Summary
Vanligvis brukes, er svært tilgjengelig metoder for å undersøke celle migrasjon og invasjon in vitro beskrevet. Den første metoden er den celle lukking av sår assay som måler celle motilitet. Den andre metoden er en Transwell migrering og invasjon assay som vurderer kjemotaktisk og invasive antall celler.
Introduction
Motilitet er en viktig funksjon i levende celler. Celle migrasjon er involvert i den oppfatning av livet, embryoutvikling, immunrespons, og mange patologiske prosesser som kreft metastasering og betennelse 1-9. Derfor metoder for å studere celletrekkadferden er svært nyttige forskning verktøy for et bredt spekter av disipliner i biomedisinske fag, biologi, bioteknologi og relaterte felt.
Studiet av celle migrasjon i kreftforskning er av spesiell interesse som den viktigste dødsårsaken hos kreftpasienter er knyttet til metastatisk progresjon. For cancer for å spre og spre seg i hele kroppen, må kreftcellene migrere og invaderer gjennom ekstracellulære matriks (ECM), intravasate inn i blodsirkulasjonen, feste til et fjernt sted, og til slutt extravasate å danne fjernt foci 1,10-12. Forskjellige biologiske metoder kan anvendes for å studere disse hendelsene i detalj. Den cellekultur sår-lukke end den Transwell migrasjon og invasjon analyser er mye brukt i det vitenskapelige miljøet 1,10. Disse testene kan gi den nødvendige data som kan gi rom for en forståelse av hvor godt en bestemt celletype kan spontant migrere eller svare på en chemo-tiltrekkende og retnings migrere mot det. Flere trekk fenotyper har blitt beskrevet. Celler kan migrere i en enkelt celleform, slik som vist i mesenchymale eller amoeboid lignende bevegelse eller ved flercellet bevegelse merket kollektive migrasjon eller celle streaming 13.. Metoden for bevegelse benyttes i bevegelige celler kan lett observeres ved hjelp av cellekultur lukking av sår assay.
Blant de tallrike metoder for å studere cellemigrering, er cellen lukking av sår assay av en av de enkleste. Denne metoden er nyttig for å bestemme migrasjons evne av hele cellemassene. Når tatt et steg videre, kan det brukes til å observere enkelte cellens morfologiske kjennetegn under trekket 14. Etter analyse av sårlukking mange fenotyper kan bli avslørt. Måling lukket avstand over tid når man sammenligner med en kontrollgruppe kan avsløre spesifikke migrasjons endringer eller en svekket vandrende fenotype som var ukjent tidligere. Videre kan enkelt celle lamellipodium formasjon, hale tilbaketrekkingen, og retningsbevegelse gi ledetråder for hva som kan bli svekket eller styrket i cellene av interesse 14.
Den Transwell migrering og invasjon assays kan bli brukt til å analysere evnen av enkelt-celler til å svare på forskjellige retnings kjemo-tiltrekningsmidler enten de er kjemokiner, vekstfaktorer, lipider, eller nukleotider 4,5,8,15,16. Det kan også vurdere differensial trekkende evne på grunn av over-ekspresjon av en reseptor 1,14. Disse assays kan også bli brukt for å identifisere og karakterisere de viktige regulatorer av cellemigrasjon slik som Rho familie av små GTPases 2. Etter disse korte og lett accesatte tester, modusen for cellemigrasjon og evnen av en celle til å invadere inn i en 3-D matrise kan også bli bestemt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Cell Culture sårlukking analysen
- Trekk-celler fra vevkultur-plate ved hjelp av 0,25% Trypsin-EDTA-løsning. Pellet-celler i et 15 ml konisk rør ved sentrifugering, supernatanten aspireres og re-suspendere celler i kulturmedier. Plate riktig antall celler i en seks-brønns plate for 100% samløpet i 24 timer.
Merk: Tester kan være nødvendig for å bestemme den tid og antall celler for å oppnå 100% sammenløpet på grunn av den celletype og størrelsen på brønnen blir brukt (for eksempel, er en 10 x 6 B16F10 melanom celler utsådd i en brønn av en 6-brønners plate 24 timer før såret generasjon). Alternativt kan 12-brønn eller 24-brønners plater benyttes.
Merk: Hvis det er tilgjengelig, kan cellene bli seedet inn i en kultur-Sett (fra ibidi LLC) på en behandlet vev kultur plate gjør såret pre-støpt. En kultur-Insert kan beskytte overflaten av vevkulturplate fra skade av pipettespissen. Hvis et kultur-Insert brukes hoppe over trinn1.2. - I et sterilt miljø (typisk en biosikkerhet hette) bruke en 200 ul pipette for å trykke hardt mot toppen av vevskultur plate og raskt foreta en vertikal såret ned gjennom cellemonolaget. En annen størrelse pipettespissen kan anvendes for å gjøre såret størrelse som er ønsket. Ikke bruk for mye kraft mot vevskulturplaten med pipettespissen som det kan skade overflaten. Dersom såret er ferdigstøpt, kan dette trinn utelates.
- Aspirer media og celleavfall nøye. Legger nok kulturmedia langsomt mot brønnveggen for å dekke bunnen av brønnen, og unngå å demontere flere celler. Etter generering og kontroll av såret et første bilde tas. Plasser vevkulturplate i en inkubator innstilt ved passende temperatur-og CO2-konsentrasjon (typisk 37 ° C og 5% CO2).
- Ved flere tidspunkter, for eksempel hver 3. time, fjerner platen fra incubateller og plassere den under en invertert mikroskop for å ta et øyeblikksbilde bilde og å sjekke for lukking av sår. Dersom time-lapse mikroskopi er tilgjengelig, ta et bilde hver X antall minutter (vanligvis starter med hvert 5. minutt) for enhver tid varighet i en temperatur og CO 2 kontrollert kammer. Avhengig av celletypen, kan lukking av sår tid variere.
- For å analysere resultatene av øyeblikksbilder, å måle avstanden på den ene side av såret til den andre ved hjelp av en skala bar. Analyser og tydelig til stede sårlukking over tid ved hjelp av et punktplott eller søylediagram, f.eks Figur 1.
- Å analysere tidsintervall bilder, importere bildene inn i ImageJ programvare (fritt tilgjengelig på http://rsb.info.nih.gov/ij/) for å lage en video. For å gjøre dette åpent ImageJ, klikk på Fil, Importer, og bildesekvens. Finn filen med bildene; klikker du det første bildet i filen. Lagre video ved å velge Fil, Lagre som, og AVI. Enkelt migrerende celler kan observeres til characterize retningsbevegelse. Videre kan morfologiske egenskaper som lamellipodia dannelse og bakkanten tilbaketrekking bli undersøkt så vel (figur 2 og supplerende video).
2. Transwell celle migrasjon og invasjon analysen
- I et sterilt miljø (typisk en biosikkerhet hette) frigjøres celler fra vevkultur-plate ved hjelp av en ikke-enzymatisk celle disassociation buffer eller 0,25% Trypsin-EDTA-løsning, pellet-celler ved sentrifugering, og suge eksisterende medier later de pelleterte cellene. Re-suspendere celler i serumfritt celledyrkningsmedium inneholdende 0,1% BSA (bovint serumalbumin).
Merk: Det er en cellelinje som undersøkes 0,25% Trypsin-EDTA kan påvirke cellemigrasjon og invasjon på grunn av spalting av forskjellige reseptorer på celleoverflaten 17..
Merk: Antall celler pr ml, avhenger av størrelsen av cellene. Ytterligere tester kan være nødvendig for å finne en seeding tetthet som proVides de beste resultatene. Vanligvis 1 x 10 6 celler / ml er et godt utgangspunkt for de fleste celletyper når du bruker 24-brønnen Transwell inn. Det er en rekke av Transwell innleggsstørrelser og antall celler tilsatt skal justeres for tilsvarende. - Plate 100 ul av celleløsningen på toppen av filtermembranen i et Transwell innsats og inkuberes i 10 minutter ved 37 ° C og 5% CO2 for å tillate cellene å slå seg ned.
Merk: Den spesielle porestørrelse på Transwell membran som brukes er avhengig av den individuelle størrelsen av cellene i prøven. For eksempel, hvis cellene er for små til at de kan passere gjennom porene, uten behov for å lette migreringen, eller hvis de er for store til at de ikke får plass gjennom porene. Det er flere Transwell innsatser med porestørrelser som spenner fra tre mikrometer, 5 mikrometer, og åtte mikrometer for celle migrasjon analyser. Den Transwell inserts er kommersielt tilgjengelig fra selskaper som Corning.
Merk: Transwell migration analysen kan enkelt endres til å utføre celle invasjon analysen. For å gjøre dette, legger ekstracellulære matrix (ECM) materialer på toppen av Transwell membran og deretter legge til celler på toppen av ECM. For eksempel er Matrigel tint og flytende på is, og deretter 30 til 50 pl av Matrigel tilsettes til en 24-brønns Transwell sette inn og størknet i en 37 ° C inkubator i 15-30 minutter for å danne et tynt gellag. Cell oppløsning tilsettes på toppen av Matrigel belegg for å simulere invasjon gjennom den ekstracellulære matriks.
Merk: Det er klare forskjeller mellom Transwell celle migrasjon og Transwell celle invasjon analyser. Den Transwell celle migrasjon analysen måler kjemotaktisk evnen til cellene mot en chemo-tiltrekkende. The Transwell celle invasjon assay, men måler begge celle kjemotakse og invasjon av celler gjennom ekstracellulær matriks, en prosess som vanligvis finnes i kreftmetastase eller embryonal utvikling. - Ved hjelp av en pipette, veldig carefully legge til 600 pl av den ønskede kjemo-lokkemiddel inn i bunnen av det nedre kammer i en 24-brønns plate. Legg chemo-tiltrekkende uten å flytte Transwell innsatsen og unngå å generere bobler. Kontroller at det kjemo-tiltrekkende væske i bunnen også kommer i kontakt med membranen i den øvre godt for å danne en kjemotaktisk gradient. Inkuberingstiden er avhengig av celletype og kjemo-lokkemiddel som brukes.
Merk: Ytterligere forsøk kan være nødvendig for å bestemme inkubasjonsperioden.
Merk: For adherente celler, vil de migrerte cellene fester seg til den andre side av membranen 1,8. Kvantifisering av migrerte celler kan bli utført ved å følge fremgangsmåten 2.4-2.8 (trinn 2.4 til 2.8 behøver ikke å bli utført i et sterilt miljø). For ikke-adherente celler, vil de migrerte celler faller inn i mediet i det nedre kammeret. Antallet migrerte celler kan telles ved hjelp av hemocytometer eller flow cytometer 5. - Fjern Transwell innlegget fra plate. Bruk av en bomullstupp applikatoren så mange ganger som nødvendig for å fjerne nøye media og gjenværende celler som ikke har migrert fra toppen av membranen, uten å skade den.
- Legg 600-1,000 mL av 70% etanol i en brønn av en 24-brønns plate. Plasser Transwell innsatsen inn i 70% etanol i 10 minutter for å tillate cellefiksering. Fjern Transwell innlegget fra 24-brønners plate, og bruk av en bomullstupp applikator for å fjerne gjenværende etanol fra toppen av membranen. Tillat Transwell membranen for å tørke (typisk 10-15 minutter).
- Legg 600-1,000 mL av 0,2% krystallfiolett i en brønn av en 24-brønns plate og posisjonere membranen inn i det for farging. Inkuber ved romtemperatur i 5-10 minutter.
- Fjern forsiktig krystallfiolett fra toppen av membranen med en pipettespiss eller bomull tippet applikator. Meget forsiktig, for å unngå å vaske av faste celler, dyppe membranen i destillert vann, så mange ganger som nødvendig for å fjerne overskudd av krystall violinert. Tillat Transwell membranen for å tørke.
- Se under et invertert mikroskop og telle antallet celler i forskjellige synsfelt for å få en gjennomsnittssummen av celler som har migrert gjennom membranen mot kjemo-lokkemiddel og festet på undersiden av membranen (figur 3).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne lukking av sår assay og Transwell cellemigrering analysen er presentert her som ble utført med mus B16F10 melanom celler som et modellsystem. I lukking av sår analyse ble B16F10-celler utsådd på en 6-brønners vevskultur plate og dyrket til 100% sammenløpet i 24 timer. Et sår på ca 700 mikrometer brede ble generert ved hjelp av en pipette spissen og lukking av sår (celle migrasjon) ble registrert ved hjelp av time-lapse mikroskopi. Alternativt kan sårlukking også studeres ved å ta snapshot-bilder ved ulike tidspunkt dersom time-lapse mikroskopi er ikke tilgjengelig en. Fire bilder fra den tidsintervallserie ved 0, 4, 8 og 12 timers tidspunkter er vist i figur 1.. Basert på bredden av såret, beregnet vi migrerings avstanden og hastigheten av cellemigrasjon på 40.42 um / t (Figur 1B). Time-lapse bilder ble også satt sammen til en video med ImageJ programmet (se supplerende video). The dynamisk celle migrasjon prosessen kan bli studert. Som vist i figur 2, var morfologien til cellene migrerer med lamellipodia (forkant), og haler (bakkanten) klart observert.
I Transwell cellemigrering assay, ble 24-brønns innsatser fra Corning anvendes. B16F10 melanom-celler ble resuspendert ved en konsentrasjon på 6 x 10 celler / ml i migreringsbuffer bestående av DMEM medium og 0,1% BSA uten serum. Kondisjonert medium fra NIH3T3 fibroblast-celler dyrket i DMEM medium inneholdende 10% føtalt bovint serum ble brukt som kjemo-lokkemiddel. 100 ul av B16F10-celler ble lagt på toppen av Transwell membran i det øvre kammer, og 600 pl av kjemo-tiltrekningsmiddel ble tilsatt til det nedre kammer eller i det samme volum av migreringsbuffer tilsatt som en negativ kontroll. Cell migrering ble utført som beskrevet i prosedyren. Antallet migrerte celler kan bli kvantifisert ved telling under et mikroskop eller ibilder tatt (Figur 3B). Som vist i figur 3, var det en 15-ganger økning i celler som migrerer mot kjemo-lokkemiddel i forhold til kontrollmigreringsbuffer (figur 3C). Den Transwell analysen undersøker celle kjemotaxis, retnings celle migrasjon mot cellegift-tiltrekkende.
Figur 1. B16F10 melanom cellen sårlukking analysen. (A) I løpet av en 16-timers såret nedleggelse analyse bildene ble tatt hvert 5 minutt ved hjelp av en time-lapse mikroskop. Representative bilder på 0, 4, 8 og 12 timer er vist og skalastenger (400 mikrometer) tilsettes for sår breddemåling. (B) Avstands av såret ble målt i um. Et spredningsdiagram som er benyttet for å vise bredden av såret med tiden og hastigheten for sårheling ble beregnet. Til genetvurdere r 2 verdi, ble en lineær regresjon kjøre på såret breddedata ved hjelp av GraphPad Prism programvaren (versjon 5.0, GraphPad Software, Inc.). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Morfologi migrere B16F10 celler fra time-lapse mikroskopi av såret nedleggelse analysen. Under en 16-timers såret nedleggelse analyse bildene ble tatt hvert 5. minutt. Alle bildene ble satt sammen til en video med ImageJ programmet (5 bilder / sekund). Celle migrasjon involverer celle polarisering, lamellipodia forlengelse, og bakkanten tilbaketrekking ble observert. Bilder fra 34,6, 36,6, og 38,6-andre tidspunkter av videoen ble presentert (video tid som tilsvarer den faktiske time-lapse migrasjon tid (HR: min: sek) 34,6 sekunder, 14:20:00; 36,6 sekunder, 15:10:00; og 38,6 sekunder, 16:00:00, henholdsvis). Scale bar 50 mikrometer. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Fig. 3. Transwell migrering assay av B16F10 melanom celler. (A) Et diagram av Transwell innsatsen apparatet som anvendes for å måle celle migrering og invasjon. (B) Representative bilder av B16F10 Transwell cellemigrasjon. Cell migrering buffer og NIH3T3 celle kondisjonerte medium ble tilsatt til det nedre kammer som den negative kontroll, og kjemo-tiltrekkende henholdsvis. Etter celle migrasjon og farging med krystallfiolett som beskrevet i prosedyren, ble bilder av de migrerte celler (lilla farget) tatt med en microscope med et 10x objektiv (total forstørrelse 100x). Porene i membranene kan også observeres som mange små, runde og mørke prikker i bildet. (C) Kvantifisering av celler migrere mot migrasjon buffer eller chemo-tiltrekkende (Gjennomsnitt av 5 bildefelt på 100x total forstørrelse). Vennligst Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Supplerende Video. Time-lapse video av en B16F10 melanom celle sårlukking analysen. Bilder ble tatt hvert 5. minutt i 16 timer for å generere 193 bilder. Alle bildene ble satt sammen til en video med ImageJ programmet (5 bilder / sekund). Se "Supplementary_Video_JOVE.avi" supplerende filen under nedlastinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cell migrasjon er et viktig aspekt for å studere i kreftforskning og det kan også bli brukt til utviklings, immunologiske og sårheling studier. Den cellekultur sårlukking assay og Transwell cellemigrering og invasjons analyser viser detaljert informasjon om celle trekkende virkemåter, og kan brukes til å undersøke de molekylære mekanismer for cellemigrasjon 1,2,10,14. Vår studie brukt disse cellemotilitet analyser for å bestemme migrasjon hastighets-og invasjons egenskapene til en B16F10 melanomacellelinjen.
Cellen lukking av sår assay undersøker evnen til en spesiell cellelinje til å migrere og deretter lukke et sår laget i et konfluent plate av celler. Denne analysen er svært tilgjengelig for grupper med grunnleggende utstyr og i forhold til eksisterende metoder er en enkel måte å måle celle migrasjon. Noe variasjon i såret nedleggelse analysen kan finnes i enkelte behandlingsgruppene, men det er flere trinn som may tas for å bidra til å minske den. En mulig metode for å redusere variasjon er å plate hver prøve med det samme antall celler for å oppnå synkron løpet og opprettholde sunn celle status ved innledningen av hvert eksperiment. Flere studier av cellekultur eksperimenter kan være nødvendig for å fastslå den eksakte plating nummeret som er nødvendig for å oppnå ufravikelig samløpet og sunn celle status blant uavhengige utvalg. Videre øker prøvestørrelsen vil også redusere variasjoner. For langsomme migrere cellelinjer som krever løpet av 24 timers inkubasjonstid å observere vesentlig migrering, er det fordelaktig å bruke aphidicolin eller annen proliferasjon inhibitor for å forebygge celletallendringer som potensielt kan påvirke resultatet av analysen.
Etter å mestre evnen til å studere cellemigrasjon hastighet ved hjelp av celle såret nedleggelse analysen, en detaljert evaluering av encellete trekkende atferd kan også være ferdig 14. Videre, etter en wound nedleggelse analyseceller kan være faste og ulike proteiner som er involvert med cytoskeletal struktur og dynamikk kan sees og evaluert ved hjelp immunocytochemistry to. Denne analysen kan føre til ytterligere detaljerte biokjemiske forandringer tidligere ukjente. Cellen sårlukking analysen er også svært mottagelig for real-time levende celle imaging å studere migrasjon dynamikk ved hjelp av time-lapse fluorescens mikroskopi. For eksempel kan aktin-GFP, tubulin-GFP, og paxillin-GFP fusjon proteiner uttrykkes i levende celler for å se lokalisering av proteiner ved ulike tidspunkt i celle migrasjon eller heft 18,19. Noen av begrensningene til lukking av sår assay omfatter at, for eksempel, er det ikke egnet for ikke-adherente celler og ikke måler celle kjemotaksis. I tillegg har noen cellelinjer har en tendens til å løsne fra platen umiddelbart etter at såret er gjort (f.eks HEK293T celler). For disse cellelinjer, er det bedre å bruke pre-støpte sår plater eller den transwell migrasjon analysen omtalt nedenfor.
The Transwell cellemigrering og invasjon analysen gir grundig analyse av evnen til celler for å avføle et bestemt kjemo-lokkemiddel og vandrer gjennom en fysisk barriere mot det. Denne testen kan videre brukes for å undersøke celle invasjon ved å legge et lag av ekstracellulær matriks eller et lag av endotelceller på toppen av Transwell membranen for å etterligne prosessen med ECM invasjon og ekstravasasjon 1,10. I tillegg, som følge av invasjonen gjennom Matrigel, kan immunologisk farging av cytoskeletal proteiner i kombinasjon med fluorescensmikroskopi være verdifulle for morfologisk undersøkelse i løpet av 3-D-invasjon. En begrensning ved hjelp av Transwell celle invasjon analysen er at tidsintervalldata for celle invasjon er vanskelig å oppnå med konvensjonelle mikroskopi og lever celle avbildning av denne prosessen er kompleks.
For å oppnå nøyaktige resultater, er det flere kritiske trinn under transwell celle migrasjon og invasjon analyser som er av betydning. Først, siden cellemigreringshastigheten kan variere sterkt mellom forskjellige celletyper flere foreløpige eksperimenter må utføres for å ta i bruk en spesifikk migrasjon tidsramme som skal brukes i fremgangsmåten. For det andre må det chemo-tiltrekningsmiddel også være gjeldende for den celletype av interesse. Et bredt spekter av kjemo-tiltrekningsmidler skal undersøkes i de foregående eksperimenter før måling av den endelige migrering og invasjon kapasiteten til en bestemt celletype. Fibroblaster kondisjonerte medium er ofte brukt som et sterkt kjemo-tiltrekningsmiddel for et stort utvalg av celletyper. Hvis en enkelt renset chemo-lokke brukes sørge for at reseptorer i chemo-tiltrekkende er uttrykt i cellen type interesse. Til slutt, for cellen invasjon assay sørge for at belegget av Matrigel eller andre ekstracellulære matriks er homogen for å redusere eksperimentelle variasjoner. Avslutningsvis, selv om det ikke er noen begrensninger, den sværttilgjengelige cellemigrerings assays som er beskrevet her er nyttig for et bredt spekter av biologiske studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Trypsin EDTA 0.25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Crystal violet | Sigma | C0775-100G | Dissolved in water at 0.2% |
| Cell disassociation buffer | Gibco | 13151-014 | |
| Cell culture incubator | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| SterilGARD biosafety hood | The Baker Company, Inc. | Model # VBM-600 | |
| EVOS Fl inverted microscope | Thermo Fisher Scientific | Model # AMF-4302-US | |
| Tissue culture plate | Becton Dickinson | 353046 | Catalog number varies depending on the type of culture plate |
| Corning Transwell insert | Fisher | 07-200-150 | Catalog number varies depending on the pore size of the membrane |
References
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84 (3), 359-369 (1996).
- Peter, C., et al. Migration to apoptotic "find-me" signals is mediated via the phagocyte receptor G2A. J. Biol. Chem. 283 (9), 5296-5305 (2008).
- Radu, C. G., Yang, L. V., Riedinger, M., Au, M., Witte, O. N. T cell chemotaxis to lysophosphatidylcholine through the G2A receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (1), 245-250 (2004).
- Buul, J. D., Hordijk, P. L. Signaling in leukocyte transendothelial migration. Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. (5), 824-833 (2004).
- Yang, L. V., Heng, H. H., Wan, J., Southwood, C. M., Gow, A., Li, L. Alternative promoters and polyadenylation regulate tissue-specific expression of Hemogen isoforms during hematopoiesis and spermatogenesis. 228 (4), 606-616 (2003).
- Yang, L. V., Radu, C. G., Wang, L., Riedinger, M., Witte, O. N. Gi-independent macrophage chemotaxis to lysophosphatidylcholine via the immunoregulatory GPCR G2A. Blood. 105 (3), 1127-1134 (2005).
- Yoshida, M., Yoshida, K. Sperm chemotaxis and regulation of flagellar movement by Ca2+. Mol. Hum. Reprod. 17 (8), 457-465 (2011).
- Albini, A. Tumor and endothelial cell invasion of basement membranes. The matrigel chemoinvasion assay as a tool for dissecting molecular mechanisms. Pathol. Oncol. Res. 4 (3), 230-241 (1998).
- Fidler, I. J. Critical determinants of metastasis. Semin. Cancer Biol. 12 (2), 89-96 (2002).
- Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nat. Med. 12 (8), 895-904 (2006).
- Roussos, E. T., Condeelis, J. S., Patsialou, A. Chemotaxis in cancer. Nat. Rev. Cancer. 11 (8), 573-587 (2011).
- Zhang, Y., et al. Comparative study of 3D morphology and functions on genetically engineered mouse melanoma cells. Integr. Biol. (Camb. 4 (11), 1428-1436 (2012).
- Junger, W. G. Purinergic regulation of neutrophil chemotaxis. Cell. Mol. Life Sci. 65 (16), 2528-2540 (2008).
- Lazennec, G., Richmond, A. Chemokines and chemokine receptors: new insights into cancer-related inflammation. Trends Mol. Med. 16 (3), 133-144 (2010).
- Huang, H. L., et al. Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells. J. Biomed. Sci. 17, (2010).
- Cortesio, C. L., Boateng, L. R., Piazza, T. M., Bennin, D. A., Huttenlocher, A. Calpain-mediated proteolysis of paxillin negatively regulates focal adhesion dynamics and cell migration. J. Biol. Chem. 286 (12), 9998-10006 (2011).
- Wehrle-Haller, B., Imhof, B. A. Actin microtubules and focal adhesion dynamics during cell migration. Int. J. Biochem. Cell Biol. 35 (1), 39-50 (2003).
