Introduction
पशु मॉडल में इन विट्रो विश्लेषण द्वारा प्राप्त नहीं किया जा सकता कि रोग विकृति में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं. सबसे प्रभावी परिणाम प्रदान करने के लिए, यह बारीकी से रोग और ब्याज की प्रजाति से संबंधित है कि एक पशु मॉडल का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है. उदाहरण के लिए, रीव्स 'Muntjac (Muntiacus reevesi), cervid prion प्रोटीन (CerTgPrP) 3 व्यक्त एक छोटे एशियाई हिरण 1,2, और ट्रांसजेनिक चूहों cervid प्रजातियों के लिए उपयोगी पशु मॉडल हैं. दोनों प्रजातियों साल के दौर प्रजनन की अनुमति, polyestrous हैं, और इसलिए गर्भावस्था संबंधी ऊतकों और तरल पदार्थ के लिए एक सुसंगत स्रोत cervid जीव विज्ञान में विशिष्ट तंत्र का अध्ययन करने के लिए. दूध के अध्ययन के लिए मानव की तुलना में पशु मॉडल में निपुण अधिक बस (और सस्ते में) हैं कि आवेदनों की एक विशाल सरणी है. शोधकर्ताओं 1) संक्रामक रोग संचरण का एक संभावित स्रोत के रूप में दूध और कोलोस्ट्रम की जांच कर सकता है, विकास में संतानों के लिए मां से स्थानांतरित 2) immunoglobulinsनिष्क्रिय उन्मुक्ति 4 और 3) लैक्टोफेरिन की pment, शोधकर्ताओं वर्तमान में करने के लिए प्रयास कर रहे हैं कि निष्क्रिय प्रतिरक्षा में शामिल मानव स्तन के दूध में पाया जाने वाला एक प्रोटीन व्यावसायिक रूप से 5 का उत्पादन.
छोटे जानवरों से दूध की पर्याप्त मात्रा में एकत्रित एक मुश्किल काम साबित हो सकता है. रोजर्स बाद चूहों में इस्तेमाल किया गया था, जो चूहों 6, से दूध एकत्र करने के लिए एक दृष्टिकोण का प्रस्ताव रखा. DePeters और Hovey तो एक वैक्यूम स्रोत से जुड़ा हुआ है जो एक दुहना इकाई, (के निर्माण की आवश्यकता दूध संग्रह, एक पाश्चर पिपेट से जुड़ी एक रबर पिपेट बल्ब द्वारा उत्पादित एक मैन्युअल उत्पन्न निर्वात का उपयोग कर एक है, और एक दूसरे के लिए दो तरीकों का प्रस्ताव ऐसे माउस दूध 7 फसल के लिए एक नल) के रूप में. यहाँ हम चूहों और केवल आसानी से उपलब्ध प्रयोगशाला के उपकरण और बुनियादी तकनीकी कौशल की आवश्यकता है जो रीव्स 'Muntjac हिरण, दोनों से दूध इकट्ठा करने के लिए एक सरल, कम लागत विधि का प्रस्ताव. हमारे विधि विभिन्न के लिए दूध की पर्याप्त मात्रा में पैदावारअनुप्रयोगों.
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Protocol
1. माउस वीर्यपात प्रोटोकॉल
इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधियों IACUC द्वारा अनुमोदित किया गया.
वंश से बांध का 1. पृथक्करण
- Milked किया जाना है बांध का चयन करें. 8-12 दिनों संग्रह 21 दिनों के लिए किसी भी समय बिंदु पद प्रसव ऊपर में संभव है अधिक से अधिक दूध संग्रह हालांकि प्रदान करने के लिए प्रसव पोस्ट है कि 4 या अधिक पिल्ले के एक कूड़े के साथ एक बांध चुनें.
- दूध देने से पहले उसे कूड़े में कम से कम 2 घंटे से बांध अलग करें.
नोट: एक निश्चित समय अवधि में एक से अधिक बांध दूध एक इच्छा चाहिए, यह पर्याप्त भोजन और पानी की आपूर्ति के साथ एक ही पिंजरे में अलग बांधों के घर में स्वीकार्य है.
ऑक्सीटोसिन, संज्ञाहरण और नेत्र स्नेहक के 2. प्रशासन
- Intraperitoneally ऑक्सीटोसिन के 2 आइयू / किग्रा (आईपी) प्रशासन. ऑक्सीटोसिन दूध की रिहाई को प्रोत्साहित करने के लिए स्तनपान कराने वाली महिलाओं के स्तन ग्रंथियों पर कार्य करता है कि एक हार्मोन है. ऑक्सीटोसिन fr प्राप्त किया जा सकता हैओम एक पशुचिकित्सा.
- 5-10 मिलीग्राम / किलो xylazine आईपी के साथ संयोजन में 80-100 मिलीग्राम / किग्रा ketamine युक्त एक संवेदनाहारी मिश्रण प्रशासन. उदाहरण के लिए, एक 10 मिलीलीटर शेयर संवेदनाहारी मिश्रण लगभग 30 ग्राम वजन चूहों के लिए अग्रिम में तैयार किया जा सकता है और 0.1 मिलीलीटर xylazine, 8.9 मिलीलीटर एच 2 हे, और 1.0 मिलीलीटर ketamine शामिल होंगे. 0.25 मिलीलीटर कुल संवेदनाहारी दूध संग्रह के लिए पर्याप्त समय उपलब्ध कराने चाहिए, जो लगभग 20-30 मिनट के लिए इस आकार के एक माउस शांत होगा.
नोट: पशु सफलतापूर्वक anesthetized किया गया है कि निर्धारित करने के लिए, धीरे से एक ठोस सतह पर उसके पेट पर उसकी जगह; वह अपने पैरों चलती है या वह पूरी तरह से anesthetized है अगर उसके पैर की वृद्धि करने का प्रयास नहीं किया जाना चाहिए. पूरी तरह से मूल खुराक के साथ anesthetized नहीं किया जा रहा है एक माउस के मामले में, शोधकर्ता एक और प्रशासन सकते ¼ या संवेदनाहारी मिश्रण माउस पहले से ही हासिल की है कि माउस और / या बेहोश करने की क्रिया के स्तर के आकार पर निर्भर करता है की मूल खुराक का आधा . बहरहाल, यह मैं कर सकतासंज्ञाहरण के लिए एक प्रतिकूल प्रतिक्रिया का मौका ncrease, और भी माउस और अधिक गहरा anesthetized और / या समय की एक लंबी अवधि के लिए anesthetized किया जा रहा हो सकता है.
नोट: एक से अधिक बांध दुहना, तो यह ऑक्सीटोसिन और ketamine और xylazine के लिए ऑक्सीटोसिन और बेहोश करने की क्रिया कई बार कम आधा जीवन के कारण संवेदनाहारी इंजेक्शन डगमगाते करने के लिए आवश्यक है. - प्रत्येक आंख के कोने में नेत्र स्नेहक की एक छोटी राशि लागू करें और संज्ञाहरण के तहत जबकि बाहर सुखाने से माउस की आँखों को रोकने में फैल गया.
3. दूध संग्रह
स्वयं (आर 1 के रूप में) दूध, और एक शोधकर्ता दूध (R2) इकट्ठा करने के लिए व्यक्त करते हुए anesthetized माउस पकड़ करने के लिए एक शोधकर्ता: दूध संग्रह सबसे आसानी से दो शोधकर्ताओं के साथ किया जाता है. माउस नुकसान से बचने के लिए एक फ्लैट सतह पर सुरक्षित है तो यह विधि भी, एक व्यक्ति के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है.
- R2 एक पी 200 रंज, बाँझ शराब प्रस्तुत करने का पैड के साथ सुसज्जित किया जाना चाहिएEtman, प्रत्येक माउस के लिए एक साफ पिपेट टिप, और इस तरह के एक 1.5 मिलीलीटर Eppendorf ट्यूब या एक 1.2 एमएल cryovial के रूप में दूध, (सामग्री की तालिका देखें) धारण करने के लिए एक कंटेनर.
- ऑक्सीटोसिन को प्रभावी करने के लिए शुरू होता है के रूप में, दूध अपमान (चित्रा 1 ए देखें) माउस के स्तन क्षेत्र में दिखाई हो जाएगा. R1: एक बाँझ शराब प्रस्तुत करने का पैड खोलना और धीरे से पहले दूध देने के लिए क्षेत्र को साफ करने के लिए माउस के स्तन क्षेत्र पोंछे. मैन्युअल दूध का एक दृश्य मनका चूची के आधार पर आकार लेती है जब तक धीरे ऊपर की ओर गति में स्तन ऊतक मालिश और निचोड़ अंगूठे और तर्जनी का उपयोग करके चूची से दूध व्यक्त करते हैं.
- पिपेट टिप के बाहर हवा जारी है और दूध संग्रह के लिए तैयार करने के लिए अपने पहले बंद करने के लिए पी 200 Pipetman सवार दबाएँ.
- दूध की बूंद के शीर्ष पर पिपेट टिप स्थिति, और धीरे धीरे धीरे सवार पर दबाव जारी करके पिपेट टिप में दूध खींच. (देखें चूची या त्वचा के लिए भी बंद टिप डालने के लिए नहीं ख्याल रखनाचित्रा 1 बी). यह इस लिए सभी तरह पिपेट टिप के ऊपर से दूध खींच जाएगा और यह मुश्किल होल्डिंग कंटेनर में अक्सर चिपचिपा दूध को निष्कासित करने के लिए कर देगा के रूप में पूरी तरह से सवार जारी करने के लिए आवश्यक नहीं है.
- (चित्रा 1C देखें) पहला पड़ाव अतीत सवार प्रेस करने के लिए अंगूठे का उपयोग कर कंटेनर में दूध निष्कासित. कोई तरल खो जाती है कि इतने छोटे संस्करणों के निष्कासन की सुविधा के लिए, ट्यूब के पक्ष के खिलाफ पिपेट टिप दबाएँ.
- किसी भी निपल को छोड़ के रूप में नहीं तो स्वयं एक दक्षिणावर्त या वामावर्त दिशा में या तो चलती है, हर चूची से दूध व्यक्त करने के लिए आगे बढ़ें. यह करने के लिए वापस आते हैं और यह एक से ज्यादा दूध का उत्पादन करना चाहिए लगातार एक ही चूची से दूध व्यक्त करने के लिए स्वीकार्य है और उपयोगी भी.
बांध में 4. संवेदनाहारी उलटा
- ज्यादातर मामलों में, यह बांध दूध देने की प्रक्रिया के दौरान जगाने के लिए शुरू करने के लिए शुरू करने के लिए आम है. यह मामला नहीं है, तो एक सीएजी में बांध जगहई परोक्ष रूप से इस तरह के एक गर्म परिसंचारी कंबल के रूप में एक गर्मी स्रोत, नीचे वह जागृत करने के लिए शुरू होता है जब तक.
नोट: बांध, जाग वह अपने दम पर उसे पिंजरे के बारे में चलने में सक्षम है जब तक उसकी गतिविधि के करीब अवलोकन रखने के लिए शुरू होता है. - बांध संघर्ष के बिना पिंजरे के बारे में आगे बढ़ जाने के बाद, उसे कूड़े के साथ उसके मूल पिंजरे में उसे वापस जगह है. कोई बुरा प्रभाव दूध संग्रह के बाद खिलाने के लिए पिल्ले 'क्षमता के संबंध में उल्लेख किया गया है.
2. Muntjac वीर्यपात प्रोटोकॉल
इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधियों IACUC द्वारा अनुमोदित किया गया.
वंश से डो के 1. पृथक्करण
- Milked किया जा डो का चयन करें. रीव्स 'Muntjac हिरण आम तौर पर एक फॉन 2 को जन्म दे. कोलोस्ट्रम 8 में आवश्यक पोषक तत्वों के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए हलके पीले रंग का अवसर की अनुमति के लिए डो प्रसव के बाद दिन दूध.
नोट: हलके पीले रंग आम तौर पर खाल और proc के दौरान फिर से प्रकट नहीं करताedure; मां संतानों जोड़ी के अलग होने के लिए आवश्यक नहीं है.
ऑक्सीटोसिन, संज्ञाहरण और नेत्र स्नेहक के 2. प्रशासन
- Intramuscularly ऑक्सीटोसिन के 10 आइयू / किग्रा (आईएम) के प्रशासन. ऑक्सीटोसिन दूध की जाने डाउन को प्रोत्साहित करने के लिए स्तनपान कराने वाली महिलाओं के स्तन ग्रंथियों पर कार्य करता है कि एक हार्मोन है. ऑक्सीटोसिन एक पशु चिकित्सक से प्राप्त किया जा सकता है.
- बेम संवेदनाहारी आईएम 11 प्रशासन butorphanol 0.45 मिलीग्राम / किग्रा, azaperone 0.25 मिलीग्राम / किग्रा, medetomadine 0.07 मिलीग्राम / किग्रा युक्त. बेम संवेदनाहारी मिश्रण की एक खुराक पूरा दूध संग्रह के लिए पर्याप्त समय प्रदान करता है, जो लगभग 20-30 मिनट के लिए एक Muntjac शांत होगा. संवेदनाहारी के लिए एक अन्य विकल्प के लगभग 10-15 मिनट के लिए एक Muntjac शांत होगा जो 1-2 मिग्रा / किग्रा, पर midazolam है. इस दूध संग्रह के लिए पर्याप्त समय प्रदान करता है बेम और जानवर कम समय अवधि के अंत में से बचने के लिए प्रयास कर सकते हैं, की तुलना में इस संवेदनाहारी अधिक जल्दी metabolized है.
नोट: दर्द को कम से कम प्रतिक्रियाबिना संघर्ष, एम.जे. धारण करने के लिए R1 की क्षमता के द्वारा पीछा कान को छू पर नाबालिग सजगता, पशु सफलतापूर्वक anesthetized गया है कि इंगित करता है.
नोट: पूरी तरह से मूल खुराक के साथ anesthetized नहीं किया जा रहा एक Muntjac के मामले में, शोधकर्ता एक और प्रशासन सकते ¼ या पहले से ही किया गया है कि बेहोश करने की क्रिया के पशु और / या स्तर के आकार पर निर्भर करता है संवेदनाहारी मिश्रण का मूल खुराक का आधा हासिल की. हालांकि, इस संज्ञाहरण के लिए एक प्रतिकूल प्रतिक्रिया की संभावना को बढ़ा सकता है, और भी Muntjac अधिक गहरा anesthetized और / या समय की एक लंबी अवधि के लिए anesthetized होने में हो सकता है. - संज्ञाहरण के तहत जबकि बाहर सुखाने से Muntjac की आँखों को रोकने के लिए हर आंख और प्रसार के कोने में चिकनाई की एक छोटी राशि लागू करें.
3. दूध संग्रह
दूध संग्रह सबसे आसानी से दो शोधकर्ताओं के साथ किया जाता है; में anesthetized Muntjac धारण करने के लिए एक शोधकर्तागोद स्वयं (आर 1 के रूप में) दूध, और एक आरामदायक और सुरक्षित स्थिति में Muntjac के सिर रखने के लिए और दूध (R2) इकट्ठा करने के लिए एक दूसरे के शोधकर्ता व्यक्त करते हुए.
- इस्तेमाल किया संवेदनाहारी पर निर्भर करता है, दुहना वे (midazolam प्रेरित) या 2) एक बिस्तर से मुक्त प्रतीक्षा कक्ष में सफाई बनाए रखने के लिए (बेम प्रक्रिया के दौरान जाग जाना चाहिए उनके लिए एक सुरक्षित जगह उपलब्ध कराने के लिए अपनी कलम में या तो 1) किया जाना चाहिए ) प्रेरित किया.
- R1 और R2 दूध पकड़ के लिए इथेनॉल से लथपथ धुंध और कई 15 मिलीलीटर शंक्वाकार polypropylene ट्यूब के साथ सुसज्जित किया जाना चाहिए.
- ऑक्सीटोसिन को प्रभावी करने के लिए शुरू होता है के रूप में, दूध अपमान Muntjac की स्तन क्षेत्र में दिखाई हो जाएगा. R1: दस्ताने हाथ और उंगलियों, साथ ही पूरे थन और इथेनॉल से लथपथ धुंध के साथ पशु के प्रत्येक व्यक्ति चूची sanitize. R2: सांस लेने में आसानी की अनुमति और रूमेण regurgitation को रोकने में मदद करने के लिए एक सुरक्षित और आरामदायक स्थिति में Muntjac के सिर पकड़ो. संग्रह ट्यूब सीएल पकड़ो चूची को OSE संभावित प्रदूषण को रोकने के लिए इसे छू बिना milked किया जा रहा है.
- चूची दूध के साथ engorged है जब तक धीरे ऊपर की ओर गति में स्तन के ऊतकों निचोड़ अंगूठे और तर्जनी का उपयोग कर एक चूची से दूध एक्सप्रेस, और धीरे 2 देखें चित्र (चूची के बाहर और R2 पकड़ रहा है कि ट्यूब में दूध रोल ).
- नोट: R2 कोई दूध को थोड़ा बर्बाद हो जाएगा कि इतने संग्रह ट्यूब तैनात करने के लिए यह महत्वपूर्ण है ताकि दूध, एक धारा में बाहर आता है.
- Muntjac के थन quadrants में विभाजित है. R1: दूध नहीं रह आसानी से बहती है जब तक प्रत्येक वृत्त का चतुर्थ भाग से दूध व्यक्त करने के लिए आगे बढ़ें. दूध एक चूची से व्यक्त नहीं किया जा सकता है, तो पहले लौटने से पहले अन्य सभी निपल से व्यक्त करते हैं. यह करने के लिए वापस आते हैं और यह एक से ज्यादा दूध का उत्पादन करना चाहिए लगातार एक ही चूची से दूध व्यक्त करने के लिए स्वीकार्य है और उपयोगी भी.
डो में 4. संवेदनाहारी उलटा
टी "> यह. ज्यादातर मामलों में, डो सभी दूध व्यक्त किए जाने के पहले भागने का प्रयास करेंगे दूध देने की प्रक्रिया के दौरान जगाने के लिए शुरू करने के लिए midazolam प्रेरित डो के लिए आम बात है. माइनर संयम दूध बढ़ाने के प्रयास में प्रयोग किया जाता है उपज है, लेकिन शोधकर्ताओं और डो दोनों की सुरक्षा और आराम समान रूप से महत्वपूर्ण हैं.- बेम के तेजी से पलटने के लिए / मिलीग्राम medetomadine subcutaneously 2.5 मिलीग्राम पर atipamezole प्रशासन डो anesthetized.
नोट: संवेदनाहारी के दोनों प्रकार के साथ, यह वह ठोकरें खाते हुए या गिरने के बिना अपने बूते पर चलने में सक्षम है जब तक डो के करीब अवलोकन बनाए रखने के लिए आवश्यक है, और आकांक्षा का डर या घुट के बिना खाने और पीने के लिए सक्षम है. कोई बुरा प्रभाव दूध संग्रह के बाद नर्स को हलके पीले रंग की क्षमता के संबंध में उल्लेख किया गया है.
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Representative Results
माउस
हमारे प्रयोगों से, हम यह कई चर पर निर्भर एक प्रयोगशाला माउस से दूध की लगभग 100-400 μl, इकट्ठा करने के लिए संभव है कि निर्धारित किया है. इन चर) संग्रह के लिए निर्धारित समय की राशि, 2) ऑक्सीटोसिन की खुराक प्रशासित, शामिल हैं 1 3) बांध वर्तमान में नर्सिंग और समय के बाद प्रसव के 4) राशि है कि कितने पिल्ले. हमारे अध्ययन से बांधों में कम से कम 2 घंटे के लिए उनके वंश से अलग हो रहे हैं जब उच्चतम उपज प्राप्त की है कि पता चला है, और एक घंटे के लिए कम से कम 45 मिनट दूध देने के लिए माउस प्रति अलग सेट है. अधिकतम दूध मात्रा में 8-12 दिनों ऑक्सीटोसिन का 2 / आइयू किलोग्राम का उपयोग प्रसव पोस्ट काटा गया. हमारे परिणाम कूड़े आकार सकारात्मक दुग्ध उत्पादन 9 (3 चित्र देखें) के साथ सहसंबद्ध था जहां अन्य अध्ययन के अनुसार ज्यादातर रहे हैं.
Muntjac
हालांकि दूध हरियाणा की राशिMuntjac से निहित दिन से दिन के लिए, हम इस्तेमाल संज्ञाहरण और / या समय के बाद प्रसव के आधार पर, 30 मिलीलीटर दूध / बांध / सत्र के लिए 5 एकत्र करने में सक्षम थे चर था. Muntjac हिरण polyestrous हैं; दूध (1 टेबल देखें) वर्ष 2 भर में विभिन्न समय बिंदुओं पर एकत्र किया जा सकता है. बेम प्रेरित डो पूरा दूध अभिव्यक्ति की अनुमति, संवेदनाहारी प्रभाव की एक लंबी अवधि (20-30 मिनट) निरंतर जबकि Midazolam प्रेरित डो, छोटे मात्रा संग्रह (आमतौर पर 5-30 मिलीग्राम) की अनुमति के लिए कम से कम 10 मिनट के लिए संज्ञाहरण के तहत बने (15-130 मिलीग्राम). दूध संग्रह दूध नहीं रह डो द्वारा पर्याप्त मात्रा में उत्पादन किया जा रहा था जब बंद थे, और इसी हलके पीले रंग का ज्यादातर घास चारा के एक आहार पर मनुष्य की जा रही थी.
चित्रा 1. (ए) बांध217, एस निपल ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन पर दूध के साथ engorged बन (बी) दूध का संग्रह एक पी 200 Pipetman का उपयोग कर एक anesthetized बांध से cryovial एक 1.2 मिलीलीटर में दूध की (सी) का इंजेक्शन...
चित्रा 2. Muntjac दूध एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में एकत्र किया जाता है.
चित्रा 3. लगभग दुग्ध उत्पादन कूड़े आकार के आधार पर चूहों से एकत्र, और पिल्ले की उम्र.
तालिका 1. दूध collection शुरू और रीव्स 'Muntjac बांधों स्तनपान कराने के लिए दिनांक खत्म.
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Discussion
माउस
1 सहित एक माउस से दूध एकत्रित करते समय ध्यान में रखना कई कारकों) संग्रह के लिए निर्धारित समय की राशि, प्रशासित ऑक्सीटोसिन का 2) खुराक, 3) बांध वर्तमान में नर्सिंग और 4) राशि है कि कितने पिल्ले कर रहे हैं संग्रह के बार में प्रसव के बाद से पारित कर दिया गया है कि समय का. दिशा निर्देशों के रूप में पिछले अध्ययनों का उपयोग करना, हम दूध उत्पादन के लिए शर्तों का अनुकूलन करने के लिए निकल पड़े.
पिछले अनुसंधान सीधे कूड़े आकार 8 के साथ दुग्ध उत्पादन सहसंबद्ध गया है. दुर्भाग्य से, कूड़े का आकार नियंत्रित नहीं किया जा सकता है कि एक चर रहा है. हालांकि, दुहना पोस्ट प्रसव के समय से नियंत्रित किया जा सकता है. प्रयोगशाला माउस अधिकतम दूध स्राव के अनुसार 8-10 दिनों के बाद प्रसव 9 में है. हमारा अनुभव इस बयान के साथ अनुरूपता में है.
यह ऑक्सीटोसिन दूध उत्पादन पोस्ट में एक अपूरणीय भूमिका निभाता है कि दिखाया गया हैप्रसव 10. 0.1 आइयू / किलो 9 से 4 आइयू / किलो 6 से लेकर ऑक्सीटोसिन खुराक कृन्तकों 6,7,9 से दूध के संग्रह के लिए सूचित किया गया है. हम सुझाव सबसे कम खुराक, 0.1 आइयू / किलो 9 प्रशासन द्वारा हमारे अध्ययन शुरू किया. इस खुराक का उपयोग करना, माउस द्वारा उत्पादित दूध की मात्रा को मापने या एकत्र करने के लिए बहुत छोटा था. 2 आइयू / किलो 6,7 करने के लिए ऑक्सीटोसिन खुराक में वृद्धि करने पर, दुग्ध उत्पादन लगभग 120 μl में काफी अधिक था. हम इष्टतम दूध संग्रह प्राप्त करने के लिए ऑक्सीटोसिन की सबसे कम खुराक का उपयोग करना चाहता था, इसलिए हमने 2 आइयू / किलोग्राम से अधिक खुराक प्रशासन नहीं था.
दुग्ध उत्पादन भी संग्रह के लिए निर्धारित समय की राशि पर निर्भर है. हम 3 घंटे की एक न्यूनतम सामग्री तैयार करने और संग्रह के लिए बांध और 1 घंटे से अलग किया जाना पिल्ले के लिए इष्टतम संग्रह-2 घंटा के लिए आवश्यक है कि निर्धारित किया है. एक सत्र में कई बांधों से दूध एकत्रित करने के लिए आवश्यक कुल समय कम हो जाएगाप्रत्येक बांध से दूध एकत्र करने के पिल्ले, सेटअप सामग्री के लिए 30 मिनट और 20-30 मिनट अलग करने के लिए एक विशिष्ट दूध की मात्रा यानी, 2 घंटा फसल. वे अपने शावकों के साथ वापस रखा जा रहा से पहले जाग रहे हैं जब तक एक बांध निगरानी की जानी चाहिए. हम उसे होश आएगा जब तक माउस milked किया जा सकता है क्योंकि दूध देने के लिए अलग सेट और अधिक समय, उच्च दूध की पैदावार की ओर जाता है का उल्लेख किया है.
उदाहरणों दुग्ध उत्पादन को प्रभावित करेगा कि पशु मॉडल के साथ उत्पन्न होती है. एक आम मुद्दा बार बार नस्ल और बड़े litters है, या उनके पहले कूड़े नर्सिंग हैं कि बांधों में किया गया है कि पुराने बांधों के दूध में रक्त या पीब की उपस्थिति है. यह हो जाना चाहिए, हम उस विशेष चूची से दूध संग्रह discontinuing सुझाव देते हैं. यह इस समय pipet सुझावों स्विच, और किसी भी पीब या रक्त त्यागने की सलाह दी जाती है.
इस विधि से बाहर ले जाने शोधकर्ताओं ने यह भी पशु मॉडल का उपयोग करते समय अक्सर मामला है, परिणाम (चित्रा भिन्न है, उस बारे में पता होना चाहिए3). दूध की कम से कम अधिकतम राशि एक सत्र में एकत्र किया जाता है, तो यह एक बाद में समय (उदाहरण के लिए 24-48 घंटे) पर प्रक्रिया को दोहराने के बजाय दूध रिहाई के लिए मजबूर करने के लिए प्रयोगात्मक शर्तों को बदलने के लिए बेहतर है.
Muntjac
रीव्स 'Muntjac बांधों से एकत्र दूध की मात्रा का इस्तेमाल किया संवेदनाहारी पर निर्भर था. चुनाव की हमारी प्रारंभिक संवेदनाहारी midazolam था. R1 एक शांत स्वभाव था और Muntjac शांत रख सकता है अगर Muntjac जगाने-होगा पहले दोनों की सुरक्षा और आराम Midazolam समय यानी की संक्षिप्त अवधि के लिए संयम की अनुमति के लिए पर्याप्त बेहोश करने की क्रिया है, बशर्ते, r2 उपज बढ़ाने के लिए दूध देने से अधिक समय लग सकता है पशु और हैंडलर अत्यंत महत्वपूर्ण थे और हम या तो समझौता किया था महसूस किया कि अगर हम दूध देने के प्रयास का त्याग कर दिया. हम उच्च खुराक कई बार प्रदर्शन के बाद आवश्यक होगा कि Muntjac डो जल्दी midazolam को सहिष्णु हो कि खोज की और दूध संग्रह दो बार साप्ताहिक तेजी से मुश्किल बना रही है.
एक इमारत सहिष्णुता के साथ मिलकर midazolam की कमी, एक वैकल्पिक संवेदनाहारी अनुसंधान करने के लिए हमें का नेतृत्व किया. Butorphanol, Azaperone और Medetomadine (बेम) का एक मिश्रण प्रभावी रूप से सफेद पूंछ हिरण 11 के स्थिरीकरण के लिए प्रयोग किया जाता है. हमारे हाथ में, बेम कॉकटेल दोहराया उपयोग के बाद कम दवा सहिष्णुता के साथ, एक सुरक्षित तरीके से दूध की स्वीकार्य संस्करणों का संग्रह करने के लिए पर्याप्त संज्ञाहरण प्रदान की है, और संवेदनाहारी के प्रभाव के पीछे में बेहतर नियंत्रण के साथ.
कुछ Muntjac बांधों संवेदनशील udders से सामना करना पड़ा और / या पहली बार माताओं थे. ये Muntjac दूध देने की प्रक्रिया के दौरान निपल पर जोरदार विकसित की है, और दूध प्रवाह धीमा या चल रहे सत्र को बंद करने के लिए हमें उत्साह, पूरी तरह से बंद कर दिया. यह हो जाना चाहिए, एक निपल में बेचैनी या चोट को रोकने के प्रयास में एक अधिक सौम्य दुहना तकनीक का उपयोग करना चाहिए.
e_content "> दूध उत्पादन) कम दूध की फसल 1 के कारण हो सकता है. कई मौकों पर मोम और पतन को दिखाई fawns सिर्फ पूर्व संग्रह करने के लिए या 2) दूध उत्पादन में गिरावट के कारण हलके पीले प्रातः की प्राकृतिक प्रक्रिया को पाले कर रही है.यह छोटे पशु मॉडल से दूध का एक बड़ा मात्रा प्राप्त करने के लिए एक कोशिश कर प्रक्रिया हो सकती है, वहीं हमारा काम यह वास्तव में माउस और Muntjac मॉडल दोनों के लिए एक संभावना है कि दिखाता है; व्यापक कौशल और न ही गहरी जेब, बस लगन की आवश्यकता भी नहीं.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials—Mouse | |||
| Ketamine (KetaVed 100 mg/ml) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose: 5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Eye lubricant | MWI/Apexa | 701013 | |
| Oxytocin (2 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materials—Muntjac | |||
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | Optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0.07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxytocin (10 IU/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment—Mouse | |||
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μl pipette tips | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml syringes | MWI | 005427 | |
| 27 G needles | MWI | 002031 | |
| Equipment—Muntjac | |||
| 15 ml conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| 22 G needles | MWI | 873 | |
| 3 ml luer lock syringes | MWI | 001377 | |
References
- Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
- Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).
- Browning, S. R. Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP. J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).
- Van de perre, P. Transfer of antibody via mother's milk. Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).
- Maden, C. Genetically modified mice produce human milk protein. BioNews. , (2009).
- Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).
- Depeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
- Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation. 84 (1), 127-133 (1986).
- Hedrich, H. J., Bullock, G. R. The laboratory mouse. , 735-736 (2004).
- Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).
- Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer. 45 (2), 457-467 (2009).
