Summary
Primäre weißen Präadipozyten aus weißem Fettgewebe von Mäusen isoliert werden in beige / brite Zellen unterschieden werden. Präsentiert hier ist ein zuverlässiger zellulären Modellsystem, um die molekulare Regulation von "Bräunung" der weiße Fett zu studieren.
Abstract
Braunen Fettzellen haben die Fähigkeit, die Atmungskette der Mitochondrien entkoppeln und dissipieren chemische Energie als Wärme. Entwicklung UCP1-positiven braunen Fettzellen in weißem Fettgewebe (sogenannte beige oder brite Zellen) hoch ist durch eine Vielzahl von Umweltreize wie chronische Kälteexposition oder durch PPAR &ggr; Agonisten induziert wird, somit hat dieses Zelltyps Potential als therapeutisches Ziel für Behandlung von Fettleibigkeit. Obwohl die meisten verewigt Adipozyten Linien nicht rekapitulieren können den Prozess der "Bräunung" der weißen Fett in Kultur, primären Adipozyten aus stromalen vaskulären Fraktion im subkutanen weißen Fettgewebe (WAT) isoliert eine zuverlässige zelluläre System, um die molekulare Kontrolle der beige / brite-Zell-Entwicklung zu studieren . Hier beschreiben wir ein Protokoll für eine effektive Trennung von Primär-und Präadipozyten zur Induzierung der Differenzierung zu beige / brite Zellen in Kultur. Die Bräunung Effekt kann durch die Expression von braunem Fett-selektive Markierung beurteilt werdenten wie UCP1.
Introduction
Adipositas ist dramatisch zunehmenden weltweit und ist heute eines der schwerwiegendsten Bedenken für die öffentliche Gesundheit 1 betrachtet. Dieser Zustand ist mit einem Ungleichgewicht in der Energieaufnahme relativ zu Ausgaben und führt überschüssige Energie als Lipid in weißem Fettgewebe (WAT) gespeichert verwandt. Vergrößerten WAT ist mit einer erhöhten Körpermasse und Gewicht zugeordnet ist, während braunes Fettgewebe hat die Fähigkeit, überschüssige Energie abzuleiten, um Wärme zu erzeugen. Daher BAT kann als Schutz gegen Kälte und Übergewicht 2,3 funktionieren. Dies wird durch Auskuppeln der Elektronentransport in Mitochondrien durch entkoppelnde Protein 1 (UCP1) erreicht. Dieses Protein wird als ein Markenzeichen für nonshivering Thermogenese in BAT 3. Mehrere Studien in den letzten Jahren gezeigt, dass erwachsene Menschen funktionale BAT 4-8 haben und somit Manipulation von BAT beim Menschen kann eine mögliche therapeutische Intervention im Kampf gegen Fettleibigkeit und die damit verbundenen Krankheiten.
jove_content "> Aktuelle Daten zeigen, dass zwei Arten von braunen Fettzellen bei Nagetieren existieren;" klassischen "oder" pre-existierenden "braunes Fett entwickelt sich während der pränatalen Phase und bildet gewidmet braunen Fettgewebe Depots in interskapularen Region und anderen peripheren Geweben Auf der anderen Seite. ein "induzierbare" Form von braunem Fett (sogenannte brite oder beige Zellen) entwickelt sich während der postnatalen Stufe und erscheint durchsetzt im weißen Fettgewebe. Die zwei Typen von braunen Fettzellen auch von verschiedenen Entwicklungsstadien Ursprünge getrennt. Während die vorbestehenden braunen Fettzellen entstehen aus myoblastsic-ähnliche Myf5 Vorstufen entstehen die induzierbare brite / beige Zellen in WAT durchsetzt von einem nicht-Abstammungslinie Myf5 9,10. Zusätzlich Regulationswege dieses Zelltyps wahrscheinlich unterschiedlich vom Myf5 abgeleiteten braun ist Adipozyten 11. Die Entwicklung der beige Zellen (dh "Bräunungs" von weißem Fett) in Reaktion auf chronische Kälteexposition und aktiviert werdenβ3-Adrenozeptor-Agonisten oder PPAR &ggr;-Agonisten bei Erwachsenen 12-14. Die beige / brite Zellen wahrscheinlich ein vielversprechendes therapeutisches Ziel für Manipulation Gesamtenergiebilanz sein und kann potentiell Teil Entfettungskur geworden, daher ist es wichtig, genaue molekulare Mechanismen und Signalwege durch welche Umweltreize steuern die Entwicklung der beige verstehen Zellen.Um die molekulare Kontrolle der Bräunung von weißem Fett zu verstehen, werden in vitro-Versuche am besten als Differenzierung von Präadipozyten erfolgt vielmehr asynchron geeignet und es ist schwierig, die Zellen in situ 15 detektieren. Obwohl Studien zur Entwicklung Adipozyten somit haben bis jetzt überwiegend auf Zelllinien wie 3T3-L1, 3T3-F442A oder HIB1 durchgeführt erscheinen diese Zelllinien, die molekulare Unterschrift beige Zellen fehlt. Auf der anderen Seite, sind primäre Adipozyten aus subkutaner WAT isoliert am ehesten die Verarbeitung rekapitulierens der Bräunung der weiße Fett in einer Zelle autonom. Hier bieten wir ein Protokoll für eine effektive Isolierung des Stroma-Kreislauf-Fraktion aus Fettgewebe und zur Induktion der Bräunung von weißem Fett in Reaktion auf PPAR &ggr;-Agonisten. Rosiglitazon ist gezeigt worden, eine besonders effektive Mediator Bräunungsgrad in diesen Zellen vorhanden sein. Wie zuvor 16 angedeutet, kann dieses zellulare System verwendet, um eine zuverlässige Zellularsystem um die Entwicklung von beige / brite Zellen zu untersuchen dienen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Ein. Bereiten Verdauung Medium
Make 5 ml pro 5 Mäuse pro Gewebe (ca. 1 ml / 1 g Fettgewebe).
- Wiegen in Verdauungsenzyme:
- Collaginase D: 1,5 u / ml (1108874103, 1 g, Roche, 70.334.223)
- Dispase II: 2,4 u / ml (04942078001, 0.980 mg / lyo, Roche, 11.466.200) - 25 ml PBS und gut mischen sich aufzulösen
- Hinzufügen CaCl 2 unmittelbar vor dem Aufschluss des Gewebes bei einer Endkonzentration von 10 mM
2. Dissect Fettgewebe von Mäusen
- Dissection sollte sorgfältig durchgeführt werden, und unmittelbar nach der Mäuse (6-8 Wochen alt) geopfert werden. Arbeiten sterile mit Ethanol auf der Maus Fell gesprüht, bevor Sie es öffnen. Legen Sie das Gewebe direkt in sauberen PBS, separate interskapularen BAT und des Unterhautzellgewebes inguinal WAT.
- Für interskapularen BAT: die Maus mit dem Rücken stellten sich gelegt, geschnitten entlang der Rückseite und den ganzen Weg bis zum Hals offen. Die brauneFettgewebe kann direkt unter der Haut zwischen den Schultern (interskapularen) gefunden werden. BAT als zwei Lappen, Schmetterling geformt gesehen werden. Eine dünne Schicht aus weißem Fett Abdecken der BAT sollte sorgfältig entfernt werden.
- Für die subkutane WAT (inguinal WAT): Haut entfernen. Leistenbruch WAT wird direkt unter der Haut auf beiden Seiten gefunden, beginnend fast auf den Rücken und geht neben, Innenseite der Oberschenkel und nach unten in Richtung des Hodens.
3. Ausschneiden und Digest Fettgewebe
- Schnelles Entfernen alle Verunreinigungen wie Haare, Skelettmuskulatur und Bindegewebe von den Gewebeschnitten.
- Trocknen Gewebe schnell auf Papier nicht verwässern Dissektion Medium mit PBS und legen Sie sie auf einer trockenen Platte.
- Fügen Digestionsmedium (hinzugefügt CaCl 2 vor der Verdauung) und Mince das Gewebe in kleine Stücke schneiden. Mix sehr gut durch Auf-und Abpipettieren mit einer 5 ml Pipette. Übertragen der zerkleinerten Gewebe in 50 ml Röhrchen mit dem Rest des Aufschlusses medium, mischen noch mehr durch Auf-und Abpipettieren.
- Digest 37 ° C mit konstantem Rühren bei 150 UpM für 40-50 min. Überprüfen Sie alle 10-15 min sicherstellen, dass die Verdauung gut und über-Verdauung zu verhindern.
Hinweis: Die korrekte Digestionsmedium und Zeit sind wichtig. Das Gewebe muss gut verdaut werden, aber überschüssige Verdauung kann die Zellen schädigen.
4. Filter Zellsuspension
- Stoppen Verdau durch Zugabe von 5 ml Vollmedium (DMEM/F12 mit 10% FPS und P / S). Die Zellen sollten fast völlig homogen. Gut mischen durch Pipettieren.
- Zentrifuge bei 700 × g für 10 min.
- SVF kann nun als bräunliches Pellet am Boden des Röhrchens gesehen werden. Saugen Sie die ölige reife Adipozyten Schicht auf der Oberseite und die meisten der flüssigen Schicht - halten Sie das Pellet und löst ihn in 10 ml Vollmedium. Gut mischen.
- Legen Sie eine Zellsieb (50-70 Mikrometer Durchmesser) über einen neuen 50 ml-Tube und Filtern der Zellsuspension.
5. Platte Cells
- Übertragen Zellsuspension in ein 15 ml Röhrchen und Zentrifuge bei 700 × g für 10 min.
- Anzusaugen Mediums und Resuspendieren Pellet in 10 ml Vollmedium. Pipette und gut mischen.
- Schätzen Sie, wie viele Platten benötigt werden. Dies kann variieren und hängt von der Pelletgröße. Eine allgemeine Regel ist 2 von 10 cm Platten aus 5 Mäusen inguinal WAT und eine 10 cm Platte für BAT.
- Platte Zellen auf Kollagen beschichteten Platten (R & D) in Vollmedium
- 1-2 Stunden nach Ausplattieren der Zellen, absaugen Medium, zweimal mit PBS waschen und mit frischem Medium. Dieser Schritt ist wichtig, da dies roten Blutzellen, Immunzellen und andere Verunreinigungen entfernen kann.
6. Differenzieren Cells
- Die Wartung und die Induktion Medien.
Erhaltungsmedium
Komplett-Medium mit:
ent "> Insulin, Endkonzentration. 5 pg / ml (5 mg / ml Brühe, *** 100 ul Essigsäure in 10 ml H 2 O zur Vorbereitung angesäuert Wasser pH-Wert 2,5. aufzulösen Insulin in der angesäuerten Wasser. Shop bestellt -20 ° C)3,3 ',5-Triiodo-L-thyronine (T3), Endkonzentration. 1 nM (10 uM Lager auflösen *** in 1N NaOH T3 und fügen mittel-bis 10 uM Lager zu machen. Sigma cat # T-2877)
Lagerung bei 4 ° C, gut für 1 Woche
Induktionsmedium
Erhaltungsmedium enthält folgende Verbindungen:
Indomethacin, Endkonzentration. 125 uM (0,125 M Lager in Ethanol, Sigma cat # I-7378). Indomethacin muss erwärmt auf 60 ° C aufgelöst werden.
Dexamethason, Endkonzentration. 2 pg / ml (2 mg / ml Socke in Ethanol, Sigma cat # D-1756)
3-Isobutyl-1-methylxanthin (IBMX), Endkonzentration. 0,5 mm (0,25 M Stammlösung in DMSO, Sigma cat # I-5879)
Rosiglitazon, Endkonzentration. 0,5 uM(10 mM Stammlösung in DMSO, Sigma cat # R-2408)
Hinweis: Stellen Sie frische Induktionsmedium jeder Zeit.
- Wachsen primären Adipozyten zu 95-97% Konfluenz in Vollmedium (konfluent, aber nicht zu voll)
- Anderer regelmäßigen Vollmedium mit Induktionsmedium (Tag 0)
- Nach 48 Stunden (Tag 2), ändern Sie mittel-bis Erhaltungsmedium mit Rosiglitazon (0,5 uM)
- Nach weiteren 48 Stunden (Tag 4), an die frische Wartung Medium mit Rosiglitazon (1 pM) für 2-3 Tage ändern. 6-7 Tage nach dem Hinzufügen des Induktionsmedium werden Zellen vollständig differenziert zu reifen Fettzellen und sind mit Öltröpfchen gefüllt. Tröpfchen etwa 3-4 Tage nach der Induktion erscheinen.
Hinweis: Ändern Medium alle 2-3 Tage, bis die Zellen vollständig differenziert.
Zellen können jetzt geerntet und mRNA-Expression von UCP1 und other braunen Adipozyten-spezifische Gene können durch qRT-PCR gemessen werden. Western Blot verwendet, um Proteine zu detektieren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Browning von primären Adipozyten kann durch Messung mRNA-Expression von UCP1 und andere braune Fett-spezifisch oder selektiv Gene durch qRT-PCR zugegriffen werden. Präsentiert in Abbildung 1 ist Genexpressionsdaten in inguinal WAT-abgeleiteten primären Adipozyten. Die Zellen wurden induziert in der Gegenwart von zwei verschiedenen Dosen von Rosiglitazon bei 50 nM und 500 nM unterscheiden sind. Eine Untergruppe von Zellen wurde mit Forskolin bei 10 pM für 4 Stunden vor der Ernte behandelt. Dies wird cyclische AMP (cAMP) in den Zellen zu induzieren und zu aktivieren thermogene Gen Programm einschließlich UCP1 Expression.
Wie in 1A gezeigt, Rosiglitazon robust induziert UCP1 mRNA-Expression. Forskolin-Behandlung (cAMP) weiter erhöht die Rosiglitazon-induzierte UCP1 Ausdruck. Ein weiterer braunem Fett-selektive Gen wurde Cidea Expression auch robust von Rosiglitazon in einer dosisabhängigen Weise (1B) induziert. <em> FABP4 ist ein direktes Ziel von PPAR und einem adipogene Marker sowohl für braunes Fett und weiße Fett. Wie in 1C gezeigt, wurde FABP4 Expression auch erhöht, wenn mit Rosiglitazon behandelt. Dieser Effekt war nicht Bräunung einfach aufgrund einer Verstärkung der Adipogenese per se, da die Induktion von UCP1 und Cidea Ausdruck war immer noch signifikant, selbst wenn die mRNA-Spiegel von UCP1 und Cidea denen von FABP4 (Figuren 1D und E) wurden normalisiert.
Um erhöhte Proteingehalt von UCP1 bestätigen, sollten Western Blot durchgeführt werden. Wie in 2 dargestellt, eine hohe Dosis von Rosiglitazon (500 nM) robust erhöht UCP1 Proteins in den Zellen. Wichtig ist, wie zuvor in Ohno et al. 16, Rosiglitazon-induzierbare beige Zellen zeigten erhöhte Gesamt-und abgekuppelt Sauerstoffverbrauch in Reaktion auf cAMP Stimulation, eine important funktionellen Eigenschaften von braunen Fettzellen / beige Zellen.
Abbildung 1. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR), die die Induktion von braunem Fett-selektive Gene einschließlich UCP1 (A) und Cidea (B). Expression eines adipogene Marker FABP4 ist ebenfalls gezeigt (C). Wo angegeben, wurden die Zellen mit cAMP (Forskolin bei 10 uM) für vier Stunden vor der Ernte behandelt. Gesamt-RNA wurde unter Verwendung von differenzierten Zellen TRIzol (Invitrogen) extrahiert. Reverse Transkription wurde unter Verwendung eines cDNA-reverse Transkription-Kit (iScript, Applied Biosystems) und qRT-PCR wurde in Duplikaten mit SYBR grün fluoreszierenden Farbstoff mit einem ABI ViiA7 Maschine durchgeführt. TATA-bindende Protein (TBP) diente als eine Referenz-Gen und Primersequenzen sind in Tabelle 1 bereitgestellt. Rosiglitazone induzierte die braun-selective Genen UCP1 (D) und Cidea (E) nach der Normalisierung durch eine adipogene Markergen FABP4.
Abbildung 2. Western-Blot von UCP1 Proteinspiegel in inguinale Primärzellen mit Rosiglitazon in Dosen von 50 nM oder 500 nM behandelt. Insgesamt Zelllysate wurden isoliert und eingesetzt für Western Blottings. UCP1 Antikörper (Abcam) wurde für Western-Blot verwendet.
| Gen | Spezies | Vorwärtsprimer | Rückwärts-Primer |
| FABP4 | Maus | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | Maus | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| Tbp | Maus | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| UCP1 | Maus | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
Tabelle 1. Primersequenzen für Echtzeit-qPCR-Analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier präsentieren wir Ihnen eine zuverlässige zelluläre System, um die Entwicklung von beige / brite Zellen in primären kultivierten Adipozyten in Mäusen untersucht werden. Wie zu mehreren verfügbaren immortalisierten Zelllinien verglichen werden, ist dieses System dürfte verbesserte Relevanz für die Bräunung der weißen Fett in vivo bieten.
Obwohl die Studie dieser primären Adipozyten bietet einige Vorteile, es existieren auch einige Einschränkungen und Bedenken, die unbedingt zu berücksichtigen sind. Erstens ist dieses System sehr abhängig Differenzierung Potenz der Zellen. Die Expression von braunem Fett-selektive Gene wie UCP1 und Cidea sind besonders Differenzierung abhängig. Beispielsweise PPAR &ggr; Agonisten und BMP7 verbessern auch Adipogenese, weisen daher die "Bräunungs"-Effekte zu ziemlich in Zellen mit ähnlichen Grad an Differenzierung genutzt werden. Alternativ kann, wie in den Figuren 1D und E dargestellt, Normalisieren der Expression von braunem Fett-selektiveGene mit der Adipogenese Markergene wie FABP4 nützlich sein. Zweitens ist das Alter der Mäuse wichtig. Es könnte vielleicht verlockend sein, große Mäuse verwenden, um so viele Zellen wie möglich zu bekommen, aber die Differenzierung mit dem Alter abnimmt. Es wäre interessant zu untersuchen, wie interne und externe Signale wie Kälte Exposition, Fettleibigkeit, Insulinresistenz oder Alterung der Proliferation, Selbsterneuerung oder Differenzierung Kapazität dieser Zelltyp mit dieser Kultur System auswirkt. In unserem Fall ist das geeignete Alter von Mäusen des Typs C57BL/6J zwischen 6-8 Wochen. Drittens primären Zellen sind im Allgemeinen empfindlicher und zerbrechlicher als verewigt Adipozyten Linien. Obwohl Präadipozyten von BAT oder subkutane WAT bessere Kapazität von Proliferation und Differenzierung als solche aus viszeralen WAT haben, neigen sie dazu, ihre Differenzierung Kapazität nach mehreren Passagen verlieren. Wir in der Regel induzieren Differenzierung innerhalb einer maximal 3 Passagen.
Ein weiterer wichtigerwichtiger Aspekt zu berücksichtigen ist, dass das Stroma-Kreislauf-Fraktion eine heterogene Zellpopulation ist. In diesem Protokoll konzentrieren wir uns auf Präadipozyten und ihre Fähigkeit, auf einem braunen Fett-selektiven genetischen Programms in Gegenwart eines PPAR &ggr; Agonisten Rosiglitazon einzuschalten. Eine kürzlich durchgeführte Studie hat gezeigt, dass PDGFRA-positive Bi-potent Vorläuferzellen im Bauch WAT Anlass zu braunen Fettzellen in Reaktion auf Beta-adrenerge Stimulation in vivo 17. Allerdings bleibt die tatsächliche Herkunft der beige / brite Zellen, die als Reaktion auf chronische PPAR &ggr;-Agonisten ergeben unklar. Die Debatte wurde aktiv und Forscher sind mit dieser grundlegenden Frage beschäftigt, ist Bräunung der weiße Fett durch verbesserte white-to-braunes Fett Umwandlung, durch Proliferation von engagierten braunen Präadipozyten oder durch Transdifferenzierung von reifen weißen Fettzellen 18,19.
Rosiglitazon ist bekannt, dass die Bräunung von weißem Fett in vitro zu induzieren in vivo 20-26. Interessanterweise kann die Aktivierung von PPAR durch synthetische Agonisten eine Bräunung von weißem Fett, jedoch ist die Überexpression von PPAR in weißen Fettzellen nicht ausreicht 27. Wir haben zuvor gezeigt, dass die PPAR &ggr; Agonisten induzierten Bräunungseffekt teilweise durch die Proteinstabilisierung der PRDM16 16 vermittelt. Daher kann Identifizierung von kleinen Verbindungen oder endogene Moleküle, die PRDM16 Protein stabilisieren können gezielt induzieren die Bräunung der weiße Fett. Übliche Verfahren bietet eine robuste und zuverlässige experimentelles System auf solche Faktoren, die zu einer neuen therapeutischen Intervention bei der Behandlung von Fettleibigkeit und Diabetes führen können identifizieren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.
Acknowledgments
Wir danken Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda und Lauren Ruiz für Diskussionen, technische Hilfe und redaktionelle Unterstützung auf dem Manuskript. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem NIH (DK087853), aus dem Programm für Breakthrough Biomedical Research und von Asubio Pharm Inc. SKULA wurde von einem Anteil PhD-Stipendien an der Universität von Kopenhagen und dem EU FP7 Projekt Diabat (HEALTH-F2 abgestützt -2.011-278.373) an Lise Madsen und Karsten Kristiansen. Wir erkennen auch die DERC Zentrum Zuschuss (NIH P30 DK063720).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
