शारीरिक और शारीरिक तकनीक जलीय चलने अंगों में संयुक्त proprioceptors और मांसपेशियों में तनाव रिसेप्टर्स के लिए समारोह और संरचना का पता करने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं.
इन प्रक्रियाओं का प्राथमिक उद्देश्य है कि वे संयुक्त स्थिति और आंदोलन का पता लगाने, और मांसपेशियों में तनाव के रूप में proprioception के लिए जिम्मेदार प्राथमिक संवेदी न्यूरॉन्स रहने की गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए कैसे शिक्षण और अनुसंधान प्रयोजनों के लिए प्रदर्शित करने के लिए है. जलीय proprioceptors और तनाव रिसेप्टर्स से इलेक्ट्रिकल गतिविधि बुनियादी neurophysiological इंस्ट्रूमेंटेशन द्वारा दर्ज की गई है, और एक ट्रांसड्यूसर एक साथ एक मोटर तंत्रिका उत्तेजक द्वारा उत्पन्न होता है कि बल को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है. इसके अलावा, हम उनके संरचनात्मक व्यवस्था की एक त्वरित मूल्यांकन के लिए या स्थायी निर्धारण के लिए न्यूरॉन्स दाग कैसे प्रदर्शित करता है. धुंधला सबसे क्रसटेशियन में chordotonal अंगों का प्रतिनिधि है कि संरचनात्मक संगठन का पता चलता है. Proprioceptive प्रतिक्रियाओं को तनाव तंत्रिका प्रतिक्रियाओं मुकाबले इन संवेदी न्यूरॉन्स कार्यात्मक रूप में परिभाषित कर रहे हैं और कैसे शरीर रचना विज्ञान समारोह को जोड़ा जाता है कैसे निर्धारित करने में एक प्रभावी शिक्षण उपकरण है. तीन धुंधला तकनीकशोधकर्ताओं और प्रशिक्षकों उनकी प्रयोगशाला के लिए आदर्श है कि एक विधि का चयन करने के लिए अनुमति प्रस्तुत कर रहे हैं.
Proprioception समन्वित मोटर व्यवहार सक्षम बनाता है कि अंग स्थिति और आंदोलन की अनुभूति होती है. Proprioceptors स्थिति (स्थिर) और आंदोलन (kinesthetic) रिसेप्टर्स से मिलकर. कीड़े और क्रसटेशियन में, chordotonal अंगों सीएनएस 1 के लिए कि जानकारी देने वाले संरचनाओं हैं. नहीं सभी chordotonal अंगों एक संयुक्त अवधि लेकिन वे अभी भी कारण संयुक्त अवधि और कंकाल मांसपेशियों और जोड़ों अभिव्यक्ति के सहयोग से जो कदम apodemes (संरचनाओं की तरह कण्डरा) पर उनके लगाव को संयुक्त आंदोलनों की निगरानी कर सकते. केकड़ा पैरों छह जोड़ों, एक या दो chordotonal अंगों 2 वाले है. आम तौर पर एक chordotonal अंग एक लोचदार किनारा भीतर एम्बेडेड 60-100 या अधिक संवेदी न्यूरॉन्स, स्थिर संयुक्त स्थिति, दिशा और आंदोलन 3-6 की गति संकेत है कि न्यूरॉन्स है. प्रत्येक संयुक्त और पैर पर chordotonal अंगों से इनपुट तो केन्द्र जानवर द्वारा समन्वित आंदोलनों की अनुमति से कार्रवाई की है.
<p class="jove_content"> पैर की मांसपेशियों isometric और isotonic संकुचन के दौरान उत्पादन बलों है कि मांसपेशी फाइबर और apodemes7 -9 को उनके अनुलग्नकों के साथ जुड़े तनाव रिसेप्टर्स द्वारा पता चला रहे हैं. हम प्राथमिक संवेदी proprioception की निगरानी कि न्यूरॉन्स और मांसपेशी फाइबर द्वारा उत्पन्न बलों का जवाब है कि न्यूरॉन्स से रिकॉर्डिंग के लिए कार्यप्रणाली को पेश पालन कि जलीय चलने पैर प्रोटोकॉल में. पैर आंदोलनों को सक्रिय करने और बल पीढ़ी बढ़ाता के लिए एक तकनीक भी प्रस्तुत किया है, साथ ही इन परिधीय तंत्रिका तंत्र संरचनाओं की व्यवस्था करने के लिए चिह्नित किया जा सकता है कि संरचनात्मक तकनीक है.नीचे का प्रदर्शन प्रक्रियाओं एक chordotonal लोचदार किनारा और apodeme पर उनके स्थान के सापेक्ष रिसेप्टर्स के दोनों प्रकार के अंदर आना कि न्यूरॉन्स की संरचनात्मक और कार्यात्मक विश्लेषण कर सकें. उदाहरण देकर स्पष्ट करने के लिए, हम propodite-dactylopodite (पीडी) chordotonal अंग, केकड़ा पैर 3 के बाहर का सबसे सेगमेंट तक फैला है कि अंग का उपयोग करें.विस्तृत electrophysiological पढ़ाई 1930 के दशक में शुरू हुआ और आज भी किए जा रहे हैं, हालांकि, कुछ पहलुओं muscles10-16 के समन्वित नियंत्रण में विभिन्न जोड़ों और उनकी भूमिकाओं में proprioceptors की कमानी कनेक्शन के बारे में जाना जाता हो गए. Proprioceptive अंगों, मांसपेशियों और तंत्रिका तंत्र के बीच संरचना समारोह संबंध स्थापित करने के लिए आगे इन भूमिकाओं को परिभाषित करने में मदद मिलेगी. उदाहरण के लिए, somata और apodeme में डाला तनाव न्यूरॉन्स के बाहर का अंत लेबलिंग मांसपेशी फाइबर 8,17-21 को उनके स्थान रिश्तेदार खोलेगा.
हम अनुसंधान या शैक्षिक प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल किया जा सकता है कि जलीय पैरों के लिए तीन धुंधला तकनीक मौजूद है. Methylene नीले धुंधला की मांसपेशियों और तंत्रिकाओं के लिए उपयुक्त विपरीत प्रदान करता है और छात्रों के शरीर रचना विज्ञान को जानने के लिए एक सरल तकनीक के रूप में सिफारिश की है. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी setups है कि लैब्स संक्षेप तंत्रिका उजागर करके अधिक चुनिंदा neuronal धुंधला पूरा कर सकते हैंमहत्वपूर्ण डाई 4-DI-2-एएसपी के लिए है. तीसरे विकल्प के न्यूरॉन्स दाग और हल करता है जो CoCl 2 backfill, है, और प्रतिदीप्ति इमेजिंग की आवश्यकता नहीं है. यह श्रम और समय गहन है, यह धुंधला प्रक्रिया भर रहे हैं कि तंत्रिकाओं के लिए उच्च विपरीत और विशिष्टता देता है. साथ में इन तकनीकों के एक अंग के भीतर या अंगों के बीच ही नहीं, बल्कि अन्य जलीय और कीट प्रजातियों 20-22 के बीच, विभिन्न chordotonal अंगों की तुलना के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. शारीरिक रिकॉर्डिंग में और संरचनात्मक धुंधला के लिए इस्तेमाल किया ब्लू केकड़ों (सी. sapidus) सभी संयुक्त राज्य अमेरिका के दक्षिणी और दक्षिण पूर्वी सीमा के आसपास आसानी से उपलब्ध हैं. इस प्रजाति सबसे केकड़ों में पाया chordotonal और तनाव तंत्रिका व्यवस्था के एक प्रतिनिधि के रूप में कार्य करता है. पश्चिमी तट पर प्रयोगशालाओं इन प्रयोगों के लिए बहुत बड़ा Dungeness केकड़ा (कैंसर मजिस्टर) का उपयोग करना पसंद करेंगे.
प्रयोगों के इस सेट का उद्देश्य 1) को पढ़ाने और प्रदर्शन कोशिकी रिकॉर्डिंग के मौलिक सिद्धांतों एक पहचान proprioceptive अंग और तनाव तंत्रिका से और 2) विशेष संवेदी प्रणाली की शारीरिक समारोह के संबंध में संरचनात्मक मानचित्रण के महत्व पर जोर देना है. उपयोग इस प्रयोगात्मक दृष्टिकोण और पशु मॉडल सस्ती और Neurophysiology शिक्षण प्रयोगशालाओं में संचालन करने के लिए अपेक्षाकृत आसान कर रहे हैं.
chordotonal अंगों के न्यूरॉन्स दो विशिष्ट कार्यात्मक प्रकार, आंदोलन का जवाब है कि उन लोगों और स्थिर पदों का जवाब देने के लिए उन में से हैं. Chordotonal अंगों की एक किस्म से सिंगल सेल रिकॉर्डिंग, कोई फर्क नहीं पड़ता संयुक्त जांच की है, जो इस मामले 3,5 होने का पता चला है. दरअसल, झींगा मछलियों की स्पर्शतंतु जोड़ों के साथ जुड़े chordotonal अंगों ही दो संवेदी प्रकार और बुनियादी संरचना 27 से पता चलता है. वहाँ दो न्यूरॉन प्रकार (आंदोलन और स्थिति होने के अलावा) पर, न्यूरॉन्स उनके संबंधित लोचदार किस्में पर एक ही संरचनात्मक व्यवस्था का हिस्सा है. कतरा पर proximally स्थित बड़े somata गतिशील आंदोलन संवेदनशील न्यूरॉन्स के हैं के लिए करते हैं. स्थिर पदों का संकेत है कि न्यूरॉन्स छोटे somata है और distally स्थित हैं. इन कोशिकाओं को सुर के अनुसार सक्रिय हैं. कलाई-propodus (सीपी) और merus-पहुंचा (एमसी) जोड़ों में दो chordotonal अंगों जबकि वहाँ पीडी संयुक्त केवल एक ही chordotonal अंग होता है.
electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए नीले केकड़ों (सी. sapidus) में proprioceptive संरचनाओं का पर्दाफाश करने के लिए विच्छेदन संवेदी न्यूरॉन्स से रिकॉर्डिंग करते हुए संयुक्त आंदोलनों प्राकृतिक स्थितियों में जगह लेने के लिए अनुमति देता है कि एक रणनीति की आवश्यकता है. पैदल पैर में सलामी बल्लेबाज पेशी के लिए तनाव तंत्रिका कई न्यूरॉन्स से बना एक बहुत ठीक तंत्रिका है. ध्यान रखा जाता है, जब तक कि तनाव तंत्रिका के साथ ही मोटर तंत्रिका प्रेरित करने की मांसपेशी innervating, इस विच्छेदन के दौरान क्षतिग्रस्त किया जा सकता है. के लिएइष्टतम रिकॉर्डिंग चूषण इलेक्ट्रोड तंत्रिका के आकार के अनुरूप होना चाहिए. रिकॉर्डिंग एक 30 40x बढ़ाई विदारक माइक्रोस्कोप और कम अंत micromanipulators का उपयोग कर एक छात्र प्रयोगशाला में आसानी से सुलभ हैं.
संयुक्त chordotonal अंगों के साथ आगे बढ़ाने के लिए दिलचस्प होगा कि भविष्य प्रयोगों के रूप में जीवन चक्र में विभिन्न चरणों में विभिन्न प्रजातियों में पैर उत्थान के दौरान संरचनात्मक और शारीरिक प्रोफाइल्स की जांच के लिए किया जाएगा एक कैंसर मजिस्टर 19,26 प्रयोग किया जाता है कि एक प्रारंभिक अध्ययन करने के लिए ऊपर का पालन करें . एक अंग regenerating जब संबोधित किया जाना शेष प्रश्नों) कर रहे हैं 1 पुनर्जीवित न्यूरॉन्स के वितरण और संगठन जानवर की उम्र पर निर्भर करता है, 2) कार्यात्मक एक Regenerating अंग में सीएनएस (उदर तंत्रिका कॉर्ड) को axonal अनुमानों हैं या यह करता है अंग autot है जब कार्यात्मक कनेक्शन स्थापित करने के लिए समय और संयुक्त उपयोग में लेते हैं, और 3) क्या autotomy विमान को समीपस्थ कटे axons के लिए होता हैomized? 28
क्रसटेशियन पर्यावरण की स्थिति और उनके आसपास के तापमान के अनुरूप है, लेकिन यह न्यूरॉन्स तापमान परिवर्तन के जवाब में उनकी गतिविधि में परिवर्तन के रूप में वे एक तंत्रिका सर्किट के भीतर समन्वय बनाए रखने कैसे स्पष्ट नहीं है. एक तेजी से परिवर्तन, 30 not29 सकता है, जबकि परिवर्तन की एक धीमी दर पशु acclimatization के लिए कुछ समय की अनुमति हो सकती है. कारण चयापचय, व्यवहार, 31 या पर्यावरणीय प्रभाव को पीएच या परासारिता में शारीरिक परिवर्तन proprioception में शामिल तंत्रिका सर्किट के समान चुनौतियों उपस्थित हो सकता है. इन जलीय तैयारी उनके कार्य अच्छी तरह से एक एकल कोशिका के स्तर पर होती है, क्योंकि इन समस्याओं के समाधान के लिए आदर्श होते हैं.
इस प्रोटोकॉल में हम सलामी बल्लेबाज मांसपेशियों द्वारा उत्पन्न बल की निगरानी में तनाव न्यूरॉन्स के शारीरिक महत्व का प्रदर्शन किया है. ये तनाव रिसेप्टर्स धुंधला प्रक्रियाओं का उपयोग करके apodeme भीतर उनके स्थान का पता लगाया जा सकता है. इनन्यूरॉन्स, स्तनधारियों में, के रूप में विभिन्न स्तरों पर बल का पता लगाने और शक्ति बढ़ जाती है के रूप में अतिरिक्त न्यूरॉन्स की भर्ती. स्वागत में संतृप्ति तक पहुँच जाता है गतिविधि में आवृत्ति मोटर न्यूरॉन की उत्तेजना आवृत्ति से संबंधित है. Flexed अंगुलि संयुक्त साथ एक जल्दी रिलीज प्रोटोकॉल का उपयोग करना, तनाव गतिविधि जल्दी से गायब हो जाता है, लेकिन फिर एक पूरी तरह से बढ़ा संयुक्त में तनाव फिर से पर देता है. इस तनाव रिसेप्टर्स द्वारा मापा बल को वर्णन करने के लिए एक क्लासिक प्रयोगात्मक प्रक्रिया है. विभिन्न neuromodulators यह बल और neuronal प्रतिक्रिया का विकास कैसे प्रभाव को देखने के लिए तैयार करने के लिए लागू किया जा सकता है. महत्वपूर्ण पहलुओं में से एक तंत्रिका प्रतिक्रियाओं संसाधित और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र और मोटर न्यूरॉन्स की गतिविधियों पर उनके प्रभाव में एकीकृत कर रहे हैं कि कैसे है. हम पता चला है तकनीक से एक वापस तनाव (संवेदी) तंत्रिका मोटर न्यूरॉन सर्किट समारोह, नाड़ीग्रन्थि के लिए एक अक्षुण्ण पैर में यानी संकेत और के बारे में अधिक जानकारी पता करने के लिए शुरू करने की अनुमतिपेशी के लिए.
का प्रदर्शन धुंधला प्रक्रियाओं proprioceptive अंगों अंदर आना कि संवेदी न्यूरॉन्स के शरीर क्रिया विज्ञान को समझने के लिए महत्वपूर्ण हैं. समारोह और सोमा के आकार के आधार पर न्यूरॉन्स के संरचनात्मक व्यवस्था केकड़ा पैरों के भीतर विभिन्न chordotonal अंगों में समान हैं. इसी तरह neuronal व्यवस्था भी अन्य जलीय प्रजातियों या कीड़ों में पाया जाता है, तो यह ज्ञात नहीं है. एकल कक्षों से शारीरिक रिकॉर्डिंग के संयोजन और स्थान मानचित्रण प्रत्यक्ष संरचना समारोह रिश्तों की अनुमति देता है. CoCl 2 धुंधला और निर्धारण के साथ संरचनात्मक व्यवस्था की लंबी अवधि के संरक्षण के एक repetitively उपायों बनाने और संरचनात्मक व्यवस्था का आकलन करने के लिए अनुमति देता है.
Proprioception और कंकाल की मांसपेशियों के तनाव स्वागत कंकाल की मांसपेशी विन्यास की एक किस्म में व्यक्त जानवरों के लिए समन्वित व्यवहार और बाह्य और आंतरिक वातावरण के लिए प्रतिक्रियाओं है कि सक्षम संवेदी रूपरेखा तैयार कर रहेएस. ; क्रेफ़िश के पेट में मांसपेशियों रिसेप्टर अंग एक और अच्छी तरह से प्रलेखित तैयारी (crawdad परियोजना को देखने है http://www.crawdad.cornell.edu/ पेट Hemi खंड 23 के अनुसार केवल दो न्यूरॉन्स के साथ proprioception के शिक्षण उद्देश्यों के लिए) . संवेदी तंत्रिका बंडलों को एक न्यूरॉन्स से रिकार्ड करने में सक्षम होने के नाते अधिक जानकारी के संवेदी स्वागत के बुनियादी सिद्धांतों को समझने में सहायता प्रदान करता है. ये अपेक्षाकृत सरल जलीय तैयारी एक proprioceptive और अन्य संवेदी आदानों 9-12, 32, 33 के मध्य एकीकरण सक्षम है कि तंत्रिका सर्किट निर्धारित करने की क्षमता के साथ, proprioception और तनाव निगरानी के बुनियादी पहलुओं को संबोधित करने की अनुमति.
The authors have nothing to disclose.
लेखकों Hyewon कूपर की कलात्मक योगदान के लिए आभारी हैं.
Sylgard | Dow Corning | 182 silicone kit | |
NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | |
KCl | Sigma-Aldrich | P9333 | |
CaCl2 | Sigma-Aldrich | C5670 | |
HEPES acid | Sigma | 3375 | Free acid, crystalline |
HEPES base | Sigma | ||
D-Glucose | Sigma | G7021 | |
MgSO4•7H2O | Sigma | M2643 | |
Na2SO4•10H2O | Sigma | 246980 | |
Bouin’s solution fixative | Sigma | HT10-1-32 | Caution: Hazardous material (Special shipping cost required) |
CoCl2 | Sigma | Caution: Hazardous material. Please follow proper disposal according to local and federal regulations. | |
Methylene blue chloride | Matheson Co., Inc | Basic Blue 9, C.I. 52015 | |
4-Di-2-ASP | Molecular Probes | 4-(4-diethylaminostyryl)-N-methylpyridinium iodide | |
Bleach | Sigma-Aldrich | To chloride silver wire | |
NaOH | Sigma-Aldrich | 221465 | To adjust pH |
HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | To adjust pH |
Materials | |||
Dissecting tools | World Precision Instruments | assortment | |
Intracellular electrode probe | |||
Faraday cage | |||
Insect Pins | Fine Science Tools, Inc | 26001-60 | |
Dissecting microscope (100X) | |||
Fiber optic lamp | |||
Small adjustable mirror | To direct light beam toward the preparation. | ||
Glass electrodes | Sigma-Aldrich | CLS7095B5X | Box of 200, suction electrodes |
Micromanipulator | World Precision Instruments | MD4-M3-R | Can fix for base or on a metal rod |
Raised preparation stand | |||
Silver wire (10/1,000 inch) | A-M Systems | 782500 | |
Computer | Any company | ||
AC/DC differential amplifier | A-M Systems | Model 3000 | |
PowerLab 26T | AD Instruments | 27T | |
Force transducer | AD Instruments | 0-50g | MLTF050/ST |
Head stage | AD Instruments | Comes with AC/DC amplifier | |
LabChart7 | AD Instruments | ||
Electrical leads | Any company | ||
Glass tools | Make yourself | For manipulating nerves | |
Cable and connectors | Any company | ||
Pipettes with bulbs | Fisher Scientific | 13-711-7 | Box of 500 |
Beakers | Any company | ||
Wax or modeling clay | Any company or local stores | ||
Stimulator | Grass Instruments | SD9 or S88 | |
Plastic tip for suction electrode | Local hardware store (Watt’s brand) | ¼ inch OD x 0.170 inch ID | Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size |