Localización y cuantificación relativa de nanotubos de carbono en las células con multiespectral de imágenes de Citometría de Flujo

Abstract

Nanomateriales a base de carbono, como los nanotubos de carbono (CNT), pertenecen a este tipo de nanopartículas que son muy difíciles de diferenciar de las estructuras celulares ricos en carbono y de hecho todavía no hay método cuantitativo para evaluar su distribución en los niveles de células y tejidos. Lo que proponemos aquí es un método innovador que permite la detección y cuantificación de los nanotubos de carbono en las células usando un flujo de imágenes multiespectrales citómetro (ImageStream, Amnis). Este dispositivo recién desarrollado integra tanto un alto rendimiento de las células y formación de imágenes de alta resolución, proporcionando de este modo imágenes para cada celda directamente en el flujo y por lo tanto el análisis de imágenes estadísticamente relevante. Cada imagen de la célula se adquiere en campo claro (BF), campo oscuro (DF), y los canales de fluorescentes, que da acceso, respectivamente, con el nivel y la distribución de la absorción de la luz, la luz dispersa y fluorescencia de cada célula. El análisis consiste entonces en una comparación píxel por píxel de cada imagen, de la 7,000-10,000 células adquiridas para cada condición del experimento. La localización y cuantificación de los nanotubos de carbono se hace posible gracias a algunas propiedades intrínsecas particulares de CNT: fuerte absorción de luz y la dispersión, de hecho CNT aparecen como absorbe fuertemente las manchas oscuras en BF y puntos brillantes en DF con una colocalización precisa.

Esta metodología podría tener un impacto considerable en los estudios acerca de las interacciones entre los nanomateriales y las células ya que este protocolo es aplicable a una amplia gama de los nanomateriales, en la medida en que son capaces de absorber (y / o difusión) con suficiente fuerza a la luz.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
ImageStream	Amnis