Summary
Primære hvite preadipocytes isolert fra hvite fettvev hos mus kan differensieres i beige / brite celler. Presenteres her er en pålitelig mobilnettet modellsystem for å studere molekylære reguleringen av "bruning" av hvitt fett.
Abstract
Brune adipocytter har evnen til Koble fra respiratoriske kjeden i mitokondriene og spre kjemisk energi som varme. Utvikling av UCP1-positive brune adipocytter i hvite fettvev (såkalt beige eller Brite celler) er sterkt indusert av en rekke miljømessige signaler som kronisk kulde eller ved PPARγ agonister, derfor har denne celletype potensial som et terapeutisk mål for fedme behandling. Selv om de fleste udødeliggjort adipocyte linjer ikke kan rekapitulere prosessen med "bruning" av hvitt fett i kultur, primære adipocytter isolert fra stromal vaskulær fraksjon i subkutan hvitt fettvev (WAT) gir en pålitelig mobilsystemet å studere molekylære kontroll av beige / brite celle utvikling . Her beskriver vi en protokoll for effektiv isolering av primære preadipocytes og for å indusere differensiering til beige / Brite celler i kultur. Bruning effekten kan vurderes ved uttrykket av brunt fett-selektiv markere som UCP1.
Introduction
Fedme er dramatisk økende over hele verden og er nå regnet som en av de mest alvorlige bekymringer til folkehelsen en. Dette forholdet er knyttet til en misbalance i energiinntak i forhold til utgifter og resultater i overskuddsenergi lagres som fett i hvitt fettvev (WAT). Forstørret WAT er assosiert med økt kroppsmasse og vekt, samtidig som brunt fettvev har evnen til å spre overskuddsenergi å produsere varme. Derfor BAT kan fungere som beskyttelse mot både kulde og fedme 2,3. Dette oppnås ved frakobling av elektrontransportkjeden i mitokondriene av uncoupling protein 1 (UCP1). Dette proteinet er ansett som en kjennetegn for nonshivering termotilblivelsen i BAT 3. Flere studier de siste årene avdekket at voksne mennesker har funksjonell BAT 4-8 og dermed kan manipulering av BAT hos mennesker være en potensiell terapeutisk intervensjon i kampen mot fedme og relaterte sykdommer.
jove_content "> Aktuelt bevis indikerer at to typer brune fettceller eksisterer hos gnagere," klassisk "eller" pre-eksisterende "brunt fett utvikles under prenatal scenen og danner dedikert brune adipose depoter i interscapular regionen og andre perifere vev På den annen side. , en "induserbar" form av brunt fett (såkalt brite eller beige celler) utvikler seg etter fødselen scenen og vises utblandet i hvite fettvev. De to typene brune fettceller er også delt av ulike utviklingsmessige opprinnelse. Mens pre-eksisterende oppstår brune fettceller fra myoblastsic-lignende Myf5 forløpere, de induserbare brite / beige celler utblandet i WAT oppstå fra en ikke-Myf5 avstamning 9,10. I tillegg er regulatoriske trasé av denne celletypen trolig være forskjellig fra Myf5-derived brun adipocytter 11. Utviklingen av beige celler (dvs. "bruning" av hvitt fett) kan aktiveres i respons til kronisk kulde og tilβ3-adrenoseptor-agonister eller PPARγ agonister hos voksne 12-14. De beige / brite celler er sannsynlig å være en lovende terapeutisk mål for manipulering av totale energibalansen og kan potensielt bli en del av fedme behandling, derfor er det viktig å forstå nøyaktig molekylære mekanismer og signalveier der miljømessige signaler styrer utviklingen av beige celler.For å forstå den molekylære kontroll av bruning av hvitt fett, er in vitro eksperimenter best egnet som differensiering av preadipocytes foregår heller asynkront og det er vanskelig å oppdage cellene in situ 15. Selv om studier på adipocyte utvikling hittil er utført i hovedsak på cellelinjer som 3T3-L1, 3T3-F442A eller HIB1, disse cellelinjer synes å mangle den molekylære signaturen beige celler. På den annen side, primære adipocytter isolert fra subkutan WAT er mest sannsynlig å rekapitulere forarbeides of bruning av hvitt fett i en celle autonome mote. Her har vi gi en protokoll for effektiv isolering av stromale vaskulære fraksjonen fra fettvev og for å indusere bruning av hvitt fett i respons til PPARγ agonister. Rosiglitazon har vist seg å være et spesielt effektivt formidler av bruning i disse celler. Som tidligere antydet 16, kan dette mobilsystemet brukes til å tjene et pålitelig mobilsystemet for å studere utviklingen av beige / Brite celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Forbered Fordøyelse Medium
Gjør 5 ml per 5 mus per vev (ca 1 ml / 1 g fettvev).
- Veie i fordøyelsen enzymer:
- Collaginase D: 1,5 U / ml (1108874103, 1 g, Roche, 70334223)
- Dispase II: 2,4 u / ml (04942078001, 0980 mg / lyo, Roche, 11466200) - Legg 25 ml PBS og bland godt å oppløse
- Legg CaCl 2 like før fordøyelse av vevet ved en endelig konsentrasjon på 10 mM
2. Dissekere fettvev fra Mus
- Disseksjon bør utføres nøye, og umiddelbart etter mus (6-8 uker gamle) er ofret. Arbeid sterilt med etanol sprayet på musen pels før du åpner den. Plasser vevet direkte i ren PBS, separat interscapular BAT og subkutan inguinal WAT.
- For interscapular BAT: har musen plasseres med ryggen møtt opp, kuttet åpen langs ryggen og hele veien til halsen. Den brunefettvev kan bli funnet rett under huden mellom skuldrene (interscapular). BAT kan sees som to lapper, butterfly formet. Et tynt lag av hvitt fett som dekker BAT skal være nøye fjernes.
- For subkutan WAT (inguinal WAT): fjerne hud. Inguinal WAT er funnet rett under huden på begge sider, med start nesten på ryggen og går sammen, innsiden av lårene og ned mot testikkel.
3. Klipp ut og Digest fettvev
- Raskt fjerne alle forurensninger, som hår, skjelettmuskulatur og bindevev fra vevsdelene.
- Tørr vev raskt på papir til ikke utvanne disseksjon medium med PBS og legg den på et tørt plate.
- Legg fordøyelsen medium (lagt CaCl 2 før fordøyelsen) og kjøttdeig vevet i små biter. Bland godt ved å pipettere opp og ned med en 5 ml pipette. Overfør hakket vev i 50 ml rør med resten av fordøyelsen medium, bland enda mer ved pipettering opp og ned.
- Resymé i 37 ° C med konstant omrøring ved 150 rpm i 40-50 minutter. Sjekk hver 10-15 minutt å sørge for at fordøyelsen går bra og for å hindre over-fordøyelsen.
Merk: Riktig fordøyelsen medium og tid er viktig. Vevet må godt fordøyd, men overskytende fordøyelsen kan skade cellene.
4. Filter cellesuspensjon
- Stopp fordøyelsen ved å tilsette 5 ml komplett medium (DMEM/F12 inneholdende 10% FPS og P / S). Cellene bør nesten være helt homogen. Bland godt av pipettering.
- Sentrifuger ved 700 xg i 10 min.
- SVF kan nå ses som et brunlig pellet på bunnen av røret. Aspirer fet modne adipocyte lag på toppen, og det meste av det flytende sjikt - holde pelleten og oppløse den i 10 ml komplett medium. Bland godt.
- Plasser en celle silen (50-70 um diameter) over en ny 50 ml rør og filtrere cellesuspensjonen.
5. Plate Cells
- Overføre cellesuspensjon til et 15 ml rør og sentrifuger ved 700 xg i 10 min.
- Aspirer medium og re-suspendere pellet i 10 ml komplett medium. Pipette og bland godt.
- Anslå hvor mange plater er nødvendig. Dette kan variere og avhenger av pelletstørrelse. En generell regel er 2 av 10 cm plater fra 5 mus for inguinal WAT og en 10 cm plate for BAT.
- Plate celler på kollagen belagt retter (R & D) i full medium
- 1-2 timer etter plating cellene, aspirat medium, vask med PBS to ganger og legge til frisk medium. Dette trinnet er viktig, da dette kan fjerne røde blodceller, immunceller og andre forurensninger.
6. Skille celler
- Gjør vedlikehold og induksjon medier.
Vedlikehold medium
Komplett medium tilsatt:
ent "> Insulin, avsluttende kons. 5 ug / ml (5 mg / ml lager, *** 100 ul eddiksyre i 10 ml H 2 O å forberede surgjort vann pH 2,5. oppløse insulin i det surgjorte vann. Butikkinfo lager hos -20 ° C)3,3 ',5-trijod-L-tyronin (T3), endelig kons. 1 nM (10 pM lager, *** oppløse T3 i 1N NaOH og legge medium for å gjøre 10 pM lager. Sigma cat # T-2877)
Oppbevar ved 4 ° C, god for en uke
Induksjon medium
Vedlikehold medium inneholdende følgende forbindelser:
Indometacin, endelig kons. 125 mikrometer (0,125 M lager i etanol, Sigma cat # I-7378). Indometacin skal være oppvarmet til 60 ° C for å bli oppløst.
Deksametason, endelig kons. 2 ug / ml (2 mg / ml i etanol sokk, Sigma cat # D-1756)
3-isobutyl-1-metylxantin (IBMX), endelig kons. 0,5 mm (0,25 M aksjer i DMSO, Sigma cat # I-5879)
Rosiglitazon, endelig kons. 0,5 pM(10 mM lager i DMSO, Sigma cat # R-2408)
Merk: Kontroller frisk induksjon medium hver gang.
- Grow primære adipocytter til 95-97% samløpet i fullstendig medium (konfluent men ikke altfor pakket)
- Endre regelmessig komplett medium med induksjon medium (dag 0)
- Etter 48 timer (dag 2), endre middels til vedlikehold medium med rosiglitazon (0,5 mikrometer)
- Etter ytterligere 48 timer (dag 4), bytt til frisk vedlikehold medium med rosiglitazon (1 mikrometer) for ytterligere 2-3 dager. 6-7 dager etter tilsetting av induksjon medium, er cellene fullt differensiert å modne fettcellene og er fylt med oljedråper. Dråper vises rundt 3-4 dager etter induksjon.
Merk: Endre medium hver 2-3 dager før cellene er fullt differensiert.
Celler kan nå høstes og mRNA uttrykk for Ucp1 og other brune adipocyte-spesifikke gener kan måles ved QRT-PCR. Western blot vil bli brukt til å detektere proteiner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bruning av primære adipocytter kan nås ved å måle mRNA uttrykk for Ucp1 og andre brune fett-spesifikke eller selektiv gener ved Qrt-PCR. Presentert i figur 1 er genekspresjonsdata i inguinal WAT-avledet primære adipocytter. Cellene ble indusert til å differensiere i nærvær av to forskjellige doser av rosiglitazon på 50 nM og 500 nM. Et delsett av celler ble behandlet med forskolin ved 10 uM for 4 hr før høsting. Dette vil indusere syklisk-AMP (cAMP) i cellene og aktivere thermogenic genet program inkludert Ucp1 uttrykk.
Som vist i figur 1A, rosiglitazon robust indusert Ucp1 mRNA ekspresjon. Forskolin behandling (cAMP) ytterligere forsterket det rosiglitazon-indusert UCP1 uttrykk. Annen brunt fett-selektiv genet, ble Cidea uttrykket også robust indusert av rosiglitazon i en dose-avhengig måte (Figur 1b). <em> Fabp4 er en direkte mål for PPARγ og en adipogenic markør for både brunt fett og hvitt fett. Som vist i figur 1C, ble Fabp4 uttrykket også økes når behandlet med rosiglitazon. Dette bruning effekten var ikke bare på grunn av en forbedring av adipogenese per se, siden induksjon av Ucp1 og Cidea uttrykk var fortsatt signifikant selv om mRNA nivåene av Ucp1 og Cidea ble normalisert til de av Fabp4 (Tall 1D og E).
Å bekrefte økt protein nivå UCP1 bør Western blot utføres. Som presentert i figur 2, en høy dose av rosiglitazon (500 nM) robustly økte UCP1 protein i cellene. Viktigere, som tidligere vist i Ohno et al. 16, rosiglitazon-induseres beige cellene viste forhøyet total og frikoblet oksygenforbruk svar på cAMP stimulering, en important funksjonelle egenskaper av brune fettceller / beige celler.
Figur 1. Kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR) som viser induksjon av brune fett-selektive gener inkludert Ucp1 (A) og Cidea (B). Ekspresjon av en adipogenic markør Fabp4 vises også (C). Hvor indikert, ble celler behandlet med cAMP (forskolin ved 10 uM) i fire timer før høsting. Total RNA ble ekstrahert fra differensierte celler ved hjelp TRIzol (Invitrogen). Revers transkripsjon ble utført ved hjelp av en cDNA revers transkripsjon kit (iScript, Applied Biosystems) og QRT-PCR ble utført i duplikater med SYBR grønt fluorescerende fargestoff med en ABI ViiA7 maskin. TATA-bindende protein (TBP) fungerte som en referanse-genet og primer sekvenser er gitt i tabell 1. Rosiglitazon induserte den brune-selective gener Ucp1 (D) og Cidea (E) etter normalisering av en adipogenic markørgen Fabp4.
Figur 2. Western blot av UCP1 protein nivåer i inguinal primære celler behandlet med rosiglitazon i doser på 50 nM eller 500 Nm. Totalt cellelysater ble isolert og anvendt for vestlige blottings. UCP1 antistoff (Abcam) ble brukt for Western blotting.
| Gene | Arter | Forward primer | Reversere primer |
| Fabp4 | mus | ACACCGAGATTTCCTTCAAACTG | CCATCTAGGGTTATGATGCTCTTCA |
| Cidea | mus | ATCACAACTGGCCTGGTTACG | TACTACCCGGTGTCCATTTCT |
| TBP | mus | ACCCTTCACCAATGACTCCTATG | TGACTGCAGCAAATCGCTTGG |
| Ucp1 | mus | CACCTTCCCGCTGGACACT | CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG |
Tabell 1. Primer sekvenser for sanntid qPCR analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her presenterer vi en pålitelig mobilsystemet å studere utviklingen av beige / brite celler i primære dyrkede adipocytter i mus. Som sammenlignet med flere tilgjengelige udødeliggjort cellelinjer, er dette systemet sannsynligvis tilby forbedret relevans til bruning av hvitt fett in vivo.
Selv om studien av disse primære adipocytter har noen fordeler, det også finnes noen begrensninger og bekymringer som er viktige å vurdere. Først, er dette systemet svært avhengige differensiering potens av cellene. Uttrykk for brune fett-selektive gener som Ucp1 og Cidea er spesielt differensiering-avhengige. For eksempel, PPARγ agonister og BMP7 også forbedre adipogenese derfor de "browning" effekter må være ganske aksesseres i celler med lignende grader av differensiering. Alternativt, som vist i figurene 1D og E, normalisere uttrykket av brunt fett-selektivgener med at av adipogenese markørgener som Fabp4 kan være nyttig. Sekund, er en alder av musene viktig. Det kan kanskje være fristende å bruke store mus for å få så mange celler som mulig, men som differensiering avtar med alderen. Det ville være interessant å undersøke hvordan interne og eksterne signaler som kulde, fedme, insulin-resistens eller aldring påvirker spredning, selvfornyelse eller differensiering kapasitet på denne celletypen bruke denne kulturen system. I vårt tilfelle er riktig alder av mus av typen C57BL/6J mellom 6-8 uker. Tredje, primære celler er generelt mer følsomme og mer skjør enn udødeliggjort adipocyte linjer. Selv preadipocytes fra BAT eller subkutan WAT har bedre kapasitet for spredning og differensiering enn de fra visceral WAT, har de en tendens til å miste sin differensiering kapasitet etter flere passasjer. Vi normalt indusere differensiering innen maksimalt tre passasjer.
En annen viktigviktig aspekt å vurdere er at stromale vaskulær fraksjonen er en heterogen cellepopulasjon. I denne protokollen har vi fokus på preadipocytes og deres evne til å slå på en brun fett-selektiv genetisk program i nærvær av en PPARγ-agonist rosiglitazon. En fersk studie har vist at PDGFRA-positive bi-potente stamceller i buk WAT gir opphav til brune fettceller i respons til beta-adrenerge stimulering in vivo 17. Men fortsatt er selve opprinnelsen til de beige / brite celler som oppstår i respons til kronisk PPARγ-agonist behandling uklar. Debatten har vært aktiv og forskere er opptatt av dette grunnleggende spørsmålet; er bruning av hvitt fett gjennom forbedret hvit-til-brunt fett konvertering, gjennom spredning av engasjerte brune preadipocytes eller gjennom transdifferentiation fra modne hvite fettceller 18,19.
Rosiglitazon har vært kjent for å indusere bruning av hvitt fett in vitro in vivo 20-26. Interessant, kan aktivering av PPARγ av syntetiske agonister indusere bruning av hvitt fett, er imidlertid overuttrykte PPARγ i hvite adipocytter ikke tilstrekkelig 27. Vi har tidligere vist at PPARγ agonist-indusert bruning effekten formidles delvis gjennom proteinet stabilisering av PRDM16 16. Derfor kan identifisere små forbindelser eller endogent molekyler som stabiliserer PRDM16 proteinet kunne spesifikt indusere bruning av hvitt fett. Gjeldende metoden gir en robust og pålitelig eksperimentelt system for å identifisere slike faktorer, som kan føre til en ny terapeutisk intervensjon for behandling av fedme og diabetes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Vi takker Haruya Ohno, Kosaku Shinoda, Louis Sharp, Emi Tomoda, og Lauren Ruiz for diskusjon, teknisk hjelp og redaksjonell bistand på manuskriptet. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra NIH (DK087853), fra Program for Breakthrough biomedisinsk forskning og fra Asubio Pharm Inc. til SKULA ble støttet av en aksje Stipendiater fra Københavns Universitet og EU FP7-prosjektet Diabat (HELSE-F2 -2011 til 278373) til Lise Madsen og Karsten Kristiansen. Vi erkjenner også DERC sentrum tilskuddet (NIH P30 DK063720).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
- Barness, L. A., Opitz, J. M., Gilbert-Barness, E. Obesity: genetic, molecular, and environmental aspects. American Journal of Medical Genetics. Part A. 143A, 3016-3034 (2007).
- Rothwell, N. J., Stock, M. J. Combined effects of cafeteria and tube-feeding on energy balance in the rat. The Proceedings of the Nutrition Society. 38, 5A (1979).
- Cannon, B., Nedergaard, J. Brown adipose tissue: function and physiological significance. Physiological Reviews. 84, 277-359 (2004).
- Cypess, A. M., et al. Identification and importance of brown adipose tissue in adult humans. The New England Journal of Medicine. 360, 1509-1517 (2009).
- van Marken Lichtenbelt, W. D., et al. Cold-activated brown adipose tissue in healthy men. The New England Journal of Medicine. 360, 1500-1508 (2009).
- Virtanen, K. A., et al. Functional brown adipose tissue in healthy adults. The New England Journal of Medicine. 360, 1518-1525 (2009).
- Zingaretti, M. C., et al. The presence of UCP1 demonstrates that metabolically active adipose tissue in the neck of adult humans truly represents brown adipose tissue. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 23, 3113-3120 (2009).
- Saito, M., et al. High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans: effects of cold exposure and adiposity. Diabetes. 58, 1526-1531 (2009).
- Seale, P., et al. PRDM16 controls a brown fat/skeletal muscle switch. Nature. 454, 961-967 (2008).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2010).
- Coulter, A. A., Bearden, C. M., Liu, X., Koza, R. A., Kozak, L. P. Dietary fat interacts with QTLs controlling induction of Pgc-1 alpha and Ucp1 during conversion of white to brown fat. Physiological Genomics. 14, 139-147 (2003).
- Klingenspor, M. Cold-induced recruitment of brown adipose tissue thermogenesis. Experimental Physiology. 88, 141-148 (2003).
- Cinti, S. The adipose organ. Prostaglandins, leukotrienes, and essential fatty acids. 73, 9-15 (1016).
- Ghorbani, M., Himms-Hagen, J. Appearance of brown adipocytes in white adipose tissue during CL 316,243-induced reversal of obesity and diabetes in Zucker fa/fa rats. International Journal of Obesity and Related Metabolic Disorders: Journal of the International Association for the Study of Obesity. 21, 465-475 (1997).
- Hansen, J. B., Kristiansen, K. Regulatory circuits controlling white versus brown adipocyte differentiation. The Biochemical Journal. 398, 153-168 (2006).
- Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. PPARy agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein. Cell metabolism. 15, 395-404 (2012).
- Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding. Cell Metabolism. 15, 480-491 (2012).
- Cinti, S. Transdifferentiation properties of adipocytes in the adipose organ. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 297, E977-E986 (2009).
- Barbatelli, G., et al. The emergence of cold-induced brown adipocytes in mouse white fat depots is determined predominantly by white to brown adipocyte transdifferentiation. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 298, E1244-E1253 (2010).
- Petrovic, N., et al. Chronic peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) activation of epididymally derived white adipocyte cultures reveals a population of thermogenically competent, UCP1-containing adipocytes molecularly distinct from classic brown adipocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 7153-7164 (2009).
- Rong, J. X., et al. Adipose mitochondrial biogenesis is suppressed in db/db and high-fat diet-fed mice and improved by rosiglitazone. Diabetes. 56, 1751-1760 (2007).
- Wilson-Fritch, L., et al. Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone. The Journal of Clinical Investigation. 114, 1281-1289 (2004).
- Sell, H., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonism increases the capacity for sympathetically mediated thermogenesis in lean and ob/ob mice. Endocrinology. 145, 3925-3934 (2004).
- Fukui, Y., Masui, S., Osada, S., Umesono, K., Motojima, K. A new thiazolidinedione, NC-2100, which is a weak PPAR-gamma activator, exhibits potent antidiabetic effects and induces uncoupling protein 1 in white adipose tissue of KKAy obese mice. Diabetes. 49, 759-767 (2000).
- Vernochet, C., et al. C/EBPalpha and the corepressors CtBP1 and CtBP2 regulate repression of select visceral white adipose genes during induction of the brown phenotype in white adipocytes by peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists. Molecular and Cellular Biology. 29, 4714-4728 (2009).
- Tai, T. A., et al. Activation of the nuclear receptor peroxisome proliferator-activated receptor gamma promotes brown adipocyte differentiation. The Journal of Biological Chemistry. 271, 29909-29914 (1996).
- Sugii, S., et al. PPARgamma activation in adipocytes is sufficient for systemic insulin sensitization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 22504-22509 (2009).
