Protocol
Убедитесь, что все процедуры, связанные с животными утверждаются соответствующим использования животных и ухода за телом.
1 Подготовьте изображения буферов в Advance
- Подготовьте 2 L запас Ca 2 + бесплатное Тирода (Таблица 1). Доводят рН до 7,4 с помощью NaOH.
- Подготовьте 2 L запас 1,2 мм Ca 2 + Тирода (Таблица 2). Доводят рН до 7,4 с помощью NaOH.
2 На день эксперимента, подготовить перфузии, трансфер, и пищеварение буферов
- Подготовьте 150 мл перфузии буфер в Са 2 + бесплатная Тирода (Таблица 3) и фильтруют через фильтр 0,2 мкм.
- Подготовьте 35 мл Ca 2 + бесплатный трансфер "Буфер" (Таблица 4) и 25 мл Ca 2 +, содержащего "Buffer B" (таблица 5). Фильтр друг через 0,2 мкм фильтр.
- Подготовка растворов 00,06, 0,24, 0,6, и 1,2 мМ Ca 2 + путем смешивания буфера А и В за таблице 6.
- Подготовка 25 мл буфера пищеварения путем растворения пищеварения ферменты в 25 мл буфера перфузии (таблица 7) в расчете на массу тела (BW) мыши. Фильтруют через фильтр 0,2 мкм перед использованием.
3 Экспериментальная установка
- Сборка постоянный поток аппарат Лангендорфа, коммерчески доступны или с помощью перистальтического насоса, трубы, и теплообменного элемента, чтобы скорость потока 3 мл / мин Перфузат нагревали до 37 ° С. Простой схематически представлена в обзоре 2011 Беллом и др 18.
- Набор циркулирующего температуры водяной бани (~ 47 ° C) в аппарате Лангендорфа таким образом, чтобы поток от канюли при 37 ° С при скорости потока 3 мл / мин.
- Запуск 70% этанола путем перфузии системы в течение 15 мин, а затем 100 мл ультрачистой типа I воде. Запуск буфер перфузии через противовирусныем в течение 5 мин, устраняя воздушные пузырьки.
- Стерилизацию всех хирургических инструментов с желаемым способом.
- Создать канюли путем присоединения короткий кусок (около 3 мм) из ПЭ-50 трубки к кончике 23 G Luer-заглушки адаптера. Тепло наконечник трубки, чтобы создать выступ, по которому будет аорты, расположенную.
4 кардиомиоцитов изоляции
- Введите мышь с 0,2 мл раствора гепарина (1000 ед / мл), с помощью внутрибрюшинной инъекции.
- Через 5 мин, обезболить мышь с изофлуораном. При полной не под наркозом (ответа на сильном повышении пешком), спрей грудь 70% этанола. Откройте сундук, быстро вырезать сердце, стараясь не повредить аорту, и место в 4 ° C перфузии буфера. Используйте изогнутые щипцы для восприятия и поднять под сердцем. Это создает пространство для обрезки вложения позади сердца с мелкими ножницами.
- Иглу сердце, осторожно захватывая край аорты с двумя парами тонких щипцов и осторожно потянув за openiнг аорты через край канюли. Убедитесь конец канюли не мимо аортального клапана и в желудочке, так как это будет препятствовать перфузии сердца через коронарные артерии.
- Закрепите аорты к канюли, связывая петлю 5-0 шелковой нити вокруг аорты непосредственно над губой канюли.
- Примечание: Шаги 4.2 через 4,4 должна быть завершена как можно быстрее для наилучшего качества пищеварения.
- Примечание: Сердце можно повесить прямо на канюли уже прикрепленной к Аппарата Лангендорфа с распущенными перфузии буфер. Тем не менее, висит на сердце канюли, прикрепленной к небольшой шприц перфузии буфер под микроскопом рассечение было установлено, что наиболее успешным. Это позволяет небольшое количество перфузии буфера для протолкнул, наблюдая за освобождение коронарных артерий и обеспечения сердце надежно прикреплена к канюли. Канюля затем повесили на Langendorff с проточной перфузии буфер.
- Заливатьсердце с Са 2 + свободный перфузии буфер при скорости потока 3 мл / мин в течение 2-3 мин.
- Перейти к ферментативного расщепления буфер и заливать на 7-10 мин, сердце станет мягче и светлее.
- Примечание: Расщепление времени может быть скорректирована на основе ферментативной активности и размера сердца.
- После того, как сердце ощутимо вялым, удалить сердце от канюли и место в стерильной P60 блюдо с буфером А (Са 2 + бесплатный трансфер буфера).
- Удалить предсердий и крупные сосуды. Удалить правый желудочек, если это необходимо. С щипцами, отделить желудочек на мелкие кусочки. Внесите несколько раз стерильным 5 мл пипетки для дальнейшего разгона клетки.
- Фильтр клеточной суспензии в 50 мл коническую пробирку через фильтр из нейлона сетки 250 мкм.
- Разрешить подвеска для осаждения в течение 10 мин.
- Перенесите осадок в 2+ решения 0.06 мМ Ca. Разрешить клетки для осаждения в течение 10 мин. Здоровые клетки гранулы, в то время как большинство мертвые клетки и поплывет. Аспирируйте супернатант и осадок передачи в мМ Са 2 + раствор 0,24.
- Повторите 10 мин инкубации, стремление, и передать через оставшиеся два Ca 2 + решений, пока клетки находятся в 1,2 мМ раствора. В этот момент большинство клеток должно быть в форме стержня миоциты.
5. Измерительные сократимость и кальция Переходные
- Примечание: Оба сократимость и переходные кальция могут быть измерены одновременно.
- Подготовка фура-2 AM решение путем ресуспендирования в безводном ДМСО до концентрации 1 мкг / мкл. Раствор Fura-2 утра можно хранить в эксикаторе при -20 ° С.
- Нагрузка 1 мл взвешенных клеток с 1 мкл Фура-2 утра. Разрешить клетки сидеть в темном 10 мин, затем аспирации супернатант. Мыть два раза раствором Ca 2 + Тирода, что позволяет клеткам для осаждения в темноте в течение 10 мин между стирок.
- Поместите стеклянную покровное в стадии вставки, что позволяет с подогревом реrfusion / стремление и электрод ходить с миоцитов поля стимулятора. Место этап вставки на инвертированный микроскоп создан для измерения флуоресценции, добавлением капли масла к линзе, если использовать масло иммерсионный объектив.
- Настройка подогревом тяжести перфузии раствором 1,2 мм Ca 2 + Тирода так решение на этапе достигает 37 ° C. Прикрепите стремление вакууме. Прикрепите электроды.
- Включите систему микроскопа, и открыть логометрические флуоресценции и сбора данных клеток размеров программного обеспечения.
- Добавить несколько капель Фура-2 утра загружалась клеток в стадии вставки, блокируя кровоснабжение мгновение, чтобы здоровые клетки урегулировать.
- Используйте 40X цели, чтобы найти нужную ячейку. Здоровая клетка должна быть стержнеобразные а не спонтанно сокращается. Следует заметно и равномерно контракт, когда клетка развивающийся на 5-20 В.
- Примечание: Физиологический анализ требует высокого качества пищеварение. Можно есть клетки, которые выглядят здоровыми, но не ра в.п. хорошо для физиологического анализа. Протокол Пищеварение может потребовать уточнения, чтобы получить высокое качество, здоровые миоцитов. Кроме того, мутантные или больных сердца может потребовать изменения в протокол.
- Регулировка вращения объектива и изменение диафрагмы желании ячейка выстроились горизонтально на экране и фоном не видно.
- Совместите бары обнаружение края к каждому концу миоцита и отрегулируйте порог. Выравнивание обнаружения саркомера на части клетки с едиными саркомеров. Чем дольше вы можете сделать этот бар, тем точнее математическая модель длиной саркомера будет, пока это не на двух популяций саркомерах.
- Pace клетки с частотой 2 Гц и 5-20 V для 10-15 сек до начала записи.
- Запись трассировки. Окружающий свет должен быть минимизирован за лучший кальция переходных записи.
6 Анализ
- Анализ следов, используя логометрические флуоресценции и клеток обмеры программное обеспечение сбора данных.
- Этот протокол обеспечивает избыточные клетки, которые могут быть использованы для различных других экспериментах в том числе: фиксацию и иммуноокрашивания, оценивая прямые эффекты наркотиков, краткосрочный культуру и атомно-силовой микроскопии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После того, как сократимость и переходные обводка собраны (Рисунок 2), данные легко проанализировать с помощью соответствующего программного обеспечения. Весь трассировка, или их части могут быть усреднены (рисунок 3). Сокращаемость могут быть проанализированы в различных формах. Для систолической функции, можно оценить масштабы сокращения с фракции укорочения или скорость сокращения со временем пиковой сокращения, и скорость сжатия. Диастолической функции могут быть проанализированы аналогичным образом с течением времени до 50% жира и скорости релаксации. Для переходных кальция, аналогичные данные можно сравнить в том числе базового и пика Фура-2 соотношениях и время до пиковой или базового (таблица 8). Эти анализы обеспечить сопоставимые данные WT и КО сердца на систолическое и диастолическое сотовой сократительной функции, а также потока кальция, любой из которых может быть изменены в сердце с аналогичным всей органной дисфункции. Кроме того, клетки из той же изоляция можетбыть использованы для других экспериментов, перечисленных в протоколе, в том числе иммуногистохимического окрашивания (рисунок 4).
| Ca 2 + Тирода | мМ | FW / концентрация | Сумма для 2 л раствора |
| NaCl | 135 | 58.44 г | 15,8 г |
| KCl | 4 | 74.56 г | 0,596 г |
| MgCl 2 | 1 | 1 М | 2 мл |
| HEPES | 10 | 238,31 г | 4,77 г |
| NaH 2 PO 4 | 0.33 | 141,96 г | 0,094 г |
Таблица решение 1. бескальциевой Тирода - ReageНТС для 2 л раствора складе Ca 2 + -свободных Тирода.
| 1,2 ммоль Са 2 + Tyrode | мМ | FW / концентрация | Сумма для 2 л раствора |
| NaCl | 137 | 58.44 г | 16 г |
| KCl | 5.4 | 74.56 г | 0,805 г |
| MgCl 2 | 0.5 | 1 М | 1 мл |
| HEPES | 10 | 238,31 г | 4,77 г |
| CaCl 2 · 2H 2 O | 1.2 | 147,01 г | 0,353 г |
Таблица 2 1,2 мМ кальция решение Тирода - Реагенты для 2 л складе 1,2 мМ Ca 2 +Решение.
| Перфузии буфера | мМ | FW | Сумма в 150 мл Са 2 + Тирода |
| Глюкоза | 10 | 180,16 г | 0,27 г |
| 2,3-бутандион-моноксима (BDM) | 10 | 101.11 г | 0,152 г |
| Таурин | 5 | 125,16 г | 0,094 г |
Таблица 3 перфузии буфер - реагентов для получения перфузии буфер в день эксперимента.
| Буфер | 35 мл перфузии буфера |
| Бычьего сывороточного альбумина (БСА) | 0.175 г |
Таблица 4 Буфер - реагентов для получения буфера А в день эксперимента.
| Буфер Б | мМ | FW | 25 мл Ca 2 + Tyrode буфер |
| Глюкоза | 5 | 180,16 г | 0,0225 г |
Таблица 5 Буфер B - реагентов для получения буфера В в день эксперимента.
| Перевести буфер | Буфер (мл) | Буфер B (мл) |
| 0.06 мМ Ca 2 + | 9.5 | 0.5 |
| 0,24 мМ Ca 2 + | 8 | 2 |
| 0,6 мМ Ca 2 + | 5 | 5 |
| 1,2 ммоль Са 2 + | 0 | 10 |
Таблица 6 - буфера переноса реагентов для получения передачи буфера в день эксперимента.
| Фермент Пищеварение буфера | 25 мл перфузии буфера |
| Коллагеназу B | 0,4 мг / г веса тела |
| Коллагеназы D | 0,3 мг / г веса тела |
| Протеазы XIV | 0,05 мг / г массы тела |
Таблица 7 Фермент Пищеварение буфера - реагентов для получения фермента диЖестьон буфера в день эксперимента.
| Сократимость | |
| Базовый | 1,73 мкм |
| Пик | 1,64 мкм |
| Фракционное укорочение | 4.70% |
| Время пик | 0,056 сек |
| Время до 50% базового уровня | 0,043 сек |
| Переходные кальция | |
| Базовый | 1.18 |
| Пик | 1.32 |
| Время пик | 0,021 сек |
| Время до 50% базового уровня | 0,083 сек |
Таблица 8 Сократимость и кальция переходных анализ. N = 5.
Рисунок 1. Общий обзор экспериментального проектирования. А) Сердце переваривается с помощью коронарной перфузии с ферментативного расщепления буфера. B) Клетки дополнительно диспергируют в отдельных здоровых миоцитов. С) Клетки последовательно передается через возрастающих концентраций кальция таким образом, клетки становятся кальция терпимо. D) Клетки загружаются с кальцием зависимой краситель, Фура-2 утра. E) Загружено клетки электрически развивающийся в то время как длина саркомера, длина ячейки, и флуоресценции регистрируются. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2) Образец Contractility трассировка представлена длины саркомера от времени. переходных B) Образец кальция представленных Фура-2 соотношении в зависимости от времени. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3) Средний трассировка сократимость после анализа. B) Средний переходных кальция после анализа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4 Иммунофлуоресцентное окрашивание кардиомиоцитов цитоскелета (α-актинина).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Выделение качества кардиомиоцитов требует определенного уровня практики и оптимизации. Этот протокол содержит основные шаги, которые могут значительно повлиять на результат переваривания. Они должны быть тщательно при выполнении и устранение неполадок протокола. Время от удаления сердца к катетеризации и перфузии должны быть сведены к минимуму, в идеале менее чем за пять минут. Сразу Промывка сердце в ледяной перфузии буфера после удаления из мыши и рассечения и cannulating сердце в ледяной буфера будет также увеличить шансы на качественный пищеварения. Сам катетеризация является важным шагом. Кончик канюли должен быть размещен ниже первых ветвей аорты, но не через аортальный клапан в желудочек, поскольку это помешает перфузии коронарных артерий. Ишемическая перфузии имеет важное значение для качества пищеварения. В этой лаборатории, канюля прикреплен к шприц, наполненный перфузии буфером. Аккуратно вводя Смальл объем перфузии буфера после монтажа и смотреть коронарные артерии четкие крови может проверить адекватность катетеризации.
Поиск и устранение неисправностей этот протокол включает тщательно оценивая вышеупомянутые критические шаги. Если сердце не становится ощутимо мягкой в течение пищеварения, есть несколько возможных причин. Во-первых, во время катетеризации, кончик канюли может были выдвинуты за пределы аортального клапана, предотвращая перфузии с помощью коронарных артерий. Это может быть оценена до висит сердца на аппарате Лангендорфа, но толкает небольшое количество перфузии буфер через канюлю с помощью шприца и тщательно наблюдая за коронарных артерий, чтобы очистить из крови. Если перфузии соответствует, но сердце не переварить хорошо, рассмотреть вопрос о приобретении разных партий ферментов. Поскольку ферменты являются на самом деле смеси, много не действуют одинаково. Мы рекомендуем приобрести небольшое количество каждого фермента. Когда много найдены, что переварить хорошо, PurcХасэ больших количеств этого много для использования в будущем. Как уже обсуждалось, если рассечение и катетеризации сердца дольше, чем 5-10 минут, качество расщепленных клеток может быть бедным. Рассмотрим комплектующие обособления с дикого типа или необработанных животных освоить рассечение, прежде чем перейти в нокаут или обработанных животных. После переваривания, клетки должны быть медленно быть кальция терпимая. Клетки должны потратить не менее 10 мин в каждом из решений кальция. Стремительное следующие действия могут уменьшить выход и жизнеспособность клеток.
Хотя воспроизводимым, физиологические измерения зависят от начиная с качества пищеварения. При выборе клетки для измерения, выберите ячейки, которые не спонтанно подрядных, что указывает на дырявой, поврежденные клеточные мембраны. Клетки должны сокращаться равномерно, когда темп. Рассмотрим ходить клетки в течение 10-15 сек перед записью измерений для обеспечения сократительной консистенции. Если появляется клетка для заражения равномерно, но измерения сотрудничестваntraction величина меняется резко в течение долгого времени, в первую очередь проверьте, чтобы убедиться, что область интересов определяется охватывает только один население саркомерах. Иногда две клетки группируются и область интереса (ROI) может быть измерения двух различных популяций саркомера как один. Если соответствующий ROI выбран, но сократимость является переменной в пределах одной клетки, клетка может быть умирает, а другой ячейки должны быть выбраны. Для переходных кальция, крайне важно, чтобы разбавить Фура-2 утра в высушенном безводного ДМСО как вода изменяет количество Фура-2 утра, функционально доступны. После загрузки, позволит, по крайней мере 20 минут между первой стирки и измерительных переходных чтобы все Фура-2 утра, чтобы де-этерификации в клетке. Как и в любом флуоресцентным красителем, защищают клетки от света во время и после загрузки. Некоторые клетки не освоит краситель, таким образом, иногда не переходные кальция не будет наблюдаться в измеряемой ячейке. Хотя сократимость и кальция переходные обводка может появиться "чище ", когда частота стимуляции значительно снижается (0,5-1 Гц), измерения более физиологичным по ставке ближе к ЧСС мыши, таким образом, темп не менее 2 Гц является предпочтительным.
Сама изоляция может быть изменена по желанию. Эта лаборатория использует метод постоянного потока (3 мл / мин для мышей) во время перфузии. Некоторые группы нашли самотеком более эффективным. Самотеком перфузии позволяет пищеварения для визуализации более легко, как расход увеличивается как сердце переваривается.
Как уже упоминалось, эти методы действительно несут ограничений. Так как качество физиологических измерений зависит от качества пищеварения, это разумно, чтобы измерить миоцитов из более чем одного сердца для каждой экспериментальной состоянии. Каждое сердце предоставит множество миоцитов для измерения, но повторные расщепление будет гарантировать, что результаты согласуются между сердцами. Выделение представляет собой терминал процедура, таким образом, если опытно-конструкторских включает Фолляблагодаря функции сердца животного в течение долгого времени, кардиомиоциты могут быть собраны только один раз. Еще мышей необходимы, чтобы когорта может следовать продольно то время как отдельные мышей забивают проанализировать кардиомиоцитов.
В центре нашего внимания изучает сократимость и структуру цитоскелета в нокаут мыши, однако отдельные кардиомиоциты могут быть использованы для различных других экспериментах в том числе живая окрашивания клеток Т-трубочек, изучая кардиомиоцитов из давления или объема перегружен мышей, для изучения влияния фармакологических лечение, иммунофлюоресценции, трансфекции 9, и транскрипции профилирования 19. Это универсальный метод предоставляет бесчисленные преимущества перед другими методами, используемыми для изучения сердечной недостаточности. Изучение физиологии отдельных клеток дает информацию, которая не предлагается целых исследований органов, таких как эхокардиографии или электрокардиографии, позволит приблизиться к пониманию клеточных изменений, которые сопровождают весь орган пailure. Кроме того, изолированные клетки превосходят для визуализации субклеточном структур, как вся камера может быть легко окрашенных и образ. Изоляция кардиомиоциты для анализа сократительной, переходных кальция, и иммунофлюоресценции является чрезвычайно универсальным методом, который предлагает ценную информацию от огромного разнообразия экспериментальных конструкций.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У нас нет ничего раскрывать.
Acknowledgments
Марк Возняк для использования Департаментом Cell и биологии развития видеосъемка оборудования.
Университет Вандербильта изображений сотовый общего ресурса.
Эта работа поддерживается AHA гранта 12PRE10950005 к ERP, AHA гранта 11GRNT7690040 чтобы DMB, NIH грант R01 HL037675 чтобы DMB. DMB является председателем Глэдис П. Stahlman в сердечно-сосудистых исследований.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
