العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

Peeyush Kumar T.; Anju Vasudevan

doi:10.3791/51021

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

15.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51021

⸱

يناير 23, 2014

Peeyush Kumar T.¹^,² , Anju Vasudevan¹^,²

¹Department of Psychiatry, Harvard Medical School, ²Angiogenesis and Brain Development Laboratory, Division of Basic Neuroscience, McLean Hospital

في هذه المقالة

ملخص

يوضح هذا الفيديو استراتيجية سهلة وموثوقة لإعداد الثقافات نقية من الخلايا البطانية من الدماغ الأمامي الجنينية داخل 10-12 يوما، وسوف يكون من المفيد للبحوث تركز على جوانب كثيرة من الأوعية الدموية الدماغية.

الملخص

الخلايا البطانية المخ الجنينية يمكن أن تكون بمثابة أداة هامة في دراسة الأوعية الدموية والتنمية وعائية عصبية والتفاعلات. شبكات الأوعية الدموية وهما من الدماغ الأمامي الجنينية، حنوني وحول البطينات الدماغية، ومميزة مكانيا ولها أصول مختلفة وأنماط النمو. الخلايا البطانية من شبكات الأوعية الدموية حنوني وحول البطينات الدماغية وفريدة من نوعها ملامح التعبير الجيني ووظائفها. هنا نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لعزل والثقافة، والتحقق من السكان نقية من الخلايا البطانية من شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين (PVECs) من الدماغ الأمامي الجنينية (الدماغ الانتهائي). في هذا النهج، ومفروم الدماغ الانتهائي خالية من الغشاء حنوني تم الحصول عليها من يوم الجنينية 15 الفئران، يتفاعل مع كولاجيناز / dispase، وفرقت ميكانيكيا في تعليق خلية واحدة. يتم تنقيته PVECs من الايقاف الخلية باستخدام اختيار إيجابية مع الأجسام المضادة anti-CD-31/PECAM-1 مترافق لبلي باستخدام مغناطيسي قويطريقة الانفصال. الخلايا تنقيته يتم تربيتها على الكولاجين 1 الأطباق الثقافة المغلفة في البطانية مستنبت الخلايا حتى تصبح متكدسة ومزيد من subcultured. الحصول PVECs مع هذا البروتوكول المعرض الحصوه والمغزل على شكل الظواهر، كما تصور من قبل على النقيض من المرحلة المجهر الضوئي ومضان المجهري. تأسست نقاء الثقافات PVEC مع علامات الخلايا البطانية. في أيدينا، وهذه الطريقة بشكل موثوق وثابت تعطي السكان نقية من PVECs. وهذا البروتوكول الاستفادة من الدراسات التي تهدف إلى اكتساب رؤى الآلي في الدماغ الأمامي الأوعية الدموية، وفهم التفاعلات PVEC، ومحادثات عبر أنواع الخلايا العصبية مع ويحمل إمكانات هائلة لتكوين الأوعية الدموية العلاجية.

المقدمة

الأوعية الدموية، والخلايا العصبية الهجرة العصبية هي الأحداث الحاسمة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) التنمية والإصلاح والتجديد. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن الخلايا البطانية أنيقة تحفيز انتشار العصبية والعكس بالعكس من خلال الافراج عن العوامل القابلة للذوبان وعن طريق الاتصال المباشر. وجدنا أنه من الغريب أنه في الغالبية العظمى من هذه الدراسات ^1-3، في حين يتم عزل الأسلاف العصبية / الخلايا الجذعية العصبية من المخ الجنينية، وأنها cocultured مع الخلايا البطانية من الدماغ الكبار، الكبار مصادر الأنسجة الأخرى، أو مع خطوط الخلايا البطانية. وهذا قد يكون في جزء منه بسبب الصعوبات التقنية المرتبطة عزل وزراعة السكان نقية من الخلاي....