Protocol
Se till att alla som deltar i djurförsök godkänns av lämplig djur användning och skötsel kropp.
1 Förbered Stock Buffers i Advance
- Bered två L lager Ca2 + fri Tyrodes (Tabell 1). Justera pH till 7,4 med NaOH.
- Förbered 2 L lager 1,2 mM Ca 2 + Tyrodes (tabell 2). Justera pH till 7,4 med NaOH.
2 På dagen för experimentet, Förbered Perfusion, Transfer och Digestion buffertar
- Förbered 150 ml perfusionsbuffert i Ca 2 + fri Tyrodes (tabell 3) och filtrera genom ett 0,2 m filter.
- Förbered 35 ml Ca2 + fri transfer "buffert A" (tabell 4) och 25 ml Ca 2 + innehåller "Buffert B" (tabell 5). Filtrera varje genom ett 0,2 pm filter.
- Bered lösningar av 0.06, 0,24, 0,6, och 1,2 mM Ca2 + genom att blanda buffert A och B enligt tabell 6.
- Bered 25 ml digere buffert genom upplösning uppslutnings enzymer i 25 ml perfusionsbuffert (tabell 7) baserat på kroppsvikt (BW) för musen. Filtrera genom ett 0,2 ^ m filter före användning.
3 Experimentell Setup
- Montera ett konstant flöde Langendorff apparat, tillgängliga kommersiellt eller med hjälp av en peristaltisk pump, slangar och en värmeväxlarslinga för att medge en flödeshastighet av 3 ml / min av perfusatet upphettades till 37 ° C. Ett enkelt schema finns i översynen 2011 av Bell et al 18.
- Ställ cirkulerande vattenbad temperatur (~ 47 ° C) av Langendorff apparat, så att utflödet från kanylen är vid 37 ° C vid en flödeshastighet av 3 ml / min.
- Kör 70% etanol genom perfusionssystemet för 15 min, följt av 100 ml ultrarent typ I vatten. Kör perfusionsbuffert via system för 5 min medan eliminera luftbubblor.
- Sterilisera alla kirurgiska verktyg med en önskad metod.
- Skapa kanyl genom att fästa en kort bit (ca 3 mm) av PE-50 slang till spetsen av en 23 G Luer-stump-adapter. Värme spets slangen för att skapa en läpp över vilken aorta kommer att placeras.
4. cardiomyocyte Isolering
- Injicera mus med 0,2 ml heparinlösning (1000 lU / ml), via intraperitoneal injektion.
- Efter 5 min, söva musen med isofluoran. När helt bedövad (ingen reaktion på en stark fot nypa), spraya bröstet med 70% EtOH. Öppna kistan, snabbt skära ut hjärtat, försiktigt så att inte skada aorta, och placera i 4 ° C perfusionsbuffert. Använd böjd pincett för att förstå och lyft under hjärtat. Detta skapar utrymme för att trimma bilagor bakom hjärtat med fina sax.
- Kanylera hjärtat genom att försiktigt ta tag i kanten av aorta med två par av fin pincett och försiktigt dra i öppng av aortan över läppen av kanylen. Se till spetsen på kanylen är inte förbi aortaklaffen och in i ventrikeln, eftersom detta kommer att inhibera perfusion av hjärtat via koronarartärerna.
- Säkra aortan till kanylen genom att knyta en slinga av 5-0 silkesutur runt aortan omedelbart ovanför läppen av kanylen.
- Notera: Steg 4,2 till 4,4 bör slutföras så snabbt som möjligt för bästa matsmältning.
- Obs: Hjärtat kan hängas direkt på kanylen redan ansluten till Langendorff Apparater med flödande perfusionsbuffert. Emellertid hängande hjärtat på en kanyl fäst till en liten spruta med perfusionsbuffert under ett dissektionsmikroskop har befunnits vara mest framgångsrika. Detta gör att en liten mängd perfusionsbuffert som ska drivas igenom, titta på clearing av kranskärl och se hjärtat sitter fast kanyl. Kanylen är sedan hängde på Langendorff med rinnande perfusionsbuffert.
- BEGJUTAhjärtat med Ca2 + fri perfusion buffert vid ett flöde av 3 ml / min under 2 till 3 min.
- Växla till enzym matsmältningen buffert och BEGJUTA för 7-10 min, kommer hjärtat att bli mjukare och ljusare i färgen.
- Obs: Uppslutning tid kan justeras baserat på enzymaktivitet och hjärtstorlek.
- När hjärtat är påtagligt slapp, ta bort hjärtat från kanylen och lägg i en steril p60 skålen med buffert A (Ca2 + fri transfer buffert).
- Ta förmak och stora fartyg. Ta höger kammare om så önskas. Med pincett, separera ventrikeln i små bitar. Pipette flera gånger med en steril 5 ml överföringspipetten att ytterligare sprida celler.
- Filtrera den cellsuspension i en 50 ml koniskt rör genom en 250 | im nylonmaskfilter.
- Tillåt suspensionen att pelle under ca 10 min.
- Överför pelleten i 0,06 mM Ca 2 + lösning. Låt cellerna till pellets i 10 min. Friska celler kommer att pelletera, medan de flesta döda celler kommer att flyta. Aspirera supernatanten och överför pelleten till 0,24 mM Ca 2 +-lösning.
- Upprepa 10 min inkubation, aspiration, och överföra den genom de resterande två Ca2 +-lösningar tills cellerna är i 1,2 mM lösning. Vid denna punkt, om en majoritet av cellerna vara stavformade muskelceller.
5. Mätning kontraktilitet och kalcium transienter
- Notera: Både kontraktilitet och kalcium transienter kan mätas samtidigt.
- Förbered Fura-02:00 lösning genom återsuspendering i vattenfri DMSO till en koncentration av 1 ug / ul. Fura-02:00 lösning kan förvaras i en exsickator vid -20 ° C.
- Last 1 ml suspenderade celler med 1 pl Fura-02:00. Låt cellerna att sitta i mörkret 10 minuter sedan aspirera supernatanten. Tvätta två gånger med Ca 2 + Tyrodes lösning, vilket tillåter celler att pelle i mörker under 10 min mellan tvättar.
- Placera ett täckglas i ett skede insats som gör att uppvärmd perfusion / aspiration och elektrodstimulering med en myocyt fält stimulator. Placera skede insats på inverterat mikroskop inställd för fluorescensmätning, tillsätta en droppe olja på linsen om du använder ett oljeimmersionsobjektiv.
- Inrätta uppvärmd gravitation perfusion med 1,2 mM Ca 2 + Tyrodes lösning så lösningen på scenen når 37 ° C. Bifoga aspiration till vakuum. Fäst elektroderna.
- Slå på mikroskopsystem och öppna ratiometrisk fluorescens och celldimensionerings datainsamling programvara.
- Tillsätt några droppar av Fura-2:00 laddade celler till scenen insatsen, blockerar perfusion tillfälligt tillåta friska celler att bosätta sig.
- Använd 40X mål att lokalisera önskad cell. En frisk cell ska vara stavformade och inte spontant upphandlande. Det ska tydligt och enhetligt avtal när cellen stimuleras vid 5-20 V.
- Obs: Fysiologiska analys kräver en hög kvalitet matsmältning. Det är möjligt att ha celler som ser friska men inte gör det pa ce väl för fysiologisk analys. Uppslutning protokoll kan kräva förfining för att få hög kvalitet, friska myocyter. Dessutom kan muterade eller sjuka hjärtan kräver ändringar av protokollet.
- Justera linsrotation och ändra bländaren så önskas cell uppradade horisontellt på skärmen och bakgrunden är inte synlig.
- Rikta kantstänger detektions till varje ände av myocyt och justera tröskeln. Rikta sarcomere upptäckt på en del av cell med enhetliga sarkomerer. Ju längre du kan göra denna bar, desto mer exakt den matematiska modellen av sarcomere längden vara, så länge det inte är på två populationer av sarkomerer.
- Pace celler vid 2 Hz och 5-20 V för 10-15 sekunder innan inspelningen.
- Record spårning. Omgivande ljus bör minimeras för bästa kalcium transient inspelning.
6. Analys
- Analysera spår med hjälp ratiometrisk fluorescens och celldimensionerings datainsamling programvara.
- Detta protokoll ger överskott celler som kan användas för en mängd andra försök, vilket omfattar: fixering och immunfärgning, bedöma direkta läkemedelseffekter, kortsiktiga kultur och atomkraftsmikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
När kontraktilitet och övergående kurvor samlas (figur 2), är data enkelt analyseras med lämplig programvara. Hela spårning, eller delar därav kan genomsnitt (Figur 3). Kontraktilitet kan analyseras på en mängd olika sätt. För systolisk funktion, kan man bedöma omfattningen av kontraktion med fraktionerad förkortning eller hastighet kontraktion med tiden till maximal förkorta och kontraktion hastighet. Diastoliskt funktion kan analyseras på liknande sätt med tiden till 50% matfett och avkoppling hastighet. För kalcium transienter, kan liknande data jämföras med baslinjen och topp Fura-2-förhållanden och tid till maximal eller baslinjen (tabell 8). Analyserna ger jämförbara uppgifter från WT och KO hjärtan på systoliskt och diastoliskt cellulär kontraktila funktion, samt kalciumflöde, något som skulle kunna ändras i ett hjärta med liknande hela organdysfunktion. Dessutom, celler från samma isolering kananvändas för andra experiment som anges i protokollet, inklusive immunhistokemisk färgning (Figur 4).
| Ca 2 + fri Tyrode | mM | FW / koncentration | Belopp för 2 L lösning |
| NaCl | 135 | 58,44 g | 15,8 g |
| KCl | 4 | 74,56 g | 0,596 g |
| MgCl2 | 1 | En M | 2 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| NaH 2 PO 4 | 0,33 | 141,96 g | 0,094 g |
Tabell 1 Kalcium-fri Tyrodes lösning - Reagents för 2 L i lager Ca 2 + -fri Tyrodes lösning.
| 1,2 mM Ca2 + Tyrode | mM | FW / koncentration | Belopp för 2 L lösning |
| NaCl | 137 | 58,44 g | 16 g |
| KCl | 5,4 | 74,56 g | 0,805 g |
| MgCl2 | 0,5 | En M | 1 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| CaCl2 • 2 H2O | 1,2 | 147,01 g | 0,353 g |
Tabell 2 1,2 mM Kalcium Tyrodes lösning - Reagenser för 2 L slut 1,2 mM Ca2 +lösning.
| Perfusionsbuffert | mM | FW | Mängd i 150 ml Ca2 + fri Tyrode |
| Glukos | 10 | 180,16 g | 0,27 g |
| 2,3-butandion-monoxim (BDM) | 10 | 101,11 g | 0,152 g |
| Taurin | 5 | 125,16 g | 0,094 g |
Tabell 3. perfusionsbuffert - reagens för att framställa perfusionsbuffert på dagen för experimentet.
| Buffert A | 35 ml perfusionsbuffert |
| Bovint serumalbumin (BSA) | 0,175 g |
Tabell 4 Buffert A - reagens för framställning av buffert A på dagen för experimentet.
| Buffert B | mM | FW | 25 ml Ca 2 + Tyrode buffert |
| Glukos | 5 | 180,16 g | 0,0225 g |
Tabell 5 Buffert B - reagens för framställning av Buffert B på dagen för experimentet.
| Överföringsbuffert | Buffert A (ml) | Buffert B (ml) |
| 0,06 mM Ca 2 + | 9,5 | 0,5 |
| 0,24 mM Ca 2 + | 8 | 2 |
| 0,6 mM Ca 2 + | 5 | 5 |
| 1,2 mM Ca2 + | 0 | 10 |
Tabell 6. överföringsbuffert - Reagens för att framställa överföringsbuffert på dagen för experimentet.
| Enzymdigestion Buffert | 25 ml perfusionsbuffert |
| Kollagenas B | 0,4 mg / g kroppsvikt |
| Kollagenas D | 0,3 mg / g kroppsvikt |
| Protease XIV | 0,05 mg / g kroppsvikt |
Tabell 7 Enzymdigestion Buffer - reagens för att framställa enzym digestion buffert på dagen för experimentet.
| Kontraktilitet | |
| Baslinje | 1,73 | im |
| Peak | 1,64 | im |
| Bråk Förkortning | 4,70% |
| Tid till topp | 0,056 sek |
| Tid till 50% baslinjen | 0,043 sek |
| Kalcium transienter | |
| Baslinje | 1,18 |
| Peak | 1,32 |
| Tid till topp | 0,021 sek |
| Tid till 50% baslinjen | 0,083 sek |
Tabell 8 Kontraktilitet och kalcium övergående analyser. N = 5.
Figur 1 Allmän översikt av experimentell design. A) Hjärta spjälkas via koronar perfusion med enzymdigestion buffert. B) Celler vidare sprids i enskilda, friska muskelceller. C) Celler sekventiellt överförs via ökande kalciumkoncentrationer så cellerna blir kalcium tolerant. D) Celler är laddade med kalciumberoende färgämne, är Fura-02:00. E) Laddade celler elektriskt tempo medan sarcomere längd, celllängd, och fluorescens registreras. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 A) Prov contractilitet spårning representeras av sarcomere längd kontra tid. B) Prov kalcium transienter representerade av Fura-2-förhållande kontra tid. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 A) Genomsnittlig kontraktilitet spårning efter analys. B) Genomsnitt av kalcium transienter efter analys. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 Immunofluorescerande färgning av cardiomyocyte cytoskelettet (α-actinin).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Isolering kvalitets cardiomyocytes kräver någon form av praktik och optimering. Detta protokoll innehåller viktiga steg som i hög grad kan påverka resultatet av matsmältningen. Dessa bör övervägas noga när du utför och felsökning protokollet. Tiden från avlägsna hjärtat att kanyler och perfusion bör minimeras, helst mindre än fem minuter. Sköljning hjärtat omedelbart i iskall perfusionsbuffert efter avlägsnande från mus och dissekera och kanyle hjärtat i iskall buffert kommer också att öka chanserna för en kvalitet matsmältning. Den kanyle sig är ett kritiskt steg. Spetsen av kanylen måste placeras nedanför de första grenarna av aortan men inte genom aortaklaffen in i ventrikeln, eftersom detta kommer att förhindra perfusion av kranskärlen. Coronary perfusion är avgörande för en kvalitet matsmältningen. I detta laboratorium är kanylen fäst till en spruta fylld med perfusionsbuffert. Försiktigt injicera en small mängd perfusionsbuffert efter montering och titta på kranskärlen klara av blod kan testa lämpligheten av kanyler.
Felsökning detta protokoll innebär noggrant bedöma de ovan nämnda kritiska stegen. Om hjärtat inte blir påtagligt mjukt under uppslutning, finns det några möjliga orsaker. Först under kanyle, spetsen på kanylen kan ha avancerat bortom aortaklaffen, vilket förhindrar perfusion via kransartärerna. Detta kan bedömas innan du hänger hjärtat på Langendorff apparaten utan att trycka på en liten mängd perfusionsbuffert genom kanylen med en spruta och titta noga för kranskärlen till klara av blod. Om perfusion är tillräcklig men hjärtat inte smälta väl, överväga att köpa olika massor av enzymer. Eftersom enzymer är faktiskt blandningar, behöver massor inte agera identiskt. Vi rekommenderar dig att köpa små mängder av varje enzym. När partier finns att smälta väl, Purchase större mängder av detta parti för framtida bruk. Såsom diskuterats, om dissekering och kanylering av hjärtat att ta längre tid än 5-10 min, kan kvaliteten på de spjälkade cellerna vara dålig. Överväg slutföra isoleringar med vildtyp eller obehandlade djur att behärska dissekering innan vi går vidare till knockout eller behandlade djur. Efter rötning, celler skall långsamt bli kalcium tolerant. Celler bör använda minst 10 min i vardera av kalciumlösningar. Rusa dessa steg kan minska utbytet och livskraft celler.
Även reproducerbar, de fysiologiska mätningarna beror på att starta med en kvalitet matsmältningen. När du väljer celler för att mäta, väljer celler som inte är spontant upphandlande, vilket indikerar en läckande, skadad cellmembranet. Celler bör ingå avtal jämnt i tempo. Överväg pacing celler i 10-15 sekunder innan du spelar mätningar för att säkerställa kontraktila konsekvens. Om cell verkar upphandlande jämnt, men mätningarna av contraction magnitud varierar kraftigt över tid, kontrollera först att se till att regionen av intresse definieras omfattar endast en population av sarkomerer. Ibland två celler gruppera och regionen av intresse (ROI) kan mäta två olika populationer av sarcomere som en. Om en lämplig ROI väljs men kontraktilitet är variabel i en enda cell kan cellen vara döende och en annan cell bör väljas. För kalcium transienter, är det viktigt att späda Fura-2:00 i uttorkad vattenfri DMSO som vatten ändrar mängden Fura-2:00 som är funktionellt tillgänglig. Efter lastning, att minst 20 min mellan den första tvätten och mäta transienter för att tillåta all Fura-2:00 att de-förestra i cellen. Som med alla fluorescerande färg, skyddar cellerna från ljus under och efter lastning. Vissa celler kommer inte upptag färgen, vilket ibland inga kalcium transienter kommer att observeras i en uppmätt cell. Även kontraktilitet och kalcium transienter kurvor kan visas "renare "när stimuleringsfrekvensen är kraftigt reducerad (0,5-1 Hz), mätningar är mer fysiologisk vid en hastighet närmare musen hjärtfrekvens, således en takt av minst 2 Hz är att föredra.
Isoleringen i sig kan ändras om så önskas. Detta laboratorium använder ett konstant flöde metod (3 ml / min för möss) under perfusionen. Vissa grupper har hittat ett självfall effektivare. Gravitationsflöde perfusionen möjliggör digestionen att visualiseras lättare då flödeshastigheten ökar när hjärtat rötas.
Som nämnts, dessa tekniker gör bär begränsningar. Eftersom kvaliteten på de fysiologiska mätningar är beroende av kvaliteten på matsmältningen, är det klokt att mäta myocyter från mer än ett hjärta för varje experimentell skick. Varje hjärta kommer att ge många myocyter att mäta, men upprepade digere kommer att säkerställa att resultaten är konsekventa mellan hjärtan. Isolering är en terminal förfarande, alltså, om experimentell design innebär follgrund av hjärtfunktionen hos ett djur med tiden, kan kardiomyocyterna endast skördas en gång. Fler möss behövs så en kohort kan följas longitudinellt medan enskilda möss offras för att analysera hjärtmuskelceller.
Vårt fokus har studerat kontraktilitet och cytoskelettala struktur i en knockout-mus, men isolerade hjärtmuskelceller kan användas för en mängd andra försök, vilket omfattar levande cell färgning för t-tubuli, studera hjärtmuskelceller från tryck eller volymbelastad möss, undersöka effekterna av farmakologisk behandling, immunofluorescens, transfektion 9 och transkriptionsprofilering 19. Denna mångsidiga tekniken erbjuder oräkneliga fördelar jämfört med andra metoder som används för att studera hjärtsvikt. Studera fysiologi enskilda celler ger information som inte erbjuds av studierna hela organ såsom ekokardiografi eller EKG, som ger inblick i de cellförändringar som följer med hela organ failure. Dessutom isolerade celler är överlägsna för avbildnings sub-cellulära strukturer, som hela cellen kan lätt färgas och avbildas. Isolera cardiomyocytes för analys av kontraktilitet, kalcium transienter och immunofluorescens är en extremt mångsidig teknik som ger värdefull information från ett enormt utbud av experimentell design.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har inget att lämna ut.
Acknowledgments
Marc Wozniak för användning av institutionen för cell-och utvecklingsbiologi videography utrustning.
Vanderbilt University cell imaging delad resurs.
Detta arbete stöds av AHA bidrag 12PRE10950005 till ERP, AHA bidrag 11GRNT7690040 till DMB, NIH bidrag R01 HL037675 till DMB. DMB är Gladys P. Stahlman professur i kardiovaskulär forskning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
