Summary
For at forbedre vores viden for Cellulær og Molekylær neotissue dannelse blev en musemodel af TEVG nylig udviklet. De transplantater blev implanteret som infrarenale vena cava indskydning grafts i C57BL / 6 mus. Denne model opnår lignende resultater til dem, der opnås i vores kliniske undersøgelser, men over en langt kortere tid-kursus.
Abstract
Bionedbrydelige stilladser podet med knoglemarv mononukleære celler (BMC'er) anvendes ofte til rekonstruktiv kirurgi til behandling af medfødte hjerte anomalier. De langsigtede kliniske resultater viste gode åbentstående kar, dog med betydelig forekomst af stenose. For at undersøge de cellulære og molekylære mekanismer af vaskulær neotissue dannelse og forhindre stenose udvikling manipuleret væv vaskulære transplantater (TEVGs) udviklede vi en musemodel af transplantatet med ca 1 mm indre diameter. Først blev TEVGs samles fra bionedbrydelige rørformede stilladser fremstillet ud fra et polyglycolsyre-vævet filt mesh belagt med ε-caprolacton og L-lactid-copolymer. De stilladser blev derefter anbragt i en frysetørrer, støvsuges i 24 timer og opbevares i en ekssikkator, indtil cellepodning. For det andet blev knoglemarv opsamlet fra donormus og mononukleære celler blev isoleret ved densitetsgradientcentrifugering. For det tredje var cirka en million cellerpodet på et stillads og inkuberet O / N. Endelig blev de podede stilladser implanteres derefter som infrarenale vena cava indskydning grafts i C57BL / 6 mus. De implanterede grafts demonstreret fremragende passage (> 90%) uden tegn på tromboemboliske komplikationer eller aneurismal formation. Denne musemodel vil hjælpe os med at forstå og kvantificere de cellulære og molekylære mekanismer i neotissue dannelse i TEVG.
Introduction
Medfødte hjertefejl er alvorlige forhold, der påvirker næsten 8% af levendefødte i USA. Ca. 25% af disse spædbørn med medfødte hjertefejl eller 2,4 per 1.000 levendefødte, kræve invasiv behandling i det første år af deres liv 1. Den mest effektive behandling for medfødt hjertesygdom er rekonstruktionskirurgi. Desværre, komplikationer som følge af brugen af for tiden tilgængelige vaskulære kanaler er den væsentligste årsag til postoperative sygelighed og dødelighed.
For at løse dette problem, har vi udviklet de første manipuleret væv karimplantater (TEVGs) til klinisk brug 2. TEVGs blev bygget af biologisk nedbrydelige polyesterrør tilsået med autolog knoglemarv afledt-mononukleære celler (BM-MNCs) og implanteret som venøse kanaler for medfødt hjerteoperation. Resultaterne viste fremragende åbentstående kar på 1-3 års follow-up, men med en betydelig forekomst af stenose
Den murine IVC indskydning model trofast gentaget processen neovessel dannelse, der forekommer i store dyr og mennesker, men over en meget kortere tidsforløb 6-9. Her en detaljeret protokol for små graft produktion ved hjælp af biologisk nedbrydelige stilladser blev BM-MNC høst og isolation, BM-MNC såning på stillads, og graft implantation i en musemodel beskrevet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Alle dyreforsøg blev godkendt af Nationwide Børnehospital Institutional Animal Care og brug Udvalg.
1.. Graft Manufacturing
- Gør ε-caprolacton og L-lactid-copolymer P (LA / CL) ved tilsætning af 100 mg P (LA / CL) i 2 ml dioxan under en emhætte. Placer løsning på en hvirvel og bland uafbrudt i 1-1,5 time til opløses fuldstændigt.
- I mellemtiden fjerne et ark polyglykolsyre (PGA) filt fra fryseren og skæres ud flere 5 x 8 mm sektioner. Også afbrød spidsen af en 0,1-10 pi pipette lige over filteret.
- Sæt en 19 G kanyle (1,5 længde) i den distale ende af en pipettespids og wrap PGA følte omkring nålen ved hjælp af mikro pincet.
- Skub forsigtigt filt til den distale ende af pipettespidsen, hvor hulrummet er mere lige end den proximale del ved hjælp af en stump 18 G nål, mens 19 G nål indsat i den.
- Pipette40 pi P (CL / LA) opløsning i pipettespidsen fra toppen. Mætte PGA filt med løsningen. Derefter skubbe luftbobler ud ved hjælp af en pipette dispenser. Gentag denne proces, hvis nødvendigt.
- Placer grafts i et 50 ml rør og placere den i en -80 ° C fryser i 20 min. Sørg for, at lederen af nåle vender nedad.
- Overfør røret i en frysetørringsapparat og vakuum i 24 timer. Sørg for at åbne låget på røret for at have luftstrøm.
- Tag de podninger og fjerne dem fra nåle. Skære begge ender af transplantatet forlader en ~ 5 mm sektion og sætte dem tilbage på nåle til at opretholde deres form. Opbevar de podninger i en ekssikkator.
- Placer stilladset under UV-lys i et biosikkerhed hætte O / N før celle såning.
2.. Knoglemarv mononukleære celler Høst og isolation
- Aflive mus med ketamin / xylazin overdosis (ketamin 200 mg / kg og xylazin 20 mg / kg).
- Fjern knogler (lårben end skinneben) fra 3 mus i 10 graft implantationer og sted i en petriskål med 10 cc RPMI. Skær begge ender af knogler og flush knoglemarv med en sprøjte med en 25 G kanyle ind i en ny petriskål med 3 cc RPMI. Saml knoglemarv og RPMI opløsning i en 15 cc rør og vaske petriskålen med yderligere 2 cc RPMI at indsamle resten af BM.
- Tag prøve (5-10 ul) og tælle celle ved hjælp af en automatiseret celle counter eller hæmocytometer. Optag resultatet.
- Sæt 5 ml Ficoll i et 15 cc centrifugeglas og tilføj knoglemarv og RPMI løsning. Føj løsningen meget forsigtigt for at forhindre det i at blande med Ficoll.
- Centrifuger ved 528 xg i 30 min med "NO BREMSE" ved 24 ° C.
- Fjern det øverste pink lag. Saml den midterste klar lag Figur 1, som er MNC-laget, og fortyndes med PBS 01:01.
- Centrifuger fortyndet MNC opløsning ved 528 xg i 10 minutter ved 24 ° C.
- Supernatanten fjernes, og dilut pillen med 5 ml PBS.
- Centrifugeres pelleten opløsning ved 528 xg i 10 minutter ved 24 ° C.
- Supernatanten fjernes. Fortynd pillen med den passende mængde RPMI (~ 200 ul).
- Tag en 5-10 ul prøve og tælle celler ved hjælp af en automatiseret celle counter eller hæmocytometer. Optag resultatet. Gentag celletælling en gang mere, og beregne den gennemsnitlige celleantal.
- Fortynd cellekoncentrationen til 1.000.000 celler/10 pi hjælp RPMI.
3. Cell. Seeding
- Prewet stillads ved tilsætning af 5 pi RPMI luminally i 5 min, derefter fjerne RPMI.
- Tilsæt 10 ul knoglemarv afledte mono nukleare celler i RPMI fra trin 2.12 til stillads lumen og vente i 10 minutter for at tillade celler til at vedhæfte på stilladset.
- Skær en 19 G nål 1 cm længde og sætte nålen ind i lumen af stilladset for at holde formen af stilladset. Anbring prøven i en 24-brønds plade. </ Li>
- Læg 1.000 pi RPMI til hver brønd og inkuberes O / N i en inkubator.
4.. Graft Implantation
- Autoklave alle de kirurgiske redskaber før operationen: 1x fine saks, 3x mikro pincet, 2x mikro vaskulære klemmer, 1x klemme anvender pincet, 1x mikro nåleholder, 1x foråret saks, 1x retractor.
- 6-8 uger gamle kvindelige C57BL / 6 anvendes som manipuleret væv kartransplantat modtagere. Fjern musen fra sit bur og vejes derefter bedøver gennem en intraperitoneal injektion i den nederste højre kvadrant af maven med en ketamin / xylazin cocktail (ketamin 100 mg / kg og xylazin 10 mg / kg). Ketoprofen (5 mg / kg, IP) anvendes som en præ-anæstesi analgetikum.
- Kontrollere niveauet af sedation med fortælling klemme, og klem den abdominale hår. Smør øjnene med steril oftalmologiske salve, og placere musen i en dorsal recumbence position på en pude. Desinficer maven med betadin og alkoholservietter. Cover musen med en sterilt afdækningsstykke og eksponere snittet eneste område.
- Lav en midterlinjen laparotomi snit fra under xyphoid til suprapubiske region, og indsætte en selv-fastholde retractor. Wrap tarmene i saltvand gaze. Omsvøb definere den infrarenale aorta og vena cava.
- Placere to mikro vaskulære klemmer på både proximale og distale side af aorta og vena cava derefter rent adskille aorta fra vena cava transekten vena cava. Hvis det er nødvendigt, ligere abdominale aorta grene med en 10-0 monofilament suturer på koniske nåle.
- Implantere en vena cava inferior indskydning transplantat med proximale og distale ende til anastomoser med en steril 10-0 sutur. Trim transplantatet, sædvanligvis 1-2 mm, afhængig af anatomien af musen. Fastgør transplantatet med en maske på både proximale og distale ender og begynder at sy kontinuerligt med 4-5 masker fra den anden side af implantatet. Efter endt forsiden, flip klemmerne og podningertil den anden side og sutur bagsiden af protesen. Under implantation skylle transplantatet med heparin løsning ofte for at hindre akut trombose.
- Fjern den proximale klemme og kontrollere blødning ved at anvende en topisk absorberbar steril arterieklemme middel. Når blødning stopper helt tages distale klemme og styre blødning på samme måde. Sørg blodet strømmer gennem graften.
- Luk mavemuskulaturen og hud i to lag ved hjælp af en 6-0 sort polyamid monofilamenter sutur med inkluderet gevind nål.
- Injicer 0,5 ml saltvand subkutant og placere musen i et opsving bur på en opvarmning pad, indtil musen er fuldt mobil. Ved genopretning returnere musen til en ny bur med papir strøelse. Give smertestillende medicin (Ibuprofen, 30 mg / kg, drikkevand) til 48 timer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En skematisk af TEVG implantation er vist i fig. 1. Knoglemarv blev høstet fra en donor mus og mononukleare celler blev isoleret ved hjælp af densitetscentrifugering og derefter podedes på en bionedbrydelig stilladset. De podede stilladser inkuberedes O / N og implanteres til en modtager mus som en inferior vena cava indskydning graft.
Figur 2 viser scanning elektronmikroskopi af PGA-P (CL / LA) stilladset. Den indre diameter var ca 1 mm, og vægtykkelsen var cirka 0,17 mm. Samlet porøsitet var 78,5% og betyder pore størrelser var 45,4 ± 17,6 um.
Brutto billede af en TEVG indskudt i IVC af C57BL / 6 mus er vist i fig. 3. Lige efter implantation (A) og 2 uger efter implantation (B). (C) viser brutto billede af en nativ IVC i sammenligning. Det er indlysende, atgraft var fyldt med neotissue, men det stadig holdes form af den oprindelige transplantat. Vores tidligere Resultatet viste, at den samlede graft nedbrydning tager op til 12 uger 10.
Ultralyd B-mode og farve Doppler billede af en 2 uger implanteret TEVG 4A-B for at vise åbenheden af de implanterede podninger. En oprindelig IVC billede sattes til sammenligning (figur 4, C). Cellepodning forbedret åbenheden af transplantatet væsentligt, patencies efter 2 uger for unseeded og podet grafts 65% og 91% (p <0,05, Fishers eksakte test).
Figur 5 viser celleinfiltration og ekstracellulær matrix aflejring i TEVG efter 2 ugers implantation. Eksplanterede transplantater farvet med H & E-farvning viste neotissue dannelse hele transplantatet og rester af stillads materiale (A). Harts og Masson trichrom plet viste aflejring af elastin i intimal lag (B) og kollagen i den mediale lag (C). Endotelcelle foring blev observeret i hele intimale lag (D) og sammenflydende glatmuskelceller var til stede i hele TEVG, især under EF foring (E) som vist ved CD31 og αSMA farvning hhv. Ved den anden uge efter implantering var makrofaginfiltration tydelig, som angivet med F4/80 farvning (F).
Figur 1. Skematisk af TEVG implantation. Knoglemarv mononukleare celler blev høstet fra en donor mus podedes på en bionedbrydelig stillads, og derefter implanteres som en IVC indskydning implantatet til en modtager mus.
tynd-side = "altid"> 
Figur 2. Scanning elektronmikroskopi billeder af et stillads. Den gennemsnitlige yderdiameter var 1,45 mm, luminal diameter var 1,1 mm, og længden var 3 mm.
Figur 3.. Implanteret TEVG efter 2 uger og indfødte IVC. A) Umiddelbart efter implantation, B) 2 uger efter implantation, og C) native IVC til sammenligning.
fig4.jpg "/>
Figur 4.. Ultralydsbilleder 2 uger og indfødte IVC. A) B-Mode og B) farve Doppler billede af TEVG efter 2 uger. C) Native IVC til sammenligning.
Figur 5.. Repræsentative billeder af de 2 uger efter operative TEVG. A) H & E (indre lumen), B) Harts (lyserød = elastin), C) Massion trichrom (blå = kollagen), D) CD31 (brun = endotelcelle), E) αSMA (brun = glatte muskelceller), og F ) F4/80 (brun = makrofag).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den musemodel af TEVG er et værdifuldt redskab til at studere cellulære og molekylære mekanismer af neotissue dannelse og udvikling af stenose. Den podede BM-MNC blev vist i både histologiske og SEM billeder af de podede celler på transplantatet 11. Cellepodning effektivitet blev også vist under anvendelse af en DNA-analyse 7. Ved hjælp af dette modelsystem viste vi, at cellepodning reducerer forekomsten af udviklingen TEVG stenose, som var den primære form for svigt i vores humane kliniske forsøg 3. Seedede celler hurtigt forsvandt fra TEVG, hvilket tyder på, at de udøver deres effekt via en parakrin mekanisme 8,12. Det blev også vist, at neovessel dannelse er en immun-medieret regenerativ proces, og at neovessel skyldes indvækst af vaskulære celler (EF og SMC) fra den nærliggende karvæg langs den luminale overflade af stilladset. Desuden normal makrofaginfiltration er afgørende for vaskulær neotissue dannelse,men når denne proces er overdreven det fører til udviklingen af TEVG stenose 7,8. Disse resultater viser relevansen af denne musemodel til sygdom hos mennesker. De mikrokirurgiske teknikker kan tilpasses til andre vaskulære anvendelser, herunder arteriel transplantater 13 og arterie fistel.
Vi opererer over 1.000 IVC indskydning graft implantationer hvert år og dødeligheden er mindre end 1%. For en vellykket graft implantation, der er flere vigtige punkter at nævne.
Først injicerbar anæstesi foretrækkes til denne operation, fordi det er nødvendigt at dreje musen rundt flere gange under anastomose. Effekten af anæstesi varer normalt omkring en time og hele kirurgi tid til en dygtig mikro kirurg er ca 30-45 min, hvilket giver tilstrækkelig tid til at afslutte operationen. Hvis dyret vågner op under operationen, kan 0,05-0,1 ml af en anæstesi cocktail injiceres intramuscularly.
Andet nødvendigt fleste af de små aorta grene ligeres til forhindre overskydende blodtab mens adskillelse IVC og aorta fra maveregionen. Også huske på ikke at skade IVC når den er adskilt fra aorta.
For det tredje, når transplantatet blev syet, de to første suturer på begge sider er de vigtigste trin i hele processen. Når de ikke er placeret omhyggeligt, er det vanskeligt at adskille de forreste og bageste lag IVC. Hvis lagene ikke er klart identificeret, er der en større chance for at et uheld sutur dem sammen. Mens suturering IVC til transplantatet, er det vigtigt ikke at over strække IVC, som kan forårsage tåreflåd. Sørg også for ikke at afskære for meget IVC at erstatte den samme længde af graft. Normalt ca 1 til 2 mm IVC blev fjernet for at erstatte en 3 til 5 mm transplantat på grund af den langsgående spænding IVC. Hvis den samme længde IVC er fjernet, gør det anastomosis ekstremt udfordrende.
For det fjerde er der betydelige stamme til stamme variationer med hensyn til TEVG dannelse og stenose udvikling. For eksempel unseeded C57BL / 6 mus (vildtype) viste en meget højere sats for stenose end SCID / bg mus (immunsvækkede mus) 8,12. Hertil kommer, fra vores erfaring, er meget lettere at operere i forhold til C57BL / 6 mus på grund af sin stivere IVC væg 14 SCID / bg mus. Opbevar det i tankerne, når de opererer på en ny stamme af mus.
Den graft fremstilling, BM-MNC høst, og cellepodning processer er ligetil, er der kun et par processer til at være bevidste om. Først for graft produktion, er det meget vigtigt ikke at "bundt" filten, mens skubbe det ved hjælp af 18 G stump nål. Vi har forsøgt forskellige metoder til at presse filten ned til den distale ende af pipettespidser. Pushing transplantatet med en stump nål viste det bedste resultat, langt. Den indrediameter af den stumpe kanyle er lidt større end den ydre diameter af nålen, at filten er viklet omkring. Derfor kan mindre nål stramt glide ind i en større stump nål og filten efterfølgende kan skubbes ned med lige store mængder af kraft over hele omkredsen af filt, som forhindrer sammenklumpning af filt. Vi har tidligere observeret, at bundter podninger viste lavere åbenhed ved 2 uger. Det er også afgørende at fjerne alle bobler fordi bobler vil medføre huller på stilladset overflade og blod vil lække gennem hullet efter implantation. For det andet, når knoglerne er adskilt for BM-MNC høst, så sørg for at rense knoglen så meget som muligt, så de ikke omfatter alt for meget muskel eller hår. Hvis det er nødvendigt, anbefales det at bruge en væv si før densitetscentrifugering processen.
Denne model af TEVG fungerede godt på venøse cirkulation, som er et lavt tryk og højt flow system. Men i blodomløb, enhøjt tryk og høj flow-system, vi observerede høje brud med PGA transplantater på grund af dens hurtige nedbrydning kendetegn. Hvilket betyder transplantatet mister sin strukturelle styrke før neotissue får nok styrke til at modstå det arterielle tryk. Vi har anvendt polymælkesyre (PLA) transplantater tidligere, men viste høj forekomst af aneurismedannelse. Også det tager mere end 2 år helt at nedbryde PLA in vivo, hvilket er mere end levetiden for mus. For en fremtidig anvendelse i arterielle cirkulation graft produktionsteknikker, for eksempel, er i øjeblikket under udvikling en electrospun graft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev delvist støttet af en bevilling fra NIH (RO1 HL098228) til CKB.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyglycolic acid (PGA) felt | Biomedical Structures | Custome ordered | |
| Pipet tip, 0.1-10 μl | Fisher Sientific | 02-707-456 | |
| Lyophilizer | Labconco | 7070020 | |
| RPMI medium 1604 | Gibco | 11875-093 | |
| Petri dish | BD | 353003 | |
| 24-well plate | Corning | 3526 | |
| 15 cc tube | BD | 352096 | |
| Ficoll | Sigma | 10831-100ml | Also called 'Histopaque' |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Littauer bone cutter 4.5" Straight | Roboz | RS-8480 | For BM harvesting |
| Forceps 4.5" | Roboz | RS-8120 | For BM harvesting |
| Scissors 4.5" | Roboz | RS-5912 | For BM harvesting |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 weeks |
| Ketamine hydrochloride injection | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Xylazine sterile solution | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofen | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparin sodium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Saline solution (sterile 0.9% sodium chloride) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| 0.9% Sodium chloride injection | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Iodine prep pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol prep pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| Fine scissor | FST | 14028-10 | |
| Micro-adson forcep | FST | 11018-12 | |
| Clamp applying forcep | FST | 00072-14 | |
| S&T Vascular clamp | FST | 00396-01 | |
| Spring scissors | FST | 15008-08 | |
| Colibri retractors | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 forcep | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - fine forceps | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
| Tish needle holder/forceps | Micrins | MI1540 | |
| Black polyamide monofilament suture, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | For suturing the graft |
| Black polyamide monofilament suture, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | For musculature and skin closure |
| Non-woven sponges | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Absorbable hemostat | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml Syringe | BD | 309659 | |
| 3 ml Syringe | BD | 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 | |
| 18 G 1.5 in, Needle | BD | 305190 | |
| 25 G 1 in, Needle | BD | 305125 | |
| 30 G 1 in, Needle | BD | 305106 | |
| Warm water recirculator | Gaymar | TP-700 | |
| Warming pad | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 |
References
- Heart Association, A. merican Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update. Circulation. 125, (2012).
- Shinoka, T., et al. Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 115, 536-546 (1998).
- Hibino, N., et al. Late-term results of tissue-engineered vascular grafts in humans. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 139, 431-436 (2010).
- Shin'oka, T., et al. Midterm clinical result of tissue-engineered vascular autografts seeded with autologous bone marrow cells. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 129, 1330-1338 (2005).
- Brennan, M. P., et al. Tissue-engineered vascular grafts demonstrate evidence of growth and development when implanted in a juvenile animal model. Ann Surg. 248, 370-377 (2008).
- Roh, J. D., et al. Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques. Journal of Pediatric Surgery. 42, 198-202 (2007).
- Hibino, N., et al. Tissue-engineered vascular grafts form neovessels that arise from regeneration of the adjacent blood vessel. The FASEB Journal. 25, 2731-2739 (2011).
- Hibino, N., et al. A critical role for macrophages in neovessel formation and the development of stenosis in tissue-engineered vascular grafts. The FASEB Journal. 25, 4253-4263 (2011).
- Naito, Y., et al. Characterization of the Natural History of Extracellular Matrix Production in Tissue-Engineered Vascular Grafts during Neovessel Formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
- Naito, Y., et al. Beyond Burst Pressure: Initial Evaluation of the Natural History of the Biaxial Mechanical Properties of Tissue Engineered Vascular Grafts in the Venous Circulation Using a Murine Model. Tissue Eng. Part A. 20, (2013).
- Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered vascular grafts: does cell seeding matter. Journal of Pediatric Surgery. 45, 1299-1305 (2010).
- Roh, J. D., et al. Tissue-engineered vascular grafts transform into mature blood vessels via an inflammation-mediated process of vascular remodeling. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 4669-4674 (2010).
- Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model. Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).
- Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice. Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).
