Summary
सामान्य में पार्किंसंस रोग और आंदोलन विकारों में, संवेदनशील और विश्वसनीय व्यवहार assays उपन्यास संभावित चिकित्सा परीक्षण के लिए आवश्यक हैं. यहाँ, हम nigrostriatal प्रणाली को चोट की डिग्री बदलती और preclinical अध्ययन के लिए उपयोगी के प्रति संवेदनशील हैं कि चूहों के लिए ज्ञानेन्द्रिय परीक्षण की एक प्रबंधनीय बैटरी का वर्णन है.
Abstract
संवेदनशील और विश्वसनीय व्यवहारिक परिणाम के उपायों कई neurodegenerative रोगों के लिए preclinical परीक्षण में संभावित चिकित्सीय उपचार के मूल्यांकन के लिए आवश्यक हैं. पार्किंसंस रोग में, ज्ञानेन्द्रिय nigrostriatal शिथिलता की डिग्री संभावित चिकित्सा की प्रभावकारिता का परीक्षण करने के लिए मौलिक हैं बदलती करने के लिए संवेदनशील परीक्षण. विश्वसनीय और काफी खूबसूरत ज्ञानेन्द्रिय उपायों चूहों के लिए मौजूद हैं, लेकिन इन परीक्षणों को मापने के ज्ञानेन्द्रिय के कई चूहे के भीतर विषमता और पीडी के नए आनुवंशिक माउस मॉडल के लिए पूरी तरह से उपयुक्त नहीं हैं. हम चूहों में संवेदनशील परीक्षण से प्रेरित और चूहों के लिए अनुकूलित ज्ञानेन्द्रिय परीक्षणों के एक बैटरी के साथ डाल दिया है. इस अध्ययन में डाला परीक्षण बैटरी अपने एक अध्ययन में लागू करने में आसानी, और ग) अपनी कम खर्च) पीडी के माउस मॉडल की एक विस्तृत विविधता, ख में एक) अपनी संवेदनशीलता के लिए चुना जाता है. इन परीक्षणों पीडी के उपन्यास आनुवंशिक माउस मॉडल में निस्र्पक के साथ ही बर्तन के परीक्षण में उपयोगी सिद्ध कर दिया हैential उपचार के रोग को संशोधित.
Introduction
पार्किंसंस रोग (पीडी) मुख्य रूप से substantia nigra में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की प्रगतिशील हानि और मध्य और परिधीय सिस्टम में Lewy शरीर inclusions की विकास की विशेषता एक दुर्बल neurodegenerative विकार है. मरीजों bradykinesia, कंपन, कठोरता, और समय के साथ खराब हो कि postural अस्थिरता सहित, ज्ञानेन्द्रिय विकलांगता से ग्रस्त हैं. पिछले 15 वर्षों में खोज की बीमारी के दुर्लभ, पारिवारिक रूपों संभावित रोग संशोधित चिकित्सा विज्ञान के लिए महत्वपूर्ण उपन्यास लक्ष्यों की पहचान करने के लिए नेतृत्व किया है. दूसरों के बीच में अल्फा synuclein, पार्किन, डीजे -1, LRRK2, और ATP13A2 एन्कोडिंग जीन में उत्परिवर्तन पीडी, आनुवंशिक माउस मॉडल के पशु मॉडल का एक नया "पीढ़ी" के विकास के निशान.
बहुत बढ़िया गैर दवा प्रेरित व्यवहार उपायों पीडी की बड़े पैमाने पर अध्ययन एकतरफा 6 hydroxydopamine (6 OHDA) चूहे मॉडल के लिए मौजूद हैं. ये अंग उपयोग के लिए परीक्षण में शामिल विषमता, आंदोलनदीक्षा, somatosensory उपेक्षा, पहुँचने क्षमताओं, और अधिक हाल ही में अल्ट्रासोनिक vocalizations 1-6. इन परीक्षणों nigrostriatal डोपामाइन न्यूरॉन नुकसान की डिग्री बदलती के प्रति संवेदनशील हैं और संभावित चिकित्सा 7-11 की विभिन्न प्रकार की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, आनुवंशिक माउस मॉडल के साथ प्रयोग करने के लिए सबसे अच्छा ज्ञानेन्द्रिय परीक्षण पर या कैसे उपयोग करने के लिए कई एक स्पष्ट आम सहमति नहीं है. Preclinical अध्ययन में, एक उपन्यास आनुवंशिक माउस मॉडल निस्र्पक, और मॉडल के बीच तुलना करने की कोशिश करते हुए जब यह समस्याग्रस्त है. पिछले दशक के दौरान हम चूहे में सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया है क्या करने के लिए इसी तरह के चूहों के लिए ज्ञानेन्द्रिय परीक्षणों के एक बैटरी एक साथ डाल करने के लिए काम किया है. इस आलेख में वर्णित परीक्षण पीडी के कई आनुवंशिक माउस मॉडल विशेषताएँ मदद करने के लिए इस्तेमाल किया गया है और वर्तमान में उपन्यास संभावित चिकित्सा के 12 परीक्षण preclinical अध्ययन में इस्तेमाल किया जाता है.
सबसे आम परीक्षण का उपयोगचूहों में मोटर समारोह का आकलन करने के लिए घ खुले मैदान और समन्वय की 13 rotarod परीक्षण में गतिविधि कर रहे हैं. इन परीक्षणों के दोनों ज्ञानेन्द्रिय समारोह के बारे में जानकारी का उपयोग और प्रदान करने के लिए स्वचालित, अपेक्षाकृत आसान कर रहे हैं, वे अक्सर nigrostriatal डोपामाइन प्रणाली में सूक्ष्म परिवर्तन का पता लगाने के लिए आवश्यक संवेदनशीलता की कमी है. उदाहरण के लिए, डोपामाइन समारोह में सूक्ष्म परिवर्तन के साथ पार्किन कमी चूहों rotarod पर दोष प्रदर्शित नहीं है, लेकिन एक चुनौतीपूर्ण किरण परीक्षण 14 पर प्रदर्शन मोटर impairments करते हैं. इसके अलावा, चूहों 1 मिथाइल-4-फिनाइल-1 ,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) rotarod पर दोष नहीं दिखाते neurotoxin की उदार खुराक के साथ इलाज किया, लेकिन एक औंधा पर चाल और impairments में महत्वपूर्ण परिवर्तन किया है ग्रिड परीक्षण 15. इसलिए, प्ररूपी मूल्यांकन के लिए केवल rotarod उपयोग अध्ययन है कि अधिक सूक्ष्म क्षति याद कर सकते हैं. एक इष्टतम दृष्टिकोण, हमारी राय में, व्यवहार लक्षण वर्णन करने के लिए एक बा भी शामिल है कि एक हैसंवेदी और मोटर समारोह के विभिन्न पहलुओं, और बेसल ganglia समारोह 13-15 में सूक्ष्म परिवर्तन के प्रति संवेदनशील हैं कि परीक्षण के ttery. यहाँ हम एक चुनौतीपूर्ण किरण चंक्रमण परीक्षण, सिलेंडर में सहज गतिविधि का एक परीक्षण, और संवेदी उत्तेजनाओं परीक्षण करने के लिए एक प्रतिक्रिया का उपयोग चूहों में ज्ञानेन्द्रिय समारोह को मापने और विश्लेषण करने के लिए कैसे का वर्णन है.
Protocol
बेहतर चूहों उनके सक्रिय (काला) चक्र के दौरान परीक्षण किया जाना चाहिए. हमारी प्रयोगशाला में चूहों हमें आसानी से अपने सक्रिय अवधि (और हमारे) के दौरान चूहों का परीक्षण करने के लिए सक्षम बनाता है एक रिवर्स / प्रकाश अंधेरे चक्र पर रखा जाता है. परीक्षण अंधेरे चक्र में कम से कम एक घंटे तक शुरू नहीं किया है. हालांकि, यह एक रिवर्स प्रकाश चक्र के साथ एक अलग माउस कमरे बनाए रखने के लिए एक अन्वेषक के लिए हमेशा संभव नहीं है. उस मामले में, सभी तीन परीक्षण प्रकाश चक्र के दौरान किया जा सकता है, लेकिन इस समय के दौरान जब परीक्षण बीम पर पार करने के लिए समय, सिलेंडर, और संपर्क और हटाने के समय में कदम और rears की संख्या अब हो सकता है कि मन में रखो.
नीचे वर्णित सभी तीन परीक्षण एक प्रयोगकर्ता के द्वारा प्रदर्शन किया जा सकता है, लेकिन निपटने और चूहों के साथ काम कर के रूप में अनुभवी नहीं हैं या चूहों में कोई अनुभव को मापने के व्यवहार को कम किया है जो उन लोगों के लिए तो एक अतिरिक्त प्रयोगकर्ता जरूरत हो सकती है. इस मामले में दूसरा प्रयोगकर्ता के साथ सहायता कर सकते हैंअन्य प्रयोगकर्ता परीक्षण रिकॉर्ड या चिपकने वाला हटाने की परीक्षा में दूसरे प्रयोगकर्ता टाइमर चला सकते हैं, जबकि जबकि पिंजरे में थूथन और स्थानों पर माउस पर अन्य स्थानों पर स्टीकर. बीम पर चूहों रखकर चुनौतीपूर्ण किरण परीक्षण
1. चुनौतीपूर्ण बीम चंक्रमण प्रक्रिया
- एक tabletop पर या एक माउस पिंजरे से बदलती स्टेशन में 3 स्वच्छ माउस पिंजरों पलटना. समान रूप से इतना है कि वे किरण (1 मीटर) की लंबाई का समर्थन कर सकते हैं कि पिंजरों अप लाइन.
- उल्टे माउस पिंजरों के शीर्ष पर सबसेसंकरेमें अनुभाग और जगह के लिए व्यापक से बीम के चार वर्गों को इकट्ठा करो.
- आप किरण की संकीर्ण अंत सही homecage में ले जाता है ताकि अपने पक्ष पर और बीम के अंत में परीक्षण की योजना है कि चूहों के homecage रखें.
- इसकी पूंछ के आधार से पहले माउस उठाओ और अपने हाथ की हथेली के साथ अपने hindlimbs समर्थन करते हैं. किरण की विस्तृत अंत में माउस रखें और अपनी पूंछ के चलते और अपने हान को दूरघ.
- माउस सूंघ और बेहतर करने के लिए उन्मुख तंत्र, अगर माउस धीरे वांछित दिशा को इसे भेज चारों ओर मुड़ता है. बनने के लिए चारों ओर चलते हैं
- उसकी तरफ से एक ही स्थिति में इसे रखने homecage (यह उस में cagemates भले) ऊपर उठाने के लिए और यह परीक्षण माउस के करीब लाने के लिए. परीक्षण माउस कोशिश और homecage माउस प्रवेश नहीं करता है तो यह कदम वापस प्रवेश करने के लिए शुरू होता है, लेकिन एक कदम आगे बनाता है. बीम नीचे यह सभी तरह से करने के लिए आगे बढ़ें. अंत में माउस homecage दर्ज करने के लिए अनुमति देते हैं. पिंजरे में प्रत्येक माउस के लिए एक ही प्रक्रिया है. यह पहली "सहायता" परीक्षण है.
- किरण अच्छी तरह से जानवरों की देखभाल या पशु चिकित्सा स्टाफ द्वारा प्रदान की एक निस्संक्रामक के साथ पिंजरों के बीच साफ किया जाना चाहिए. यह अगले माउस ध्यान भंग होगा क्योंकि एक पिंजरे के भीतर यह अगले माउस चलाया जाता है इससे पहले किसी भी मूत्र या बीम बंद fecal छर्रों को साफ करने के लिए महत्वपूर्ण है.
- एक बार जब पिंजरे में चूहों के सभी तो एक सहायता परीक्षण के माध्यम से चले गए हैंफिर पहले माउस लेने और किरण की विस्तृत अंत में यह जगह. वांछित दिशा में धीरे पूरबी माउस अपने हाथ के साथ की जरूरत है, और हल्के से अपने homecage में बीम की लंबाई के साथ स्थानांतरित करने के लिए इसे प्रोत्साहित करने के लिए अपनी पीठ को स्पर्श करते हैं. माउस सूंघ या किरण अपने हाथ से माउस सही है या इसे लेने के लिए और इसे दूर चला गया, जहां एक ही खंड पर जगह से दूर चलने के लिए बंद हो जाता है. किरण का अंत करने के लिए माउस मार्गदर्शन करने के लिए अपने हाथ पास में है. आप कोशिश करते हैं और बीम पर जबकि रोक और तलाश माउस को कम करना चाहते हैं. अधिक इस कम माउस परीक्षण के दौरान ऐसा करने की आदत को प्रशिक्षण के दौरान किया जाता है.
- माउस homecage में अपनी forelimbs के एक देता है जब परीक्षण समाप्त होता है. अगले माउस तो अपने 2 एन डी परीक्षण प्राप्त कर सकते हैं. चूहे प्रत्येक माउस ~ 30 सेकंड या उससे अधिक की एक intertrial अंतराल इतना है कि चूहों के बीच बारी, पहला प्रशिक्षण दिन पर 5 परीक्षणों की कुल प्राप्त करते हैं. आम तौर पर पिछले कुछ परीक्षण चूहों द्वारा की लंबाई को पार करेगाकिरण, अपने दम पर, सही करने के लिए आवश्यकता के बिना.
- 24 घंटा बाद में प्रशिक्षण के 2 दिन शुरू कर सकते हैं. दिन 2 चूहों सेट अप के दिन 1 के रूप में ही बीम पर 5 और अधिक परीक्षण प्राप्त करते हैं. चूहों किसी भी सहायता की जरूरत नहीं होनी चाहिए, लेकिन रोक या की खोज को रोकने के लिए पीठ पर सही या छुआ जाना पड़ सकता है.
- 24 घंटा बाद में वास्तविक परीक्षण के दिन शुरू कर सकते हैं. परीक्षण के दिन के लिए, किरण पिछले 2 प्रशिक्षण दिनों की तरह समान रूप में स्थापित किया है. हालांकि, अब हर बीम चौड़ाई से मेल खाती है कि एक जाल ग्रिड प्रत्येक बीम अनुभाग के शीर्ष पर रखा गया है. एक वीडियो कैमरा सब किरण चंक्रमण परीक्षणों रिकॉर्ड करने के लिए प्रयोग किया जाता है और एक या एक से अधिक प्रयोगकर्ताओं के द्वारा प्रदर्शन किया जा सकता है.
- आवश्यक प्रयोग जानकारी (तिथि, माउस #, परीक्षण #, आदि) के साथ एक कार्ड लेबल. यह परीक्षण किया जा रहा है जो माउस और उस पर क्या परीक्षण स्पष्ट है कि इतने 2-3 सेकंड के लिए कैमरा और रिकॉर्ड के सामने इस कार्ड रखें.
- माउस किरण की व्यापक खंड पर ग्रिड सतह के शीर्ष पर रखा और एक दर्ज की गई हैयह बात किरण के साथ चलता है. रिकॉर्डिंग पास पर्याप्त माउस के शरीर की पूरी लंबाई के कैमरे पर दिख रहा है ताकि होना चाहिए. यह बहुत दूर है तो निकल जाता है को देखने के लिए मुश्किल हो जाता है और यह भी तो बंद है अगर अंग आंदोलनों को याद किया जा सकता है. कैमरा ग्रिड दर्शक के बीच में है कि इतना तैनात किया जाना चाहिए.
- टेस्ट दिन पर सभी चूहों ग्रिड सामने बीम पर 5 परीक्षण प्राप्त करते हैं.
2. बीम वीडियो का विश्लेषण
- वीडियो कैमरे से सीधे देखी या एक बड़ी स्क्रीन देखने के लिए एक टीवी या कंप्यूटर से जोड़ा जा सकता है. वीडियोटेप प्रयोग के भीतर जीनोटाइप और उपचार हालत को अंधा एक प्रयोगकर्ता के द्वारा बनाए जाने चाहिए.
- वीडियो धीमी गति में खेला जाता है के रूप में एक परीक्षण के लिए त्रुटियाँ रन बनाए हैं. माउस का सामना करना पड़ रहा है और आगे बढ़ रहा है जब निकल जाता है या त्रुटियों गिने जाते हैं. अंग ग्रिड सतह से नीचे 0.5 सेमी (आधे रास्ते नीचे) से आगे निकल जाता है जब ग्रिड के बाहर के माध्यम से या एक पर्ची एक त्रुटि माना जाता है. किसी भी निकल जाता हैएक माउस बंद हो जाता है या पक्ष के लिए अपने सिर orients के बाद बनाया त्रुटियों को नहीं माना जाता है. माउस आगे नहीं बढ़ रहा है और एक अंग या अंग बार बार ग्रिड के माध्यम से फिसल जाता है, तो यह एक त्रुटि नहीं माना जाता है. Hindlimbs के आधार ग्रिड और की ओर से फांसी की उंगलियों के शीर्ष पर हो सकता है किरण की संकीर्ण अनुभाग में, यह एक त्रुटि नहीं माना जाता है.
- कदम भी धीमी गति में गिने जाते हैं. कैमरे का सामना करना पड़ hindlimb कदम की संख्या को ट्रैक करने के लिए प्रयोग किया जाता है. माउस आगे अपना पहला कदम बनाता है और माउस homecage में अपनी forelimb देता है जब समाप्त हो जाती है जब गिनती शुरू होता है.
- पार करने के समय एक स्टॉपवॉच का उपयोग कर बना है और वास्तविक समय में किया जाता है. माउस को आगे ले जाने के लिए शुरू होता है और पहली forepaw homecage में रखा जाता है जब समाप्त हो जाती है जब टाइमर शुरू कर दिया है.
3. सिलेंडर प्रक्रिया में सहज गतिविधि
- एक tabletop पर या एक माउस पिंजरे से बदलती स्टेशन में 3 स्वच्छ माउस पिंजरों पलटना. ई करने के लिए अगले दो पिंजरों को व्यवस्थित करेंach अन्य पिंजरों के सामने प्रयोगकर्ता का सामना कर रहे हैं के अलावा ताकि ~ 18 सेमी. शेष पिंजरे अन्य दो पिंजरों के पीछे रखा जाता है और दर्पण का समर्थन करने के लिए की सेवा करेंगे.
- 2 पिंजरों के शीर्ष पर कांच का टुकड़ा रखें और कांच पहले 2 पिंजरों के बाहरी छोर द्वारा समर्थित किया जा रहा है तो यह स्थिति.
- पीठ में 3 पिंजरे पर झुकाव, कांच के शीर्ष और कांच के नीचे एक कोण पर दर्पण पर सिलेंडर रखें. कोण 30 डिग्री से कहीं रेंज कर सकते हैं - 45 ° लेकिन अधिक महत्वपूर्ण बात आईने से देखने सिलेंडर से भरा व्यास शामिल करने के लिए है.
- आप सिलेंडर के नीचे के पूरे व्यास देख सकते हैं जब तक दर्पण के सामने वीडियो कैमरा सेट अप और दर्पण और वीडियो कैमरा दोनों को समायोजित.
- 3 मिनट के लिए टाइमर सेट और महत्वपूर्ण प्रयोग विवरण (तिथि, माउस #, आदि) के साथ एक कार्ड लेबल. Videorecord 2-3 सेकंड के लिए लेबल.
- सिलेंडर और प्रेस रिकॉर्ड और टाइमर में माउस रखें. ग्रामीण विद्युतीकरण निगमतीन मिनट के लिए माउस ord. यह जोर शोर और बातचीत माउस विचलित और संभवतः ठंड व्यवहार के कारण हो सकता है के रूप में परीक्षण क्षेत्र शांत है कि महत्वपूर्ण है.
- 3 मिनट के दौरान माउस सिलेंडर में जबकि बनाता rears की संख्या गिनने के लिए एक हाथ काउंटर का उपयोग करें. एक रियर माउस केवल अपनी hindlimbs पर खड़ा है तो मंजिल दूर forelimbs दोनों के साथ एक ऊर्ध्वाधर आंदोलन के रूप में परिभाषित किया गया है. 3 मिनट के अंत में माउस को हटा दें और अपने homecage में वापस जगह है.
- जानवरों की देखभाल या पशु चिकित्सा कर्मचारियों द्वारा उपलब्ध कराई गई एक निस्संक्रामक के साथ सिलेंडर और कांच साफ करें. सफाई समाधान सिलेंडर में अगले माउस रखने से पहले सूखे की अनुमति दें.
4. सहज गतिविधि का विश्लेषण
- वीडियो कैमरे से सीधे देखी या एक बड़ी स्क्रीन देखने के लिए एक टीवी या कंप्यूटर से जोड़ा जा सकता है. वीडियोटेप प्रयोग के भीतर जीनोटाइप और उपचार हालत को अंधा एक प्रयोगकर्ता के द्वारा बनाए जाने चाहिए.
- वीडियो धीमी गति में वापस खेला जाता है के रूप में forelimb कदम गिने जाते हैं. एक forelimb के कदम एक जानवर एक लगातार आंदोलन में सिलेंडर की मंजिल पार दोनों क्रमिक forelimbs चलता है जब गिना जाता है. एक forelimb के आंदोलन और अन्य forelimb के बीच समय 5 सेकंड से अधिक समय है अगर forelimb आंदोलन नहीं गिना जाता है. Hindlimb कदम forelimb के कदम के रूप में एक ही तरीके में गिने जाते हैं.
- सौंदर्य बिताए समय एक स्टॉपवॉच का प्रयोग और वास्तविक समय में वीडियो वापस खेल मापा जाता है. थूथन, दृढ़रोम, और शरीर पर सौंदर्य मुकाबलों मापा जाता है.
5. चिपकने वाला निकालना
- परीक्षण के कमरे में या एक माउस पिंजरे से बदलती स्टेशन में अपने homecage में जगह माउस.
- पिंजरे से फीडर बिन निकालें और पिंजरे ढक्कन की जगह. चूहे / माउस 1 घंटे के लिए फीडर के बिना परीक्षण के कमरे और पिंजरे को आदत डालना करने की अनुमति दें.
- परीक्षण के लिए परीक्षण माउस homecage में केवल एक ही है तो cagemates जगह करने के लिए एक साफ पिंजरे का उपयोग करें.~ 3/4 बिस्तर से निकालें और cagemates साथ स्वच्छ पिंजरे में डाल दिया है.
- Homecage कूड़ा में आदेश में परीक्षण माउस इसे नियंत्रित करने के लिए और माउस के थूथन पर छोटे संदंश जगह एक चिपकने वाला लेबल की एक जोड़ी का उपयोग कर. धीरे forcep साथ थूथन पर लेबल प्रेस और माउस छोड़ें. पिंजरे पर ढक्कन प्लेस और एक स्टॉपवॉच शुरू. माउस अपने forepaws समय रिकॉर्ड के साथ लेबल को दूर करने का प्रयास करता है. माउस संपर्क में आता है, लेकिन यह इसे हटाने और उस समय रिकॉर्ड के रूप में अच्छी तरह से (संपर्क और हटाने के समय) जब तक टाइमर जा रहा रखने तो लेबल को दूर नहीं करता है.
- माउस 60 सेकंड के भीतर स्टीकर संपर्क या दूर नहीं करता है तो परीक्षण समाप्त हो गया है और स्टीकर प्रयोगकर्ता द्वारा मैन्युअल रूप से हटा दिया जाता है.
- साफ पिंजरे में परीक्षण माउस रखें और अगले माउस को हटाने और homecage में जगह और परीक्षण शुरू. सभी चूहों 3 परीक्षण प्राप्त करते हैं. इसमें सभी तीन परीक्षणों कर के बजाय चूहों के बीच वैकल्पिक करने के लिए महत्वपूर्ण हैएक समय में एक माउस. लेबल बंद हो जाता है या थूथन पर सुरक्षित नहीं है जहां परीक्षण नहीं गिने जाते हैं.
Representative Results
Discussion
वर्तमान अध्ययन में हम चूहों में ज्ञानेन्द्रिय समारोह की तीन उपयोगी परीक्षण करने और विश्लेषण करने के लिए कैसे दिखा. इन चुनौतीपूर्ण बीम, सिलेंडर में सहज गतिविधि, और संवेदी उत्तेजनाओं (चिपकने वाला हटाने) के जवाब में शामिल हैं. इन परीक्षणों के बीम के लिए हम और दूसरों को केवल प्रशिक्षण की एक छोटी राशि की आवश्यकता है उन्हें आनुवंशिक माउस मॉडल 14,16-18, 2) में nigrostriatal डोपामिनर्जिक शिथिलता की डिग्री बदलती करने के लिए अत्यधिक संवेदनशील हो पाया है निम्नलिखित कारणों 1) के लिए चुने गए और संवेदी उत्तेजनाओं परीक्षण की प्रतिक्रिया से निपटने के लिए और एक बार assays के प्रशिक्षित एक परीक्षण सत्र में प्रदर्शन किया, और 3) परीक्षण करने के लिए आवश्यक उपकरणों की कीमत ऐसे rotarod और खुले रूप में और अधिक स्वचालित उपकरणों की खरीद की तुलना में काफी कम किया जा सकता है क्षेत्र कक्षों.
चुनौतीपूर्ण किरण परीक्षण मैं पीडी की आनुवंशिक माउस मॉडल में मोटर प्रदर्शन और समन्वय घाटे का पता लगाने में उपयोगी ही नहीं है, लेकिन यह भी उपयोगी हैएन 1 मिथाइल-4-फिनाइल-1 ,2,3,6-tetrahydropyridine का इलाज और 6 hydroxydopamine का इलाज चूहों और norepinephrine कमी चूहों 19, 23-25 में impairments uncovering. इसके अलावा, हम चुनौतीपूर्ण बीम कम मोटर प्रदर्शन और समन्वय (rotarod और ध्रुव परीक्षण) के दूसरे परीक्षण की तुलना में शरीर के वजन से प्रभावित हो सकते हैं. 50 + ग्राम तक वजन कर सकते हैं कि वृद्ध नर चूहों के साथ काम करते हैं तो यह विशेष रूप से लाभप्रद है. किरण की तरह, सहज गतिविधि में परिवर्तन मज़बूती पार्किन पीटा, PQ311X, Thy1-Asyn, Pitx3-लेंसहीनता, और LRRK2 चूहों 14, 16-18, 26 में मनाया जाता है. चिपकने वाला हटाने परीक्षण भी पार्किन पीटा, पार्किन Q311X, Thy1-Asyn, और चूहों 14,16, 17, 22 में डीजे -1 पीटकर म्यूटेशनों सहित आनुवंशिक हेरफेर के प्रति संवेदनशील है. एकतरफा 6 hydroxydopamine का इलाज माउस में चिपकने वाला हटाने परीक्षण यह आम तौर पर चूहों 1,2 के साथ कैसे किया जाता है के लिए एक समान तरीके से किया जाता है. चिपकने वाला लेबल का उपयोग करते हुए प्रत्येक forepaw पर रखा गया हैएक forcep और लेबल हटाने के लिए समय दर्ज की गई है. हम 6 hyrdoxydopamine का इलाज चूहों प्रभावित अंग पर 19 लेबल हटाने से पहले अप्रभावित अंग से लेबल हटा देगा कि पाया.
यह परीक्षण बैटरी पुरानी उपचार का उपयोग पढ़ाई बुढ़ापे में लागू करने के लिए आसान है लेकिन यह भी औषधीय अध्ययनों में प्रयोग करने में आसान है. एक बार जानवरों प्रत्येक परख के लिए स्थापित किया जा सकता है के लिए एक परीक्षण स्टेशन के परीक्षण के लिए प्रशिक्षित और तैयार हैं. जानवरों तो प्रत्येक परीक्षा पर उसी क्रम में चलाए जा रहे हैं. ब्याज की दवा प्रशासित किया जा सकता है और एक बार वांछित दवा शिखर एकाग्रता चिपकने वाला हटाने के परीक्षण के लिए फिर एक माउस बीम पर परीक्षण किया जा सकता है पर पहुंच गया और फिर तीन मिनट के लिए सिलेंडर के लिए ले जाया जाता है. हम चूहों 18, 21 में विभिन्न डोपामाइन एगोनिस्ट जब परीक्षण अच्छी तरह से काम करने के लिए इस रणनीति पाया. किरण और चिपकने वाला हटाने परीक्षण दोनों दोहराया परीक्षण के लिए उत्तरदायी हैं, सिलेंडर में हालांकि सहज गतिविधि दोहराया testi से प्रभावित हैएनजी समय 16 से अधिक कम गतिविधि में जिसके परिणामस्वरूप. घाटे आप अभी भी सिलेंडर 16 में दोहराया परीक्षण के साथ मतभेदों का पता लगाने में सक्षम हो सकती माउस में है कि कैसे मजबूत पर निर्भर करता है. सामान्य तौर पर, आदी होना और कम गतिविधि सिलेंडर को 2 जोखिम के रूप में हालांकि, हम औषधीय अध्ययनों 18,21 में किरण चंक्रमण के बाद तुरंत सहज गतिविधि परीक्षण चला जब हम पर्याप्त गतिविधि के स्तर को प्राप्त कर सकते हैं जैसे ही मनाया जाता है. एक अध्ययन में शामिल करने के लिए सहज गतिविधि परीक्षण सत्र की संख्या माउस तनाव (कुछ दूसरों की तुलना में निश्चित रूप से अधिक सक्रिय हैं) और इलाज की अवधि पर निर्भर हो जाएगा. एक मिश्रित C57BL 6 / हम 2-4 बार और परीक्षण सत्र के बीच में गतिविधि मापा एक्स डी बी पृष्ठभूमि पर चूहों में हमारे औषधीय अध्ययन में एक सप्ताह में 21 से अलग हो गए थे.
किरण और सिलेंडर परीक्षण videorecorded व्यवहार के बाद परीक्षण के विश्लेषण की आवश्यकता है. विश्लेषण के इस पहलू इसके लिएप्रयोगात्मक शर्तों को अंधा कर रहे हैं कि रेटर है करने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है. हम प्रयोगशाला में नई रेटर प्रशिक्षित जब हम पहले से प्रयोगशाला से करदाता एक विशेषज्ञ द्वारा विश्लेषण वीडियोटेप पर व्यक्ति स्कोर व्यवहार किया है. मापदंड समझाया और नए करदाता और उसके बाद व्यक्ति अपने दम पर पहले से विश्लेषण किया टेप स्कोर करने के लिए शुरू होता है करने के लिए दिखाए जाते हैं. स्कोर तो विशेषज्ञ 'रेटिंग की तुलना कर रहे हैं. वे विशेषज्ञ के 95-98% सटीकता के भीतर कर रहे हैं जब तक व्यक्ति दर नए डेटा की अनुमति नहीं है. सभी डेटा तो बेतरतीब ढंग से करदाता एक विशेषज्ञ द्वारा सटीकता के लिए जगह की जाँच की है.
इस अध्ययन में वर्णित परीक्षण की बैटरी चूहों में ज्ञानेन्द्रिय समारोह का आकलन करने के लिए बनाया गया है. हालांकि, इस रोग का एक उपन्यास माउस मॉडल निस्र्पक जब भी यह साथ ही पशु की एक बुनियादी परीक्षा करने के लिए हमेशा के लिए महत्वपूर्ण है. दृढ़रोम या सीएल के हटाने की तरह, शरीर के वजन और तापमान परीक्षण के दौरान निगरानी की जानी चाहिए और किसी भी असामान्य व्यवहार ध्यान दिया जाना चाहिएपूंछ से उठाया जब की asping hindlimbs. बेसिक मस्तिष्क संबंधी आकलन विस्तार 27-29 में कहीं से वर्णित हैं.
Disclosures
हम ब्याज की कोई संघर्ष है.
Acknowledgments
इस काम एनआईएच / NINDS NS07722-01 और पार्किंसंस रोग और आंदोलन विकार के लिए गार्डनर परिवार केंद्र द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Challenging beam apparatus | Starks Plastics | Segment 1= 3.5 cm Segment 2= 2.5 cm Segment 3= 1.5 cm Segment 4= 0.5 cm |
Contact information: 11276 Sebring Dr. Forest Park ,OH 45240 USA Ph +1 (513) 541-4591 Fax +1 (513) 541-6773 |
| Cylinder | Starks Plastics | 15.5 cm diameter 12.7 cm height |
Contact information: 11276 Sebring Dr. Forest Park ,OH 45240 USA Ph +1 (513) 541-4591 Fax +1 (513) 541-6773 |
| Mesh Grid Wiring | Ace Hardware | 1 cm2 | |
| Mouse Cages | Ancare | 19 x 29 x 12.7 cm | |
| Glass | Ace Hardware | 19 cm2 | |
| Mirror | Ace Hardware | 18 x 13 cm | |
| Camcorder | Sony HDR-HC9 | ||
| MiniDV Tapes | Sony DVC premium | 90 min long play | |
| Labels | AveryColor Coding Labels | 6.35 mm diameter (1/4" Round) |
References
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