Summary
Primært hvide præadipocytter isoleret fra hvide fedtvæv hos mus kan opdeles i beige / Brite celler. Præsenteret her er en pålidelig trådløs model system til at undersøge den molekylære regulering af "bruning" af hvidt fedt.
Abstract
Brune adipocyter har evnen til at afkoble den respiratoriske kæde i mitochondrierne og sprede kemiske energi som varme. Udvikling af UCP1-positive brune adipocyter i hvide fedtvæv (såkaldte beige eller Brite celler) er stærkt induceres af en lang række miljømæssige signaler, såsom kronisk kulde eller PPARy-agonister derfor denne celletype har potentiale som et terapeutisk mål for fedme behandling. Selv om de fleste immortaliserede adipocyt linier ikke kan gentage processen med "brunfarvning" af hvidt fedt i kultur, primære adipocytter isoleret fra stromal vaskulær fraktion i subkutant white adipose tissue (WAT) tilvejebringe et pålideligt cellulært system til at undersøge den molekylære kontrol af beige / Brite celleudvikling . Her beskriver vi en protokol for effektiv isolering af primære præadipocytter og til fremkaldelse af differentiering til beige / Brite celler i kultur. Den bruning effekt kan vurderes ved ekspression af brunt fedt-selektiv mærkeERS såsom UCP1.
Introduction
Fedme er dramatisk stigende på verdensplan, og er nu betragtes som en af de mest alvorlige bekymringer for folkesundheden 1. Denne tilstand er forbundet med en misbalance i energiindtag i forhold til udgifterne og resulterer i overskydende energi lagres som lipid i hvidt adipøst væv (WAT). Forstørret WAT er forbundet med øget masse og vægt, mens brunt fedtvæv har evnen til at sprede overskydende energi til at producere varme. Derfor BAT kan fungere som beskyttelse mod både kulde og fedme 2,3. Dette opnås ved afkobling af elektrontransport i mitokondrierne ved frakobling protein 1 (UCP1). Dette protein betragtes som kendetegnende for nonshivering termogenese i BAT 3. Flere undersøgelser i de senere år har vist, at voksne mennesker har funktionel BAT 4-8 og dermed kan manipulation af BAT i mennesker være en potentiel terapeutisk intervention i kampen mod fedme og dens sygdomme.
jove_content "> Aktuel viden indikerer, at to typer af brune adipocyter findes hos gnavere," klassisk "eller" præ-eksisterende "brunt fedt udvikles under prænatal fase og danner dedikerede brune adipose depoter i interscapular regionen og andre perifere væv På den anden side. En "inducerbar" form af brunt fedt (såkaldte brite eller beige celler) udvikles under postnatale fase og vises indflettet i hvide fedtvæv. De to typer af brune adipocyter er også adskilt af forskellige udviklingsstadier oprindelse. Mens den allerede eksisterende brune adipocyter skyldes myoblastsic-lignende Myf5 forstadier, de inducerbare Brite / beige celler indflettet i WAT opstå fra en ikke-Myf5 linjen 9,10. Derudover er regulatoriske veje af denne celletype kan være forskellig fra den Myf5-afledte brown adipocytter 11. Udviklingen af beige celler (dvs. "brunfarvning" af hvidt fedt) kan aktiveres som reaktion på kronisk kulde ogβ3-adrenoceptor-agonister eller PPARy-agonister hos voksne 12-14. De beige / Brite celler sandsynligvis er en lovende terapeutisk mål for manipulation af samlede energibalance og kan potentielt blive en del af fedme behandling, og derfor er det vigtigt at forstå præcise molekylære mekanismer og signaleringsveje, hvorved miljømæssige signaler styrer udviklingen af beige celler.For at forstå den molekylære kontrol af brunfarvning af hvidt fedt, er in vitro-eksperimenter bedst egnet som differentieringen af præadipocytter foregår temmelig asynkront, og det er vanskeligt at detektere af cellerne in situ 15. Selv om undersøgelser af adipocyt udvikling således er hidtil blevet udført primært på cellelinier, såsom 3T3-L1, 3T3-F442A eller HIB1, disse cellelinjer synes at mangle den molekylære signatur af beige celler. På den anden side, er primære adipocytter isoleret fra subkutan WAT mest sandsynligt, at gentage de forarbejds i brunfarvning af hvidt fedt i en celle selvstændig måde. Her giver vi en protokol for effektiv isolering af det stromale-kar fraktion fra fedtvæv og til at fremkalde den brunfarvning af hvide fedt som reaktion på PPARy-agonister. Rosiglitazon er blevet vist at være et særligt effektivt mediator af brunfarvning i disse celler. Som tidligere antydet 16, kan denne cellulære system anvendes til at tjene et pålideligt cellulært system til at studere udviklingen af beige / Brite celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Forbered Fordøjelse Medium
Gøre 5 ml per 5 mus pr væv (ca. 1 ml / 1 g fedtvæv).
- Afvejes i fordøjelsesenzymer:
- Collaginase D: 1,5 u / ml (1108874103, 1 g, Roche, 70.334.223)
- Dispase II: 2,4 u / ml (04942078001, 0.980 mg / Lyø, Roche, 11.466.200) - Tilføj 25 ml PBS og bland godt for at opløse
- Tilføj CaCl2 lige før fordøjelse af vævet ved en slutkoncentration på 10 mM
2. Dissekere fedtvæv fra mus
- Dissektion skal udføres omhyggeligt, og umiddelbart efter mus (6-8 uger gamle) aflives. Arbejd sterilt med ethanol sprøjtes på musens pels, før du åbner den. Placer vævet direkte i ren PBS, separat interscapular BAT og subkutan inguinal WAT.
- For interscapular BAT: har musen anbragt med ryggen står op, skåret op langs bagsiden og hele vejen til halsen. Den brunefedtvæv kan findes lige under huden mellem skuldrene (interscapular). BAT kan ses som to kamre, sommerfugl formet. Et tyndt lag af hvidt fedt dækker BAT bør fjernes forsigtigt.
- Til subkutan WAT (lyske WAT): fjerne hud. Inguinal WAT findes direkte under huden på begge sider, der starter næsten på ryggen og går sammen, indersiden af lårene og ned mod testikel.
3. Klip og fordøje fedtvæv
- Hurtigt fjerne enhver urenhed, som hår, skeletmuskel og bindevæv fra vævssnit.
- Tør væv hurtigt på papir til ikke fortyndes dissektion medium med PBS og læg det på et tørt plade.
- Tilføj fordøjelse medium (tilsat CaCl2 før fordøjelse) og mos vævet i små stykker. Bland godt ved pipettering op og ned med en 5 ml pipette. Overfør hakkede væv i 50 ml rør med resten af fordøjelsen medium, blandes endnu mere ved at pipettere op og ned.
- Digest i 37 ° C med konstant omrøring ved 150 rpm i 40-50 min. Tjek hver 10-15 min for at sikre fordøjelsen går godt, og for at undgå over-fordøjelse.
Bemærk: Korrekt fordøjelse medium og tid er vigtige. Vævet skal være godt fordøjet, men overskydende fordøjelse kan skade cellerne.
4. Filter cellesuspension
- Stop fordøjelse ved tilsætning af 5 ml komplet medium (DMEM/F12 indeholdende 10% FPS og P / S). Cellerne bør næsten fuldstændig homogen. Bland godt ved pipettering.
- Centrifuger ved 700 x g i 10 minutter.
- SVF kan nu ses som en brunlig pellet på bunden af røret. Aspirer olieagtige modne adipocytter lag på toppen og det meste af væskelaget - holde pelleten og opløse det i 10 ml komplet medium. Bland godt.
- Placer en celle si (50-70 um diameter) over en ny 50 ml rør og filtreres cellesuspensionen.
5. Plate Cells
- Overførsel cellesuspension til et 15 ml rør og centrifugeres ved 700 x g i 10 minutter.
- Aspirere medium og resuspender pellet i 10 ml komplet medium. Pipette og bland godt.
- Vurdere, hvor mange plader er nødvendige. Dette kan variere og afhænger af den pelletstørrelse. En generel regel er 2 af 10 cm plader fra 5 mus til lyskelymfeknuder WAT og en 10 cm plade for BAT.
- Plate celler på collagen-coatede retter (F & U) i komplet medium
- 1-2 timer efter udpladning af cellerne, aspireringsstilling medium, vaskes med PBS to gange, og der tilsættes frisk medium. Dette trin er vigtigt, da dette kan fjerne røde blodlegemer, immunceller og andre kontaminanter.
6. Differentiere Celler
- Gør vedligeholdelse og induktions medier.
Vedligeholdelsesmedium
Komplet medium med tilsat:
ent "> Insulin, slutkonc. 5 ug / ml (5 mg / ml stamopløsning, *** 100 pi eddikesyre i 10 ml H2O til fremstilling af forsuret vand pH 2,5. opløse insulin i det syrnede vand. Store lager ved -20 ° C)3,3 ',5-triiod-L-thyronin (T3), slutkoncentration. 1 nM (10 pM stock, *** opløses T3 i 1 N NaOH og tilsæt medium at 10 uM stock. Sigma cat # T-2877)
Opbevares ved 4 ° C, godt i en uge
Induktionsmedium
Vedligeholdelsesmedium indeholdende følgende forbindelser:
Indomethacin, slutkonc. 125 um (0,125 M stamopløsning i ethanol, Sigma katalognr I-7378). Indomethacin skal opvarmes til 60 ° C for at blive opløst.
Dexamethason, slutkonc. 2 ug / ml (2 mg / ml sok i ethanol, Sigma katalognr D-1756)
3-isobutyl-1-methylxanthin (IBMX), slutkoncentration. 0,5 mM (0,25 M stamopløsning i DMSO, Sigma katalognr I-5879)
Rosiglitazon, slutkonc. 0,5 uM(10 mM stamopløsning i DMSO, Sigma katalognr R-2408)
Bemærk: Kontroller frisk induktion medium hver gang.
- Grow primære adipocyter til 95-97% konfluens i komplet medium (sammenflydende men ikke alt pakket)
- Ændre regelmæssig komplet medium med induktionsmedium (dag 0)
- Efter 48 timer (dag 2), ændre medium til vedligeholdelse medium med rosiglitazon (0,5 uM)
- Efter yderligere 48 timer (dag 4), skifter til frisk opretholdelsesmedium med rosiglitazon (1 uM) i yderligere 2-3 dage. 6-7 dage efter tilsætning af induktionsmedium, bliver cellerne fuldstændigt differentierede til modne fedtceller og er fyldt med oliedråber. Droplets vises omkring 3-4 dage efter induktionen.
Bemærk: Skift medium hver 2-3 dage, indtil cellerne er fuldt differentieret.
Celler kan nu høstes og mRNA-ekspression af UCP1 og other brun adipocytspecifikke gener kan måles ved qRT-PCR. Western blot skal anvendes til at detektere proteiner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bruning af primære adipocytter kan tilgås ved at måle mRNA-ekspression af UCP1 og andre brunt fedt-specifikke eller selektive gener ved qRT-PCR. Vist i figur 1 er genekspression data i ingvinale WAT-afledte primære adipocyter. Cellerne blev induceret til at differentiere i nærværelse af to forskellige doser af rosiglitazon ved 50 nM og 500 nM. En undergruppe af celler blev behandlet med forskolin ved 10 uM for 4 timer før høst. Dette vil inducere cyklisk-AMP (cAMP) i cellerne og aktivere termogen gen, som omfatter UCP1 ekspression.
Som vist i figur 1A, rosiglitazon robust inducerede UCP1 mRNA-ekspression. Forskolin behandling (cAMP) forøges yderligere rosiglitazon-induceret UCP1 udtryk. En anden brunt fedt-selektiv genet, blev Cidea ekspression også robust induceret af rosiglitazon på en dosis-afhængig måde (figur 1B). <em> Fabp4 er et direkte mål for PPARy og en adipogeniske markør for både brunt fedt og hvide fedt. Som vist i figur 1C, blev Fabp4 ekspression også forøget ved behandling med rosiglitazon. Denne brunfarvning virkning var ikke kun på grund af en forøgelse af adipogenese per se, idet induktion af UCP1 og Cidea ekspression var stadig signifikant selv hvis mRNA-niveauer af UCP1 og Cidea blev normaliseret til de Fabp4 (figur 1 D og E).
For at bekræfte forøget proteinniveau af UCP1, bør Western blot udføres. Som vist i figur 2, en høj dosis af rosiglitazon (500 nM) robust steg UCP1 protein i cellerne. Vigtigt er, som tidligere vist i Ohno et al. 16, rosiglitazon-inducerbare beige celler udviste forhøjet total og afkoblet oxygenforbruget som respons på cAMP stimulation, en indførselnt funktionelle egenskaber brune adipocytter / beige celler.
Figur 1. Kvantitativ real-time PCR (qRT-PCR) viser induktionen af brunt fedt-selektive gener, herunder UCP1 (A) og Cidea (B). Ekspression af et adipogeniske markør Fabp4 er også vist (C). Hvor det er angivet, blev celler behandlet med cAMP (forskolin ved 10 uM) i fire timer før høst. Totalt RNA blev ekstraheret fra differentierede celler ved anvendelse af TRIzol (Invitrogen). Revers transkription blev udført under anvendelse af et cDNA revers transkription kit (iScript, Applied Biosystems) og qRT-PCR blev udført i dubletter med SYBR-grønt fluorescerende farvestof under anvendelse af et ABI ViiA7 maskine. TATA-bindende protein (TBP) fungerede som reference gen og primersekvenser er angivet i tabel 1. Rosiglitazon inducerede brun-selective gener UCP1 (D) og Cidea (E) efter normalisering af en adipogeniske markørgen Fabp4.
Figur 2. Western blot af UCP1 proteinniveauer i ingvinale primære celler behandlet med rosiglitazon i doser på 50 nM eller 500 nM. Samlede cellelysater blev isoleret og anvendt for Western blottings. UCP1 antistof (Abcam) blev anvendt til Western blotting.
| Gene | Arter | Fremadrettet primer | Reverse primer |
| Fabp4 | mus | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | mus | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| Tbp | mus | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| UCP1 | mus | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
Tabel 1. Primersekvenser for real time qPCR analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her præsenterer vi et pålideligt cellulært system til at studere udviklingen af beige / Brite celler i primære dyrkede adipocytter i mus. Sammenlignet med adskillige tilgængelige udødeliggjorte cellelinier, dette system vil sandsynligvis give bedre relevans for brunfarvning af hvidt fedt in vivo.
Selv om studiet af disse primære adipocytter giver nogle fordele, der også findes visse begrænsninger og bekymringer, der er vigtige at overveje. Dels dette system er meget afhængig af differentiering styrken af cellerne. Ekspression af brunt fedt-selektive gener, såsom UCP1 og Cidea er særligt differentiering-afhængig. For eksempel også PPARy-agonister og BMP7 øge adipogenese derfor de "brunfarvningsvirkninger" virkninger skal temmelig tilgås i celler med lignende grader af differentiering. Alternativt, som vist i fig 1D og E, normalisering af ekspressionen af brunt fedt-selektivegener med den for adipogenese markørgener såsom Fabp4 kan være nyttig. For det andet, alder musene er vigtig. Det kunne måske være fristende at bruge store mus med henblik på at få så mange celler som muligt, men som differentiering aftager med alderen. Det ville være interessant at undersøge, hvordan interne og eksterne signaler såsom kulde, fedme, insulinresistens eller ældning påvirker proliferation, selvfornyelse eller differentiering kapacitet af denne celletype ved hjælp af denne kultur system. I vores tilfælde er en passende alder af mus af typen C57BL/6J mellem 6-8 uger. For det tredje, primære celler er generelt mere følsom og mere skrøbelig end immortaliserede adipocyt linjer. Selv præadipocytter fra BAT eller subkutan WAT har bedre kapacitet af proliferation og differentiering end dem fra visceral WAT, de har tendens til at miste deres differentiering kapacitet efter adskillige passager. Vi normalt inducerer differentiering inden for højst 3 passager.
En anden vigtigvigtig aspekt er, at det stromale-vaskulære fraktion er en heterogen cellepopulation. I denne protokol fokuserer vi på præadipocytter og deres evne til at tænde et brunt fedt-selektiv genetisk program i nærværelse af en PPARy-agonist rosiglitazon. En nylig undersøgelse har vist, at PDGFRA-positive bi-potente progenitorer i den abdominale WAT giver anledning til brune adipocyter som reaktion på beta-adrenerg stimulation in vivo 17. Men det faktiske oprindelse beige / Brite celler, der opstår som reaktion på kronisk PPAR-agonist behandling er fortsat uklar. Debatten har været aktiv og forskere er optaget af dette fundamentale spørgsmål; er bruning af hvid fedt gennem øget hvid-til-brunt fedt konvertering, gennem spredning af engagerede brune præadipocytter eller gennem transdifferentiation fra modne hvide adipocytter 18,19.
Rosiglitazon vides at inducere brunfarvning af hvidt fedt in vitro og in vivo 20-26. Interessant nok kan aktivering af PPARy af syntetiske agonister inducerer brunfarvning af hvidt fedt imidlertid overekspression af PPARy i hvide adipocytter, er ikke tilstrækkeligt 27. Vi har tidligere vist, at PPARy agonist-induceret bruning virkning medieres til dels gennem proteinstabilisering af PRDM16 16. Således kan identificere små forbindelser eller endogene molekyler, der stabiliserer PRDM16 protein være i stand til specifikt at inducere brunfarvning af hvidt fedt. Nuværende fremgangsmåde tilvejebringer en robust og pålidelig eksperimentelt system til at identificere sådanne faktorer, som kan føre til en hidtil ukendt terapeutisk indgriben til behandling af fedme og diabetes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Vi takker Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda, og Lauren Ruiz for diskussion, teknisk hjælp og redaktionel bistand på manuskriptet. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra NIH (DK087853) fra Program for Breakthrough Biomedical Research og fra Asubio Pharm Inc. til SKULA blev støttet af en aktie ph.d.-stipendier fra Københavns Universitet og EU FP7 projekt Diabat (HEALTH-F2 -2.011-278.373) til Lise Madsen og Karsten Kristiansen. Vi anerkender også den DERC center tilskud (NIH P30 DK063720).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
