Introduction
Nyren er afgørende for fluid homeostase, blodtryk regulering og filtrering af affald fra kroppen. Selvom pattedyr er i stand til at reparere eksisterende nefroner efter skade ved brug differentierede epitelceller 1-4, synes de at mangle en pulje af reserverede stamceller 5 og er ude af stand til at danne nye nefroner de novo. I modsætning til pattedyr, voksne fisk er i stand til at danne nye nefroner hele voksenlivet at understøtte væksten af fisk og som respons på skade 6,7. Zebrafisken, Danio rerio, er en uvurderlig model organisme for studiet af orgel regenerering 8-10 og har potentiale til at levere stærke indsigt i ansøgninger om engineering reparation af menneskelige nyrer. Tg (Lhx1a: EGFP) transgen 11 er blevet vist at mærke en pulje af nephron progenitor celler i den voksne zebrafisk nyre 12 imidlertid mekanismer, der styrer respons lhx1a + -celler af skader rEmain uklar.
Aminoglycosidet gentamicin er et meget anvendt antibiotikum med kendte nefrotoksiske og ototoksiske virkninger hos mennesker 13. Intraperitoneal injektion af gentamicin er en etableret metode til at inducere akut nyreskade i fisk 6. Denne skade i fisk efterligner tabet af rørformede epitel og ardannelse i glomeruli, der forekommer hos mennesker efter gentamicin overdosis 14. Inducerende skade i zebrafisk af gentamicin injektion er en bekvem måde til at inducere en stærk, synkron regenerering respons, med mange nye nefroner produceret og samtidig behandling via stadier af dannelse, proliferation og differentiering.
Denne protokol beskriver vores metode for robust og reproducerbar skade i den voksne zebrafisk nyre ved at udnytte en noninvasiv visuel screening proces for at minimere outliers. Vi drage fordel af det faktum, at skaden med gentamicin fører til døden af epitelial nyrevæv og formation af renale tubulære afstøbninger, som derefter ophobes i masserne i mesonephric kanaler og kloak. Disse er bestået af fisk og kan observeres visuelt i vandet. Dette giver os mulighed for at screene for fisk med en stærk ikke-letal skade, som derefter kan samles til yderligere eksperimenter. Minimering af antallet af skadede fisk eller fisk, der dør, før de når endepunktet af forsøget fører til en mere ensartet og effektiv dataindsamling og analyse. Desuden er ingen specielle anordninger eller reagenser påkrævet, hvilket gør denne fremgangsmåde omkostningseffektiv og egnet til anvendelse i en akademisk eller undervisning indstilling. Ved hjælp af vores metode, her viser vi de stigende virkninger af gentamicin dosis på nyre regeneration samt effekten af øget temperatur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Etik Statement: Alle forsøg blev udført i overensstemmelse med Massachusetts General Hospital retningslinjer for dyr brug i forskning.
1. Advance Forberedelse
- Bestemme, hvor mange voksne zebrafisk 6-12 måneder gammel til at skade. Plan til at skade 10-20% mere fisk end der er behov for. For at minimere variabilitet, brug aldersmatchede søskende fisk opdrættet sammen i den samme tank, så de er nogenlunde samme størrelse og har mindre genetiske variabilitet. Kvindelige fisk er meget lettere at injicere i forhold til den mandlige fisk, på grund af den større kapacitet af maven. Imidlertid hanner og hunner giver samme resultat.
- Når du gør eksperimentet for første gang, plotte en dosis kurve for at bestemme den passende gentamicin dosis for en specifik stamme af fisk. Teste hver ny batch af gentamicin før anvendelse i eksperimenter siden renheden af gentamicin varierer fra batch til batch. Korrekt dosering bør bestemmes ved at vurdere expressiom af skade markører såsom lhx1a. (Se figur 1A - D).
- Forbered gentamicin opløsning. Gentamicin stamopløsning kan opbevares i -20 ° C og optøet til senere brug. For eksempel, for en 80 mg / kg dosis (80 mg gentamicin / kg legemsvægt) i en fisk, der vejer 0,5 g, forberede 2 mg / ml gentamicin i phosphatpufret saltvand som en bekvem arbejdsopløsning. Dette giver en 20 pi gentamicin til intraperitoneal injektion ind i fisken.
BEMÆRK: Generelt / 80-120 mg kg opnå gode resultater, men så lave doser som 40 mg / kg kan være hensigtsmæssig. Gentamicin kan også købes i opløsning for at minimere farlig udsættelse for lab personale.
BEMÆRK: Gentamicin i høje doser kan være giftige. Bær handsker og maske, når der vejer pulver. - Forbered 100 ml 0,016% tricaine vand til bedøve fisk. Der fremstilles en 25x bestand af tricaine (4 g / 1 I) opløses i sterilt milliQ vand justeres til pH 7 og opbevares ved 4 ° C indtil anvendelse. Fortynd 4 ml i 100 ml fisk vand til en arbejdsgruppe koncentration på 0,016%.
BEMÆRK: tricaine er et bedøvelsesmiddel og hudirriterende, handsker ved håndtering. - Lav en fisk øse ud af en plastik overførsel pipette ved at skære pæren i en scoop form og skære 2 slots i bunden for at dræne vandet. Load 1 ml sprøjter (med 10 gradueringer pi) med den klargjorte gentamicin løsning og vedhæfte en 30½ G nål. Fjern eventuelle luftbobler. Drej nålen på sprøjten for at sikre, at den vinklede spids på nålen vender væk og sprøjten markeringer vender fremad og læsbar. For kontrol injektioner, udarbejde en sprøjte og kanyle med sterilt PBS.
- Forbered en skala med en ren overflade eller vejer båd samt papirservietter til at tørre fisk og til at holde fisk til injektion.
- Forbered individuelle små halv-liters beholdere med låg til at holde fisk til observation natten over efter injektion. Små gennemsigtig plast parring bure er nyttige til dette formål. Dissebeholdere skal IKKE være hvid - ideelt set bør de være klar, så de hvide epitel afstøbninger kaste af fisk kan observeres på en sort bænk top. Fyld hver beholder med fisk nok vand til fisk at svømme komfortabelt.
2. intraperitoneal injektion af Gentamicin
- Bedøver fiskene i 0,016% tricaine løsning i fisk vand. Vent på gælle ventilation sats at bremse, og for fiskene ikke længere reagerer at røre ved.
- Øse op fiskene ved hjælp af fisk scoop, flytter fra hovedet mod halen, for at undgå skade gæller eller finner. Læg fisken på papirservietter til at absorbere det overskydende vand ved at dreje fisken ud forsigtigt på siden og ryst overskydende vand fra scoop.
- Øse op fiskene igen og placere den i vejer båd på nulstillede skala og vejer fisken. Runde til nærmeste 0,25 g, og beregne den passende mængde gentamicin at injicere.
BEMÆRK: For en 0,5 g fisk bruge en 20 pi injektion ved 80 mg / kg dosis. - Øse op fiskene igen og læg den på et tørt foldet køkkenrulle. Hvis injektion ved hjælp af den højre hånd, skal du holde køkkenrulle i venstre hånd, og placer fisken hoved peger venstre, med bugen let tilgængelige.
- Hold sprøjten med kanylen i en 45 ° vinkel til huden på maven, forreste til kloakken. Skub nålen lige under huden, så sænke vinkel og skub nålen frem under huden, undgå de indre organer. Tryk stemplet den passende mængde, pause for at sikre ingen væske kommer ud omkring nålen, derefter trække nålen. Hvis du holder fisken støt er et problem, at afstive albuer mod torso stabilisere dem.
BEMÆRK: Brug handsker ved håndtering gentamicin løsning. - Drop hver fisk i en enkelt container. Observere fisk og sikre dens nyttiggørelse fra anæstesi. Hold fisk på 28,5 ° C natten over.
BEMÆRK: Hvis fisken ikke genoplive straks, skal du bruge en plastik transfer pipette til at overrisle vand tværs sine gæller for at genoplive den. - Brug den samme sprøjte og kanyle, når indsprøjtning flere fisk med den samme dosis af gentamicin. Bortskaf den brugte sprøjte og kanyle i den relevante smittefarlige skarpe genstande container.
3. Indlæg Injektion Observation af skade
- Den næste dag (1 dag efter skade), placer den injicerede fisk i dets beholder på en mørk overflade. Hvide afstøbninger af døde epitelvæv udskilles af de sårede fisk bør være synlige. (Se figur 1E - H). Hvis der ikke er afstøbninger, enten fiskene var ikke skadet af gentamicin injektion (enten dosen var for lav, eller nogle af den gentamicin lækket under injektionsprocessen) eller fisken blev alvorligt skadet resulterer i fuldstændig blokering af urinlederne og kloak med sloughed væv.
BEMÆRK: Hvis fisken ikke er i stand til at rydde afstøbninger fra sin krop, vil normalt dø inden for 2-3 dage, og er derfor ubrugelig i længere tidassays. Hvis der ikke afstøbninger er synlige, aflive fisken i tricaine vand ved nedsænkning i mindst 10 min efter gælle bevægelse stopper. - Hvis hvide væv afstøbninger er synlige, skal du indstille fisken til side og fortsætte kontrollen af andre fisk. En passende dosis af gentamicin vil resultere i 80-90% af fiskene er brugbar. Pool den skadede fisk og derefter opdele dem i forskellige behandlingsgrupper, hvis det ønskes.
4. Pleje af Gendannelse Fish
- Hold fisk i rent vand og uncrowded miljø. Beskidt vand og fortrængning vil føre til infektioner og utilsigtede død. Forsøge at holde mere end 6 fisk / 500 ml vand fisk og skifte vand dagligt, hvis muligt.
BEMÆRK: Dette er et minimum volumen for bevarelse af rummet, eller hvis investigator ønsker at udføre forsøg med dyre lægemiddelbehandlinger. - Må ikke fodre fiskene indtil 3 dage efter skaden. Gendannelse fisk vil ikke spise på først, og noget mad i tanken vil nedbrydes og fremmer bakterier growth. Begyndende ved 3 dage efter skaden, foder en lille mængde gang om dagen.
5. Analyse af tilskadekomne Nyrer
- For in situ hybridisering til lhx1a mRNA-ekspression, kan nyrer høstes fra fisk på ønskede tidspunkter. Aflive fisk i tricaine vand på is mindst 10 min, indtil gælle bevægelse stopper, og fjern derefter hovedet med et barberblad og åbne kroppen hulrum, og fjern de indre organer med en pincet.
- Efterlad nyrerne på plads (pigmenteret organ fastgjort til den dorsale kropsvæg) og fikseres fiskene i 4% paraformaldehyd i PBS natten over. Dissekere ud nyren 15 og fortsætte med standard in situ-hybridisering.
- Kort fortalt vaskes nyrerne i PBST (phosphatbufferet saltvand 0,5% Tween 20), permeabiliseret med proteinase K i PBST (10 ug / ml) i 1 time ved stuetemperatur. Post-fix med 4% paraformaldehyd og igen vasket med PBST.
- Derefter præ-hybridisere nyrerne natten over ved 68; ° C i hybridiseringsbuffer (50% formamid, 5 x SSC, 50 ug / ml heparin, 500 ug / ml tRNA, 0,1% Tween 20, pH 6,0).
- Inkuber prøverne med digoxigenin-mærket probe i hybridiseringsbuffer, vask derefter i 5-10 minutter hver med 100%, 75%, 50%, 25% hybridiseringspuffer ved 68 ° C, derefter flyttet til stuetemperatur og vaskes to gange i 30 minutter med 2 x SSC med 0,1% Tween 20, og vask to gange i 30 minutter med 0,2 x SSC med 0,1% Tween 20.
- Ækvilibrering af prøven 3x 5 min i MAB (0,1 M maleinsyre, 0,15 M NaCl, pH 7,5) og blokeret natten over ved 4 ° C i MAB med 10% gedeserum. Derefter inkuberes prøverne natten over i anti-digoxigenin-AP Fab 1: 5.000 i MAB.
- Vask prøven 5x i 1 time i MAB, og tempereres 3x i 15 minutter i NTMT (0,1 M Tris pH 9,5, 0,05 M MgCl2, 0,01 M NaCl, 50 pi Tween 20).
- Så behandle nyrerne med NBT / BCIP at detektere signalet. Fastgør nyrerne med 4% paraformaldehyd og inkuberes i dimethylformamid til Remove overskydende NBT / BCIP, bleget natten over i deioniseret vand. Vask nyrerne og derefter fotografere i PBST med 50% glycerol under et dækglas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Gentamicin skade kan bekræftes visuelt ved observation af renale epiteliale afstøbninger i vand (figur 1). Forskellige doseringer af gentamicin blev anvendt til at skade voksen vildtype TuAB zebrafisk, hvilket resulterer i et stigende antal lhx1a + cellulære aggregater i regenererende nyre (figur 1A - D). Hvide afstøbninger kan let ses i vandet 1 dag efter skade (Figur 1E - H). En lav dosis af gentamicin resulterede i de fleste fisk med ingen afstøbninger, mens højere doser resulterede i over 75% af fisk med afstøbninger (figur 1 i). I alle grupper, vælge for fisk med afstøbninger resulterede i en højere gennemsnitlig skade niveau (figur 1J).
Efter visuel bekræftelse af skade, kan fiskene samles og derefter opdelt i kontrol- og behandlingsgruppen til eksperimenter (figur 2). Vildtype TuAB voksne zebrafisk blev såret med en 80mg / kg dosis af gentamicin. En dag efter skade blev fisk med afstøbninger valgt, samlet og derefter opdelt i varmechok og ingen varmeshock grupper. Varmechok fisk blev udsat for 37 ° C i 16 timer natten over og en 8 timers hvileperiode ved 28,5 ° C hver dag. På 4 dage og 7 dage efter skade fisk blev fikseret i hele mount in situ hybridisering og skade niveau blev vurderet ved densiteten af lhx1a + aggregater. Varmechok alene ikke frembringer en skade respons (figur 2A, D), men varmechok accelererer respons i sårede fisk sammenlignet med ingen varmeshockproteiner kontroller (figur 2B, C, G). Ved 7 dage efter skade der ikke længere var en signifikant forskel mellem tilskadekomne grupper (figur E, F, H).
<strong> Figur 1: Regeneration som reaktion på akut nyreskade ved gentamicin er dosisafhængig (A - D) lhx 1 a mRNA-ekspression markerer cellulære aggregater, som er nye nephron stamfædre.. (A) 7 dage efter kontrol ip injektion, vildtype TuAB voksne zebrafisk har normalt 0-2 lhx 1a + cellulære aggregater i hele nyren. (B - D) 7 dage efter injektion gentamicin fisk display mange lhx 1a + cellulære aggregater, hvilket indikerer robuste neonephrogenesis.This respons er dosisafhængig, med højere koncentrationer af gentamicin resulterer i flere lhx 1 a + klynger. (E - H) 1 dag efter injektion af gentamicin, fisk udskiller hvide afstøbninger består af dødt epitelvæv fra nyrerne. (E) En samling af afstøbninger fra i alt 12 fisk der viser sortaf former og størrelser. Bemærk forskellen mellem hvide afstøbninger angiver skade sammenlignet med rødlig-orange fordøjet artemia. (F - H) Eksempler på afstøbninger indsamlet fra fisk 1 dag efter skade ved at lade vandet i tanken til at afregne pipettering sedimentet ud og observere under et mikroskop. (F) Afføring uden afstøbninger, hvilket indikerer ingen skader fra en fisk behandlet med 40 mg / kg dosis. (G) mellemstore kaster indikerer skade fra en fisk behandlet med 60 mg / kg dosis. (H) Større afstøbninger med ekstra afstødning væv indikerer skade fra en fisk behandlet med 80 mg / kg dosis. (I) Procentdelen af sårede fisk med afstøbninger øges ved 60 mg / kg og 80 mg / kg. (J) Efter 7 dage injiceret fisk blev forarbejdet til hele mount in situ hybridisering til at vurdere skade. Lhx1a + aggregater blev talt i en enkelt 5x billede taget på det bredeste point af hver nyre og nyre område blev målt ved anvendelse ImageJ. Gennemsnitlige antal aggregater / mm 2 er vist for hver dosis. I hvert tilfælde, fisk med afstøbninger havde en højere gennemsnit end den samlede gruppe ved hver dosis. p <0,5 for 40 mg / kg sammenlignet med 80 mg / kg. Scale bar i AD = 0,2 mm, E = 1 mm, FH = 2mm.
Figur 2:. Temperaturafhængig regenerering 24 timer efter injektion gentamicin, skadet vildtype TuAB voksen zebrafisk med afstøbninger blev samlet og derefter opdelt i en varmechok gruppe og en ikke varmechok gruppe. Fisk blev holdt ved 37 ° C i 16 timer natten over hver nat bagefter med en 8 timers hvileperiode ved 28,5 ° C i løbet af hver dag. (A, D) Kontrol uskadt fisk ikke udtrykke lhx1a efter varmechok. (B, C) Heat shOck accelererer regenerering respons, med flere klynger allerede forekommer ved 4 dage efter skade sammenlignet med skadet fisk uden varmechok (p <0,5, t-test). (E, F) Efter 7 dage, er der ingen signifikant forskel mellem fisk skadet behandlet med varmechok og ingen varmechok. (G, H) Kvantificering af skade ved at tælle lhx1a + aggregater pr mm2. Hvert punkt repræsenterer en enkelt fisk. Antal fisk og gennemsnitlige respons er angivet over hver gruppe. Scale bar = 0,2 mm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Zebrafisken er ideel til at studere regenerering af voksne organer, herunder den voksne mesonephric nyre 6. Nylige undersøgelser har benyttet sig af molekylære markører og nye transgene reporter linjer til bedre karakterisere de trin, der opstår under nephron regenerering og hvilke celler kan være ansvarlig 7,12. Observation af urin afstøbninger har været anvendt i over et århundrede at diagnosticere nyresygdom hos mennesker 16. Her bruger vi tilstedeværelsen af afstøbninger som en nem, noninvasive og tidlig indikator for omfanget af akut nyreskade efter gentamicin injektion. Vi observerer, at fisk, der ikke producerer casts er enten kun mildt sårede (og ikke danner nye nefroner) eller for skadelidte at inddrive og normalt dør inden for de første 3 dage. Derfor er en afgørende skridt i protokollen er den enkelte observation af fisk efter skade, og tilstedeværelsen af urin kaster som en indikator for ordentlig skade niveauer. Vi ser også lhx1a udtryki aggregater startende på dag 4 efter skade. Dette indikerer, at de første 3 dage efter skaden er en afgørende periode for inddrivelsen.
Hvis et stort antal fisk er uskadt, eller for mange fisk dør i løbet af forsøget, skal du kontrollere, at de intraperitoneale injektioner bliver gjort ordentligt. Det kan hjælpe at tilføje et ikke-toksisk farvestof, såsom phenolrødt til gentamicinopløsning at visualisere enhver lækage under indsprøjtning. Mærkning nålen med en permanent markør eller et stykke tape 2 mm fra spidsen kan tjene som vejledning til at forhindre at skubbe nålen for langt ind i fisken. Derudover kan doseringen af gentamicin være nødvendigt at justere. Injicere fisk med en række gentamicin doser og teste nyrerne for ekspression af lhx1a mRNA enten ved in situ hybridisering eller kvantitativ RT-PCR.
En begrænsning af denne teknik er, at det kræver boliger enkelte fisk natten før du vælger sårede fisk tileksperimentering. At undersøge meget tidlige begivenheder i regenerering (indenfor de første 24 timer efter skaden) fisk kan være nødvendigt at gennemgå kontinuerlig eksperimentel behandling, selv under den enkelte observationsperioden. Omkostningerne ved behandling af enkelte fisk med lægemidler, for eksempel, kan være meget høj. Vor teknik er en forbedring af den eksisterende metode til akut nyreskade hjælp gentamicin, fordi den tillader forskeren at fjerne outliers ved anvendelse af en non-invasiv visuel screening proces. Denne stærke, ensartet og reproducerbar skade model kan nu anvendes til effektivt at teste hypoteser om nyreregenerering i den voksne zebrafisk.
Vi observerede, at selv om regenerering forekommer i både mandlige og kvindelige zebrafisk (alle data vist her er fra kvinder), regenerering som reaktion på gentamicin injektion hos mænd er meget mere variabel. Dette kan skyldes tekniske årsager, fordi deres krop er lange, tynde og mere muskulære, mens kvinder har en meget større belly med løsere, tyndere hud, giver lettere injektion og en større bughulen til at rumme injektionsvoluminer uden lækage. En alternativ mulighed er, at androgener produceres af hanner kan have en vis virkning på regenereringsprocessen 17. Fundet Nachtrab et al., At virkningen af androgener var stamme afhængig, hvilket indikerer, at den genetiske baggrund kan modulere androgen niveau. Små variationer i genetisk baggrund af TuAB fisk, der anvendes i vores undersøgelse kan forklare variabiliteten set hos mænd, men formentlig androgener er ikke den eneste kilde til variation og andre genetiske loci kan bidrage til heterogenitet i respons på skade. Vi har også fundet, at forskellige transgene linjer af zebrafisk kan reagere forskelligt på gentamicin skade. For eksempel Tg (Lhx1a: GFP) 12 linje i vores hænder kræver 120 mg / kg til effektiv induktion af skade (data ikke vist). Disse observationer fremhæver betydningen af at bruge samme køn sibLing kontrollerer i skade undersøgelser for at minimere eksperimentel variabilitet.
Mange zebrafisk transgene linjer bruge en varmechok følsom promotor som et middel til at inducere ekspression af et transgen. Da zebrafisk er poikilothermic og ikke regulere deres kropstemperatur, er de tvunget til at udføre fysiologiske funktioner ved en temperatur på deres omgivelser. I forbindelse med forsøg under anvendelse hsp70 promotor til at udtrykke dominerende transgener til at modulere regenerering reaktion, uventet observerede vi, at regenereringen respons blev fremskyndet ved højere temperatur. Derfor bestemmelse af virkningen af temperatur på regenereringen respons i et givet system bliver det afgørende at planlægge timingen af eksperimenter (opfange toppen af regenerering respons for eksempel) og gør sammenligning med regenerering ved normale temperaturer problematiske. Andre inducerbare systemer, der anvender for eksempel CreERT og tamoxifen i transgen induktion kan være bedre egnet to undersøgelser af voksne nyre regenerering. Ligeledes at nyere genetiske metoder til skade induktion såsom CreERT aktivering af giftige transgener eller inducerbare skade ved hjælp af bakteriel nitroreduktase / metronidazol 18,19 vil udvide viften af mulige eksperimenter bedre at forstå neonephrogenesis og nyre regenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| gentamicin sodium sulfate | Sigma | G1264 | TOXIC, purity varies from batch to batch |
| plastic transfer pipets | Fisher | 13-711-7M | |
| 1 ml Norm-Ject syringes | Electron Microscopy Sciences | 72520 | green plastic syringes, ordinary 1 ml syringes are OK, but harder to read accurately |
| 30 G1/2 needles | Becton Dickinson | 305106 | |
| ethyl 3-aminobenzoaate methanesulfonate salt (tricaine) | Sigma | A5040 | IRRITANT |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Make 4% in 1x PBS for working solution |
References
- Humphreys, B. D., et al. Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury. Cell Stem Cell. 2, 284-291 (2008).
- Humphreys, B. D., et al. Repair of injured proximal tubule does not involve specialized progenitors. Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 9226-9231 (2011).
- Guo, J. K., Cantley, L. G. Cellular maintenance and repair of the kidney. Annu Rev Physiol. 72, 357-376 (2010).
- Cirio, M. C., de Groh, E. D., de Caestecker, M. P., Davidson, A. J., Hukriede, N. A. Kidney regeneration: common themes from the embryo to the adult. Pediatr Nephrol. , (2013).
- Little, M. H., Bertram, J. F. Is there such a thing as a renal stem cell. J Am Soc Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).
- Reimschuessel, R. A fish model of renal regeneration and development. ILAR J. 42, 285-291 (2001).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. Heart regeneration in zebrafish. Science. 298, 2188-2190 (2002).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Dev Biol. 320, 161-174 (2008).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Swanhart, L. M., et al. Characterization of an lhx1a transgenic reporter in zebrafish. Int J Dev Biol. 54, 731-736 (2010).
- Diep, C. Q., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-100 (2011).
- Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kidney Int. 79, 33-45 (2011).
- Hentschel, D. M., et al. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am J Physiol Renal Physiol. 288, F923-F929 (2005).
- Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. Dissection of the adult zebrafish kidney. J Vis Exp. , (2011).
- Fogazzi, G. B., Cameron, J. S. Urinary microscopy from the seventeenth century to the present day. Kidney Int. 50, 1058-1068 (1996).
- Nachtrab, G., Czerwinski, M., Poss, K. D. Sexually dimorphic fin regeneration in zebrafish controlled by androgen/GSK3 signaling. Curr Biol. 21, 1912-1917 (2011).
- Zhou, W., Hildebrandt, F. Inducible podocyte injury and proteinuria in transgenic zebrafish. J Am Soc Nephrol. 23, 1039-1047 (2012).
- Huang, J., et al. A zebrafish model of conditional targeted podocyte ablation and regeneration. Kidney Int. 83, 1193-1200 (2013).
