Summary
Vi beskriver en ikke-invasiv fremgangsmåte for billeddannelse for å skille inflammatoriske stadier. Systemisk levering av luminol avslører områder av akutt betennelse avhengige MPO aktivitet i nøytrofile granulocytter. I kontrast muliggjør injeksjon av lucigenin for visualisering av kronisk betennelse avhengig Phox aktivitet i makrofager.
Abstract
Betennelse er en grunnleggende del av mange menneskelige sykdommer. I denne videoen rapporten, viser vi ikke-invasive bioluminesens imaging teknikker som skiller akutt og kronisk betennelse i musemodeller. Med vevsskade eller patogen invasjon, nøytrofile granulocytter er den første linjen i forsvaret, spiller en viktig rolle i formidling av akutt inflammatorisk respons. Som den inflammatoriske reaksjonen utvikler seg, sirkulerende monocytter gradvis migrere inn i skadestedet og differensieres til modne makrofager, som formidler kronisk betennelse og fremme vev reparasjon ved å fjerne vev rusk og produsere anti-inflammatoriske cytokiner. Intraperitoneal injeksjon av luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione, natriumsalt) muliggjør påvisning av akutt inflammasjon i stor grad mediert av vev-infiltrere nøytrofiler. Luminol reagerer spesifikt med superoxide generert innenfor phagosomes av nøytrofile siden bioluminesens resultater fra en myeloperoxidase (MPO)-mediert reaksjon. Lucigenin (bis-N-metylakridinium nitrat) også reagerer med superoksid for å generere bioluminescens. Imidlertid er lucigenin bioluminescens uavhengig av MPO og det utelukkende er avhengig av phagocyte NADPH oksidase (Phox) i makrofager ved kronisk inflammasjon. Sammen luminol og lucigenin tillate ikke-invasiv visualisering og langsgående vurdering av ulike phagocyte populasjoner på tvers av både akutte og kroniske inflammatoriske faser. Gitt den viktige rollen av betennelse i en rekke humane sykdommer, tror vi at dette ikke-invasiv fremgangsmåte for billeddannelse kan bidra til å undersøke de differensielle rollene til neutrofiler og makrofager i en rekke patologiske tilstander.
Introduction
Betennelse er en svært regulert biologisk respons som er involvert i en rekke sykdommer hos mennesker, deriblant en mikrobiell infeksjon, sårheling 2, 3 diabetes, 4 kreft, hjerte-5, neurodegenerative 6, 7 og autoimmune sykdommer. Tissue betennelse krever riktig koordinering av forskjellige immunceller for å oppnå patogen clearance, vevsreparasjon, og sykdom-oppløsning. Nøytrofile granulocytter og makrofager er viktige immun mediatorer av vev betennelse. I den akutte fasen av betennelse, nøytrofile granulocytter er de første reaksjoner til ulike skadelige stimuli og vevsskade åtte. De nøytrofile raskt extravasate fra sirkulasjon til stedet av skader, hvor cellene inaktivere invaderende mikrober ved å slippe anti-mikrobielle granulater og fagocytose. Under fagocytose, sluker nøytrofile invaderende mikrober inn phagosomes, innen hvilke celler produsere høye nivåer av superoxide (O 2 · -). Phagosomal superoksid er den primære kilden til mange nedstrøms reaktive oksygen arter (ROS). For eksempel kan superoksyd bli dismutated til hydrogenperoksid (H 2 O 2) ved spontan dismutation eller ved superoksid dismutase (SOD) 9, 10. I nøytrofile, konverterer myeloperoxidase (MPO) videre hydrogen peroxide til anti-mikrobiell hypoklorsyre (HOCl) 11. Som inflammatoriske responser fortsette, sirkulerende monocytter gradvis migrere inn i skadestedet og differensieres til modne makrofager to, hvis fagocytisk funksjon bidra til å fjerne inaktivert patogener og celle rusk. I tillegg, som en viktig regulator i den senere fase av inflammasjon, fremmer makrofag vevsreparasjon ved fremstilling av anti-inflammatoriske cytokiner 12 og ved å generere ekstracellulær ROS på et lavere nivå 9.. ROS generert på dette senere tidspunkt regulere vev ombygging, nye fartøy dannelse, og reepithelialization 13.
Phagocyte NADPH oksidase (Phox) er den primære kilden til superoksydproduksjon i begge nøytrofile granulocytter og makrofager ni. Phox er en multi-subenheten kompleks hvis montering er strengt regulert ni. Den holoenzyme inneholder flere cytosoliske regulatoriske subenheter (P67 phox, P47 phox, p40 phox, og RAC) og en membran-bundet heterodimer cytokrom b 558 (består av subenheten CYBA og CYBB). Cytokrom b 558 er reaksjonen kjerne innen hvilke CYBB subenhet (også kjent som P91 phox og NOX2) utfører den primære redoks kjedereaksjon 9.. Interessant, sin samling områder er forskjellige mellom nøytrofile granulocytter og makrofager. I hviler neutrofiler, er cytokrom-b 558 for det meste finnes i membranen av intracellulær lagringsgranuler 14. Under fagocytose, nøytrofile montere holoenzymes på 9 phagosomes, der høye nivåer av MPO aktivitet er også til stede. Nøytrofile Phox raskt forbruker oksygen og utøver sin mikrobedrepende makt ved ROS produksjon, kalles et fenomen luftveiene burst 11. I kontrast, makrofager ha et lavere nivå av ekspresjon og MPO cytokrom b 558 er for det meste finnes i plasma membranen 15, 16.. Således neutrofiler produsere høye nivåer av superoksid for anti-mikrobiell aktivitet, mens makrofager genererer mindre superoksid for regulatoriske funksjoner 15.
Siden betennelsen er en intrikat in vivo prosessen, ville ikke-invasive imaging metoder spesifikke for ulike faser av betennelse tillate kvantitativ og langsgående vurdering av sykdom modeller. Ved hjelp av mekanistiske undersøkelser har vi tidligere demonstrert bruk av to kjemiluminescerende midler, luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione) og lucigenin (bis-N-metylakridinium nitrat), For ikke-invasiv bildediagnostikk av akutte og sene (kronisk) stadier av betennelse, henholdsvis 17. Luminol muliggjør visualisering av neutrofil MPO-aktivitet i den akutte fase av inflammasjon 18-20, mens lucigenin bioluminescens kan brukes til å vurdere makrofag aktivitet i forbindelse med den sen fase eller kronisk inflammasjon 17. I dette manuskriptet, brukte vi to eksperimentelle betennelse modeller (sc PMA og sc LPS) for å demonstrere disse imaging teknikker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: Alle dyrestudier ble utført under godkjente institusjonelle protokoller og dyr omsorg retningslinjer.
En. Reagenser og løsninger
- PMA-løsning for sc inokulering: Fremstill en stamløsning av forbol 12-myristat 13-acetat (PMA) ved 5 mg / ml i DMSO. Oppbevar stamløsning ved -20 ° C. Før inokulering, tine stamløsning og fortynnet til 1 mg / ml PMA i PBS.
- LPS-løsning for sc inokulering: Oppløs lipopolysakkarid (LPS fra Salmonella enteritidis enterica serotype) i steril PBS ved 1 mg / ml før sc inokulasjon.
- Luminol løsning for akutt fase avbildning: Oppløs luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione, natriumsalt) i sterilt fysiologisk saltvann (0,9% NaCl) ved 10 mg / ml. Løsningen kan bli lagret ved -20 ° C før bruk.
- Lucigenin løsning for kronisk fase bildebehandling: Løs lucigenin (bis-N-metylakridinium nitrat) i sterilt fysiologisk saltvannpå 2,5 mg / ml. Løsningen kan bli lagret ved -20 ° C før bruk.
2. Subkutan PMA Betennelse Model
- Anesthetize NCR nakne mus i en induksjon kammer med 1-2% isofluran. Bekreft generell anestesi ved tap av bevegelse og en konstant respirasjonsfrekvens. Overfør et dyr til en nesekonus forsynes med isofluran-blandet gass og holde dyret under anestesi.
- Bruk en isopropylalkohol tørk å rengjøre og desinfisere injeksjonsstedet på venstre flanke.
- Ved hjelp av steril teknikk, injisere 50 pl PMA inokuleringen oppløsning (inneholdende 50 ug av PMA) inn i det subkutane rom til venstre flanke. Fjern overflødig væske fra injeksjonsstedet ved hjelp av en isopropanol pad. Unngå bruk av smertestillende som det kan påvirke betennelsesreaksjoner.
- Beveg dyret tilbake til huset og buret nøye overvåke dens oppvåkning fra anestesi. For å bistå i utvinning, bruker en varmepute for å holde dyret varm.
3. Subkutan LPS Betennelse Model
- Anesthetize C57BL/6J mus med 1-2% isofluran i en induksjon kammer. Etter etablering av generell anestesi, overføre et dyr til en nesekonus forsynes med isofluran gass og holde dyret under anestesi.
- Bruk en isopropylalkohol tørk å rengjøre injeksjonsstedet på venstre footpad.
- Ved hjelp av steril teknikk, injisere 50 pl av den LPS inokulasjon-løsning (inneholdende 50 ug LPS) inn i den venstre fotpute. Fjern overflødig væske fra injeksjonsstedet ved hjelp av en isopropanol pad. Unngå bruk av smertestillende som det kan påvirke betennelsesreaksjoner.
- Beveg dyret tilbake til huset og buret nøye overvåke dens oppvåkning fra anestesi. Bruk en varmepute for å holde dyret varmt under utvinning.
4. Bioluminescence Imaging av betennelse
- Anesthetize dyret i en induksjonsovn kammer med 1-2% isofluran-blandet gass. Confirm generell anestesi ved tap av bevegelse og en konstant respirasjonsfrekvens.
- Mens dyret fremdeles er under anestesi, intraperitonealt (ip) injisere luminol-oppløsning (10 mg / ml), eller den lucigenin oppløsning (2,5 mg / ml) i akutt eller kronisk betennelse avbildning, henholdsvis. Den endelige dose er 100 mg / kg for luminol og 25 mg / kg for lucigenin. En lavere dose av lucigenin (10-15 mg / kg) kan brukes for å unngå mulig toksisitet for enkelte musestammer. Tegn på toksisitet inkluderer kortpustethet og åndenød. C57BL/6J belastningen har lavere lucigenin toleranse enn NCR naken belastning.
- Overfør dyret inn i bildebehandling kammer av en bioluminesens imaging system.
- Utfør sekvensiell Bioluminescens bildebehandling med 1 minutts intervaller. Hver avbildning trinn består av 1 min registreringstid, f / stopp = 1, binning = 16 og 0 sek forsinkelse.
- Innenfor bildeinnlastingen panel, for å muliggjøre sekvensiell multi-trinns bildebehandling, klikk på sekvensen sette button. Gi tilstrekkelig bildebehandling trinn i oppkjøpet profilen for å fastslå maksimal luminescence utgang (vanligvis 15 ett-minutters trinn vil nok). Den 15-min avbildning delen lar tilstrekkelig tid til underlaget absorpsjon og systemiske sirkulasjonen.
- Ta dyret fra bildebehandling kammeret og flytte den tilbake til huset bur. For å bistå i utvinning, bruker en varmepute for å holde dyret varm.
- Under post-oppkjøpet analyse, bruker bildebehandling programvarepakken til å beregne maksimal total bioluminescent signal gjennom standardiserte regioner av interesse (ROI). Bildene er til stede som utstråling i fotoner / sek / cm 2 / sr med minimal og maksimal terskel angitt. Kvantitative data presenteres som total forandring i fotoner per sekund per ROI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi utførte langsgående Bioluminescens bildebehandling for å vurdere akutt og kronisk betennelse i eksperimentelle betennelse modeller. Forbol 12-myristat 13-acetat (PMA) er et kraftig protein-kinase C (PKC) agonist som aktiverer Phox for superoksydanion produksjon og utløser intense akutte inflammatoriske responser 21.. SC-injeksjon av 50 mg av PMA i NCR nakne mus forårsaket hurtig hudirritasjon og akutt inflammasjon ved injeksjonssteder 18, 22, 23. Vi utførte daglig avbildning i 4 dager med de første bilder fremstilt så tidlig som 3 timer etter injeksjon PMA. Figur 1 vist den langsgående Bioluminescens avbildning ved hjelp av luminol og lucigenin som substrater. På tidlige stadier av inflammasjon (3 t), observerte vi betydelige luminol Bioluminescens indikerer høye nivåer av nøytrofile MPO aktivitet på nettstedene til PMA injeksjon. Ingen signifikant lucigenin Bioluminescens ble observert i løpet av disse tidlige stadiene av betennelse. Starter pådag 2, observerte vi skorpedannelse og dermed redusert luminescence intensitet. Som sårtilheling ble tydelig (figur 1A, dag 3 og 4), observerte vi en jevn økning i lucigenin Bioluminescens (figur 1B). Disse resultatene illustrerer at luminol bioluminescens er forbundet med den akutte fase av inflammasjon, mens lucigenin bioluminescens er nært forbundet med vev reparasjon på slutten faser av betennelse.
Selvstendig, injisert vi sc 50 mikrogram av lipopolysakkarid (LPS) i footpads av vill-type C57BL/6J mus, og utført langsgående Bioluminescens bildebehandling i opptil 10 dager (Figur 2A). LPS er en membran-komponent av Gram-negative bakterier. SC inokulering av LPS er i stand til å utløse sterke betennelsesreaksjoner ved TLR4 reseptor aktivering og påfølgende inflammatorisk chemokine / cytokin produksjon 24. I motsetning til PMA som direkte aktiverer Phox for superoksid blusern, LPS krever en lengre periode for å fullt ut aktivere vev infiltrere fagocytter 18. Som nøytrofile er de tidlige respondere til mikrobe infeksjon, observerte vi forhøyet luminol Bioluminescens løpet av de første fire dagene av akutt betennelse, som falt etter dag 5 (figur 2B). I kontrast, lucigenin Bioluminescens gradvis økt på slutten og kronisk fase av betennelse (figur 2B, dager 5-10).
Sammen utgjør disse resultater viser evnen til å bruke differensial substratspesifisitet å skille akutte og kroniske inflammatoriske stadier. Viktigere er tenkelig medieres av de endogene enzymatiske aktiviteter av immunceller, og det er ikke behov for ektopisk ekspresjon av pressen.
Figur 1. In vivo langsgående bioluminescens avbildning av akutte og sene faser av betennelse. sterk> (A) vi induserte lokale vev betennelse ved subkutan injeksjon av 50 ug PMA, og utføres daglig luminol (100 mg / kg, ip) og lucigenin (25 mg / kg, ip) bioluminescens avbildning som starter ved 3 hr etter PMA injeksjon. Ingen signifikant bakgrunn auto-luminescens ble observert på områder av betennelse uten kjemiluminescente agenter. (B) Kvantitativ representasjon av luminol og lucigenin Bioluminescens på injeksjonsstedet. I den akutte fase av inflammasjon, dominerte luminol signaler bioluminescence utgang (3 timer). I de senere stadier av betennelse, hadde de områder av injeksjon høyere lucigenin Bioluminescens sammenlignet med luminol (dag 4). Feilfelt representerer standardavvikene bioluminesens målinger ved hver tenkelig tidspunkt. Klikk her for å se større figur .
690fig2.jpg "/>
Figur 2. (A) 50 mikrogram LPS ble injisert sc inn i footpads av C57BL/6J mus. Langsgående Bioluminescens bildebehandling med luminol og lucigenin ble utført daglig i 10 dager. (B) Kvantitativ representasjon av luminol og lucigenin Bioluminescens på LPS injeksjonssteder. Luminol Bioluminescens økt i løpet av de første fire dagene av akutt betennelse. Men på slutten av / kroniske faser av betennelse, Luminol signaler raskt avvist og lucigenin Bioluminescens gradvis økt. Feilfelt representerer standardavvikene bioluminesens målinger ved hver tenkelig tidspunkt. Klikk her for å se større figur .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne rapporten viser vi en Bioluminescens metode for ikke-invasiv bildediagnostikk av betennelse i levende dyr. Å dra nytte av to luminescerende substrater, luminol og lucigenin, kan metoden skille mellom forskjellige faser av betennelse. Luminol bioluminescens er forbundet med nøytrofiler i den akutte fase av inflammasjon, mens lucigenin bioluminescens er mediert av makrofager i den kroniske fase. Relativt små (MW = 177,16 g / mol) og elektrisk uladede, kan luminol lett trenge gjennom både plasma og phagosomal membran 25-29. I tillegg er luminol spesifikk luminescens til det intracellulære MPO aktivitet i neutrofiler 9. På den annen side er lucigenin hovedsakelig ugjennomtrengelig membran på grunn av sin større størrelse (MW = 510,5 g / mol) og to positive ladningene 25, 27-30.
Nøytrofile granulocytter og makrofager montere Phox holoenzyme på ulike subcellular steder. Selv om begge reagenseravhenge Phox å gi superoksydanion (O 2 · -), gjør det mulig for misforhold i celle permeabilitet og MPO-avhengighet underlag å skille inflammatorisk fagocytter i sykdom modeller. Neutrofiler uttrykke det meste av Phox i membranen av intracellulære vesikler (phagosomes) 14, hvor høye nivåer av MPO er også til stede. Som et resultat er luminol bioluminescens spesifikt assosiert med aktiverte neutrofiler under akutt inflammasjon. I kontrast, makrofager montere Phox i plasma membran som de infiltrerer og modnes ved kronisk betennelse 15. Ikke-gjennomtrengelig lucigenin kan direkte samhandler med den ekstracellulære superoksid generert av makrofager til å produsere kronisk inflammatorisk Bioluminescens.
Betennelse er en komplisert in vivo prosess som krever god koordinering av mange celletyper og ulike ekstracellulære signalmolekyler. I denne videoen rapporten, demonstrerer visynergistisk bruk av både luminol og lucigenin, for å overvåke akutte og sene (kronisk) fase betennelse i dyremodeller. Siden disse substrater er kommersielt tilgjengelige og relativt billige, tror vi at dette forholdsvis enkel og robust fremgangsmåte for billeddannelse kan lett omregnes til in vivo-anvendelser i mange sykdommer områder. Av notatet, sammenlignet med PET, MR og nær-infrarødt (NIR) fluorescerende imaging teknikker, er chemiluminescent metoden ikke ideelt for dype vev bildebehandling på grunn av underlag 'blå utslipp spektra. For å forbedre vevspenetrasjon, har det nylig blitt vist at den blå kjemiluminescens utslippet kan overføres til co-forvaltningsområdet nanopartikler for NIR utslipp 31.. Ytterligere modifisering av deres kjemiske strukturer som potensielt kan forbedre sin quantum effektivitet for sterkere lys og avgrense sine utslipp spektra for dypere vev penetrasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt i denne studien.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av Nancy Lurie Marks Foundation. Vi takker Dr. Nancy E. Kohl for kritisk lesing av manuskriptet. Vi takker Kin K. Wong for hans hjelp i utarbeidelsen av denne videoen rapporten.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO | P8139 | |
| Lipopolysaccharide from Salmonella enterica serotype enteritidis | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO | L2012 | |
| Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt) | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO | A4685 | |
| Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate) | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO | M8010 | |
| IVIS Spectrum imaging system with Living Imaging 4.2 software package | Caliper LS/Perkin Elmer, Hopkinton, MA |
References
- Premack, B. A., Schall, T. J. Chemokine receptors: gateways to inflammation and infection. Nat. Med. 2, 1174-1178 (1996).
- Singer, A. J., Clark, R. A.
- Wellen, K. E., Hotamisligil, G. S.
- Weitzman, S. A., Gordon, L. I. Inflammation and cancer: role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis. Blood. 76, 655-663 (1990).
- Ridker, P. M., Cushman, M., et al. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N. Engl. J. Med. 336, 973-979 (1997).
- Wyss-Coray, T., Mucke, L. Inflammation in neurodegenerative disease--a double-edged sword. Neuron. 35, 419-432 (2002).
- Hamilton, J. A. Colony-stimulating factors in inflammation and autoimmunity. Nat. Rev. Immunol. 8, 533-544 (2008).
- Harlan, J. M.
- Bedard, K., Krause, K. H. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology. Physiol. Rev. 87, 245-313 (2007).
- Rest, R. F., Spitznagel, J. K. Subcellular distribution of superoxide dismutases in human neutrophils. Influence of myeloperoxidase on the measurement of superoxide dismutase activity. Biochem. J. 166, 145-153 (1977).
- Hampton, M. B., Kettle, A. J., et al. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. Blood. 92, 3007-3017 (1998).
- Serhan, C. N., Savill, J. Resolution of inflammation: the beginning programs the end. Nat. Immunol. 6, 1191-1197 (2005).
- Jiang, F., Zhang, Y., et al. NADPH oxidase-mediated redox signaling: roles in cellular stress response, stress tolerance, and tissue repair. Pharmacol. Rev. 63, 218-242 (2011).
- Calafat, J., Kuijpers, T. W., et al. Evidence for small intracellular vesicles in human blood phagocytes containing cytochrome b558 and the adhesion molecule CD11b/CD18. Blood. 81, 3122-3129 (1993).
- Johansson, A., Jesaitis, A. J., et al. Different subcellular localization of cytochrome b and the dormant NADPH-oxidase in neutrophils and macrophages: effect on the production of reactive oxygen species during phagocytosis. Cell. Immunol. 161, 61-71 (1995).
- Kumar, A. P., Piedrafita, F. J., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligands regulate myeloperoxidase expression in macrophages by an estrogen-dependent mechanism involving the -463GA promoter polymorphism. J. Biol. Chem. 279, 8300-8315 (2004).
- Tseng, J. C., Kung, A. L. In vivo imaging of inflammatory phagocytes. Chem Biol. 19, 1199-1209 (2012).
- Gross, S., Gammon, S. T., et al. Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo. Nat. Med. 15, 455-461 (2009).
- Kielland, A., Blom, T., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).
- Zhou, J., Tsai, Y. T., et al. Noninvasive assessment of localized inflammatory responses. Free Radic. Biol. Med. 52, 218-226 (2012).
- Karlsson, A., Nixon, J. B., et al. Phorbol myristate acetate induces neutrophil NADPH-oxidase activity by two separate signal transduction pathways: dependent or independent of phosphatidylinositol 3-kinase. J. Leukoc. Biol. 67, 396-404 (2000).
- Taylor, R. G., McCall, C. E., et al. Histopathologic features of phorbol myristate acetate-induced lung injury. Lab Invest. 52, 61-70 (1985).
- Fukaya, S., Matsui, Y., et al. Overexpression of TNF-alpha-converting enzyme in fibroblasts augments dermal fibrosis after inflammation. Lab Invest. 93, 72-80 (2013).
- Lu, Y. C., Yeh, W. C., et al.
- Aitken, R. J., Buckingham, D. W., et al. Reactive oxygen species and human spermatozoa: analysis of the cellular mechanisms involved in luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence. J. Cell. Physiol. 151, 466-477 (1992).
- Allen, R. C., Loose, L. D. Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages. Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, 245-252 (1976).
- Caldefie-Chezet, F., Walrand, S., et al. Is the neutrophil reactive oxygen species production measured by luminol and lucigenin chemiluminescence intra or extracellular? Comparison with DCFH-DA flow cytometry and cytochrome c reduction. Clin. Chim. Acta. 319, 9-17 (2002).
- Dahlgren, C., Aniansson, H., et al. Pattern of formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence in human neutrophils. Infect. Immun. 47, 326-328 (1985).
- Dahlgren, C., Karlsson, A.
- Aerts, C., Wallaert, B., et al. Release of superoxide anion by alveolar macrophages in pulmonary sarcoidosis. Ann. N.Y. Acad. Sci. 465, 193-200 (1986).
- Zhang, N., Francis, K. P., et al. Enhanced detection of myeloperoxidase activity in deep tissues through luminescent excitation of near-infrared nanoparticles. Nat Med. , (2013).
