर सकता है.
  5. 8 मिनट के अंत में, hemostatic क्लिप हटाने और, धीरे धीरे प्रति मिनट 2 मिलीलीटर रक्त reinfusing द्वारा reperfusion की शुरू करते हैं.
  6. रक्त reinfused किया गया है जब प्रवेशनी ऊरु धमनी से हटाया जा सकता है. धमनी पर चीरा को समीपस्थ बाद सेशन, सुरक्षित दो अलग गांठ के दौरान किसी भी खून बह रहा से बचने के लिए.
  7. 5-0 Vicryl सीवन के साथ, एक व्युत्क्रम काटने की सुई का उपयोग कर एक टूटनेवाला पैटर्न के साथ चीरों सीवन. यह सीवन भंग करेंगे, तो यह r नहीं होगाहटाने equire. नोट प्रक्रिया के दौरान पर्याप्त संज्ञाहरण isoflurane के निचले स्तर के साथ पहुँच नहीं किया जा सकता है, ketamine के एक अतिरिक्त खुराक प्रशासन.

4. Analgesia और रिकवरी

पशु कल्याण वसूली के साथ ही शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान प्राथमिकता है. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल संस्था के विशिष्ट दिशा निर्देशों का पालन करना चाहिए. वैश्विक मस्तिष्क ischemia से गुजरना है कि पशु बरामदगी के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं. जब्ती घटना को कम करने के लिए यह वसूली कमरे न्यूनतम उत्तेजना, यानी शोर और दृश्य गड़बड़ी है कि महत्वपूर्ण है. इस उद्देश्य के लिए एक सुनसान कमरे में 72 घंटे के लिए हमारे पशुओं के उपयोग के प्रोटोकॉल के तहत, हम घर पोस्ट ऑपरेटिव जानवरों.

  1. चीरों sutured किए जाने के बाद चूहे वेंटीलेटर बंद weaned किया जा सकता है. Isoflurane बंद करें और चूहा वेंटीलेटर खिलाफ साँस लेने के लिए शुरू होता है जब तक 30% oxygen/70% नाइट्रस ऑक्साइड में वेंटिलेशन जारी है.
  2. 0.5 मिलीग्राम / कश्मीर प्रशासनsubcutaneously कंधे ब्लेड के बीच 5 मिलीलीटर खारा में छ butorphanol,.
  3. तेजी से रक्त reinfusing सही निलय प्रीलोड वृद्धि हो सकती है. यह फेफड़े के परिसंचरण दबाव बढ़ जाता है और फेफड़े के edema कारण बन सकता है. इस में शामिल लक्षण श्वसन के दौरान श्वसन और तीखी आवाज लगता अस्वाभाविक. सकारात्मक अंत expiratory दबाव लागू करने से फेफड़े के edema को बेहतर बनाने में मदद मिलेगी.
  4. श्वसन की स्वैच्छिक नियंत्रण में आ गया है, जब extubate, थर्मामीटर को हटाने और हीटिंग कंबल बंद कर देते हैं. इस बिंदु पर पशु एक वसूली के पिंजरे में रखा जा सकता है. पिंजरे के आधे reperfusion के पहले 24 घंटे के लिए एक पानी घूम कंबल (34 डिग्री सेल्सियस) के शीर्ष पर है तो वसूली के पिंजरे तैनात किया जाना चाहिए. तापमान बनाए रखने में सहायता करने के लिए हीटिंग कंबल से अधिक पिंजरे मंजिल की ओर से पशु रखें. पशु संज्ञाहरण और analgesia से उबरने के लिए शुरू होता है, यह अपने आप में thermoregulate को पिंजरे के चारों ओर कदम होगा. पशु बाद सेशन के दौरान अलग से रखा जाएगा.
  5. जानवर पानी के लिए असीमित उपयोग किया जाना चाहिए. दो दिनों के बाद सेशन के लिए, इस पानी 4 मिलीग्राम / किलो तरल Tylenol समाधान को शामिल करना चाहिए. कृंतक चाउ के अलावा, मीठा नाश्ता अनाज खाने को प्रोत्साहित करने और वजन घटाने को रोकने के लिए पिंजरे में प्रदान की जाती है.
  6. एक कपड़ा के साथ पिंजरे के आधे कवर और बारीकी से पोस्ट ऑपरेटिव वसूली की निगरानी.
  7. पशु संज्ञाहरण से ठीक है के रूप में यह संकट के संकेत के लिए नजर रखने के लिए महत्वपूर्ण है. अस्वाभाविक या असंगत श्वसन संभवतः इंटुबैषेण के दौरान फेफड़े के edema या एयरवे जलन की वजह से संकट का संकेत हो सकता है. Butorphenol, लेकिन हल्के गतिविधि 1 घंटा के भीतर गतिविधि को कम करने शांत जानवर, बहाल किया जाना चाहिए होगा. हम जानवरों के व्यवहार खाने और extubation के 4 घंटे के भीतर पीने के लिए शुरू हो जाएगा लगता है. 12 घंटा तक, सामान्य व्यवहार और खिला गतिविधि फिर से शुरू किया जाना चाहिए. संकट का एक और संकेत वजन घटाने है, एक जानवर किसी भी 48 घंटा अवधि में मूल शरीर के वजन के कोई 20 से अधिक% खोना चाहिए, अत्यधिक वजन घटाने अगर मैंपशु euthanized किया जाना चाहिए मनाया.
  8. बरामदगी होते अगर इंसानियत हस्तक्षेप आवश्यक है. जब्ती गतिविधि के इस प्रकार के आम तौर पर reperfusion के बाद 24 से 48 घंटे में देखा जाता है. बरामदगी से प्रति इस्कीमिक अपमान से स्वतंत्र है कि वृद्धि मस्तिष्क क्षति हो सकती है, इस प्रकार जब्ती गतिविधि पूर्व अध्ययन 29 की दीक्षा के लिए जगह में स्थापित एक अपवर्जन मानदंड माना जाना चाहिए. कोई भी मौजूद है जब बरामदगी हो सकता है, इसलिए यह लक्षण पहचान करने के लिए महत्वपूर्ण है. बिस्तर पिंजरे से परेशान और संभवतः निष्कासित कर दिया जाएगा. एक postictal चूहे, तेजी के साथ एक निस्तेज स्वभाव है साँस लेने और / अस्वाभाविक या एक चोट या खून बह नाक होगा.

दर्द या संकट का कोई संकेत नोट तुरंत दर्दनाशक दवाओं के साथ क्रमशः समाप्त कर रहे हैं. Sympotoms दर्दनाशक दवाओं की एक खुराक के साथ क्रमशः समाप्त या एनलजेसिया की लगातार चौथी खुराक के बाद जारी रहती है नहीं कर रहे हैं, पशु euthanized और अध्ययन से बाहर रखा जाएगा. सर्जिकल wounds आठ दिनों बाद सेशन के लिए उचित उपचार के लिए निरीक्षण किया जाना चाहिए.

5. ऊतक संग्रह और प्रसंस्करण

मस्तिष्क paraformaldehyde के transcardial अर्क से तय हो गई है. सकल सेक्शनिंग और cryoprotection के बाद, हम एक cryostat पर मस्तिष्क और खंड स्थिर तस्वीर. ये मस्तिष्क वर्गों cresyl वायलेट के साथ दाग और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप पर imaged हैं.

  1. प्रेरण कक्ष में पशु रखने और 5% isoflurane के साथ 30% ऑक्सीजन / 70% नाइट्रस ऑक्साइड के साथ भरने के द्वारा संज्ञाहरण प्रेरित. पशु नली लगाना और 5% isoflurane के साथ 30% ऑक्सीजन / 70% नाइट्रस ऑक्साइड में हवादार.
  2. छिड़काव की प्रक्रिया के लिए सामग्री तैयार करते हैं. 1x फॉस्फेट की 100 मिलीलीटर के साथ एक बीकर भरें 4 में खारा (पीबीएस) buffered 4 डिग्री सेल्सियस और 4% paraformaldehyde के 100 मिलीलीटर (पीएफए) के साथ एक बीकर डिग्री सेल्सियस पीबीएस एक छिड़काव पंप के माध्यम से, पीएफए ​​के द्वारा पीछा के साथ मस्तिष्क प्लावित है. ट्यूबिंग प्रत्येक बीकर में रखा और एक के लिए एक तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी से जोड़ा जाएगापीबीएस से पीएफए ​​छिड़काव को सुचारु llow. ट्यूबिंग पर एक पा 18 गेज सुई प्लेस और पीबीएस के साथ लाइन भरें. सुई और हवा के रूप में ट्यूबिंग में कोई बुलबुले हैं सुनिश्चित छिड़काव रोकने सकता है जो एक दिल का आवेश, हो सकता है. इसके अलावा, मस्तिष्क के विसर्जन के निर्धारण के लिए पीएफए ​​के साथ तैयार एक छोटे कंटेनर.
  3. तरल पदार्थ के कम से कम 200 मिलीलीटर पकड़ करने के लिए पर्याप्त क्षमता के साथ, एक तरल पदार्थ संग्रह ट्रे का प्रयोग करें. इस बिंदु पर पशु गहरी संज्ञाहरण तक पहुँचने के लिए (कम से कम 3 मिनट) काफी लंबे समय के लिए isoflurane के साथ हवादार किया जाना चाहिए था.
  4. महत्वपूर्ण संज्ञाहरण की शल्य चिकित्सा विमान तक पहुँच जाता है सुनिश्चित करें.
  5. एक चीरा पेट के माध्यम से वक्ष गुहा का उपयोग करने के लिए बनाने के द्वारा आगे बढ़ें. उतरते महाधमनी दबाना. दिल संपर्क में है, महाधमनी में दिल के शीर्ष के माध्यम से पा 18 गेज सुई डालने. Perfusate जानवर बाहर निकलने के लिए अनुमति देने के लिए सही अलिंद में एक छोटे कटौती करें.
  6. पीबीएस के साथ शुरुआत, 50 मिलीग्राम / मिनट पर पंप पर मुड़ें. Pumpï बादपीबीएस के एनजी 100 मिलीलीटर, पीएफए ​​की 100 मिलीलीटर छिड़कना को पानी निकलने की टोंटी स्विच.
  7. ऊतकों को नुकसान नहीं ख्याल रख रही है, मस्तिष्क निकालें.
  8. एक ऊतक मैट्रिक्स में मस्तिष्क प्लेस और सेरिबैलम और मस्तिष्क के बीच में कटौती. धारा अग्रमस्तिष्क, सेरेब्रल कॉर्टेक्स के सामने और पीछे से ~ 3 मिलीमीटर. यह तीन वर्गों का उत्पादन होगा, मध्यम वर्ग हिप्पोकैम्पस में शामिल होंगे.
  9. पूर्ण विसर्जन के लिए पर्याप्त पीएफए ​​के साथ एक जार में मस्तिष्क वर्गों रखें. विसर्जन ठीक 2 घंटे के लिए मस्तिष्क को ठीक.
  10. ठंड की वजह से नुकसान से ऊतकों की रक्षा करने के लिए, मस्तिष्क पीबीएस में 30% sucrose के साथ पीएफए ​​की जगह से cryoproteced है. ऊतकों के नमूनों sucrose के समाधान (~ 24-48 घंटा) में सिंक के साथ Cryoprotection पूरा हो गया है.
  11. मस्तिष्क वर्गों स्थिर तस्वीर करने के लिए, सूखी बर्फ में एक बीकर जगह है और दस मिनट के लिए 2 methylbutanol से भरना. 5 मिनट के लिए methylbutanol में मस्तिष्क स्लाइस रखें, तो cryost तक -80 में एक sealable कंटेनर और दुकान डिग्री सेल्सियस में स्थानांतरितसेक्शनिंग पर.
  12. 20 माइक्रोन से कम cryostat खंड मस्तिष्क, 3 मस्तिष्क एटलस निर्देशांक (stereotaxic निर्देशांक में चूहा मस्तिष्क. Paxinos और वाटसन, थाली वर्गों के 29, 31, 33 या शीर्षस्थान -2.8 मिमी, -3.3 मिमी, और -3.8 पर कम से कम 3 वर्गों का संग्रह मिमी). वर्गों का आरोप लगाया खुर्दबीन स्लाइड पर रखा और -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करने से पहले सूखे की अनुमति दी
  13. Cresyl वायलेट (पीएच 3.5 से 0.1%) प्रत्येक मस्तिष्क एटलस समन्वय पर 9 मस्तिष्क वर्गों, 3 दाग.
  14. एक खुर्दबीन के साथ 40x पर हिप्पोकैम्पस की छवि CA1 क्षेत्र कैमरा घुड़सवार और सीए 1 न्यूरोनल विमान के साथ एक 300 माइक्रोन पैमाने बार समानांतर डालें. झगड़ा फ़ाइलों के रूप में छवियों को बचाने.

6. मस्तिष्क क्षति मात्रा

ImageJ, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा की पेशकश की एक मुफ्त कार्यक्रम, मस्तिष्क क्षति की मात्रा का प्रतिनिधित्व करेंगे जो व्यवहार्य न्यूरॉन्स, गिनती और यों इस्तेमाल किया जा सकता है.

  1. ImageJ के 'सेल काउंटर' प्लगइन के साथ खुला माइक्रोस्कोप झगड़ा छवियों. एक का चयन करेंपैमाने पर पट्टी की सीमाओं के भीतर रंग और गिनती न्यूरॉन्स अंकन. न्यूरॉन्स अस्थिकणिका / microglial आकारिकी (छोटे गोल या लंबी ट्यूबलर आकार) के लिए neuronal आकारिकी (बड़े, पिरामिड आकार) या अपवर्जन मानदंड के आधार पर सरल शामिल किए जाने के मानदंडों के आधार पर गिना जाता है.
    महत्वपूर्ण समावेश / बहिष्कार स्लाइड्स के बीच मापदंड है, और न्यूरॉन्स गिनती जब व्यक्तियों के साथ लगातार हो.
  2. रिकॉर्ड न्यूरॉन मायने रखता है और सेल काउंटर खिड़की बचाने के लिए.
  3. न्यूरॉन मायने रखता है संगत, सटीक न्यूरॉन मायने रखता प्राप्त करने के लिए दो अलग अलग लोगों द्वारा पूरा किया जाना चाहिए.
  4. प्रत्येक जानवर से सभी 9 छवियों का मतलब सांख्यिकीय विश्लेषण में प्रयोग की जाने वाली सीए 1 हिप्पोकैम्पस क्षति की मात्रात्मक उपाय है जो एक ही मतलब है "न्यूरॉन गिनती", प्रदान करेगा. समूह स्थिर रुप से सामान्य परीक्षण विफल रहता है जहां एक Tukey के एचएसडी पद अस्थायी विश्लेषण के लिए परीक्षण, या, डन पुलिस द्वारा पीछा रैंकों पर एक Kruskal वालिस एक तरह से एनोवा के बाद एक तरह से एनोवा तुलना में उपयोग किया जा सकता हैसेंट अस्थायी विश्लेषण सांख्यिकीय समूहों के बीच मतभेद का मूल्यांकन करने के लिए. विशिष्ट सांख्यिकीय विश्लेषण व्यक्तिगत अध्ययन डिजाइन से तय किया जाना चाहिए, यहाँ प्रस्तुत एक परीक्षण किया जा रहा विशिष्ट परिकल्पना के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है.

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Representative Results

वैश्विक मस्तिष्क ischemia / reperfusion के 2VOH मॉडल हिप्पोकैम्पस के CA1 क्षेत्र में neuronal मौत का कारण बनता है. चित्रा 2 14 दिनों reperfusion के बाद संसाधित वैश्विक मस्तिष्क ischemia के 8 मिनट, द्वारा उत्पादित चोट का प्रतिनिधित्व करता है. आंकड़े 2A और 2B दिखावा से हिप्पोकाम्पी तुलना और cresyl वायलेट के साथ दाग के बाद इस्कीमिक दिमाग,. चित्रा 2A एक अक्षुण्ण सीए 1 सहित, सामान्य आकारिकी दर्शाती है जो एक दिखावा संचालित चूहे से एक हिप्पोकैम्पस से पता चलता है. चित्रा 2B ischemia / reperfusion को हिप्पोकैम्पस विषय है, यह दर्शाता है जहां दांतेदार गाइरस, सीए 2 और सीए 3 न्यूनतम आकारिकी प्रभावित किया है. सीए 1 हिप्पोकैम्पस के चुनिंदा न्यूरॉन्स कमजोर ischemia / reperfusion चोट जीवित नहीं है और केवल बिखरे न्यूरॉन्स रहते हैं. हालांकि, घुसपैठ मैक्रोफेज और / या microglia (आईबीए -1 पॉजिटिव कोशिकाओं), और प्रतिक्रियाशील astrocytes (GFAP पॉजिटिव कोशिकाओं) में नाटकीय वृद्धि सीए 1 घंटे में स्पष्ट कर रहे हैंippocampal क्षेत्र. NeuN, बृहतभक्षककोशिका / microglia आईबीए-1 के साथ लेबलिंग, और GFAP साथ अस्थिकणिका लेबलिंग के साथ न्यूरॉन्स के विशिष्ट immunofluorescent लेबलिंग इन निष्कर्षों की पुष्टि.

चित्रा -2 40x बढ़ाई सीए 1 की माइक्रोस्कोप छवियों के लिए खिड़कियों गिनती नमूना न्यूरॉन प्रस्तुत करता है. शीर्ष पैनल एक दिखावा संचालित नियंत्रण से सीए 1 से पता चलता है और कम पैनल ischemia / reperfusion सीए 1 निम्न दिखाता है. घायल सीए 1 microglia और छोटे और ट्यूबलर या आकार आंसू दिखाई देते हैं जो astrocytes, भी शामिल है कि एक धुंधला प्रदर्शित करता है. ये उनके आकार से न्यूरॉन्स से प्रतिष्ठित किया जा सकता है. बरकरार hippocampal न्यूरॉन्स, दांतेदार गाइरस में चाहे, सीए 2 या सीए 1, एक परिपत्र या पिरामिड आकार के साथ बड़े होते हैं.

चित्रा 2 डी सीए 1 न्यूरोनल मायने रखता द्वारा मात्रा 2VOH प्रेरित चोट की एक चित्रमय विश्लेषण है. यह 2VOH मॉडल द्वारा उत्पादित ischemia के 8 मिनट पैदा कर सकता है कि यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है एक सुसंगत और reproduciblई चोट मुख्य रूप से सीए 1 हिप्पोकैम्पस को अलग किया जाता है.

चित्रा 1
चित्रा 1. प्रायोगिक टाइमलाइन. प्रयोगात्मक समय शल्य कदम और ऊतक प्रसंस्करण का प्रतिनिधित्व है.

चित्रा 2
चित्रा 2. प्रतिनिधि परिणाम. एक अनुपचारित चूहे में हिप्पोकैम्पस क्षतिग्रस्त एक दिखावा संचालित नियंत्रण चूहा (ए) की तुलना में मैं / आर (बी) के अधीन है. Cresyl बैंगनी दाग हिप्पोकैम्पस (10X) [चारों] 40X सीए 1 के आवर्धन, सीए 2, सीए 3, hilus, और महानिदेशक (शीर्ष leftà दक्षिणावर्त). (बी) के नुकसान सीए 1 hippoc के लिए स्थानीय हैसीए 1 के ampus. (सी) न्यूरॉन गिनती और क्षति की मात्रा का ठहराव एक दिखावा संचालित नियंत्रण पशु में (ऊपर, नियंत्रण) और वैश्विक मस्तिष्क ischemia के उजागर करने के लिए एक जानवर के लिए इस्तेमाल प्रतिनिधि गिनती खिड़कियां (नीचे, मैं / आर). (डी) प्रतिनिधि quantitation एक अप्रकाशित अध्ययन से हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन मायने रखता है (+ मानक विचलन, एन = 8, पी <0.05).

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Discussion

यहाँ वर्णित मॉडल मनुष्यों में पाया गया है कि इसी तरह एक चोट प्रदान करने, हृदय की गिरफ्तारी और पुनर्जीवन का एक परिणाम के रूप में हो सकता है कि मस्तिष्क के लिए एक इस्कीमिक अपमान पैदा करता है. वैश्विक मस्तिष्क ischemia के उत्पादन के लिए यह विधि कई प्रोटोकॉल में से एक है. हम अपने comparably कम मृत्यु दर, तेजी से वसूली, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के लिए अग्रणी इस प्रोटोकॉल का उपयोग. हृदय की गिरफ्तारी / पुनर्जीवन मॉडल हालांकि तकनीकी तौर पर, यकीनन लगातार पुन: पेश करने के लिए सबसे कठिन सबसे नैदानिक ​​प्रासंगिक मॉडल है. वैश्विक मस्तिष्क ischemia के 4VO मॉडल सभी चार योगदान वाहिकाओं ischemia के दौरान occluded रहे हैं कि वास्तव में मूल्यवान एक और आमतौर पर इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल है. यह मॉडल भी एकाधिक सर्जरी और न्यूरोप्रोटेक्टिव शर्त की संभावना शामिल हैं जो कमियां है. 4VO मॉडल एक प्रक्रिया के दौरान सभी चार जहाजों की क्षणिक रोड़ा ischemia के निर्माण करने के लिए अनुमति देता है, अनुकूलित किया गया है, लेकिन सर्जरी तकनीकी रहता हैly 30 की मांग की.

2VOH पर बदलाव परिणाम 31,32 की एक श्रृंखला का निर्माण करने के लिए दिखाया गया है. Ischemia और हाइपरटेंशन की डिग्री की अवधि के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं कि प्रमुख चर रहे हैं. रिपोर्टें रक्तचाप काफी कम नहीं है अगर उत्पादित चोट चूहों 30 में असंगत या एकतरफा हो सकता है दिखाया है. हम यह उल्लेखनीय परिधीय चोट के कारण के बिना विश्वसनीय इशेमिया पैदा करता है क्योंकि हाइपोटेंशन की एक इष्टतम डिग्री होने के लिए 30 mmHg पाया है. इस प्रतिमान लेकिन हमारे प्रोटोकॉल जटिलताओं की अन्यथा वृद्धि हुई मौका कम हो जाएगा के बाद गंभीर के रूप में होती ischemia के उत्पादन करता है. अपमान की गंभीर प्रकृति आमतौर पर चोट स्थिरता को प्रभावित नहीं करता पशुओं के बीच शारीरिक मापदंड में कारण मामूली बदलाव हो सकता है.

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Disclosures

लेखक ब्याज की कोई वित्तीय संघर्ष किया है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Material Name
5-0 VICRYL suture, reverse cutting Ethicon J391H
Scalpel, No.10 Swann-Morton 6601
Gauze Sponges Fisher 22-362-178
18G x 1 ½ in needle BD 305201
23G x 1 in needle BD 305145
26 G x 3/8 in needle BD 305110
18 G x 1 ¼ catheter EXEL 26735
1 ml syringe BD 309659
10 ml syringe BD 309604
60 ml syringe BD 309653
Surgilube Henry Schein 1152666
.9% Saline, plastic IV bag Henry Schein 1537468
Suture 3-0 Silk Henry Schein 1007842
Puralube Ophthalmic Ointment Henry Schein 3390017
Betadine Henry Schein 6903564
Sterile Towel Drape Moore Medical 14170
Polyethylene Tubing, 50 Intramedic 427411
Stopcock, 3 way Smiths medical MX9311L
Drug Name
AERRANE (isoflurane) Henry Schein 2091966
Mapap Liquid (Tylenol) Major Pharmaceuticals 1556
Kedavet (ketamine) Ketathesia Butney NDC 50989-996-06
Butorphic (butorphanol) Lloyd Labs 4881
Heparin APP Pharmaceuticals 504011
Chemical Name
Paraformaldehyde prills Elecron Microscopy Sci. 19202
2-methylbutane Sigma 270342
Cresyl Violet Acetate Sigma C5042
Sucrose Sigma S9378
Software
ImageJ NIH

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References

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Sanderson, T. H., Wider, J. M. 2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia. J. Vis. Exp. (76), e50173, doi:10.3791/50173 (2013).

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