Introduction
Deneysel koşullar bir dizi genelinde vivo gastrointestinal (Gİ) hareketliliğinde rekor besin homeostasisin için gerekli yatan normal ve patofizyolojik süreçleri anlamak için güçlü bir araç olmaya devam deneysel çalışmalar. Geleneksel olarak, sayısız deneysel yöntemler, doğrudan GI daralma oranı 2-5, intraluminal basınç 6, 7 veya emilemeyen belirteçlerin 8 GI transit, 9 değişiklikleri ölçmek için istihdam edilmiş klinik pratikte 1 bulunanlara benzerlikler bazı veya stabil izotoplar 10-12. Bu tekniklerin her biri literatürde daha önce ele alınmış özgü avantajları ve dezavantajları vardır. Emilemeyen belirteçlerin gastrointestinal kurtarma deneysel anima euthanizing gerektirir Örneğin, basınç değişiklikleri ölçmek için balon manometri yarar balon malzemenin doğasında uyum nedeniyle sorgulanmaktadırtek bir veri noktası için L.. Son zamanlarda, bir minyatür arter basıncı kateter başvuru ve doğrulama sıçanlar ve fareler 3 gastrik kasılma izlenmesi için cerrahi olmayan bir yöntem önerir bildirilmiştir. Bir orogastrically yerleştirilen basınç dönüştürücü etkin invaziv cerrahi prosedürleri kaçınarak gastrointestinal fonksiyon üzerindeki karıştırıcı değişkenleri ortadan kaldırır iken, böyle bir yaklaşım anestezi hazırlıkları için uygundur. Ayrıca, görsel rehberlik eksikliği mide özel bölgeleri içinde transdüktörün tutarlı yerleştirilmesine izin vermez. Bu nedenle, bu uygulama, oniki parmak bağırsağı içinde, nispeten sert bir tel ile bağlanmış transdüser görselleştirme yana mide ya da kalın bağırsak, ince bağırsak ya da sınırlı bir seçenek değildir.
Benzer şekilde, biyomanyetik alternatif akım biosusceptometry (ACB) tekniği GI daralma analizi 4 için valide edilmiştir. ACB tekniği noninvaziv ap sağlarkenmide-bağırsak kasılmaları ölçmek için yaklaştığınızda, ACB olması ile, benzer bir sınırlama GI bölgesinin spesifik bölgelerinin kesin bir kaydını izin vermez sindirilen manyetik algılama ortamın kullanılmasıdır uğrar. Bu sınırlama, manyetik işaretleyicilerin cerrahi implantasyon ile aşılabilir. Bununla birlikte, ACB tekniği hayvan veri toplama anestezi zorunlu kılmaktadır.
Ultrasonomicrometry bazı GI istihdam edilmiştir mekansal küçük boyutu, yararlanmak için 13, 14, çalışmaları ve piezoelektrik kristal verici / alıcıların zamansal avantajları. Mide düz kas kasılması dalgaları yüksek frekanslı bir olay değildir ve yaklaşık 3 oranında meydana - / dak 5 döngü. Bu nedenle, sonomicrometry zamansal avantajları maliyet haklı gereksiz olabilir. Doğrusal hareket doğru sonomicrometry ölçülür olmasına karşın, sınırlamalar doğru mide-bağırsak ile ilgili veriler sunulmuştur14 kristaller yetersiz sayıda implant kaynaklanabilir yorumlanması.
Bass ve arkadaşları 2, 15 özgün tasarımları dayalı bu görsel protokol daha tam adım adım yapılışı ve minyatür deneysel uygulaması, tüm GI boyunca düz kas kasılmalarını kayıt için yüksek hassasiyet ve esneklik sahip çift elemanlı gerinim ölçer belgelemektedir yolu. Soy ölçer elemanlarının boyutları elemanlarını içine alan silikon tabakaların üzerine çok bağlı olan nihai gerilme ölçer duyarlılık ve büyüklüğü, kemirgen beri herhangi bir uygulama için uygundur. Bu soy ölçer, böylece kolayca düz kas kasılmalarını hesaplamak için, tek bir teknik sağlayarak, anestezi uygulanmış ve bağımsız davranan laboratuar modellerinde, akut ve kronik uygulama için uyarlanmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm prosedürler Sağlık kılavuzların Ulusal Enstitüleri takip ve Tıp Penn State Hershey Koleji'nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Sıçanlar ortak vivaryum uygulamaları kullanarak tutuldular. Not: Bu protokol erkek Wistar sıçanları ≥8 yaş hafta ve başlangıçta 175 tartı kullanır - 200 gr.
Gerilme Gage İmalat 1. Prosedürleri
- Çoğu takım ve parçaları orijinal veya halefi firmalardan temin kalır ve Tablo 1'de özetlenmiştir.
- Hazırlık ve iki tek eleman deformasyon ölçüm aletlerinin yapıştırılması
- Dikkatli bir şekilde temiz Dumont # 5 forseps ile gerinim ölçer elemanları (EA-06-031-350) taşıyınız. Elemanlarının istenmeyen hareketini sınırlamak için, kirlenme ya da aşırı yapışma riski olmadan çalışma yüzeyine sabitlemek için elemanları yukarı bakacak şekilde yapışkan yüzey ile küçük bir kağıt, temiz, kendinden yapışkanlı bir parça kullanın.
- Tahvil iki tek gerinim ölçeröğeleri arka arkaya, bir çift elemanının oluşturulması için. Izopropil alkol ile her bir eleman, filmin geri temizleyin ve buharlaştırma ile kurutulmasının (gazlı bez ile kurutulduktan giderilmesi zordur, fiber kirleticileri). Stereomikroskopta rehberliği altında (1 - 3x) ve temiz bir sanatçı fırça (10-0 deve tüyü) kullanarak, bir elemanın arkasına epoksi-fenolik yapıştırıcı sürün ve hemen temas geri ikinci elemanın karşıt yerleştirin ve folyo ızgaralarını (Şekil 1A) hizalayın.
- Tam olarak epoksi tedavisi için 60 ° C fırında göre O / N - 50 olarak bağlanmış elemanları yerleştirin.
NOT: Fazla epoksi elemanlar üzerine sızabilir ve basınç ızgaraları dengesizliğini neden olabilir beri bağlı unsurları kelepçe etmeyin. İki kısımlı epoksi karıştırma sonrası, sadece 6 hafta kullanılabilir bir buzdolabında ömrüne sahiptir. Bond ve bir anda elemanlarının yeterli bir tedarik tedavi ve daha sonra kullanmak için temiz, tozsuz, ortamda saklayın.
- Boyutlandırma ve kablolamaçift elemanlı gerinim ölçer
- 11. Bir bisturi ya tek kenar bıçak ile 3 x 3 mm boyutlarındaki bir son boyutuna bağlı çift elemanları kesin. Gecikme güvenli bir şekilde elemana (Şekil 1A) ele alınması için bir alana sahip olmak amacıyla, şu anda çift elemanların en üst kısmını kırpma.
- Her eleman bondable üç-iletken, imal dört iletken tel gerektirir, Teflon (P / N 336-TZE) tel yalıtımlı. Üç kurucu teller içine üç-iletken telin bir 30 cm örgülü telini sökün.
- Üç iletken telin bir ikinci 30 cm uzunluğunda yer alan herhangi bir gibi renkli teli ile oluşturulan tek tellerin bir çifti, bir dört telli kablo yapmak için. Aşağıdaki adımlarda, bu eşleme renkli teller nihai gerilme ölçer (Şekil 1B) için ortak bir telini oluşturmak için terminal ucunda katılacak.
- Termal tel striptizci ile her telden her iki ucundan Teflon yalıtım yaklaşık 1mm çıkarın. Aktive edilmiş reçine eriyik ileakı ve düşük sıcaklık lehim dering (erime noktası 183 ° C) tel lehim kalemi ile biter teneke.
- Bir sonraki aşamada, bir microsoldering uç elemanının (Şekil 1C) film tabakasına ısı hasarını önlemek üzere daha ayrı lehim oluşturmak için gereklidir. Küçük microsoldering ucu imal etmek, bakır tel standart lehim ucu uzunluğu ötesinde sağlamak, bir zamanlar standart lehim ucu etrafında bakır tel (~ 0.25 mm çapında) küçük bir parça sarın.
- Akı temiz bir fırça 10-0, lehim tek bir kurşun lehim ve pedi (Şekil 1D) Eşleştirilmiş ortak uçlarının biri ile bağlanmış ikili elemanının bir tarafında sadece bir lehim pedleri. Kalıntı akı reçine çözgen içinde batırılmış temiz bir fırça ile daha sonra çıkarılabilir.
- Kalan ortak tel kurşun orijinal ortak kurşun karşısında yastığı için lehimli olduğunu sağlanması, karşı tarafta işlemi tekrarlayın.
- Test birnd çift elemanlı gerginlik mastar epoxying
- Tellere serbest uçlarına lehim altın soket konnektörleri (0 / E363). Bu noktada, iki eleman takımının bütünlüğünü kontrol etmek için bir kayıt amplifikatör (aşağıda tarif edilmektedir) için gerilme ölçer bağlayın.
- Kaliteli volt-ohm metre ile direncini ölçün. Elements yaklaşık 350 Ω arasında bir direnç kayıt. Taze lehim ile bu noktada resolder yetersiz bağlantıları.
- Lehim bağlantıları ve çift düzeneği, yeterli kabul edilirse, kalan eleman filmi keserek.
- İki parçalı silikon-kauçuk epoksi reçinesi (P / N E211) ince bir tabaka ile eleman lehim yastıkları üzerinde lehim eklemleri izole. 30 dakika önce uygulama (Şekil 1E) - En iyi sonuçlar için, kısmen 20 için reçinenin sertleştirilmesi.
- Silikon çift elemanlı gerginlik mastar Encapsulating
- 15 mm2 ve c 0.5 mm kalınlığında silikon levha (P / N 20-20) üç adet kesmedistile su ile silikon yalın. Kapsül silikon (Şekil 1F) deforme olmadan nihai çift elemanını barındırmak üzere bu şekilde U-biçimli bir silikon levha tek parça kesin.
- Kaplama berrak silikon yapıştırıcı ile çentiksiz silikon tabakaların iç yüzeyleri.
- Sonra yavaşça herhangi bir fazla silikon bastırarak hem de hava kabarcıkları, dışa doğru merkezi çentik ile hizalanmış dış tabakalarının içinde bir çift bileşen düzeneğini sandviç. Dikkatle üniforma kalınlığını sağlamak için 24 saat boyunca ve hiçbir deformasyon meydana geldiği metal çubuk stokunun iki blok arasındaki kapsüllü düzeneğini kelepçe.
- Aşırı silikon montaj ve tedavi sınırları boyunca kalmasına izin. Silikon tabaka arzu edilen nihai boyutlar (Şekil 1G yaygın olarak, 6 mm x 8 mm) kesildiğinde bu fazla kaldırılır.
- Telli bağlayıcı ve kalibrasyon Tamamlama
- Lehim eklem Güçlendirmetek tek terminal tel üzerinde altın soket bağlantı 3 mm (1/8 inç) boru shrink ve plastik elektrot kaide (MS363, Şekil 1H) içindeki uyum ile olur. Deney (Şekil 1I) sırasında kesilmesini önlemek için tüp shrink 0.125 ve 0.25 inç çaplı elektrot kaide ve telleri sabitleyin.
- Strain gage sinyalleri yüksek kazanç köprü amplifikatör (P / N AMP-01-SG) ile işlenir. Elektrot kaideyi maç - (SL / 6 363) birleştirilmiş bir fişli bir kablo kullanılarak amplifikatöre gerilme ölçer bağlayın. Dişli başlık deney sırasında kesintisiz sinyalleri korumak için ek güvenlik sağlar.
- Üreticinin talimatlarına göre özel bir gerinim ölçer için amplifikatör Köprüsü, Denge ve Kazanç ayarlarını yapın. Teller bir bükülmez kelepçe yatay çıkmak ve ilk Pascaud ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi, zıt uçta bir 1 gr statik yük yerleştirerek kalibre burada streyn ölçer sonunu ekleyiniz2, 16, 17.
Gerilme Gage Akut İmplantasyonunda 2. Cerrahi İşlemleri
- Hayvan Bakım ve Hazırlanması:
- Yiyecek (su ad libitum temin edilebilir), cerrahi implantasyondan önce gece deney hayvanlarına mahrum.
- Derinden hayvan uyutmak. Tiyobutabarbital (100-150 mg / kg ip fareler için) terminal için tercih edilen deformasyon ölçüm implantasyon ve deney bağlı sıçan 10 sürekli anestetik etkisi ve mide reflekslerin en az bir değişiklik (yani, hayatta olmayan.). Pençe tutam refleks yokluğu için test anestezi derinliğini belirlemek için.
- , Cerrahi aletleri sterilize kesi siteleri tıraş, veteriner göz merhemi uygulayarak ve tüm cerrahi alanlarda dezenfekte dahil IACUC kurallarına deneysel tasarım tarafından dikte ve onaylı aseptik cerrahi için sıçan hazırlayın NOT:. Gerinim ölçer kronik kullanım için adapte ediliyor ise, sterilizesadece etilen oksit (gaz) sterilizasyon ile gerinim ölçer. Isı veya kimyasal sterilizasyon teknikleri kullanılması soy ölçer zarar verebilir.
- Terminal deneyler için entübasyon:
- Uzun süreli, terminal, deneyler açık bir hava korumak için bir trakeal tüp ile sıçan entübe. Sternal çentik mandibulanın alt sınırından boynun ventral tarafta 2 cm orta hat kesi - 1 yapın.
- Trakea maruz orta hatta künt diseksiyon kullanılarak altta yatan kayış kasları ayırın. Yatan özofagus trakea ayırın ve bir ligatürün oluşturmak için trakea ve özofagus arasında 3-0 etilon sütür bir döngü yerleştirin.
- Tiroid bezinin hemen distalinde trakea kıkırdak halkaları ikisi arasında zarında küçük bir incison yaparak öne trakea açın. Trakea içine polietilen boru (P / N PE-270), uzunluğu 5 mm'den (ve bir ucunda şevli) arasında küçük bir parça eklemeve dikilen ile yerine sabitleyin.
- Yerine geri kayış kasları koyun ve 3-0 etilon ile üstteki deriyi dikin.
- Gastrointestinal yüzeye Strain gage enstrümantasyon:
- Cerrahi öncesi 14. konik nokta 3/8 daire iğne kullanılarak 5 4-0 cm uzunlukta, veya daha küçük, steril ipek sütür - 4 ile gerinim ölçer dört köşe geçirin. İpek dikiş esneklik, yüksek düzeyde sağlar ve deformasyon ölçüm elemanını içine alan silikon zarar daha az olasıdır.
NOT: ipek iplik hayatta olmayan ameliyatlar için ve bir epitel bariyeri karşısında bakteri fitilleme bir risk değildir iç uygulamalar için kabul edilebilir. Sağkalım cerrahi gerektiren uygulamalarda, prolen ipek sütür örgülü kumaş lifleri doğal enfeksiyon riskini azaltmak için gereklidir. - Orta hat boyunca karın cilt kesisi ile laparotomi gerçekleştirin. Bölüm boyunca rektus abdominus kasbağlantı linea alba (avasküler) kanamayı önlemek için. Sonra altta yatan karın iç organları yaralamaya önlemek için paryetal periton çok yüzeysel bir orta hat kesi yapmak.
- Tuzlu ıslatılmış pamuk uçlu aplikatörler yardımıyla mide exteriorize. Dikkatle karın kesi kaudal sonunda tuzlu batırılmış gazlı bez koyarak pozisyonda mide tutun.
- Dairesel düz kas liflerinin paralel olarak kapsüllenmiş gerilme ölçer arasında ızgara hizalayın. Önceden dişli sütür (adım 2.3.1) kullanarak, 14. konik nokta 3/8 daire iğne kullanılarak mide korpus ventral serozal yüzeyine Gage köşelerinde takmak. Doku hasarı ve potansiyel kanamayı en aza indirmek amacıyla, kesim kenarlı iğneler kullanmayın ve mide yüzeyinde herhangi bir yüzeysel kan damarları delebilir yok.
- Fundus / korpus sınırı yakınında mide büyük bir kavis boyunca Gage dikiş kalıbı başlayın ve devam edinsonraki fundus boyunca / korpus küçük eğrilik doğru sınır. Strain Gage yatan seroza ne gevşeklik, ne de aşırı iyi sonuçları elde etmek için gergin olmalıdır.
- Dikkatle tuzlu batırılmış pamuk uçlu aplikatörler kullanarak anatomik pozisyonuna mide dönmek.
- Akut modelinde, gerinim ölçer karın kesi kapatılmadan önce orta hat kesi kaudal sonunda açar exteriorize. Hayvan ya da terminal kablo konnektörünün manipülasyonu sırasında gerilimin azaltılmasını sağlamak amacıyla, bir hayvan (örneğin,., Arka ayak) için serbest teller elde edin. 3-0 naylon sütür ile ayrı ayrı rektus abdominus kasları ve karın cildi kapatın. Kronik modelde, sıçan dorsal kenarı boyunca deri altından uçlarını sabitlemek ve kafatası 18 yukarıda onları exteriorize.
- Cerrahi aletlerin sonra, üst gövde baş ve yükseltmek için bir stereotaksik çerçeveye hayvanlar koyun. İkinci adım, yeniden azaltmaya yardımcı olurKayıt sırasında Spiration buluntu. Rektal sıcaklığı izlemek ve geri besleme kontrollü ısıtma yastığı kullanılarak 37 ± 1 ° C'de muhafaza.
- Tiyobutabarbital anestezi kullanan terminali deneyler sonunda, hayvan Ötanazi American Veterinary Medical Association (travma), Kılavuz ile tutarlı bir şekilde ötenazi edilmelidir.
- Cerrahi öncesi 14. konik nokta 3/8 daire iğne kullanılarak 5 4-0 cm uzunlukta, veya daha küçük, steril ipek sütür - 4 ile gerinim ölçer dört köşe geçirin. İpek dikiş esneklik, yüksek düzeyde sağlar ve deformasyon ölçüm elemanını içine alan silikon zarar daha az olasıdır.
- Gastrik Motilite kayıtları:
- Piyasada bulunan herhangi bir DC köprü amplifikatör ile gerinim ölçer sinyali yükseltmek.
- Piyasada bulunan herhangi bir veri toplama sisteminin grafik kaydedici işlevini kullanarak bir bilgisayara DC çıkış sinyalleri kaydedin.
NOT: amfi çıkışı bir basılı bir yalan grafik kaydedici aracılığıyla oluşturulabilir.
Mide Kontraksiyonlarını 3. Temsilcisi ölçümü Beyin Stimülasyonu ardından
- Beyin sapı ve dördüncü ventrikül Pozlama
- Cerrahi enstrümantasyon ve placem sonraboyun tabanına doğru oksipital kemik 2 cm orta hat cilt insizyonu - bir stereotaksik çerçeveye tiyobutabarbital-anestezi verilen hayvanın görülmektedir, 1.5 olun.
- Orta hat boyunca yatan boyun kaslarının bilateral kas karınlarını birleştiren bağ dokusunu ayırın (yüzeysel derin kasları, levator auris longus kranial kısmı, levator auris longus kuyruk kısmı ve platizma kranial bölümü vardır).
- Orta hat açıkça tanımlanmış ve maruz kez oksipital kemik levator auris longus ayırın.
- Dikkatle yatan dura mater adlı platizma kası ayırmak için künt diseksiyon kullanılarak kafatası kaudal bölgesini açığa.
- Dikkatli oksipital kondillerin taraflı uzanan foramen magnum boyunca dura mater ayırmak için yeni bir 25 G iğne kullanın.
- Dördüncü ventrikül örten pia ve araknoid meninksler kaldırmak ve beyin sapı maruz 5. Dumont forseps kullanın.
- Yönetme dördüncü ventrikül thyrotropin hormon veya intravenöz sodyum nitroprüsid
- Tartın ve 50 uM TRH bir nihai konsantrasyon elde etmek üzere, steril tuzlu su içinde tirotropin salgılayan hormon (TRH) çözülür.
- Tartın ve 150 uM SNP bir nihai konsantrasyona ulaşmak için steril tuzlu su içinde, sodyum nitroprussit (SNP) çözülür.
- 10 ul şırınga kullanarak, mide kasılmaları kaydını kolaylaştırmak için beyin sapı dördüncü ventrikülün dorsal yüzeyine (son doz 100 pmol eşittir) TRH 2 ul yönetmek.
- Steril bir şırınga ve 27 G iğne kullanılarak, mide rahatlama kaydını kolaylaştırmak için kuyruk ven yoluyla SNP 150 mol / kg yönetmek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bir anestezi tiyobutabarbital-sıçandan Örnek veriler, Şekil 2'de gösterilmiştir. Iyi eser tirotropin salıveren hormonun beyin uygulama için (TRH, 100 umol), bilinen bir hareket kabiliyeti artırıcı peptid 3, 19 boyunca sıçandan Gastrik korpus kasılmaları temsil eder. Bu fazik mide düz kas aktivitesindeki artış önce taban çizgisi kasılmaları gösterir. Not: Mide kasılmaları bu piklerin analizi Ormsby ve Bass 20 tarafından geliştirilen orijinal formülü takip
Hareketlilik Endeksi = (N 1 x1) + (N 2 x2) + (N 3 x4) + (N 4 x8)
Bu formülde bağlı olarak, N, özellikle miligram aralığında tepe noktalarının toplam sayısına eşittir. 50 mg - 60 - 100 mg, 110-200 mg ve daha fazla sinyal Bu nedenle, bir sinyal 0 mg gastrik motilitenin göstermektedir olduğunu varsayarsak, tepeden-tepe sinüzoidal sinyallerin gruplama 25 olarak hesaplanır sırasıyla N 4 ile N 1 210 mg, daha. Bu formül, doğal birkaç saniye veya dakika boyunca meydana bazal tonu dalgalanmalara karşı daha az duyarlıdır. Bu tür dalgalanmalar eğri ölçümler 3 altında kullanarak geçerli bir alan üretmek üzere çıkartılır edilmesi gerekir.
Ikinci izleme nitrik oksit donörü tepki olarak aynı hayvandan elde taban mide düz kas gerginliğinde bir azalma gösterir, sodyum nitroprusit (150 umol / kg iv) ile. Mide düz kas aktivitesinin inhibisyonunu temsil eden veriler kolayca taban ve maksimal yanıt arasında sinyal gerilimi azalması ile analiz edilmiştir. Soy ölçer Deneyden önce kalibre edilmiştir, bu voltaj sinyal daha sonra, gram olarak, eşdeğer statik yük elde etmek için kullanılabilir. Bu temsili veriler düzgün mide seroza bağlı olan bir çift elemanlı gerinim ölçer çift yönlü yeteneklerini göstermek.
e_content "> Üçüncü iz, bir fasted sıçan duodenum serozal yüzeyine dikilir bir subminyatür gerinim ölçer tarafından kaydedilen bazal düz kas kasılmalarını temsil eder. gerinim ölçer elemanlarının oryantasyon duodenum dairesel kas paralel olarak da vardı.
Gerinim ölçer fabrikasyon Şekil 1. Temel aşamaları. Nihai boyutlar üç dört taraftan kesilmiş olan (A) Çift bağlanmış elemanları. (B) tellerin Temsilcisi uçları sağ (elementler (solda) ve terminal konnektörleri gage eki için yapılandırılmış ). Çift kırmızı kabloları terminal ucunda (ok başı) sadece birleştirilen unutmayın. (C) yakınında bakır bir tel şeridinin Örnek yerleştirme (1,5 mm) ince soldering ucu. Bu kavşakta (ok başı) boyunca taze lehim bakımı eritmek için mikro ucundan yeterli ısı transferini sağlayan% 63 Kalay: 36.65% Kurşun:% 0.35 Antimon lehim (D) ölçer elemanı üzerinde tellere lehim yastıkları arasındaki lehim eklem Temsilcisi ölçüde. . (E) Düzgün saksı lehim eklemleri. (F) tamamlandı elemanı deforme olmadan gerinim ölçer elemanı için iç silikon laminat levha Temsilcisi çentik. (G) silikon levhalar Gümrüklü katmanları (toplam üç) tamamlanmış bir gerginlik ölçeri önce şekillendirme altın nihai boyutlandırma. (H) Kablo bağlantıları prizler elektrod kaide sokulmadan önce tüp shrink succeedingly büyük çaplı katmanları ile takviye edilmiştir kaplamalı. (I) Terminal konnektörleri ve elektrot kaide Final shrink şal iliştirilmesi. Kalibrasyon çubukları (A - B), 5 mm, (E) 2 mm; Ve (F - I), 5 mm. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2. Temsilcisi hareketliliği izler. Mide kasılmaları (üst iz) bir artış sırasında ön mide korpus yapılan kayıtlar fabrikasyon çift elem ent deformasyon ölçüm aletlerinin oluşturulacak ve mide kasılmaları (orta iz) ve duodenum (alt iz) bir baskılanması sırasında aç bırakılmış fareleri (200-250 g) eklenmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada sunulan prosedürler bireysel laboratuvarlar dahil olmak üzere biyolojik uygulamalar için hassas minyatür gerginlik mastar imal izin, ama küçük laboratuvar hayvanlarında gastrointestinal motilite, bunlarla sınırlı değildir. Bu deformasyon ölçüm aletlerinin, ticari imalatı bittikten yana, mide-barsak fonksiyonu soruşturma laboratuvarın deneysel uygulamaların tam aralığını izin vermeyebilir diğer teknikler ile sınırlıdır. Bu rapor, daha önce açıklanan tekniklerin 15 güncellenmiş ve daha detaylı bir açıklama sağlar. Metin ve beraberindeki video özellikle biz fabrikasyon sürecinin geliştirilmesine ve ustalık döneminde tanınan ortak tuzaklar çözümler adresi.
Tarif edildiği gibi her adım, başarılı bir imalat teknikleri sunar. Temiz ve güvenli bir şekilde tüm bağlantıları lehimleme yanı sıra solderin aşırı ısı ile elemanına zarar gelmesin dikkat edilmesig sürecinin başarısı için en sık sorunlardır. İnce Gage tel düzgün shrink boru veya silikon epoksi ile takviye edilmez ve mastar hafifçe esnediği zaman sinyal yokluğu neden olacaktır eğer kırılmaya yatkın. Plastik terminal kaide dahilinde altın konnektörleri yakınında bir kırık veya kopuk tel ile bir gerinim ölçer önceden fonksiyonel Gage en sık başarısızlık. Bireysel mastar dikkatle kırık bir tel ortaya çıkarmak için büzülme boru kaldırarak demonte edilebilir. Altın konnektörüne teli tekrar kaynaklama sonra, tüm Gage yeni shrink boru yeniden birleştirilir.
Düzgün boyutlarda gerginlik mastar imalatı yerler (örn., Büyük mide eğrilik, fundus / korpus sınır) temizlemek için göreli gerginlik mastar yapıştırılması ve damarsal hasar görmesini önlemeye uygulama ve dikkatli Biraz dikkat ile, acemi kullanıcılar hızla gelişecektir tutarlı sonuçlar elde etmek için yeteneği. Silikon üç katmanları çift elemanı Encapsulating uygun bakım ile tekrarlanan kullanımlarda sürecek dayanıklı ve esnek, ama son derece hassas gerginlik ölçer oluşturur. Bir kapsüllenmemiş suşu Gage yüksek hassasiyet minimal silikon laminat tarafından kazandırılan herhangi bir direnç etkilenir. Tiner silikon levhalar (P / N 20-05) bağırsak uygulamalar için ya da sfinkter ve özofagus gibi fareler ve ayrık bağırsak bölgeler için küçük mastar imalatı için Gage değiştirmek için tavsiye edilir. Ince mastar implantasyon sırasında silikon tabakanın yırtılma direnci azalmış beri Ekstra dikkatli olunmalıdır.
Bu ölçüm aletlerinin kullanımı ile cerrahi zorluklar sık sık implantasyon sırasında Gage iç organlarda ya da hiza aşırı manipülasyon sonucu. Eski muhtemelen hem olsa doğrudan bozulmuş GI motilite neden sinirsel ve enflamatuar süreçleri, 9, 21 başlatırtuzaklar kolayca cerrahi teknik arıtma tarafından giderildiği. Bu uzunluğunu değiştirmek ve karın içine orta hattan bir kesik başlangıç noktası olarak eksteriorizasyon ve mide değiştirme işlemi sırasında iç organların manipülasyonu minimize içerebilir.
Bu deformasyon ölçüm aletlerinin geçerliliği ve sadakat, tek bir araştırmacı can enstrüman yeterli enstrümantasyon ile. 2, 15. Biz, ve diğerleri, rutin, 22, akut, anestezi hazırlıkları 16 gastrik düz kas aktivitesini ölçmek önce tartışılan ve güncel veri elde edilmiştir Tek bir günde dört hayvanlara. Buna ek olarak, aynı hayvan içinde birden fazla ölçüm cihazlarının implantasyonu bir mide-bağırsak yolunun, bitişik veya uzak bölgeler arasındaki ilişkiyi ölçmek için sağlar.
Özetle, bu subminyatür deformasyon ölçüm aletlerinin imalat uygulama tekniklerinin ortak bir dizi kullanan çalışmaların daha geniş bir aralığı sağlar instrumentation ve veri analizi. Gastrointestinal alanda uygulamaları yanı sıra, bu mastar A toplanan verilere), akut ve / veya kronik deneysel tasarım çapraz karşılaştırma yapılmasına izin verir; B) tek bir hayvan içinde birden (eşzamanlı) kayıt siteleri; ve C) deneysel müdahalelerin daha geniş bir dizi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Araştırma fon Nörolojik Bozukluklar ve İnme (NS049177 ve NS087834) Ulusal Enstitüsü aracılığıyla alındı. Yazarlar geç Dr Paul Bass ve deformasyon ölçüm aletlerinin orijinal tasarımına meslektaşlarının entelektüel katkılarını kabul etmek istiyoruz; ve 2010 yılında olduğu gibi onun anlayışlı yazışma için üretimin durdurulması kadar deformasyon ölçüm aletlerinin üretim ve pazarlama için Carol Tollefsrud.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Strain gage element | Micro-Measurements (Vishay Product Group) | EA-06-031-350 | Linear pattern, foil, stress analysis strain gage (2 required) www.vishaypg.com/micro-measurements/ or http://www.vishaypg.com/docs/11070/031ce.pdf |
| Epoxy-phenolic adhesive | M-bond 610 | General purpose adhesive for bonding strain gage elements | http://www.vishaypg.com/docs/11024/wirecable.pdf |
| 3 conductor insulated wire | 336-FTE | Fine gage, flexible general purpose wire | http://www.vishaypg.com/docs/11024/wirecable.pdf |
| Flux and rosin solvent kit | FAR-2 M-Flux AR kit | Liquid solder flux | http://www.vishaypg.com/docs/11023/soldacce.pdf |
| Solder | 361A-20R-25 | Optimized and recommended for strain gage applications | http://www.vishaypg.com/docs/11023/soldacce.pdf |
| Gold socket connector | PlasticsOne | E363/0 | Socket contact for electrode pedestal http://www.plastics1.com/PCR/Catalog/Item.php?item=407 |
| Electrode pedestal | MS363 | Secure platform for wire contacts | http://www.plastics1.com/PCR/Catalog/Item.php?item=499 |
| 6-wire cable | 363 PLUG W/VINYL SL/6 | Pre-fabricated vinyl-coated cable (in customized lengths) with plug adaptor to match electrode pedestal and tinned solder lugs on terminal end | |
| Silicone rubber casting compound | EIS electrical products | Elan Tron E211 | Potting medium for gage/wire solder joints http://www.eis-inc.com |
| HOTweezers | Meisei Corporation | Model 4B | Wire insulation strippers http://www.impexron.us |
| Soldering station | Weller (Apex Tool Group) | WES 51 | High quality soldering equipment http://www.apexhandtools.com/weller/index.cfm |
| Available through http://www.eis-inc.com or http://www.amazon.com | |||
| Silicone sheet | Trelleborg Sealing Solutions Northborough-Life Sciences | Pharmelast 20-20 | Encapsulating strain gage elements 10 B Forbes Road Northborough, MA 01532 (800) 634-2000 |
| Amplifier | Experimetria Ltd | AMP-01-SG | http://experimetria.com/Biological_amplifiers.php |
References
- Szarka, L. A., Camilleri, M. Methods for measurement of gastric motility. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296 (3), G461-G475 (2009).
- Pascaud XB, F. A. U., Genton, M. J., Bass, P. A miniature transducer for recording intestinal motility in unrestrained chronic rats. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. Gastrointest. Physiol. 4 (5), 532-538 (1978).
- Gourcerol, G., Adelson, D. W., Million, M., Wang, L., Tache, Y. Modulation of gastric motility by brain-gut peptides using a novel non-invasive miniaturized pressure transducer method in anesthetized rodents. Peptides. 32 (4), 737-746 (2011).
- Américo, M. F., et al. Validation of ACB in vitro and in vivo as a biomagnetic method for measuring stomach contraction. Neurogastroenterol. Motil. 22 (12), 1340-1374 (2010).
- Fujitsuka, N., Asakawa, A., Amitani, H., Fujimiya, M., Inui, A. Chapter Eighteen - Ghrelin and Gastrointestinal Movement. Ghrelin and Gastrointestinal Movement. , Academic Press. 289-301 (2012).
- Monroe, M. J., Hornby, P. J., Partosoedarso, E. R. Central vagal stimulation evokes gastric volume changes in mice: a novel technique using a miniaturized barostat. Neurogastroenterol. Motil. 16 (1), 5-11 (2004).
- Herman, M. A., et al. Characterization of noradrenergic transmission at the dorsal motor nucleus of the vagus involved in reflex control of fundus tone. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294 (3), 720-729 (2008).
- Gondim, F. A., et al. Complete cervical or thoracic spinal cord transections delay gastric emptying and gastrointestinal transit of liquid in awake rats. Spinal Cord. 37 (11), 793-799 (1999).
- Van Bree, S. H. W., et al. Systemic inflammation with enhanced brain activation contributes to more severe delay in postoperative ileus. Neurogastroenterol. Motil. 25 (8), 540-549 (2013).
- Qualls-Creekmore, E., Tong, M., Holmes, G. M. Gastric emptying of enterally administered liquid meal in conscious rats and during sustained anaesthesia. Neurogastroenterol. Motil. 22 (2), 181-185 (2010).
- Qualls-Creekmore, E., Tong, M., Holmes, G. M. Time-course of recovery of gastric emptying and motility in rats with experimental spinal cord injury. Neurogastroenterol. Motil. 22 (1), 62 (2010).
- Choi, K. M., et al. Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293 (5), G1039-G1045 (2007).
- Adelson, D. W., Million, M., Kanamoto, K., Palanca, T., Tache, Y. Coordinated gastric and sphincter motility evoked by intravenous CCK-8 as monitored by ultrasonomicrometry in rats. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 286 (2), G321-G332 (2004).
- Xue, L., et al. Effect of modulation of serotonergic, cholinergic, and nitrergic pathways on murine fundic size and compliance measured by ultrasonomicrometry. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290 (1), G74-G82 (2005).
- Bass, P., Wiley, J. N. Contractile force transducer for recording muscle activity in unanesthetized animals. J. Appl. Physiol. 32 (4), 567-570 (1972).
- Holmes, G. M., Browning, K. N., Tong, M., Qualls-Creekmore, E., Travagli, R. A. Vagally mediated effects of glucagon-like peptide 1: in vitro and in vivo gastric actions. J. Physiol. 587 (19), 4749-4759 (2009).
- Tong, M., Qualls-Creekmore, E., Browning, K. N., Travagli, R. A., Holmes, G. M. Experimental spinal cord injury in rats diminishes vagally-mediated gastric responses to cholecystokinin-8s. Neurogastroenterol. Motil. 23 (2), e69-e79 (2011).
- Miyano, Y., et al. The role of the vagus nerve in the migrating motor complex and ghrelin- and motilin-induced gastric contraction in suncus. PLoS ONE. 8 (5), e64777 (2013).
- Holmes, G. M., Rogers, R. C., Bresnahan, J. C., Beattie, M. S. Thyrotropin-releasing hormone (TRH) and CNS regulation of anorectal motility in the rat. J Auton. Nerv. Syst. 56, 8-14 (1995).
- Ormsbee, H. S., Bass, P. Gastroduodenal motor gradients in the dog after pyloroplasty. Am. J. Physiol. 230, 389-397 (1976).
- Fukuda, H., et al. Impaired gastric motor activity after abdominal surgery in rats. Neurogastroenterol. Motil. 17 (2), 245-250 (2005).
- Browning, K. N., Babic, T., Holmes, G. M., Swartz, E., Travagli, R. A. A critical re-evaluation of the specificity of action of perivagal capsaicin. J. Physiol. 591 (6), 1563-1580 (2013).
