Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

Published: February 8, 2013 doi: 10.3791/50217

Summary

Akciğer sistemik bronşiyal arter ve pulmoner arterler hem perfüze edilir. Çoğu akciğer patolojilerinde, bu sağlam neovaskülarizasyonu gösterir küçük sistemik damar olduğunu. Pulmoner kan akımının kesilmesi tempolu bronşiyal anjiyogenez teşvik etmektedir. Biz bronşiyal neovaskülarizasyon teşvik sol pulmoner arter iskemi oluşturulmadan cerrahi ayrıntıları.

Abstract

Erişkin akciğer sistemik bronşiyal arter ve pulmoner arterler üzerinden akan tüm venöz dönüşü hem perfüze edilir. Çoğu akciğer patolojilerinde, bu gelişmiş akciğer perfüzyon için bir ihtiyaca cevap veriyor ve sağlam neovaskülarizasyonu gösteren küçük sistemik damar olduğunu. Pulmoner arter tıkanıklığı ile uyarılan pulmoner vasküler iskemi insan hızlı bir sistemik arteryel anjiyogenez yanı sıra çok sayıda hayvan modellerinde neden olduğu gösterilmiştir. Sıçanlarda bronşiyal arter proliferasyon zaman dersin histolojik değerlendirmesi dikkatlice Weibel 1 tarafından tanımlanmış olmasına rağmen, yeni gemiler bu örgütlü büyümesi için sorumlu mekanizmalar net değildir. Biz bronşiyal neovaskülarizasyonu neden sıçan sol pulmoner arter iskemi oluşturulmadan cerrahi ayrıntıları. Anjiyogenez ölçüde kantitasyonu akciğer içinde iki vasküler yatak varlığı nedeniyle ek bir engel oluşturmaktadır. Yöntemleretiketli mikrosfer enjeksiyonları göre fonksiyonel anjiyogenez belirlemek için sağlanır.

Introduction

Akciğer Sistemik anjiyogenez iyi tanınır. Astım 2, interstisyel akciğer fibrozis 3, kanser 4, ve kronik pulmoner tromboemboli 5, sistemik damar ve akciğer parankimi akciğer proliferates çevreleyen ve işgal gibi hastalık durumlarında. Ancak, sistemik bu diferansiyel ziyade aktivasyonu pulmoner dolaşım incelemek için hayvan modelleri birkaçıdır. Belki de yetişkin memeli akciğerde sistemik neovaskülarizasyon en tekrarlanabilir modeli kronik pulmoner arter iskemi uyaran sonra oluştuğu olmasıdır. 5-7 insanlarda sol akciğer arter tıkanması olan cevap, köpekler 8, 9 domuz, koyun 10, kobay 11, sıçan 1, 12, 13, 14 ve fareler bronşiyal arter hem de interkostal arterlerin hızlı yayılmasıdır. Sistemik neovasculari sorumlu mekanizmalarpulmoner iskemi sonrası akciğer kıymetleştirme büyük ölçüde bilinmemektedir ve yaygın olarak çalışılmamıştır. Sol pulmoner arter tıkanıklığı sonrası sıçan bronş anjiogenezin zamanlı kurs dikkatli Weibel 1 histolojik çalışmada tarif edilmiştir. Bu iş rat uzanan, laboratuar bu süreçte önemli büyüme faktörleri yanı sıra, akciğer içinde bu neovaskülatür fizyolojik sonucu, her iki üzerine odaklanmıştır. Sonuçlar CXC kemokin CINC-3 erken iskemi sonrası ve CXCR2 bir nötralizan antikor ile sıçan tedavisinde yükselmiş göstermek, CINC-3 reseptör, anjiyogenez 13 azaltır. 14 gün pulmoner iskemi başlangıcından sonra yeni kurulan bronşiyal damar anlamlı artış protein geçirgenliği 15 ile anormal olduğu gösterilmiştir. Sol akciğer fonksiyonu difüzyon kapasitesi ve akciğer hacmi 15 bir azalma azalma normal bir gösteri değildi. Neovaskülatür co olsakronik akciğer iskemi sırasında akciğer dokusunun korunmasına ntributed, normal olmak ve solunum fonksiyon sürekli bir azalma katkıda bulunabilir olmadığı görülüyor.

Belki de bu modelin en çok merak yönlerinden biri kan damarlarının genişlemesi mekansal dağılımı ile ilgilidir. Iskemiye bağlı akciğer parankimi içinde büyüme faktörlerinin serbest rağmen neovaskülatür nispeten büyük memba bronşiyal arterler kaynaklanır. Normal Bronşiyal arter aortadan küçük bir dal olarak ortaya çıkan ve karina de havayolu ağacı işgal etti. Böylece büyüme faktörleri arteriogenesis işleminin başlangıç ​​aşamasında indüklemek ile ilgili bir mekanizma açık değildir. Biz sıçan, insana benzer bir vasküler anatomisi, akciğer iskemi sırasında sistemik anjiyogenez sorumlu mekanizmaları incelemek için eşsiz bir fırsat sunuyor öneririz. Sol pulmoner arterde tam tıkanma insan deneklerde nadir bir olay olmasına rağmen,artmış bronşiyal vaskülarite benzer hastalarda indüklenebilirler görünüyor pulmoner arter tıkanıklığı 16 ne olursa olsun yeri ve boyutu. Böylece, sıçanlarda sol pulmoner arter ve anjiogenezin büyüklüğünü ölçmek için bir araç Arter için cerrahi yaklaşım ayrıntılı bir açıklamasını sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Sıçanlar üzerinde gerçekleştirilen tüm protokoller Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından ve NIH yönergeleri doğrultusunda onaylanmıştır. Mümkün olduğunda, hayvan cerrahi ameliyat kontaminasyon en aza indirmek için cerrahi bölgeden ayrı bir alanda prepped olmalıdır.

1. Anestezi / analjezi

  1. % 3 izofluran ile aşılanmış bir indüksiyon odasında; Yeri sıçan (Harlan, Indianapolis, IN Sprague Dawley erkek rat, 125-150 g).
  2. % 3 izofluran anestezi ile burun konisi ve ventilatöre bağlı cerrahi gemide anestezi sıçan yerleştirin. Tüm prosedürler için steril tekniği kullanın. Steril çalışma alanı sağlamak için fare asmak.

2. Entübasyon

  1. Cerrahi bant kullanarak yatar pozisyonda uzantıları hareketsiz.
  2. Burun konisi, sıçan kaldır, yastıklı forseps ile dil uzatmak.
  3. Kılavuz olarak küntleşmiş metal Stilet ile 14 gauge intracath kullanın. Geride kaydırıntrakea içine ngue.
  4. Trakeada beyaz plastik intracath bırakarak metal Stilet çıkarın. Sıçan nefes ve hava borusu akan emin olun.
  5. Kateter doğrudan adaptör ile burun konisi değiştirin, ventilatör (; 8 ml / kg tidal volüm; Kemirgen Vantilatör Model 683, Harvard Apparatus, Holliston, Massachusetts 90 solunum / dk) sıçan bağlayın.
  6. Puralube (Butler Schein, Dublin, OH) gözleri Veteriner merhem uygulayın.

3. Torakotomi

  1. Sıra sıçan sağ tarafında aşağı, cerrahi bant kullanarak uzantıları hareketsiz.
  2. Sol tarafında göğüs kafesi alanı Tıraş.
  3. Küçük vakum ile aşırı kürk çıkarın.
  4. Povidon-İyot swabstick (Dynarex Corporation Orangebur, NY) ardından alkol ile silinerek steril alanın olun. Bu işlem iki kez daha (üç scrubs toplam) tekrarlayın.
  5. Alanın merkezinde neşter steril kesme makası veya steril ile transvers kesi olun.
  6. L boyunca teşrih küntaşağı kaburga (son kat kaburga kaplayan ince bir zardır) doku ve yağ ayers.
  7. 3. interkostal alan belirlemek için kaburga sayısı.
  8. Steril 45 ° Graefe forseps kullanarak, 3. ve 4. kaburga arasında künt kesi yapmak.
  9. , Kaburga ayırıcılar yerleştirin hafifçe açık tutmak için sütürler açık akciğer tam görselleştirme void yer bandı oluşturma çekin.

4. Sol Pulmoner Arter Ligasyonu

  1. 90 ° Graefe forseps ile, sağ el ile sol arka akciğer taşıyın.
  2. Dumont pattern # 5 düz forseps kullanarak, sol eliyle sol pulmoner arter ve havayolu kapmak. Sol pulmoner arter yolu üstünde yatıyordu olacaktır. Forseps tabloya doğrudan dik olduğundan emin olun. Ayrıca, en distal pozisyonlar (parankim yakın) de sol pulmoner arter / sol ana bronşu almak için en etkili yöntemdir. Bu sol manevra ile kenara havalandırma sol akciğer itin.
  3. Dumont kullanınpattern # 5 45 ° kendi doğal sınırları, sol ana bronşu gelen sol pulmoner arter ayırmak için kavisli bir forseps. Bu ayırma çizgisi iki ayrı yapı arasındaki ince ve beyaz görünür.
  4. Damar geçmeden arter altında doğrudan ayırın; sorunsuz ayrılması boyunca birlikte düzenlenen forseps ipuçları kaydırın.
  5. Forseps ipuçları gözle sol pulmoner arter ve sol ana bronşu ayrılır kadar devam edin. Ucu sadece küçük bir nokta tam yoluyla olmalıdır. Kan forseps ucu üzerinde görselleştirilebilir edilebilir ise, o zaman yoluyla tam değildir ve ligasyon teşebbüs edilmemelidir. Bir kez uzayda, sol pulmoner arter forseps eğrisi yatıyordu olacaktır. Bu pozisyonda tutun.
  6. Yavaşça künt forseps kavrama (sol) bırakın ve bir pre-cut sütür (~ 2-3 inç; polipropilen sütür boyutu 6-0; Myco Tıp, Cary, NC) parça kapmak.
  7. Sol pulmoner arter ve g kucağında kavisli bir forseps açınrab sütür. Yavaşça forseps eğriye göre yukarıya doğru bir hareketle sol pulmoner arter ve sol ana bronşu arasındaki uzayda sütür çekin.
  8. Bir kare düğüm ile sol pulmoner, sütürün dikkatle kırt kalanı tıkayıp sıkılaştırın.
  9. (Mavi monofilaman) polipropilen ile iki kez kaburga ve sütür tutun künt forseps kullanarak Kapat kaburga boyutu dikkatli olmanın, bir 19 mm, bir hemostat iğne (Myco Tıp, Cary, NC) kesim 3/8 daire ters bağlanmış 4-0 sütür cilt (sadece kaburga).
  10. Gevşek bir kare düğüm tamamlayın, pozitif ekspirasyon sonu basınç (PEEP; 2-5 cmH2O) üzerinde yer akciğer şişirmek, sıkı akciğer ardından güvenli düğüm hyperinflate ve sütür kalanı kırpma önce başka bir tam düğüm yapmak. PEEP çıkar ve akciğeri olmadığından emin olmak için 30 saniye görselleştirmek. 5 damla bupivicaine (APP Pharmaceuticals, Schaumbur, IL) uygulayın.
  11. Kapat yara üzerine doku yapıştırıcısı yerleştirerek cilt ve birlikte cilt itin tr back kullanarakpamuk uçlu aplikatör d. Daha sonra yara yerinden 24 saat süre ile her 8 saatte ya da hayvan normal aktivite kadar devam eder bupivakain (2.0 mg / kg deri altı) ver. Bu alanda subkutan tabakası çok ince olduğundan, kendi kendine dikiş kolay değildir. Doku yapıştırıcı uygulanır ve deri birlikte itilir, bu da deri altı tabaka kapatır.
  12. Izofluran gazı kapatın ama istemli hareket dönünceye kadar oda havası 1-2 dakika sıçan havalandırmak için devam ediyor. Ventilatörden trakeal tüp ayırın ve sıçan çıkarmadan önce spontan soluyan olduğundan emin olun.
  13. Pamuklu çubukla ve monitör hareketi ve kurtarma ile gözlerden Puralube siliniz. (0.05 mg / kg intraperitoneal, Butler Schein, Dublin OH) Buprenorfin hidroklorür enjekte. Ameliyat sonrası 48 saat süreyle analjezik her 12 saatte teslim devam edin.

5. Sol Karotis Arter Kanülasyonu

Bronş perfus büyüklüğünü değerlendirmek için,sol pulmoner arter ligasyonu sonrası istenilen zaman noktalarında iskemik sol akciğer iyon, arkus içine sol karotis arter yoluyla etiketli mikrosferler enjekte. 1-2 yukarıdaki gibi sıçan hazırlayın.

  1. Boyun boyunca orta hat Kes, trakea ve sol karotis arter (mikroküre enjeksiyon yerinde) ortaya çıkarmak için teşrih künt.
  2. 25 g iğne, 4 yollu musluk, 1 ml şırınga bağlı damar içine PE20 boru (Becton Dickinson, MD Sparks) ve heparinize salin, künt ucu ile dolu kateter yerleştirin.
  3. Su sonikatör 30 sn için; mikroküreler (Invitrogen, Eugene, OR x 10 6 küre / ml 15 mikron kızıl polistiren floresan mikrosferler, 1) Yeri şişe.
  4. Şişe, vorteks çıkarın ve 20 g iğne yoluyla 1 ml Hamilton cam şırınga (Hamilton Company, Reno, NV) içine 0.5 ml (500.000 mikroküreler) hazırlar.
  5. 4-yollu musluk Hamilton şırınga takılır ve enjektör pompası (oranıyla mikroküreler demlenmeye: 500 ul / dak; Genie Plus, Kent Bilimsel, Torringt) BT üzerinde.
  6. 500 ul / dk 'heparized tuzlu 1 ml Hamilton şırıngası ile aynı hizada cihazları çıkarın.
  7. Tam göğüs torakotomi gerçekleştirin ve inferior vena kava kopararak sıçan exsanguinate.
  8. Sol akciğerde ve diğer ilgi dokuları çıkartın.
  9. Dokudan mikroküreler ayıklamak için, kan kaybından sonra sıçan sol akciğerinin tamamı almak ve 2M KOH (4-6 ml) koyun. 55 ° C su banyosunda Yeri ve doku sindirim için bir gece bekletin. , Boncuk yıkamak için vorteks (10 sn) ve santrifüj (; 10 dakika süreyle 20 ° C'de 2.000 rpm) Tween 80 (0.25%) ekleyin. , Süpernatantı 2-etoksietil asetat (1 mi) çözündürüldü, girdap ekleyin ve 1 saat boyunca bekletilir. Vortex süspansiyon ve santrifüj (2.000 rpm; (20 ° C'de 10 dak) bir Hitachi F-2500 floresans spektrometresi kullanılarak bir küvet ve ölçülere floresans, yer içeren 2-etoksietil asetat sulu tabaka (eksitasyon 612/emission 618 çıkarın. ; Digilab, Holliston, MA).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vasküler döküm: sıçan sol pulmoner arter iskemi etkilerinin sonuçları Şekil 1'de gösterilmiştir. Gösterilen bronşiyal damar bir metakrilat döküm ve 28 gün LPAL sonra sol havayolu ağacının geniş vaskülarite olduğunu. Bu döküm elde etmek için, sistemik damar inen aorta retrograd bir metakrilat karışımı (kırmızı) enjekte edildi ve trakea kanüle ve beyaz bir silikon bazlı bir materyal enjekte edildi. Bu vasküler döküm akciğer bronş anjiyogenez olağanüstü bir görselleştirme sağlar. Özellikle kayda değer sol akciğer büyük, kıvrımlı yukarı bronş damarları vardır. Bu resimde gösterilmemiş olsa da, sağ bronş normal, yalnız, sağ bronşiyal arter dışında büyük gemiler esasen yoksundur.

Histoloji: havayolu vaskülarizasyon değişiklikler histolojik kesitleri Şekil 2'de gösterilmiştir sol akciğerde görüntülendi. Bronkodilasyonaial gemiler LPAL gösterilir 3 gün ve 14 gün sonra görülür. Şekil 2A 3 gün LPAL sonra sol akciğerde bir hava yolu kesitini göstermektedir. Hava yolu duvarının içinde bulunan tanınmış bronşiyal damarların unutmayın. Inset PCNA (proliferatif hücre çekirdek antijeni) için 2A lekeli bir seri bölümünden olduğunu. Bronş damar astar PCNA pozitif endotel hücreleri not edin. Şekil 2B 14 gün sonra LPAL bir sıçan, bir sol akciğer kesitini göstermektedir. Bu zaman noktasında bronşiyal damar ve solmuş pulmoner arter artan boyutunu unutmayın.

Fonksiyonel anjiyogenez: bronşiyal arterler vasıtasıyla sol akciğerin sistemik perfüzyon büyüklüğünü değerlendirmek için, floresan mikrosferler tüm mikroküreler kardiyak çıktının bir parçası olarak arkus karışık böyle tıkalı sol karotis arter infüze edildi. Mikroküre bu boyutu (15 mikron) dan Floresans naif sol akciğerde neredeyse belirlenemeyen oldusıçanlar. Ancak sıçan sol akciğerde ölçülen önemli, anlamlı ve tutarlı bir düzeyde 14 gün LPAL sonra okudu vardı.

Şekil 1
Şekil 1. Sol pulmoner arter ligasyonu (LPAL) sonra sol bronş (beyaz) 28 gün ile ilişkili dolambaçlı neovaskülatür Red metakrilat döküm.

Şekil 2A
Şekil 2A. 3 gün sol pulmoner arter (PA) büyük bir pulmoner arter bitişik bronşial damarlar gösteren ligasyonu sonrası sol sıçan akciğer Havayolu bölümü. Ankastre bronşiyal arter endotel hücreleri (BA) çoğalan belirlemek için PCNA ile boyanmış bir seri kesitini göstermektedir. Uzaklık bar 200 mikron gösterir.

<img src = "/ files/ftp_upload/50217/50217fig2B.jpg" alt = "Şekil 2B" />
Şekil 2B. Sol akciğer bölümünde 14 gün LPAL sonra sıçan alınan. Bronş damar boyutu önemli ölçüde artması not edin. Uzaklık bar 500 mikron gösterir.

Şekil 3
Şekil 3 sol pulmoner arter ligasyonu sonrası naif ratlar (n = 2 sıçan) ve 14 gün sol akciğerde teslim floresan mikrosferler Analizi. (LPAL; n = 3 adet).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Test edilen bütün türlerde Sol pulmoner arter ligasyonu iskemik akciğer sağlam sistemik neovaskülarizasyon yol açar. Biz bir sıçan modelinde cerrahi yaklaşımın ayrıntıları sundu. Bizim sonuçlarımız vasküler döküm, histopatoloji tarafından üretilen, ve in vivo etiketleme bronşiyal arterler prolifere olduğunu göstermektedir ve akciğer parankimi serpmek. Böylece, bronşiyal anjiogenezin mekanizmaları kronik pulmoner tromboemboli insanlık durumunun paralellik bir hayvan modelinde okudu olabilir. Ayrıca, bu klinik küçük hayvan modeli insan deneyleri savunulabilir değildir formu ve neovaskülarizasyon işlevini incelemek için bir fırsat sağlar.

Listelenen cerrahi cerrahi deneyime sahip bir hayvan teknisyenine hızlı bir şekilde bu tekniklerde ustalaşmak için mümkün olmalıdır gibi yeterli detay verin. Bizim gözlemler Sprague Dawley erkek ağırlıklı olmasına rağmensıçanlar (75-100 g), diğer suşlar çalışma için eşit ölçüde uygundur. Biz sistematik bronşiyal anjiogenezin ölçüde yaşa bağımlılığı değerlendirildi değil. Biz de sol karotis arter kanülasyonu bilgilerini sağlamıştır. Biz retrograd sol karotis arter infüze floresan mikro ölçüm kullanmış olduğunuz iskemik akciğerin sistemik perfüzyon ve dolayısıyla, fonksiyonel anjiyogenez için bir belirteç olarak aort ve sol akciğerde sonradan lodge karıştırın. Bu ölçüm infüzyon döneminde kardiyak output değişiklikler nedeniyle değişken olabileceğini kabul edersiniz. Ancak, bunu sürekli ölçüm prosedürü öncesi ve sırasında sıçanlarda sistemik kan basıncı eş zamanlı ölçümü kardiyovasküler statüsünde herhangi bir değişiklik göstermiştir. Ayrıca, Şekil 3'te sunulan sonuçlar sıçan, bir grup içinde bir değişkenlik küçük olarak kabul edilebilir bir geniş olduğunu gösterir. İlginç bir şekilde, naif hayvanlarda bir minimall gösterdifloresans y saptanabilir seviyesi normal sıçanlarda çok düşük bir bronşiyal perfüzyon düşündürmektedir. Daha küçük bir mikro küreleri kullanılarak perfüzyon farklı bir taban seviye tespit etmek için izin verebilir.

Bizim sonuçlarımız LPAL 28 gün sonra bir iyi gelişmiş damar göstermektedir. Sol bronş ile ilişkili bronş damarlarının metakrilat döküm geniş ve dolambaçlı neovaskülatür dikkat çekici bir görünüm sağlar pulmoner iskemi yanıt formları. Belki daha az dramatik ama vasküler döküm ile tutarlı 14 gün LPAL (Şekil 2B) sonra sol akciğer kesitlerde elde görüntülerdir. Sıçanlar gösterilen kesit için önceki dokusu hasat etmek kandan arındırıldı. 3 gün LPAL (Şekil 2A) sonra elde edilen sol akciğer ve histolojik kesitler ile bronş damarların büyüklüğü karşılaştırıldığında Bununla birlikte, bronş damarlarının oluşmasını özellikle açıktır. Bronşiyal endotel gözle görülürçoğalması olarak PCNA boyanma kullanılarak değerlendirildi. Böylece anjiyogenez sürecinin başlangıcından pulmoner iskemi sonrası erken başlar.

Neovaskülatür kapsamını belirlemek Bizim yöntemleri bronşiyal damar ve damar döküm perfüze, tam işleyen mikroküre ölçümü bronşiyal endotel çoğalan erken histolojik değerlendirmesine arasında değişmektedir. Amacımız, zaman içinde bronş anjiyojenez sürecini perspektif bir sağlamaktır. Gemi sayma Proliferatif değerlendirici hassas, yeterli örneklem büyüklüğü ve solunum ile ilişkili damarların erken anjiyogenez birincil odağı olduğunu bir varsayım gerektirir. Akciğer mikroküreler arasında Değerlendirilmesi tam gelişmiş anjiogenik damar, dolayısıyla geç fenomen gerektirir. Ayrıca, yöntem, işlem sırasında, infüzyon sırasında kardiyak output herhangi bir değişiklik küreler karıştırılması yeterli varsayar ve teslim spher sayısındaki değişikliklerinES kaplar ve değil vazoreaktivite değişiklikler perfüze sayısında değişiklikleri yansıtır. Biz daha iyi normalde iki farklı vasküler yatak ve pulmoner ağlar iskemi sırasında patent kalması için görünür olan bir organ sistemik anjiogenezin sürecini tanımlamak için sürekli meydan kabul. Sıçan Endotel etiketleri histokimyasal iki vasculatures ayıran benzersiz bir anjiogenik fenotip ispatlanamamıştır. Vivo görüntüleme solunum ve kalp hareketi hem tarafından engellenmektedir. Biz daha hassas neovaskülarizasyon ölçüde ölçmek için ek yöntemler aramaya devam ediyor. Zorluk olmayan diğer Perfüze pulmoner kapiller ağları arasında küçük ama büyüyen bir sistemik vasküler yatağa tespit etmek kalır.

Iskemi kaynaklı anjiyogenez sorumlu mekanizmalar tam olarak anlaşılmış değildir. Geçmiş çalışma genel süreci 13 belli bir aşamada bir rol oynamaya olarak CXC-kemokinlerin implicates. BecBu modelde sol akciğer ause iskemik ancak tam havalandırılmış, hipoksi-indüklenebilir faktör gerçekleşir sistemik neovaskülarizasyon bir rol oynaması beklenmiyor. Bu durumun iskemi doku hipoksisi eşliğinde diğer organlardan farklı olduğu vurgulanmalıdır. Böylece, akciğer içinde tam bronş damarı büyümesi için sorumlu büyüme faktörleri tam olarak tanımlanmış olması gerekir. Yeni damarların büyümesi iskemik doku korunması için gerekli olduğu görünse de, anjiogenik bronş damarları dilate pro-inflamatuar ve hyperpermeable 15, 17 olduğu gösterilmiştir. Bu anormal damarların kronik sonuçları vazodilatasyon ve solunum yolu ödemi 18 nedeniyle kalıcı hava yolu daralmasını içerir.

Büyüme faktörü serbest site ve müdahale araçlarının ilgilendirmeyen bu model ile ilgili ek sorular. Akciğer iskemi rağmen, sistemik bronş damarları olduğu yanıtlayabiliyorakciğer içindeki diğer iskemik uyarana d ve olmayan akciğer damarları. Bu iskemik uyaran memba bronşiyal damarların aktarılmaktadır nasıl açık değildir. Muhtemelen aortadan kaynaklanan damar sol akciğere benzersiz çoğalmaya indüklenen nasıl iskemik parankim dokusu tarafından yayımlanan büyüme faktörleri çok sayıda rağmen açık değildir. Gelecek deneyler bu soruları ele almak gereklidir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Biz akciğer döküm ile yardımcı Dr Adlah Sukkar, MD işi kabul ederler. Bu çalışma NHLBI, HL088005 tarafından finanse edilmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
buprenorphine hydrochloride, Puralube Butler Schein
bupivicaine APP Pharmaceuticals
Povidone-Iodine swabstick Dynarex Corporation
polypropylene suture size 6-0, 3/8 circle reverse cutting needle Myco Medical
PE20 tubing Becton Dickinson
15 μm crimson polystyrene fluorospheres Invitrogen
1 ml Hamilton glass syringe Hamilton Company
Equipment:
Genie Plus syringe pump Kent Scientific
Fluorescence Spectrophotometer Digilab
Rodent Ventilator Model 683 Harvard Apparatus
Table 1. Table of specific reagents and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weibel, E. R. Early stages in the development of collateral circulation to the lung in the rat. Circulation Research. 8, 353-376 (1960).
  2. Li, X., Wilson, J. W. Increased vascularity of the bronchial mucosa in mild asthma. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 229-233 (1997).
  3. Turner-Warwick, M. Precapillary systemic-pulmonary anastomoses. Thorax. 18, 225-237 (1963).
  4. Muller, K. M., Meyer-Schwickerath, M. Bronchial arteries in various stages of bronchogenic carcinoma. Pathol. Res. Pract. 163, 34-46 (1978).
  5. Remy-Jardin, M., Duhamel, A., et al. Systemic Collateral Supply in Patients with Chronic Thromboembolic and Primary Pulmonary Hypertension: Assessment with Multi-Detector Row Helical CT Angiography. Radiology. , 274-281 (2005).
  6. Karsner, H., Ghoreyeb, A. Studies in infarction: The circulation in experimental pulmonary embolism. J. Exp. Med. 18, 507-522 (1913).
  7. Endrys, J., Hayat, N., et al. Comparison of bronchopulmonary collaterals and collateral blood flow in patients with chronic thromboembolic and primary pulmonary hypertension. Heart. 78, 171-176 (1997).
  8. Virchow, V. Uber die Standpunkte in den Wissenschaftlichen Medizin. Virchow Archiv. 1, 1-19 Forthcoming.
  9. Fadel, E., Mazmanian, G. M., et al. Lung reperfusion injury after chronic or acute unilateral pulmonary artery occlusion. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157, 1294-1230 (1998).
  10. Charan, N. B., Carvalho, P. Angiogenesis in bronchial circulatory system after unilateral pulmonary artery obstruction. J. Appl. Physiol. 82, 284-291 (1997).
  11. Shi, W., Hu, F., et al. Altered reactivity of pulmonary vessels in postobstructive pulmonary vasculopathy. J. Appl. Physiol. 88, 17-25 (2000).
  12. Shi, W., Giaid, A., et al. Increased reactivity to endothelin of pulmonary arteries in long-term post-obstructive pulmonary vasculopathy in rats. Pulm. Pharmacol. Ther. 11, 189-196 (1998).
  13. Sukkar, A., Jenkins, J., et al. Inhibition of CXCR2 Attenuates Bronchial Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung. J. Appl. Physiol. 104, 1470-1475 (2008).
  14. Mitzner, W., Lee, W., et al. Angiogenesis in the mouse lung. Am. J. Pathol. 157, 93-101 (2000).
  15. Wagner, E. M., Jenkins, J., et al. Lung and vascular function during chronic severe pulmonary ischemia. J. Appl. Physiol. 110, 538-544 (2011).
  16. Remy-Jardin, M., Bouaziz, N., et al. Bronchial and nonbronchial systemic arteries at multi-detector row CT angiography: comparison with conventional angiography. Radiology. 233, 741-749 (2004).
  17. Baluk, P., Tammela, T., et al. Pathogenesis of persistent lymphatic vessel hyperplasia in chronic airway inflammation. J. Clin. Invest. 115, 247-257 (2005).
  18. Bailey, S. R., Boustany, S., et al. Airway vascular reactivity and vascularisation in human chronic airway disease. Pulm. Pharmacol. Ther. 22, 417-425 (2009).

Tags

Tıp Sayı 72 Anatomi Fizyoloji Biyomedikal Mühendisliği Patoloji Cerrahi Akciğer Akciğer Hastalıkları Akciğer Hasarı Cerrahi Göğüs Prosedürler Fizyolojik Süreçler Büyüme ve Gelişme Solunum Sistemi Fizyolojik Olayları anjiogenez bronşiyal arter kan damarları arter sıçan iskemi entübasyon arter ligasyonu torakotomi kanülasyon hayvan modeli
İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jenkins, J., Wagner, E. Angiogenesis More

Jenkins, J., Wagner, E. Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung. J. Vis. Exp. (72), e50217, doi:10.3791/50217 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter