Protocol
Certifique-se de todos os procedimentos que envolvem animais são aprovados pelo uso de animais apropriados e cuidados com o corpo.
1 Prepare Banco Buffers em adiantado
- Prepare 2 L estoque de Ca2 + de Tyrode livre (Tabela 1). Ajustar o pH para 7,4 com NaOH.
- Prepare 2 L estoque 1,2 mM de Ca2 + Tyrode (Tabela 2). Ajustar o pH para 7,4 com NaOH.
2 No dia do experimento, Prepare Perfusão, Transferência e Digestão Buffers
- Prepare tampão de perfusão de 150 ml em Ca 2 + de Tyrode livre (Tabela 3) e filtrar através de um filtro de 0,2 m.
- Preparar 35 ml de Ca 2 + transferência livre "Tampão A" (Tabela 4) e 25 ml de Ca2 + contendo "Tampão B" (Tabela 5). Filtre através de um filtro a cada 0,2 m.
- Preparar soluções de 00,06, 0,24, 0,6, e 1,2 mM de Ca 2 + por mistura de tampão A e B por Tabela 6.
- Preparar um tampão de digestão de 25 ml por dissolução de enzimas de digestão em 25 ml de tampão de perfusão (Tabela 7) com base no peso corporal (BW) do rato. Filtrar através de um filtro de 0,2 m antes da utilização.
3. Setup Experimental
- Montar um aparelho de Langendorff o fluxo constante, disponíveis comercialmente ou através de um bomba peristáltica, tubagem, e um permutador de calor da bobina para permitir uma taxa de fluxo de 3 mL / min de perfusato aquecida a 37 ° C. Um esquema simples é fornecida na revisão de 2011 por Bell, et al 18.
- Ajuste temperatura do banho de circulação de água (~ 47 ° C) do aparelho de Langendorff de modo que a partir da saída da cânula é de 37 ° C a uma taxa de fluxo de 3 ml / min.
- Executar etanol a 70%, através do sistema de perfusão durante 15 min, seguido de 100 ml de tipo I de água ultrapura. Tampão de perfusão Executar através do system durante 5 minutos, enquanto a eliminação de bolhas de ar.
- Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos com um método desejado.
- Criar uma cânula, anexando uma peça curta (cerca de 3 mm) de tubagem PE-50 para a ponta de um adaptador Luer 23 L-topo. Ponta de tubo de calor para criar um rebordo ao longo da aorta que vai ser posicionado.
4. Cardiomyocyte Isolamento
- Injectar rato com 0,2 mL de solução de heparina (1000 IU / ml), por meio de injecção intraperitoneal.
- Após 5 min, anestesiar rato com isofluorano. Quando totalmente anestesiados (sem resposta à forte pitada pé), spray peito com etanol 70%. Abra o peito, rapidamente extirpar do coração, tomando cuidado para não danificar a aorta, e coloque em 4 ° C tampão de perfusão. Use uma pinça curva para agarrar e levantar sob o coração. Isso cria espaço para cortar os anexos por trás do coração com uma tesoura fina.
- Canular coração, segurando gentilmente a borda da aorta com dois pares de uma pinça fina e puxando cuidadosamente o opening da aorta ao longo da borda da cânula. Assegurar a ponta da cânula não está para além da válvula aórtica no ventrículo e, como isso vai inibir a perfusão do coração através das artérias coronárias.
- Fixar a aorta à cânula por amarrar um laço de seda de sutura 5-0 em torno da aorta imediatamente acima do bordo da cânula.
- Nota: Os passos 4.2 através de 4.4 deve ser concluída o mais rapidamente possível para a digestão de melhor qualidade.
- Nota: O coração pode ser suspenso directamente sobre a cânula já ligado ao aparelho de Langendorff com fluir tampão de perfusão. No entanto, pendurando o coração para uma cânula ligada a uma pequena seringa de tampão de perfusão sob um microscópio de dissecção foi encontrada para ser mais bem sucedido. Isso permite que uma pequena quantidade de tampão de perfusão a ser empurrado através, prestando atenção para limpeza de artérias coronárias e garantindo coração está firmemente conectado à cânula. A cânula é então pendurado na Langendorff com tampão de corrida de perfusão.
- Perfundiro coração com Ca2 + livre tampão de perfusão a um caudal de 3 ml / min durante 2-3 min.
- Mudar para a enzima tampão de digestão e perfuse por 7-10 min, o coração vai se tornar mais suave e de cor mais clara.
- Nota: O tempo de digestão pode ser ajustada com base na atividade enzimática e tamanho do coração.
- Uma vez que o coração é palpável flácido, retire o coração da cânula e coloque em um prato p60 estéril com tampão A (Ca2 + buffer de transferência gratuita).
- Remover átrios e grandes vasos. Remover ventrículo direito, se desejar. Com uma pinça, separar o ventrículo em pedaços pequenos. Pipeta várias vezes com uma pipeta esterilizada de 5 ml de transferência para dispersar ainda mais as células.
- Filtra-se a suspensão de células para um tubo cónico de 50 ml através de um filtro de 250 um de malha de nylon.
- Permitir que a suspensão para sedimentar durante cerca de 10 min.
- Transferir a pelota na solução de Ca 2 + de 0,06 mM. Permitir que as células sedimentar durante 10 minutos. Células saudáveis irá agregar, enquanto a maioria das células mortas vão flutuar. Aspirar o sobrenadante, e transferir o sedimento para o Ca 2 + solução 0,24 mM.
- Repetir 10 min de incubação, a aspiração, e transferir-se através dos restantes dois Ca 2 + soluções até que as células estão na solução 1,2 mM. Neste ponto, a maioria das células deverá ser em forma de haste miócitos.
5. medição na contração e cálcio Transitórios
- Nota: Tanto a contratilidade e transientes de cálcio podem ser medidos simultaneamente.
- Prepare Fura-2 AM solução por ressuspensão em DMSO anidro para uma concentração de 1 ug / uL. Solução de Fura-2 AM pode ser armazenado num exsicador a -20 ° C.
- Carga 1 ml de células em suspensão com 1 ml Fura-2 AM. Permitir que as células se sentar no escuro 10 min, em seguida, aspirar o sobrenadante. Lavar duas vezes com uma solução de Ca2 + de Tyrode, permitindo que as células de granulação no escuro durante 10 min entre as lavagens.
- Coloque uma lamela de vidro em uma inserção de estágio que permite pe aquecidarfusion / aspiração e eletrodo de andar com um estimulador campo miócitos. Coloque inserção fase em microscópio invertido configurado para medição de fluorescência, adicionando uma gota de óleo de lente se utilizando uma objectiva de imersão em óleo.
- Configure perfusão gravidade aquecida com solução 1,2 mM de Ca2 + de Tyrode tão solução no palco atinge 37 ° C. Anexar aspiração a vácuo. Anexar eletrodos.
- Ligue o sistema de microscópio, e abrir a fluorescência e aquisição de dados dimensionamento celular software ratiometric.
- Adicione algumas gotas de células carregadas Fura-02:00 à inserção fase, bloqueando momentaneamente perfusão permitir que as células saudáveis para resolver.
- Use objectiva de 40x de localizar celular desejado. Uma célula saudável deve ser em forma de haste e não contrair espontaneamente. É visível e uniformemente contrato deve quando a célula é estimulada em 5-20 V.
- Nota: a análise fisiológica requer uma digestão de alta qualidade. É possível ter células que parecem saudáveis, mas não fazer pa ce bem para análise fisiológica. Protocolo de digestão pode exigir refinamento para obter alta qualidade, os miócitos saudáveis. Além disso, corações mutantes ou doentes podem necessitar de modificações no protocolo.
- Ajustar a rotação da lente e abertura mudança tão célula desejada está alinhada horizontalmente na tela e no fundo não é visível.
- Alinhe bares detecção de bordas a cada final de miócitos e ajustar limite. Alinhar detecção sarcómero sobre uma porção de célula com sarcómeros uniformes. Quanto mais tempo você pode fazer este bar, mais preciso será o modelo matemático de comprimento do sarcômero será, desde que ele não esteja em duas populações de sarcômeros.
- Células ritmo em 2 Hz e 5-20 V para 10-15 segundos antes de gravar.
- Rastreamento Record. A luz ambiente deve ser minimizado para a melhor gravação de cálcio transiente.
6 Análise
- Analisar os traços usando fluorescência ratiometric e dimensionamento de células software de aquisição de dados.
- Este protocolo prevê excesso de células que podem ser usados para uma variedade de outras experiências, incluindo: fixação e imunomarcação, avaliando os efeitos diretos da droga, a cultura de curto prazo, e microscopia de força atômica.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uma vez que a contratilidade e traçados transitórios são coletados (Figura 2), os dados são facilmente analisadas com o software apropriado. Toda a rastreio, ou respectivas porções, pode ser calculada a média (Figura 3). Contractilidade pode ser analisado de uma variedade de maneiras. Para a função sistólica, pode-se avaliar a magnitude da contração com fração de encurtamento, ou a velocidade de contração com o tempo para atingir o encurtamento, e velocidade de contração. A função diastólica podem ser analisadas de forma semelhante com o tempo para 50% de encurtamento e velocidade de relaxamento. Para transientes de cálcio, os dados podem ser comparados semelhantes incluindo linha de base e pico de Fura-2 e os rácios de tempo para atingir o pico ou de linha de base (Tabela 8). Estas análises de fornecer dados comparáveis de WT e KO corações em função contrátil celular sistólica e diastólica, bem como o fluxo de cálcio, qualquer um dos que poderiam ser alteradas em um coração com semelhante disfunção orgânica todo. Além disso, as células da mesma pode isolamentoser utilizado para outros experimentos como listados no protocolo, incluindo a coloração imuno-histoquímica (Figura 4).
| Ca 2 + Tyrode livre | mM | FW / concentração | Valor para 2 L solução |
| NaCl | 135 | 58,44 g | 15,8 g |
| KCl | 4 | 74,56 g | 0,596 g |
| MgCl2 | 1 | 1 M | 2 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| NaH 2 PO 4 | 0,33 | 141,96 g | 0,094 g |
Tabela 1 solução livre de cálcio de Tyrode - Reagents para 2 L da solução de Ca 2 + livre de Tyrode.
| 1,2 mM de Ca2 + Tyrode | mM | FW / concentração | Valor para 2 L solução |
| NaCl | 137 | 58,44 g | 16 g |
| KCl | 5.4 | 74,56 g | 0,805 g |
| MgCl2 | 0,5 | 1 M | 1 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| CaCl 2 2H 2 O | 1.2 | 147,01 g | 0,353 g |
Tabela de cálcio solução de Tyrode 2. 1,2 mM - Reagentes para 2 L de estoque Ca 2 + 1,2 mMsolução.
| Perfusão tampão | mM | FW | Valores em 150 ml de Ca2 + Tyrode livre |
| Glicose | 10 | 180,16 g | 0,27 g |
| 2,3-butanodiona-monoxime (BDM) | 10 | 101,11 g | 0,152 g |
| Taurina | 5 | 125,16 g | 0,094 g |
Quadro 3 Tampão de Perfusão - reagentes para preparar tampão de perfusão no dia da experiência.
| Tampão A | 35 ml de perfusão tampão |
| Albumina de soro bovino (BSA) | 0,175 g |
Tabela 4 Tampão A - Reagentes Tampão A para preparar no dia da experiência.
| Tampão B | mM | FW | 25 ml de tampão de Ca2 + Tyrode |
| Glicose | 5 | 180,16 g | 0,0225 g |
Tabela 5 Tampão B - Os reagentes para preparar tampão B no dia da experiência.
| Transferir Tampão | Tampão A (mL) | Tampão B (ml) |
| 0,06 mM Ca 2 + | 9,5 | 0,5 |
| 0,24 mM Ca 2 + | 8 | 2 |
| Ca 2 + 0,6 mM | 5 | 5 |
| Ca 2 + 1,2 mM | 0 | 10 |
Tabela 6 Transferência de buffer - Reagentes para preparar buffer de transferência no dia do experimento.
| Digestão Enzimática Tampão | 25 ml de tampão de perfusão |
| Colagenase B | 0,4 mg / g de peso corporal |
| Colagenase D | 0,3 mg / g de peso corporal |
| Protease XIV | 0,05 mg / g de peso corporal |
Tabela 7 Enzima Digestão buffer - Reagentes para a preparação da enzima digestion tampão no dia da experiência.
| Contratilidade | |
| Linha de Base | 1,73 mM |
| Peak | 1,64 mM |
| Fração de encurtamento | 4,70% |
| Tempo para o pico | 0,056 seg |
| Tempo para 50% da linha de base | 0,043 seg |
| Transientes de cálcio | |
| Linha de Base | 1.18 |
| Peak | 1.32 |
| Tempo para o pico | 0,021 seg |
| Tempo para 50% da linha de base | 0,083 seg |
Tabela 8 Contractility e cálcio transiente analisa. N = 5.
Figura 1 Visão geral do projeto experimental. A) do coração é digerido por meio de perfusão coronária com um tampão de digestão enzimática. B) As células são mais dispersas, em miócitos individuais saudáveis. C) As células são sequencialmente transferidos através do aumento das concentrações de cálcio tão células tornam-se tolerantes cálcio. D) As células são carregadas com o dependente de cálcio tintura, Fura-02:00. E) Loaded células são eletricamente ritmo enquanto o comprimento do sarcômero, comprimento celular e fluorescência são gravados. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 A) contração Amostralidade rastreamento representado pelo comprimento do sarcômero em função do tempo. transientes B) Amostra de cálcio representados por Fura-2 proporção em função do tempo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3 A) rastreamento Média contratilidade após análise. B) Média de transientes de cálcio após análise. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4. coloração por imunofluorescência de citoesqueleto de cardiomiócitos (α-actinina).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Isolamento de cardiomiócitos de qualidade requer um certo nível de prática e de otimização. Este protocolo contém passos-chave que podem afetar significativamente o resultado da digestão. Estes devem ser considerados com cuidado na realização e solução de problemas do protocolo. O tempo de remoção do coração de canulação e perfusão deve ser minimizado, de preferência menos do que cinco minutos. Lavar o coração imediatamente em tampão de perfusão gelada após a remoção a partir do rato e dissecando e canulação do coração em tampão gelado também vai aumentar as chances de uma digestão de qualidade. A punção em si é um passo crítico. A ponta da cânula tem de ser colocado por baixo das primeiras ramificações da aorta, mas não através da válvula aórtica no ventrículo, pois isso irá impedir que a perfusão das artérias coronárias. Perfusão coronária é essencial para uma qualidade de digestão. Neste laboratório, a cânula é ligada a uma seringa cheia com o tampão de perfusão. Delicadamente, injetando um small quantidade de tampão de perfusão após a montagem e observando as artérias coronárias claras de sangue pode testar a adequação da punção.
A solução desse protocolo envolve avaliando cuidadosamente as etapas críticas acima mencionadas. Se o coração não se tornar palpável suave durante a digestão, há algumas causas potenciais. Em primeiro lugar, durante a canulação, a ponta da cânula pode ter sido avançado para além da válvula da aorta, evitando a perfusão através das artérias coronárias. Isto pode ser avaliado antes de desligar o coração do aparelho de Langendorff, mas empurrando uma pequena quantidade de tampão de perfusão através da cânula com uma seringa cuidadosamente para observação e as artérias coronárias para clara de sangue. Se a perfusão é adequado, mas o coração não digere bem, considere a compra de lotes diferentes de enzimas. Porque as enzimas são, na verdade misturas, muitos não agem de forma idêntica. Recomendamos a compra de pequenas quantidades de cada enzima. Quando lotes são encontrados que digerir bem, purchase maiores quantidades desse lote para uso futuro. Como discutido, se a dissecção e a canulação de coração demorar mais do que 5-10 minutos, a qualidade das células digeridos pode ser pobre. Considere completando isolamentos com tipo selvagem ou animais não tratados para dominar a dissecção antes de passar para nocautear ou animais tratados. Após a digestão, as células devem ser lentamente ser tolerante de cálcio. As células devem gastar pelo menos 10 minutos em cada uma das soluções de cálcio. Pressa etapas pode diminuir o rendimento e a viabilidade de células.
Embora reprodutível, as medições fisiológicas dependem começando com uma digestão qualidade. Ao selecionar células para medir, escolher as células que não sejam entidades de forma espontânea, o que indica, de uma membrana celular danificado gotejante. As células devem contrair uniformemente quando andava. Considere andando células de 10-15 seg antes de gravar as medições para garantir a consistência contrátil. Se a célula parece estar uniformemente contratante, mas as medições de contraction magnitude varia drasticamente ao longo do tempo, verifique primeiro se certificar de que a região de interesse definida cobre apenas uma população de sarcômeros. Ocasionalmente duas células agrupar e a região de interesse (ROI) possam ser medindo duas populações diferentes de sarcómero como um. Se um ROI adequado é escolhido mas contractilidade é variável dentro de uma única célula, a célula pode ser outra célula morrer e devem ser escolhidos. Para transientes de cálcio, que é fundamental para a diluir de Fura-2 AM de DMSO anidro desidratado como água muda a quantidade de Fura-2 AM, que é funcionalmente disponível. Após o carregamento, permitem pelo menos 20 minutos entre a primeira lavagem e transientes medem a permitir que todos os Fura-2 AM até des-esterificar no interior da célula. Tal como acontece com qualquer corante fluorescente, protegem as células da luz, durante e após o carregamento. Algumas células não absorção do corante, não há, assim, ocasionalmente transientes de cálcio irá ser observada numa célula de medida. Apesar de contratilidade e cálcio transientes traçados podem aparecer "mais limpo ", quando a frequência de estimulação é grandemente reduzida (0,5-1 Hz), as medições são mais fisiológico a uma velocidade mais próxima da frequência cardíaca do rato, assim, um ritmo de, pelo menos, 2 Hz é preferido.
O isolamento pode ser modificado se se desejar. Este laboratório utiliza um método de fluxo constante (3 ml / min para ratos) durante a perfusão. Alguns grupos têm encontrado uma gravidade fluir mais eficaz. Perfusão fluxo de gravidade permite a digestão para serem visualizados mais facilmente como a taxa de fluxo aumenta à medida que o coração é digerido.
Tal como mencionado, estas técnicas fazem transportar limitações. Como a qualidade das medições fisiológicas é dependente da qualidade da digestão, é prudente medir miócitos de mais do que um coração para cada condição experimental. Cada coração vai proporcionar muitos miócitos de medir, mas digestões repetição vai garantir que os resultados são consistentes entre os corações. O isolamento é um procedimento terminal, assim, se delineamento experimental envolve exerdevido a função do coração de um animal ao longo do tempo, os cardiomiócitos só pode ser colhido uma vez. Mais camundongos são necessários para uma coorte podem ser seguidos longitudinalmente, enquanto camundongos individuais são sacrificados para analisar cardiomiócitos.
Nosso foco tem vindo a estudar a contratilidade ea estrutura do citoesqueleto em um camundongo knockout, no entanto, cardiomiócitos isolados podem ser usados para uma variedade de outras experiências, incluindo a coloração de células vivas para t-túbulos, estudando cardiomiócitos de pressão ou de volume sobrecarregado ratos, examinando os efeitos da farmacológico o tratamento, a imunofluorescência, transfecção 9, e transcrição de perfil 19. Esta técnica versátil proporciona inúmeras vantagens em relação a outros métodos usados para estudar a insuficiência cardíaca. Estudar a fisiologia das células individuais dá a informação que não é oferecido por meio de estudos de órgãos inteiros como o ecocardiograma ou eletrocardiograma, fornecendo informações sobre as alterações celulares que acompanham todo órgão failure. Além disso, células isoladas são superiores às estruturas sub-celulares de imagem, tal como toda a célula pode ser facilmente manchado e fotografada. Isolando cardiomiócitos para análise da contratilidade, transientes de cálcio, ea imunofluorescência é uma técnica extremamente versátil que oferece informações valiosas de uma enorme variedade de modelos experimentais.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Não temos nada a divulgar.
Acknowledgments
Marc Wozniak para o uso do Departamento de celular e Developmental Biology videografia equipamento.
Universidade Vanderbilt imagens de células recurso compartilhado.
Este trabalho é apoiado pela AHA concessão 12PRE10950005 de ERP, AHA concessão 11GRNT7690040 a DMB, NIH concessão R01 HL037675 a DMB. DMB é o Presidente Gladys P. Stahlman no Cardiovascular Research.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
