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Bioengineering

Lokalisierung und Relative Quantifizierung der Kohlenstoff-Nanoröhrchen in Zellen mit multispektrale Imaging Durchflusszytometrie

Published: December 12, 2013 doi: 10.3791/50566
* These authors contributed equally

Abstract

Kohlenstoff-Nanomaterialien, wie Kohlenstoffnanoröhrchen (CNTs), gehören zu diesem Typ von Nanopartikeln, die sehr schwer von kohlenstoffreichen Zellstrukturen unterscheiden und de facto noch keine quantitative Methode, um ihre Verteilung auf Zell-und Gewebespiegel zu beurteilen sind. Was wir hier vorschlagen, ist eine innovative Methode, die den Nachweis und die Quantifizierung von CNTs in Zellen unter Verwendung eines multispektrale Bild Durchflusszytometer (Image, Amnis). Das neu entwickelte Gerät integriert sowohl eine Hochdurchsatz von Zellen und hochauflösende Bildgebung und bietet damit Bilder für jede Zelle direkt in Fluss und somit statistisch relevante Bildanalyse. Jedes Bild Zelle auf Hellfeld (BF), Dunkelfeld (DF) und Fluoreszenzkanäle, die den Zugang jeweils auf das Niveau und die Verteilung der Lichtabsorption, Streulicht und Fluoreszenz für jede Zelle erworben. Die Analyse besteht dann in einer Pixel-für-Pixel-Vergleich von jedem Bild der 7,000-10,000-Zellen für jede Bedingung des Experiments erfasst. Lokalisierung und Quantifizierung von CNTs wird möglich durch einige besondere intrinsischen Eigenschaften von CNTs gemacht: starke Lichtabsorption und Streuung, ja CNTs werden als stark absorbiert dunkle Flecken auf BF und helle Flecken auf DF mit einer präzisen Kolokalisation.

Diese Methode könnte erhebliche Auswirkungen auf die Studien über Wechselwirkungen zwischen Nanomaterialien und Zellen gegeben, dass dieses Protokoll ist für einen großen Bereich von Nanomaterialien, soweit sie absorbieren kann (und / oder Streuung) sind stark genug, um das Licht.

Materials

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Marangon, I., Boggetto, N.,More

Marangon, I., Boggetto, N., Ménard-Moyon, C., Luciani, N., Wilhelm, C., Bianco, A., Gazeau, F. Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry. J. Vis. Exp. (82), e50566, doi:10.3791/50566 (2013).

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