Yaygın olarak kullanılan, in vitro olarak hücre göçü ve işgali incelenmesi için oldukça erişilebilir yöntemler tarif edilmiştir. Birinci yöntem, hücre motilitesini büyüklüğüne hücre yara kapatma deneyidir. İkinci yöntem kemotaktik ve hücrelerin invaziv kapasitesini değerlendirir transwell göç ve istila testtir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Vitro Hücre Göç ve Invasion Tahliller
Bu makalede
Özet
Özet
Göç, canlı hücrelerin önemli bir özelliğidir ve normal gelişim, bağışıklık tepkisi ve kanser metastazı ve iltihaplanma gibi hastalık süreçleri için kritik öneme sahiptir. Hücre göçünü inceleme yöntemleri, kanser biyolojisi, immünoloji, vasküler biyoloji, hücre biyolojisi ve gelişim biyolojisi gibi çok çeşitli biyomedikal araştırmalar için çok yararlı ve önemlidir. Burada örnek olarak tümör hücresi göçü ve istilasını kullanıyoruz ve bu süreçleri ölçmek için yaygın olarak kullanılan, kolay erişilebilir yöntemleri göstermek için ilgili iki testi açıklıyoruz. İlk yöntem, birleşik bir hücre tek tabakası üzerinde bir çiziğin oluşturulduğu hücre kültürü yara kapatma testidir. Yara kapanma ve hücre göçünün hızı, birkaç zaman aralığında düzenli bir ters mikroskopla anlık görüntü resimleri çekilerek ölçülebilir. Hızlandırılmış mikroskopi sistemi kullanılarak daha ayrıntılı hücre göç davranışı belgelenebilir. Bu yazıda açıklanan ikinci yöntem, hücre motilitesinin ve invazivliğinin kemo-çekici bir gradyana doğru kapasitesini ölçen transwell hücre göçü ve invazyon testidir. Amacımız, bu yöntemleri son derece erişilebilir bir şekilde tanımlamaktır, böylece prosedürler sadece temel hücre biyolojisi kurulumuyla bile araştırma laboratuvarlarında başarılı bir şekilde gerçekleştirilebilir.
Giriş
Motilite canlı hücre bir temel özelliğidir. Hücre göçü ömrü, embriyonik gelişmesi, bağışıklık tepkisi ve kanser metastaz ve enflamasyon 1-9 gibi birçok patolojik süreçlerin kavramında yer almaktadır. Bu nedenle, hücre göç davranışlarını incelemek için yöntemler biyomedikal bilimler, biyoloji, biyomühendislik ve ilgili alanlarda disiplinler geniş bir yelpazede için çok yararlı bir araştırma araçlardır.
Kanser hastalarında başlıca ölüm nedenidir metastatik ilerlemesi ile ilgili olarak kanser araştırmalarında hücre göçünün çalışma özel önem taşımaktadır. Vücuda yayılmış ve yaymak için kanser için, kanser hücreleri göç olmalı ve in....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1.. Hücre Kültürü Deneyi yara kapatma
- Tripsin-EDTA solüsyonu% 0.25 ile doku kültürü hücreleri plakadan ayırın. Santrifüj ile bir 15 ml konik tüp içinde Pelet hücreleri, süpernatant aspire ve kültür ortamı hücreleri yeniden askıya. 24 saat içinde% 100 birleştiği için bir 6-çukurlu plaka içindeki hücrelerin uygun plaka.
Not: Testler (örneğin, 1 x 10 6 B16F10 melanom hücrelerinin bir kuyuda tohumlanır nedeniyle hücre tipi ile de kullanılan ölçülerine% 100 izdiham elde etmek için zaman ve hücrelerin sayısını belirlemek için gerekli olabilir 6-çukurlu plaka önce yara kuşağa 24 saat). Seçenek olarak ise, 12-iyi veya 24 oyuklu plakalar kullanıla....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada sunulan deney yara kapatma ve Transwell hücre göçü deneyi, bir model sistem olarak fare B16F10 melanom hücreleri kullanılarak yapıldı. Yara kapatma tahlilde, B16F10 hücrelerinin bir 6-yuvalı doku kültürü plakasında tohumlandı ve 24 saat içinde% 100 konflüansa büyütülür. Yaklaşık 700 mikron genişliğinde bir yara time-lapse mikroskopi kullanılarak kaydedilen bir pipet ve yara kapanmasını (hücre göçü) kullanılarak oluşturulmuştur. Alternatif olarak, yara kapama da time-lapse mikroskopi 1 mevcut değilse fa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Hücre göçü kanser araştırmalarında incelemek için önemli bir yönüdür ve aynı zamanda, gelişim ve yara iyileşmesi immünolojik çalışmalar uygulanabilir. Hücre kültürü kapatma deneyi yara ve transwell hücre göçü ve işgali deneyleri hücre göç davranışları ayrıntılı bilgilerin açığa çıkarılması ve hücre göçü 1,2,10,14 moleküler mekanizmaları araştırmak için kullanılabilir. Çalışmamız B16F10 melanom hücre çizgisinin hareket hızı ve invazyon yeteneklerini belirlemek için aşağıdaki hücre hareketi deneyleri kullanılır.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Yazarlar, video prodüksiyonunda yardım sağladıkları için ECU Multimedya ve Teknoloji Hizmetleri'nden Mike Myles, Sam Saunders ve C.W. Elton'a teşekkür eder. Kuzey Carolina Biyoteknoloji Merkezi, Kansere Karşı Golfçüler, Brody Brothers Bağış Fonu, Amerikan Kalp Derneği ve ECU/Vidant Kanser Araştırma ve Eğitim Fonu'ndan (LVY ve MJR) hibe desteğini kabul ediyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s modifiye Eagle ortamı (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | İkizler | 100106 | |
| Sığır serum albümini (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Tripsin EDTA% 0.25 | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco' s fosfat tamponlu tuzlu su (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Kristal viyole | Sigma | C0775-100G | %0,2'de suda çözülür |
| Hücre ayrışma tamponu | Gibco | 13151-014 | |
| Hücre kültürü inkübatörü | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| SterilGARD biyogüvenlik başlığı | The Baker Company, Inc. | Model # VBM-600 | |
| EVOS Fl ters mikroskop | Thermo Fisher Scientific | Model # AMF-4302-US | |
| Doku kültürü plakası | Becton Dickinson | 353046 | Katalog numarası, kültür plakasının tipine bağlı olarak değişir |
| Corning Transwell kesici uç | Fisher | 07-200-150 | Katalog numarası, zarın gözenek boyutuna bağlı olarak değişir |
Kaynaklar
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lau....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
