Summary
Inyección intramiocárdica percutánea guiada por ecocardiografía representa una modalidad eficiente, fiable, y objeto de orientación para la entrega de agentes de transferencia de genes o células en el corazón murino. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
Abstract
Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son importantes para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y la exploración de potenciales terapias regenerativas. Los experimentos que implican la inyección miocárdica se llevan a cabo actualmente por el acceso quirúrgico directo a través de una toracotomía. Aunque esto es conveniente cuando se realiza en el momento de otra manipulación experimental como la ligadura de la arteria coronaria, la necesidad de un procedimiento invasivo para la entrega intramyocardial limita posibles diseños experimentales. Con cada vez mejor resolución ultrasonido y técnicas de imagen no invasivas avanzadas, ahora es factible realizar rutinariamente guiada por ecografía, la inyección intramiocárdica percutánea. Esta modalidad ofrece eficiente y fiable agentes a una región específica del miocardio. Las ventajas de esta técnica son evitar la morbilidad quirúrgica, la facilidad para las regiones objetivo de miocardio selectivamente bajo control ecográfico, y la oportunidad de ofrecer a inyectar a la myocardium en múltiples intervalos de tiempo, predeterminadas. Con técnica practicada, complicaciones de la inyección intramiocárdica son raros, y los ratones regresar rápidamente a la actividad normal en la recuperación de la anestesia. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador con experiencia básica ecocardiografía puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
Introduction
La enfermedad cardíaca es la principal causa de muerte tanto para hombres y mujeres en los Estados Unidos, lo que representa 600.000 muertes al año 1. Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son de importancia crítica para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y para explorar posibles terapias. Infarto de entrega de vectores de terapia génica, las células, los ARN modificados, y otros agentes terapéuticos permisos de investigación de su potencial terapéutico para la enfermedad cardíaca 2-7 tallo. En la actualidad, hay opciones limitadas para la entrega infarto de agentes terapéuticos en modelos de ratón 6. Inyección intramiocárdica bajo visualización directa se usa comúnmente, pero requiere una esternotomía o toracotomía y se limita a la región expuesta del corazón. Aunque esto es conveniente cuando se realiza en el momento de otra manipulación experimental, como la ligadura de LAD, la necesidad de un procedimiento invasivo para la entrega intramyocardial limita posibles diseños experimentales e introduce unefectos adicionales A partir del procedimiento (por ejemplo, la fibrosis debido a toracotomía). Entrega pericárdico percutáneo de vectores virales se ha informado, pero el sitio y la distribución de agente terapéutico no es homogénea y es difícil de controlar 8. Resultados de inyección percutáneo de distribución más homogénea de material inyectado, pero la entrega coronaria eficiente y reproducible es un reto en modelos murinos.
A continuación, describimos una técnica de inyección cerrado pecho intramyocardial que permite al operador controlar la orientación mínimamente invasiva, de agentes terapéuticos bajo guía ecográfica. La técnica es fácil de aprender, evita la necesidad de toracotomía o esternotomía y sus complicaciones experimentales concomitantes, y proporciona una mayor flexibilidad en el calendario y los sitios de la inyección intramiocárdica. Por lo tanto, la inyección intramiocárdica ecocardiografía asistida representa un método técnicamente simple y altamente efectiva de manipular elmiocardio en modelos experimentales murinos.
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Protocol
Todos los pasos descritos se realizaron bajo los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional del Hospital Infantil de Boston.
1. Preparación
- Realizar la evaluación anatómica y funcional cardiaca por ecocardiografía línea de base antes de comenzar el protocolo de inyección, ya que la posición del transductor fijo óptimo para la inyección intramiocárdica puede no producir las vistas estándar óptimas para delinear la anatomía y la evaluación de la función.
- La configuración de la inyección se muestra en las Figuras 1A-1C. Coloque una jeringa vacía con una aguja enfundada, orientada bisel hacia arriba, en la abrazadera de la jeringa (ver Figura 1C) y asegurar la sonda de transductor de ultrasonidos en la abrazadera de exploración de la cabeza (véase la Figura 1B). Aflojar el scan-cabeza de la articulación de bloqueo de bolas abrazadera (Figura 1B) y manipular la orientación del transductor de manera que está alineado en paralelo al eje de la aguja. Fijar el SCAN-posición de la cabeza apretando el conjunto de bloqueo de bolas abrazadera exploración de cabeza.
NOTA: Para la inyección en ratones adultos, una aguja de 30 G con un 1 in / 2,5 cm de longitud es óptima. Una jeringa de 1 ml se puede utilizar para volúmenes más grandes, mientras que una jeringa estanca a los gases puede ser utilizado para un control más preciso de volúmenes más pequeños (5-10 l). - Aplicar gel de ultrasonido liberalmente a la punta del transductor con una espátula para cubrir la cabeza a lo largo de su totalidad. Desenvainar cuidadosamente la aguja y el uso de la aguja de montaje controles para avanzar la aguja justo debajo del transductor y en el gel de ultrasonido para la visualización. Hacer ajustes menores utilizando la aguja de montaje de control de modo que la aguja se visualiza claramente a lo largo de su longitud en la imagen de ultrasonido. Si el transductor se correctamente alineado paralelo a la aguja en el paso 1.4, a continuación, la aguja debe permanecer dentro del plano de la imagen a medida que avanza y se retira con el mando de control de la inyección (Figura 1C).
- En etapas posteriores, no molestar la necesidadLE / transductor alineación horizontal moviendo ya sea en el eje horizontal. Más bien, apuntar a áreas específicas del corazón para inyección cambiando la posición vertical (eje y) de la aguja de montar y moviendo la plataforma animal.
- Mueva el transductor superiormente desde la plataforma animal, mediante la exploración de control de altura (Figura 1B) para permitir la posterior colocación del ratón anestesiado en la plataforma animal. Esto no perturbar la alineación del eje x del transductor al eje largo de la aguja.
- Retire la jeringa que se utilizó para la alineación de la abrazadera de la jeringa y desechar cuidadosamente. Cargue la aguja y jeringa con la sustancia inyectada al volumen de destino final, teniendo en cuenta el espacio muerto en la punta de la jeringa. Tenga cuidado de eliminar las burbujas de aire. Coloque la jeringa en la abrazadera de la jeringa sin ajustar su alineamiento eje x. Retraer completamente la jeringa con el control de la inyección.
NOTA: Para los propósitos iniciales de formación, el uso de azul de Evanscolorante (1%), mancha azul tripán (0,4%) o una suspensión de microesferas fluorescentes como el inyectado puede ayudar al operador a confirmar la competencia y el éxito de la inyección objetivo.
2. Inyección
- Encienda el calentador integrado de la plataforma de calefacción y configurarlo para 37 ° C. Coloque la plataforma de animales 180 ° de la orientación de imagen de rutina, con la abrazadera de la manguera de anestesia y la cabeza del animal más próximo al operador. Esto permite que el corazón (en el lado izquierdo del pecho) para ser ipsilateral a la abrazadera de la jeringa y la aguja. Nota: Los ajustes de rotación menor en sentido horario, además, a la plataforma de los animales pueden ser necesarios para orientar correctamente el corazón para el plano paraesternal eje corto de imagen que se utilizará para la inyección (Figura 2A).
- Preparar los ratones para la ecocardiografía como se informó anteriormente 9. Anestesiar el ratón en una cámara de inducción con 2% de isoflurano. Eliminar el vello del pecho con el pelo crema de eliminación de und aplicar gel lubricante a ambos ojos para evitar el secado de la esclerótica.
- Elevar el transductor mediante la exploración de control de altura de la cabeza (Figura 1B). Coloque la supina anestesiado ratón encima de la plataforma de los animales se calienta con el hocico dentro de un cono de la nariz entrega 1-3% isoflurano (Figuras 2A-2B). Suavemente inserte una sonda rectal y la cinta de las cuatro patas a los electrodos de ECG, la aplicación de gel de electrodos para el contacto eléctrico.
NOTA: El nivel adecuado de anestesia se debe garantizar un trato humanitario de los animales. No debe haber ningún cambio en la frecuencia cardíaca y sin respuesta a la colocación de la aguja a través de la pared torácica. Controles de temperatura homeostática integradas de la plataforma de los animales deben ser utilizados para manutención de la temperatura (37 ± 0,5 ° C), como la hipotermia dará lugar a bradicardia relativa, dilatación ventricular, y posibles molestias. - Una vez que el ratón es seguro en la plataforma animal, bajar el transductor sobre la depilaTed pecho usando el análisis de control de altura de la cabeza (Figura 1B). La configuración de ultrasonido óptimo para la inyección es para el corazón para ser visualizado en la orientación del eje corto paraesternal, según la técnica ecocardiográfica estándar. Gire la plataforma animales 20-30 ° hacia la derecha para obtener la ventana acústica óptima para la inyección en el plano de imagen de eje corto (Figuras 2A-2B). Nota: Como alternativa, la inyección se puede realizar a partir de una orientación del eje longitudinal paraesternal en sentido contrario a las agujas del reloj de la plataforma de los animales (Figura 2C).
- Use los controles de ajuste de la plataforma de animales para ajustar el campo de visión y para dirigirse a cualquier sitio de la inyección deseada en el miocardio del ventrículo izquierdo. Pan de ida y vuelta desde el ápice a la base de corazón para apuntar a la ubicación de inyección deseado en el miocardio del ventrículo izquierdo (Figuras 3A-3C). Nota: El paraesternal de eje corto midpapillary (Figura 3A) ofrece reproducible hitos que permiten imágenes de seguimiento del sitio de la inyección. Nota: Como alternativa, el eje largo paraesternal se puede utilizar para llegar a un sitio predefinido inyección (Figura 3D).
- Comenzando con la jeringa en la abrazadera de la jeringa completamente retraído, avanzar lentamente la jeringa hacia el pecho del animal girando las agujas del reloj de control de la inyección (Figura 4A). Para permitir la visualización clara de ultrasonido de tanto el corazón y la punta de la aguja a medida que se acerca al pecho, utilizar un montón de gel de ultrasonido sobre el lado izquierdo del pecho y optimizar la ventana acústica mediante el establecimiento de un amplio campo de visión en los controles ecocardiográficos. Ajuste el punto / zona focal en el sitio diana para la inyección. Los ajustes menores a la aguja de montaje controles pueden optimizar la imagen de la aguja a lo largo de su longitud.
NOTA: Algunas máquinas de ultrasonido tienen una función de software de guía de la aguja para ampliar digitalmente una línea a lo largo del eje largo de la aguja a través de al miocardio objetivo(Figura 4B). Esta herramienta de software puede ser útil, pero no es esencial. - Con el animal sedado adecuadamente (1-3% de isoflurano mezclado con 0,5-0,8 L / min 100% de oxígeno), avanzar la aguja a través de la pared torácica del ratón y en el miocardio, observando cuidadosamente la posición de la punta de la aguja biselada en absoluto veces. Detener el avance cuando la punta de la aguja está dentro del miocardio objetivo (Figura 4C). La punta biselada entera debe ser segura dentro del miocardio, para evitar la fuga de la sustancia inyectada en el espacio pericárdico.
- Cuando la punta está en la ubicación deseada, entregar el inyectado empujando el émbolo de la jeringa. Entregar el producto a inyectar lentamente, durante 5 a 30 segundos (dependiendo del volumen que se entrega). Hasta 50 l de solución inyectada se pueden entregar sin comprometer la función ventricular. Un aspecto echobright transitoria a la región del miocardio inyectado puede ser evidente después de la inyección con éxito. Un período breve (segundos) de bradycard relativaia en ocasiones se observó con la inyección en el miocardio y rápidamente se resuelve.
- Una vez que se ha administrado la sustancia inyectada, retirar rápidamente la aguja por el giro hacia la izquierda de la perilla de control de la inyección. El ratón debe mantenerse bajo anestesia durante varios minutos de observación ecocardiográfica para confirmar la función ventricular preservada y sin complicaciones después del procedimiento. Si está indicado, múltiples regiones de miocardio pueden ser inyectados en serie mediante el reposicionamiento del ángulo de la aguja de enfoque mediante el ajuste de la plataforma animal. Después de la inyección intramiocárdica, el ratón se coloca en una jaula en su propia y permitió recuperarse de la anestesia bajo observación.
- No deje un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal. No devuelva un animal que ha sufrido la inyección intramiocárdica de la compañía de otros animales hasta que se recupere completamente. La jaula debe ser colocado sobre una almohadilla de termorregulación con ready provisión de agua y el ratón dieta. No se espera que las molestias después del procedimiento y el fracaso para reanudar adecuadamente el comportamiento normal poco después de la intervención sugiere una posible complicación (ver Discusión).
- Deseche cuidadosamente la aguja inmediatamente después de la finalización de la inyección intramiocárdica para minimizar el riesgo de lesiones cortopunzantes al operador oa terceros. La reutilización de una aguja puede resultar en embotamiento de la punta por lo que es más difícil de perforar el miocardio y que resulta en un mayor riesgo de complicación.
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Representative Results
Inyección intramiocárdica murino con colorante azul o microesferas fluorescentes
La inyección de colorante azul de Evan es útil para fines de capacitación. Pronto después de la inyección, la eutanasia el ratón y quitar el corazón para visualizar la ubicación de la inyección de colorante azul. Figura 5 muestra un ejemplo de una inyección de éxito, con colorante azul de infiltrarse en el miocardio a nivel muscular mediados papilares (Figura 5A, región encerrada por la línea de puntos). Colorante azul de Evans se lave fuera del tejido dentro de unas pocas horas. Para obtener más marcado del lugar de la inyección permanente, microesferas fluorescentes que permanecen indefinidamente en el sitio de la inyección pueden ser utilizados. Figuras 5C-5F ilustra múltiples dianas de inyección en las paredes anterior y posterior del ventrículo izquierdo.
Inyección Adenovirus en Miocardio
Para visualizar la entrega de adenovirus de miocardio por guía de ultrasonidod inyección, se inyecta un adenovirus en el que el 10 unidades de cardiomiocitos específicos troponina T de rata promotor de expresión de mamíferos codón optimizado-Cre 11. El dominio de la recombinación mediada por Cre se determinó utilizando ratones Rosa26 mTmG, en el que la recombinación Cre se apaga proteína roja fluorescente (RFP) y se convierte en la proteína verde fluorescente (GFP). Una sola inyección de 50 l de virus (2,8 x 10 9 unidades infecciosas / ml) regionalmente activa la expresión de GFP dentro de los 7 días de la inyección (Figura 6). Algunos infiltración miocárdica regional a lo largo de los planos tisulares más allá del lugar inicial de la inyección se aprecia en las imágenes seccionadas.
Configuración de la inyección guiada por ultrasonido Figura 1. A) Descripción general del sistema ferroviario integrado, que permites alineación de la jeringa de inyección y ecografía cabeza. B) Ultrasonido Controles de cabezal de escaneo. La cabeza del escáner está bloqueado en posición, alineado con la jeringa de inyección. El campo de visión se ajusta moviendo el animal plataforma. C) controles de jeringa de inyección.
Figura 2. posicionamiento óptimo del ratón en la plataforma animal para la inyección de la aguja guiada por ultrasonido. A) Orientación de la plataforma animal, la aguja y el transductor para la inyección intramiocárdica desde el plano de formación de imágenes de eje corto. B). Primer plano de la trayectoria de la aguja bajo el campo del transductor de vista a través de una cantidad generosa de gel de ultrasonido a medida que pasa dentro de la cavidad torácica . C) Orientación de la plataforma animal, la aguja y el transductor de inje intramyocardialcción en el plano de la imagen en el eje largo paraesternal.
Figura 3. imágenes de ultrasonido representativos del miocardio para la orientación en el eje corto y eje largo paraesternal aviones. AC) imágenes de eje corto del ventrículo izquierdo a nivel de mediados de los músculos papilares (A), por debajo de los músculos papilares (B) y el ápice del corazón (C). D) Imagen eje largo demostrando inyección intramiocárdica en la pared ventricular izquierda anterior. Las flechas resaltan la posición del eje de la aguja.
Figura 4. imágenes Representante 2D Ecocardiografía. Una) B) La función de guía de la aguja de superposición alineados a lo largo del eje largo de la aguja y la predicción de un curso (línea punteada verde) a través del miocardio anterior. C) inyectado miocardio con bisel de la aguja enterrada dentro de la pared del miocardio anterior.
Figura 5. que marca el sitio de la inyección con colorante azul de Evan o microesferas fluorescentes. Inyección intramiocárdica de colorante azul en la pared del miocardio anterior. A) Sección transversal del corazón a nivel de los músculos midpapillary, demostrando la infiltración del colorante después de 30 min entrega a la intramiocárdicaventrículo izquierdo. B) Visible sitio de la punción de la aguja en la superficie lateral izquierda del miocardio. C, D) miocardio murino demostrando microperlas fluorescentes rojas 7 días después de la inyección intramiocárdica separada en las paredes anterior y posterior del ventrículo izquierdo. E, F) Izquierda miocardio ventricular seccionadas a mediados del músculo papilar en el plano transversal del corazón demostrando deposición de microperlas fluorescentes rojos. Microperlas dispersas en toda la superficie de corte se debieron a la dispersión en el búfer durante y después de cortar el corazón con un cuchillo.
Figura 6. etiquetado fluorescente de la pared miocárdica anterior de un corazón Rosa26 mTmG después de la inyección intramiocárdica única de un TNT-ICREAdenovirus. A) La microscopia óptica de la pared anterior de todo corazón murino 7 días después de la inyección de adenovirus regional. B) Fluorescente imagen (EGFP) en el mismo corazón que demuestran la entrega exitosa y la transducción de infarto por un vector adenoviral. C, D) Sección transversal en el nivel del músculo papilar mediados de, demostrando el grado de transfección regional a partir de una única inyección intramiocárdica de adenovirus (50 l de 2,8 x 10 9 unidades infecciosas / ml).
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Discussion
Los biológicos se pueden entregar al miocardio por inyección intramiocárdica directa, inyección intrapericárdica, o administración indirecta a través del torrente sanguíneo. Ensayos de terapia basados en células recientes en modelos de infarto de miocardio han descrito un enfoque de toracotomía abierta a la entrega de la sustancia inyectada 12-14. Un factor importante en el éxito de una intervención terapéutica de miocardio depende de la elección de la ruta de entrega. La dosis más alta de locales biológico se logra mediante la entrega 15,16 intramyocardial. Inyección intramiocárdica bajo visualización directa es el método más sencillo y permite una administración específica dentro del miocardio 17. Sin embargo, este método es también la más invasiva, ya que requiere la apertura de la cavidad torácica y el pericardio para exponer el objetivo de miocardio 18. Algunas partes del corazón, como su superficie dorsal, no se visualizan fácilmente y se inyecta mediante este método. La invasión del procedUre también limita los posibles esquemas de dosis terapéuticas. A continuación, describimos una técnica técnicamente sencilla, fiable y reproducible para entregar productos biológicos o fármacos bajo ultrasonidos-guía con seguridad por inyección intramiocárdica percutánea, sin la morbilidad y las limitaciones de la exposición toracotomía quirúrgica. En más de 150 ratones inyectados a la fecha, después de obtener la competencia técnica inicial, la tasa de mortalidad perioperatoria fue inferior al 5% cuando menos de cuatro sitios de miocardio fueron atacados en cualquier momento. El volumen total de inyectado de hasta 200 l fueron sorprendentemente bien tolerados por el corazón murino. El miocardio anterior se presta bien como un objetivo para inyección, dada la orientación paralela de esta región del miocardio al eje largo de la aguja, permitiendo que la aguja permanezca en el músculo del corazón de manera más segura. Es importante que el operador visualizar la totalidad de la punta biselada en el miocardio antes de la inyección, ya que esto asegura la entrega total de la injectate sin fugas en el tejido circundante. El cuidado para asegurar la punta de la aguja permanece siempre visible dentro del miocardio también es fundamental para la inyección miocárdica exitosa. Al practicar con colorante azul de Evan, inyección inadvertida en la cámara ventricular resultará en el ratón en rápido desarrollo una tonalidad azul visible más claramente en la piel depilada. También vale la pena señalar que la inserción de la aguja a través de la pared torácica está determinado únicamente por la imagen de ultrasonido que se muestra del miocardio objetivo previsto y no por ningún anatómicas superficie hitos del ratón. Para un ecografista con experiencia, competencia en la inyección intramiocárdica puede lograrse razonablemente después de la práctica en 4-5 intentos.
A medida que la aguja pasa a través de la pared torácica, debe pasar a través del espacio intercostal. No es raro tener que hacer ajustes menores en el plano de la imagen, una vez a través del espacio intercostal para mantener la punta biselada claramente a la vista. Thestá por lo general se lleva a cabo a través de pequeños ajustes de la plataforma animal o los controles de jeringa de inyección. Las pequeñas modificaciones se deben hacer una vez que la aguja es a través de la caja torácica, pero antes de que haya pasado en el miocardio para prevenir laceración miocárdica y el trauma de la manipulación punta de la aguja repetida. Para minimizar el riesgo de hemopericardio, el objetivo debe ser entrar en el corazón como pocas veces que sean necesarias para completar la entrega de producto a inyectar. Aunque la técnica descrita es para inyección intramiocárdica en el plano del eje corto del corazón, es igualmente factible para inyectar en el plano del eje paraesternal largo del corazón a través de simple ajuste de la plataforma animal para alinearse con dicho plano (Figura 2C) y redireccionamiento la aguja para entrar en el objetivo previsto de miocardio (Figura 3D).
Inyección intramiocárdica exitosa puede confirmarse mediante el uso de un indicador dye seguido por examinat patológica inmediataion del corazón de ratón inyectado. La inyección de una suspensión de microesferas fluorescentes permanecerá indefinidamente en el sitio de la inyección y puede ser administrado de forma concomitante con otro agente para marcar el área de orientación. El ratón es sacrificado utilizando dióxido de carbono inhalado por personal capacitado por los protocolos de manejo de animales institucionales. El examen de la superficie del corazón revelará la región inyectada, y cortando el corazón con una matriz corazón producirá secciones transversales que van a demostrar la región inyectada. Cuando se desea la inyección y / o de formación de imágenes repetidas de la misma región del miocardio con el tiempo, es ventajoso utilizar planos de imágenes estándar y para apuntar puntos de referencia anatómicos reproducibles. Por ejemplo, es conveniente utilizar el plano de la imagen de eje corto para dirigir el ventrículo izquierdo a nivel muscular midpapillary (Figura 3A). La posible complicación más grave es el infarto de laceración / rotura y la consiguiente hemorragia y / o hemopericardio. El riesgo de jues de complicaciones aumenta con pases repetidos de la aguja (cuatro o más) a través del miocardio, la inyección rápida de bolo de líquido, la reutilización de una punta de aguja roma, y el uso de los ratones más pequeños (menores de 15 g) ratones. Si múltiples objetivos dentro del miocardio se inyectan en serie (pared anterior, la pared lateral o en la pared inferior), es óptimo para lograr esto en tres pasadas o menos de la aguja a través de miocardio para minimizar el riesgo de complicaciones del procedimiento. Las paredes laterales de miocardio del ventrículo izquierdo pueden ser inyectados simultáneamente con una sola pasada de la aguja a través de la pared torácica (Figuras 5E y 5F) a medida que se alinean paralelas entre sí pero cualquier otro objetivo de la pared del miocardio requerirá re-inserción de la aguja a través de la pared torácica siguiente ajuste del ángulo de la aguja. El ratón no debe sobresedado como bradicardia (menos de 400 latidos por minuto) puede aumentar el volumen diastólico final y reducir significativamente el grosor de la pared miocárdica. Nuestroexperiencia es para los ratones a recuperarse del procedimiento rápido y para deambular en sus jaulas a pocos minutos de la recuperación de la anestesia. Complicaciones, cuando surgen, son abruptos y se producen en el momento de la intervención.
Aunque este protocolo está escrito para la inyección intramiocárdica, una ligera modificación de la posición final punta de la aguja permite al operador apuntar inyección en el torrente sanguíneo de la cavidad ventricular izquierda para la entrega arterial sistémica de un agente. Tirar hacia atrás el émbolo de la jeringa puede confirmar si la punta de bisel es en la cámara ventricular izquierda (aspirado sangre rica en oxígeno) o en la masa muscular del miocardio. Con vectores virales altamente eficientes y específicas de órgano de hoy, específicamente un 9 vector adeno-asociado serotipo del virus con un promotor específico cardíaco, un investigador puede adaptar esta técnica como una alternativa a la retro-orbital inyección o vena de la cola para lograr la entrega segura de un alto carga viral en el coronariacirculación, con absorción de primer paso reducida por el hígado. En el modelo murino postinfarto crónica, el miocardio cicatrices y fibrosis no se presta bien a la inyección intramiocárdica dado el objetivo de pared delgada resultante el operador tiene que enterrar a la punta de la aguja. Sin embargo, las regiones de la zona fronteriza de miocardio deben ser susceptibles de inyección intramiocárdica y ventanas acústicas después de toracotomía son más que adecuadas para la guía del ultrasonido éxito.
Guiada por ecografía, la inyección intramiocárdica en modelos animales representa un bien tolerado, método eficaz, mínimamente invasivo y técnicamente sencilla a agentes biológicos de entrega al miocardio. Esta técnica se puede emplear fácilmente para la entrega exitosa de vectores de genes o terapias basadas en células en cualquier punto de tiempo experimental en un modelo murino, incluyendo después de los procedimientos anteriores toracotomía abierta. La adquisición de la familiaridad y la competencia con el equipo y el procedimiento de inyección segarantizar éxito posterior en modelos experimentales.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vevo 2100 ultrasound imaging system | Visualsonics | ||
| Vevo Integrated Rail System III | Visualsonics | ||
| Microscan MS400 transducer | Visualsonics | ||
| Microscan MS550D transducer | Visualsonics | ||
| PrecisionGlide needles | BD | 305128 | 30 G x 1 in/2.5 cm |
| 1 cc slip tip syringe | Exel International | 26048 | or equivalent |
| Gastight 50 μl glass syringes | Hamilton | 1705 | |
| Trypan blue stain (0.4%) | Gibco | 15250 | or equivalent |
| Isoflurane | Baxter | AHN3640 | or equivalent |
| Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | or equivalent |
| Polystyrene microspheres (red fluorescent) | Life Technologies | F-8842 | or equivalent |
References
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