Protocol
Asegurar que todos los procedimientos con animales son aprobados por el uso adecuado con animales y el cuidado del cuerpo.
1. Preparar Imagenes Buffers in Advance
- Prepare 2 L de stock Ca 2 + de Tyrode libre (Tabla 1). Ajustar el pH a 7,4 con NaOH.
- Prepare 2 L de stock 1,2 mM de Ca2 + Tyrode (Tabla 2). Ajustar el pH a 7,4 con NaOH.
2. En el día del experimento, Preparar perfusión, Transferencia, y Digestión Buffers
- Preparar tampón de perfusión de 150 ml de Ca 2 + de Tyrode libre (Tabla 3) y se filtra a través de un filtro de 0,2 micras.
- Preparar 35 ml de transferencia de Ca 2 + libre de "tampón A" (Tabla 4) y 25 ml de Ca2 + que contiene "tampón B" (Tabla 5). Filtra cada uno a través de un filtro de 0,2 micras.
- Preparar soluciones de 00,06, 0,24, 0,6, y 1,2 mM Ca 2 + mediante la mezcla de tampón A y B según la Tabla 6.
- Preparar 25 ml de tampón de digestión de enzimas de digestión por disolución en 25 ml de tampón de perfusión (Tabla 7) basado en el peso corporal (BW) del ratón. Filtrar a través de un filtro de 0,2 micras antes de su uso.
3. Configuración Experimental
- Montar un aparato Langendorff de flujo constante, disponibles comercialmente, o usando una bomba, tubos, y una bobina de intercambiador de calor peristáltica para permitir un caudal de 3 ml / min de perfusión se calienta a 37 ° C. Un esquema simple se proporciona en la revisión de 2011 por Bell et al 18.
- Conjunto de circulación temperatura del baño de agua (~ 47 ° C) del aparato Langendorff de manera que la salida de la cánula está en 37 ° C a una velocidad de flujo de 3 ml / min.
- Ejecutar etanol al 70% a través del sistema de perfusión durante 15 min, seguido por 100 ml de agua ultrapura tipo I. Ejecutar tampón de perfusión a través de la system durante 5 minutos, mientras que la eliminación de burbujas de aire.
- Esterilice todos los instrumentos quirúrgicos con un método deseado.
- Crear cánula uniendo una pieza corta (aproximadamente 3 mm) de PE-50 tubo a la punta de un adaptador Luer-stub 23 T. Punta de calor de tubo para crear un labio sobre el cual se colocará la aorta.
Aislamiento 4. cardiomiocitos
- Inyectar ratón con 0,2 ml de solución de heparina (1.000 UI / ml), a través de inyección intraperitoneal.
- Después de 5 min, anestesiar al ratón con isofluorano. Cuando anestesiado por completo (sin respuesta a la fuerte pellizco pie), el pecho rociar con EtOH al 70%. Abre el cofre, extirpar rápidamente el corazón, con cuidado de no dañar la aorta, y el lugar en el 4 ° C tampón de perfusión. Utilice pinzas curvas para agarrar y levantar en el corazón. Esto crea espacio para recortar archivos adjuntos detrás del corazón con tijeras finas.
- Cannulate el corazón agarrando suavemente el borde de la aorta con dos pares de pinzas finas y tirando con cuidado el opening de la aorta sobre el labio de la cánula. Asegúrese de que la punta de la cánula no es allá de la válvula aórtica y en el ventrículo, ya que esto inhibir la perfusión del corazón a través de las arterias coronarias.
- Asegure la aorta a la cánula mediante la vinculación de un bucle de sutura de seda 5-0 alrededor de la aorta inmediatamente por encima del labio de la cánula.
- Nota: Los pasos 4.2 a 4.4 se debe completar lo más rápidamente posible a la mejor digestión de calidad.
- Nota: El corazón se puede colgar directamente en la cánula ya está fijado en el aparato Langendorff con un chorro de tampón de perfusión. Sin embargo, el corazón colgando sobre una cánula unida a una jeringa pequeña de tampón de perfusión bajo un microscopio de disección ha sido encontrado para ser más exitoso. Esto permite que una pequeña cantidad de tampón de perfusión para ser empujado a través, en busca de la limpieza de las arterias coronarias y la garantía de corazón está bien conectado a la cánula. La cánula se colgó en el Langendorff con tampón de perfusión.
- Perfundirel corazón con Ca 2 + tampón de perfusión libre a un caudal de 3 ml / min durante 2-3 min.
- Cambie a la enzima tampón de digestión y perfundir durante 7-10 minutos, el corazón se volverá más suave y de color más claro.
- Nota: el tiempo de digestión se puede ajustar sobre la base de la actividad enzimática y el tamaño del corazón.
- Una vez que el corazón es palpablemente flácida, quitar el corazón de la cánula y colocar en un plato p60 estéril con tampón A (Ca 2 + tampón de transferencia gratuita).
- Retire aurículas y los grandes vasos. Retire ventrículo derecho, si lo desea. Con unas pinzas, separar el ventrículo en trozos pequeños. Pipeta varias veces con una pipeta de transferencia 5 ml estéril para dispersar a más células.
- Se filtra la suspensión celular en un tubo cónico de 50 ml a través de un filtro de malla de nylon 250 m.
- Deje que la suspensión para que sedimenten durante aproximadamente 10 min.
- Transferir el sedimento en la solución 0,06 mM Ca 2 +. Permiten a las células para sedimentar durante 10 min. Las células sanas se sedimenten, mientras que la mayoría de las células muertas flotan. Aspirar el sobrenadante, y transferir el pellet a la mM Ca 2 + 0,24 solución.
- Repetir 10 min de incubación, la aspiración y transferir a través de los dos restantes de Ca 2 + soluciones hasta que las células están en la solución 1,2 mM. En este punto, la mayoría de las células debe ser miocitos en forma de varilla.
5. medición contractilidad y calcio transitorios
- Nota: Tanto la contractilidad y transitorios de calcio pueden ser medidos de forma simultánea.
- Preparar Fura-2 AM solución mediante resuspensión en DMSO anhidro a una concentración de 1 g / l. Solución de Fura-2 AM se puede almacenar en un desecador a -20 ° C.
- Cargar 1 ml de células suspendidas con 1 l Fura-2 PM. Permiten a las células para sentarse en la oscuridad 10 min y luego se aspira el sobrenadante. Lavar dos veces con solución de Tyrode Ca 2 +, permitiendo que las células de pellets en la oscuridad durante 10 min entre lavados.
- Coloque un cubreobjetos de vidrio en un inserto de fase que permite pe climatizadarfusion / aspiración y el electrodo de estimulación con un estimulador campo de los miocitos. Lugar etapa de inserción en microscopio invertido configurado para la medición de fluorescencia, la adición de una gota de aceite a la lente si se utiliza un objetivo de inmersión en aceite.
- Configure perfusión por gravedad calienta con una solución 1,2 mM Ca 2 + de Tyrode lo solución en el escenario alcanza los 37 ° C. Conecte la aspiración a vacío. Conecte los electrodos.
- Encienda el sistema de microscopio, y abra la fluorescencia y la adquisición de datos dimensionamiento celular software radiométrica.
- Añadir unas gotas de células cargadas Fura-2 am a la inserción etapa, bloqueando la perfusión momentáneamente para permitir que las células sanas se asienten.
- Utilice objetivo de 40X para localizar célula deseada. Una célula sana debe ser en forma de bastón y no contratar de forma espontánea. Debe visiblemente y el contrato de manera uniforme cuando la célula se estimula a 5-20 V.
- Nota: análisis fisiológico requiere una digestión de alta calidad. Es posible tener células con aspecto saludable, pero no lo hacen pa ce bien para análisis fisiológico. Protocolo de digestión puede requerir refinamiento para obtener alta calidad, miocitos sanos. Además, corazones mutantes o enfermos pueden requerir modificaciones en el protocolo.
- Adjust rotación de la lente y el cambio abertura de modo de célula deseado se alinean horizontalmente en la pantalla y el fondo no es visible.
- Alinear bares de detección de bordes en cada extremo del miocito y ajuste de umbral. Alinear la detección del sarcómero en una parte de la célula con sarcómeros uniformes. Cuanto más tiempo pueda hacer de este bar, más preciso será el modelo matemático de la longitud del sarcómero será, siempre y cuando no se encuentre en dos poblaciones de sarcómeros.
- Células Pace a 2 Hz y 5-20 V durante 10-15 segundos antes de la grabación.
- Trazado Record. La luz ambiente debe reducirse al mínimo para obtener el mejor registro de transitorios de calcio.
6. Análisis
- Analizar huellas utilizando fluorescencia radiométrica y dimensionamiento celular software de adquisición de datos.
- Este protocolo proporciona el exceso de células que pueden ser utilizados para una variedad de otros experimentos que incluyen: la fijación y la inmunotinción, la evaluación de los efectos directos de drogas, cultivo a corto plazo, y microscopía de fuerza atómica.
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Representative Results
Una vez que la contractilidad y trazados transitorios se recogen (figura 2), los datos se analizan con facilidad con el software adecuado. Todo el rastreo, o porciones de los mismos se pueden promediar (Figura 3). La contractilidad se puede analizar en una variedad de maneras. Para la función sistólica, se puede evaluar la magnitud de la contracción con la fracción de acortamiento, o la velocidad de la contracción con el tiempo hasta el pico acortamiento, y la velocidad de contracción. La función diastólica se puede analizar de manera similar con el tiempo a 50% acortamiento y la velocidad de relajación. Para los transitorios de calcio, datos similares se pueden comparar incluyendo la línea de base y pico de Fura-2 y ratios de tiempo hasta el pico o la línea de base (Tabla 8). Estos análisis proporcionan datos comparables de WT y KO corazones en función contráctil celular sistólica y diastólica, así como el flujo de calcio, cualquiera de los cuales podría ser alterados en un corazón con disfunción de órganos conjunto similar. Además, las células de la misma aislamiento puedeser utilizado para otros experimentos que figuran en el protocolo, incluyendo la tinción inmunohistoquímica (Figura 4).
| Ca 2 + Tyrode libre | mM | FW / concentración | Importe para 2 l de solución |
| NaCl | 135 | 58,44 g | 15,8 g |
| KCl | 4 | 74,56 g | 0,596 g |
| MgCl2 | 1 | 1 M | 2 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| NaH 2 PO 4 | 0.33 | 141.96 g | 0,094 g |
Tabla 1.-solución de calcio libre de Tyrode - Reagenoches para 2 l de solución madre Ca 2 + libre de Tyrode.
| 1.2 mM Ca2 + Tyrode | mM | FW / concentración | Importe para 2 l de solución |
| NaCl | 137 | 58,44 g | 16 g |
| KCl | 5.4 | 74,56 g | 0,805 g |
| MgCl2 | 0,5 | 1 M | 1 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| CaCl 2 · 2H 2 O | 1.2 | 147.01 g | 0,353 g |
2. 1,2 mM de calcio solución Tabla de Tyrode - Reactivos para 2 L agotadas 1,2 mM Ca 2 +solución.
| Perfusión Buffer | mM | FW | Monto en 150 ml de Ca 2 + Tyrode libre |
| Glucosa | 10 | 180.16 g | 0,27 g |
| 2,3-Butanedione-monoxima (BDM) | 10 | 101.11 g | 0,152 g |
| Taurina | 5 | 125.16 g | 0,094 g |
Tabla 3 perfusión Buffer - reactivos para preparar tampón de perfusión en el día de experimento.
| Tampón A | 35 ml Buffer de perfusión |
| Albúmina de suero bovino (BSA) | 0,175 g |
Tabla 4. Tampón A - reactivos para preparar Tampón A en el día de experimento.
| Tampón B | mM | FW | 25 ml de tampón de Ca2 + Tyrode |
| Glucosa | 5 | 180.16 g | 0,0225 g |
Tabla 5. Tampón B - reactivos para preparar Tampón B en el día de experimento.
| Transfer Buffer | Tampón A (ml) | Tampón B (ml) |
| 0,06 mM Ca 2 + | 9.5 | 0,5 |
| 0,24 mM Ca 2 + | 8 | 2 |
| 0,6 mM Ca 2 + | 5 | 5 |
| 1,2 mM Ca 2 + | 0 | 10 |
Cuadro 6 Transferencia Buffer - Reactivos para preparar tampón de transferencia en el día del experimento.
| Digestión enzimática Buffer | 25 ml Buffer de perfusión |
| La colagenasa B | 0,4 mg / g de peso corporal |
| La colagenasa D | 0,3 mg / g de peso corporal |
| Proteasa XIV | 0,05 mg / g de peso corporal |
Cuadro 7 Digestión enzimática Buffer - Reactivos para preparar enzima ditampón de gestion en el día de experimento.
| Contractilidad | |
| Línea de base | 1,73 m |
| Pico | 1,64 m |
| El acortamiento fraccional | 4,70% |
| Tiempo a pico | 0.056 sec |
| Tiempo para 50% de línea de base | 0,043 seg |
| Los transitorios de calcio | |
| Línea de base | 1.18 |
| Pico | 1.32 |
| Tiempo a pico | 0,021 seg |
| Tiempo para 50% de línea de base | 0,083 seg |
Analiza la Tabla 8 contractilidad y calcio transitorio. N = 5.
Figura 1 Visión general del diseño experimental. A) Corazón se digiere a través de la perfusión coronaria con tampón de digestión enzimática. B) Las células se dispersan más en los miocitos, saludables individuales. C) Las células se transfirieron secuencialmente a través de aumento de las concentraciones de calcio por lo que las células se vuelven tolerantes calcio. D) Las células se cargan con el dependiente de calcio tinte, Fura-2 células de AM. E) Cargado se paseó eléctricamente, mientras que la longitud del sarcómero, longitud de la célula, y la fluorescencia se registran. Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2 A) contrac Muestratilidad rastreo representado por la longitud del sarcómero en función del tiempo. transitorios B) de calcio Muestra representados por Fura-2 ratio en función del tiempo. Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3 A) Promedio trazado contractilidad tras el análisis. B) Promedio de los transitorios de calcio después de análisis. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4. tinción de inmunofluorescencia de citoesqueleto de los cardiomiocitos (α-actinina).
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Discussion
Aislamiento de cardiomiocitos de calidad requiere un cierto nivel de la práctica y la optimización. Este protocolo contiene pasos clave que pueden afectar en gran medida el resultado de la digestión. Estos deben ser cuidadosamente considerados al realizar la solución de problemas y el protocolo. El tiempo desde la extracción del corazón de la canulación y la perfusión debe reducirse al mínimo, idealmente menos de cinco minutos. Enjuagar el corazón inmediatamente en tampón de perfusión enfriado con hielo después de la eliminación del ratón y de disección y canulación el corazón en tampón enfriado con hielo también aumentará las posibilidades de una digestión de calidad. La canalización en sí es un paso crítico. La punta de la cánula debe ser colocado por debajo de las primeras ramas de la aorta, pero no a través de la válvula aórtica en el ventrículo, ya que esto evitará que la perfusión de las arterias coronarias. De perfusión coronaria es esencial para una digestión calidad. En este laboratorio, la cánula está conectada a una jeringa llena con tampón de perfusión. Inyectar suavemente una Small cantidad de tampón de perfusión después de montar y ver las arterias coronarias claras de sangre pueden probar la adecuación de la canalización.
Solución de problemas de este protocolo consiste en una cuidadosa evaluación de los pasos críticos antes mencionados. Si el corazón no se convierta en palpablemente suave durante la digestión, hay algunas causas potenciales. En primer lugar, durante la canulación, la punta de la cánula puede haber sido avanzado más allá de la válvula aórtica, la prevención de la perfusión a través de las arterias coronarias. Esto se puede evaluar antes de colgar el corazón en el aparato de Langendorff pero empujando una pequeña cantidad de tampón de perfusión a través de la cánula con una jeringa y observando cuidadosamente para las arterias coronarias a clara de la sangre. Si la perfusión es adecuada, pero el corazón no digiere bien, considerar la compra de lotes diferentes de enzimas. Debido a que las enzimas son en realidad mezclas, muchos no actúan de forma idéntica. Recomendamos la compra de pequeñas cantidades de cada enzima. Cuando los lotes se encuentran que digieren bien, purcHase mayores cantidades de ese lote para uso futuro. Como se ha discutido, si la disección y canulación del corazón tardan más de 5-10 minutos, la calidad de las células digeridas puede ser pobre. Considere la posibilidad de completar los aislamientos con tipo silvestre o animales sin tratar de dominar la disección antes de pasar a octavos de final o de los animales tratados. Después de la digestión, las células deben hacerse lentamente calcio tolerante. Las células deben pasar al menos 10 minutos en cada una de las soluciones de calcio. Corriendo estos pasos puede disminuir el rendimiento y la viabilidad de las células.
Aunque reproducible, las mediciones fisiológicas dependen comenzando con una digestión calidad. Al seleccionar células para medir, elija las células que no están contrayendo de forma espontánea, lo que indica una membrana de células dañadas que gotea. Las células deben contraerse de manera uniforme cuando de ritmo. Considere la posibilidad de pasearse células durante 10-15 segundos antes de grabar las mediciones para garantizar la coherencia contráctil. Si aparece célula a contraer de manera uniforme, pero las mediciones de COmagnitud ntraction varía drásticamente con el tiempo, compruebe primero para asegurarse de que la región de interés definida cubre sólo una población de sarcómeros. Ocasionalmente grupo de dos células juntos y la región de interés (ROI) pueden estar midiendo dos poblaciones diferentes de sarcómero como uno. Si se elige un ROI apropiado, pero la contractilidad es variable dentro de una sola célula, la célula puede ser morir y otra célula debe ser elegido. Para los transitorios de calcio, que es fundamental para diluir Fura-2 am en DMSO anhidro desecado como el agua cambia la cantidad de Fura-2 am de ese es funcionalmente disponible. Después de la carga, deje al menos 20 minutos entre el primer lavado y transitorios de medición para permitir todo Fura-2 AM a desesterificar dentro de la célula. Como con cualquier colorante fluorescente, proteger a las células de la luz durante y después de la carga. Algunas células no absorción del tinte, por tanto, de vez en cuando no hay transitorios de calcio se pueden observar en una celda de medida. Aunque pueden aparecer contractilidad y calcio transitorios trazados "limpiador "cuando la frecuencia de estimulación se reduce considerablemente (0,5-1 Hz), las mediciones son más fisiológico a una velocidad más cerca de la tasa de corazón de ratón, de este modo un ritmo de al menos 2 Hz se prefiere.
El aislamiento en sí se puede modificar si se desea. Este laboratorio utiliza un método de flujo constante (3 ml / min para los ratones) durante la perfusión. Algunos grupos han encontrado una gravedad fluya más eficaz. Perfusión de flujo por gravedad permite la digestión a visualizarse más fácilmente como el caudal aumenta a medida que el corazón se digiere.
Como se ha mencionado, estas técnicas son portadores de limitaciones. Como la calidad de las mediciones fisiológicas depende de la calidad de la digestión, es prudente para medir los miocitos de más de un corazón para cada condición experimental. Cada corazón proporcionará muchos miocitos de medir, pero la repetición digestiones se asegurará de que los resultados son consistentes entre los corazones. El aislamiento es un procedimiento de terminal, por lo tanto, si el diseño experimental implica SSdebido a la función del corazón de un animal con el tiempo, los cardiomiocitos sólo pueden ser cosechadas una vez. Más ratones son necesarios ya una cohorte pueden ser seguidos longitudinalmente mientras que los ratones individuales se sacrifican para analizar los cardiomiocitos.
Nuestro enfoque ha estado estudiando la contractilidad y la estructura del citoesqueleto en un ratón knock-out, sin embargo, los cardiomiocitos aislados se pueden utilizar para una variedad de otros experimentos que incluyen la tinción de células vivas para túbulos-T, el estudio de los cardiomiocitos de presión o ratones volumen sobrecargado, que examina los efectos de las pruebas farmacológicas tratamiento, la inmunofluorescencia, la transfección 9, y transcripcional de perfiles 19. Esta técnica versátil ofrece un sinnúmero de ventajas sobre otros métodos de estudio de la insuficiencia cardíaca. El estudio de la fisiología de las células individuales da información que no es ofrecido por los estudios de órganos enteros, como la ecocardiografía o electrocardiografía, proporcionando información sobre los cambios celulares que acompañan f órgano enteroFALLO. Además, las células aisladas son superiores para las estructuras subcelulares de formación de imágenes, como toda la célula se puede teñir y fotografiado fácilmente. Aislar a los cardiomiocitos para el análisis de la contractilidad, los transitorios de calcio, y la inmunofluorescencia es una técnica extremadamente versátil que ofrece información valiosa de una gran variedad de diseños experimentales.
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Disclosures
No tenemos nada que revelar.
Acknowledgments
Marc Wozniak para el uso de Departamento de la célula y el equipo videografía Biología del Desarrollo.
Universidad Vanderbilt de imágenes de células de recursos compartidos.
Este trabajo es apoyado por AHA subvención 12PRE10950005 a ERP, AHA subvención 11GRNT7690040 a DMB, NIH subvención R01 HL037675 de DMB. DMB es el Presidente Gladys P. Stahlman en Cardiovascular Research.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
