Introduction
Nyrene er avgjørende for fluid homeostase, blodtrykksregulering og filtrering av avfall fra kroppen. Selv om pattedyr er i stand til å reparere eksisterende nephrons etter skade ved bruk av differensierte epitelceller 1-4, de synes å mangle en pool av reserverte stamceller 5 og er ikke i stand til å danne nye nephrons de novo. I motsetning til pattedyr, voksen fisk er i stand til å danne nye nephrons hele voksne liv for å støtte vekst av fisken, og i respons på skade 6,7. Sebrafisk, Danio rerio, er en uvurderlig modellorganisme for studier av organ regenerering 8-10 og har potensial til å gi kraftige innsikt i applikasjoner for engineering reparasjon av menneskelige nyrer. Tg (Lhx1a: EGFP) transgenet 11 har vist seg å merke en pool av nevronet progenitorceller i den voksne sebrafisk nyre 12, men mekanismene som styrer responsen til lhx1a + -celler til å skade rEmain uklart.
Den aminoglykosid gentamicin er en mye brukt antibiotikum med kjente nefrotoksiske og ototoksiske effekter hos mennesker 13. Intraperitoneal injeksjon av gentamicin er en etablert metode for å indusere akutt nyre-skade i fiske 6. Denne skaden i fiskeligner tapet av rørformede epitel og arrdannelse i glomeruli som oppstår hos mennesker etter gentamicin overdose 14. Induserende skade i sebrafisk av gentamicin injeksjon er en praktisk måte å indusere en sterk, synkron regenerering respons, med mange nye nephrons produsert og samtidig fortsetter gjennom stadier av formasjonen, spredning og differensiering.
Denne protokollen detaljer vår metode for robust og reproduserbar skade i voksen sebrafisk nyre ved å benytte en ikke-invasiv visuell screening prosess for å minimere uteliggere. Vi tar nytte av det faktum at skader med gentamicin fører til døden av epithelial nyrevevet og formation av tubulære kaster, som deretter akkumuleres i massene i mesonefrosgangen kanaler og cloaca. Disse er passert av fisken og kan observeres visuelt i vannet. Dette gir oss muligheten til å screene for fisk med sterk-dødelige skader, som deretter kan samles for videre eksperimentering. Redusering av antall uskadd fisk eller fisk som dør før de når endepunktet av forsøket fører til mer enhetlig og effektiv datainnsamling og analyse. I tillegg er ingen spesielle enheter eller reagenser som kreves, noe som gjør denne metoden kostnadseffektiv og egnet for bruk i en akademisk eller undervisning innstilling. Ved å bruke vår metode, her vi vise den økende effekten av gentamicin dose på nyre regenerering, så vel som effekten av økt temperatur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Etikk Uttalelse: Alle forsøkene ble utført i samsvar med Massachusetts General Hospital retningslinjer for bruk av dyr i forskning.
1. Advance Utarbeidelse
- Bestem hvor mange voksne sebrafisk 6-12 måneder gammel til å skade. Plan for å skade 10-20% mer fisk enn vil være nødvendig. For å minimalisere variabiliteten bruk alder tilpasset søsken fisk alet sammen i samme tank, slik at de er omtrent samme størrelse og har mindre genetisk variabilitet. Hunnfisk er mye lettere å injisere i forhold til hannfisk, på grunn av den større kapasitet av buken. Imidlertid, hanner og hunner gi lignende resultater.
- Ved å gjøre forsøket for første gang, plotte en dose kurve for å bestemme den passende dose for gentamicin en spesifikk stamme av fisk. Test hver ny batch av gentamicin før bruk i forsøkene siden renheten av gentamicin varierer fra parti til parti. Riktig dosering bør bestemmes ved å vurdere expressipå skademarkører som lhx1a. (Se figur 1A - D).
- Forbered gentamicin løsning. Gentamicin lager oppløsningen kan lagres i -20 ° C og tint for senere bruk. For eksempel, for en 80 mg / kg dose (80 mg gentamicin / kg kroppsvekt) i en fisk som veier 0,5 g, fremstille 2 mg / ml gentamicin i fosfat-bufret saltløsning som en praktisk arbeidsoppløsning. Dette gir en 20 ul av gentamicin for intraperitoneal injeksjon inn i fisken.
MERK: Generelt 80-120 mg / kg oppnå gode resultater, men doser så lave som 40 mg / kg kan være hensiktsmessig. Gentamicin kan også kjøpes i løsningen for å minimere farlig eksponering for laboratoriepersonell.
MERK: Gentamicin i høye doser kan være giftig. Bruk hansker og maske når veiing pulver. - Forbered 100 ml 0,016% Tricaine vann for bedøvelse fisk. Forbered en 25x lager av Tricaine (4 g / 1 l) oppløst i sterilt milliQ vann justere pH 7 og oppbevares ved 4 ° C inntil bruk. Fortynne 4 ml i 100 ml fisk vann for en arbeidsgruppe konsentrasjon på 0,016%.
MERK: Tricaine er en bedøvelse og hudirriterende, hansker ved håndtering. - Lag en fisk øse ut av en plast transfer pipette ved å kutte pæren inn i en scoop form og kutte to sporene i bunnen for å drenere vann. Load 1ml sprøyter (med 10 mikroliter graderinger) med den tilberedte gentamicin løsning og feste en 30½ G nål. Fjern eventuelle luftbobler. Vri nålen på sprøyten for å være sikker på at den vinklede spissen på nålen vender bort og sprøyte markeringene er vendt forover og lesbare. For kontroll injeksjoner, utarbeide en sprøyte og kanyle med steril PBS.
- Forbered en skala med en ren overflate eller veie båt samt papirhåndklær for tørking av fisk og for å holde fisk for injeksjon.
- Utarbeide individuelle små halvliters beholdere med lokk for å holde fisk for observasjon over natten etter injeksjon. Små gjennomsiktig plast parring bur er nyttige for dette formål. Dissecontainere bør ikke være hvit - ideelt sett bør de være klart slik at de hvite epiteliale kaster skur av fisken kan være observert på en svart benk toppen. Fyll hver container med nok fisk vann for fisken å svømme komfortabelt.
2. intraperitoneal injeksjon av Gentamicin
- Bedøve fisken i 0,016% Tricaine oppløsning i fisk vann. Vent til gill ventilasjonsraten å bremse og for at fisken ikke lenger reagere på berøring.
- Øse opp fisken med fisk scoop, flytte fra hode mot hale for å unngå å skade gjellene eller finnene. Legg fisken på tørkepapir for å absorbere overflødig vann ved å vri på fisken forsiktig ut på siden og rist av overflødig vann fra scoop.
- Øse opp fisken igjen og legg den i veie båt på nullet skala og veie fisken. Rund til nærmeste 0,25 g, og beregne passende mengde gentamicin å injisere.
MERK: For en 0,5 g fisk bruke en 20 mL injeksjon på 80 mg / kg dose. - Øse opp fisken igjen og legg den på et tørt brettet papirhåndkle. Hvis injisere bruke høyre hånd, hold papirhåndkle i venstre hånd, og legg fisken hode som peker til venstre, med buken lett tilgjengelig.
- Hold sprøyten med nålen i 45 ° vinkel mot huden på magen, anterior til cloaca. Stikk nålen rett under huden, deretter redusere vinkel og skyv nålen frem under huden, unngå de indre organer. Trykke stempelet riktig mengde, pause for å sørge for at ingen væske kommer ut rundt nålen, trekk så nålen. Ved å holde fisken jevn er et problem, å spenne albuene mot torsoen stabilisere dem.
MERK: Bruk hansker når du håndterer gentamicin løsning. - Slipp hver fisk i en individuell beholder. Observere fisk og sikre dens utvinning fra anestesi. Hold fisk på 28,5 ° C over natten.
MERK: Hvis fisken ikke gjenopplive umiddelbart, bruke en plast transfer pipette til å vanne vann over gjellene å gjenopplive den. - Bruk samme sprøyten og nålen når injisere flere fisk med samme dose av gentamicin. Kast den brukte sprøyten og kanylen inn i riktig biohazard kanylebøtte.
3. Post Injeksjon Observasjon av Injury
- Neste dag (en dag etter skade), plasser den injiserte fisk i sin container på en mørk overflate. Hvite avstøpninger av døde epitelvev utskilles av de skadde fisken skal være synlig. (Se figur 1 E - H). Hvis det ikke er noen kaster, enten fisken ble ikke skadet av gentamicin injeksjon (enten dosen var for lavt, eller noen av gentamicin lekket under injeksjonen prosessen) eller fisken ble alvorlig skadet som resulterer i fullstendig blokkering av urinlederne og cloaca med sloughed vev.
MERK: Hvis fisken ikke er i stand til å fjerne de kaster fra kroppen sin vil det vanligvis dør i løpet av 2-3 dager, og er derfor ubrukelig for lengeranalyser. Hvis ingen kaster er synlige, avlive fisken i Tricaine vann ved neddykking i minst 10 minutter etter at gjelle bevegelsen stopper. - Hvis hvite vev kaster er synlig, sett fisken til side og fortsette å kontrollere andre fisk. En passende dose av gentamicin vil resultere i 80-90% av fisken være brukbare. Pool den skadde fisk og deretter dele dem inn i ulike behandlingsgrupper om ønskelig.
4. Vedlikehold av Gjenopprette Fish
- Hold fisken i rent vann og urørte miljø. Skittent vann og trengsel vil føre til infeksjoner og utilsiktet død. Prøv å holde ikke mer enn seks fisk / 500 ml vann og fisk endre vann daglig hvis mulig.
MERK: Dette er et minimumsvolum for bevaring av plass eller hvis etterforsker ønsker å utføre eksperimenter med dyre medikamentelle behandlinger. - Ikke mate fiskene før tre dager etter skade. Utvinne fisk vil ikke spise først, og noe mat i tanken vil brytes ned og fremme bakterie growth. Starter på 3 dager etter skade, mate en liten mengde en gang om dagen.
5. Analyse av Skadet Nyrer
- For in situ hybridisering for lhx1a mRNA uttrykk, kan nyrer høstes fra fisk på ønskede tidspunkter. Avlive fisk i Tricaine vann på is i minst 10 min før gill bevegelsen stopper, og deretter fjerne hodet med et barberblad og åpne kroppens hulrom og fjerne de indre organer med pinsett.
- La nyrene på plass (pigmentert organ festet til den dorsale kroppsveggen), og feste fisken i 4% paraformaldehyd i PBS over natten. Dissekere ut nyrene 15 og fortsett med standard in situ hybridisering.
- I korthet, vask nyrene i PBST (fosfatbufret saltvann 0,5% Tween 20), permeabilisert med proteinase K i PBST (10 ug / ml) i 1 time ved romtemperatur. Post-fikse med 4% paraformaldehyde, og vasket igjen med PBST.
- Så pre-hybrid nyrene over natten ved 68; ° C i hybridiseringsbuffer (50% formamid, 5x SSC, 50 ug / ml heparin, 500 ug / ml tRNA, 0,1% Tween 20, pH 6,0).
- Inkuber prøvene med digoksygenin-merket probe i hybridiseringsbuffer, vask deretter i 5-10 minutter hver med 100%, 75%, 50%, 25% hybridiseringsbuffer ved 68 ° C, og deretter flyttet til romtemperatur og vaskes to ganger i 30 min med 2 x SSC med 0,1% Tween 20, og vaskes to ganger i 30 min med 0,2 x SSC med 0,1% Tween 20.
- Ekvilibrer prøven 3x 5 min i MAB (0,1 M maleinsyre, 0,15 M NaCl, pH 7,5) og blokkert over natten ved 4 ° C i MAB med 10% geiteserum. Deretter inkuber prøvene over natten i anti-digoxigenin-AP Fab 1: 5000 i MAB.
- Vask prøven 5x i 1 time i MAB, og likevekt 3x i 15 minutter i NTMT (0,1 M Tris pH 9,5, 0,05 M MgCl2, 0,01 M NaCl, 50 ul Tween 20).
- Deretter behandle nyrene med NBT / BCIP å oppdage signalet. Fix nyrene med 4% paraformaldehyde og inkuberes i dimetylformamid til Remove overflødig NBT / BCIP, bleket over natten i avionisert vann. Vask nyrene og deretter fotografere i PBST med 50% glycerol under et dekkglass.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Gentamicin skade kan bekreftes visuelt ved observasjon av renal epitel avstøpninger i vannet (figur 1). Ulike doser av gentamicin ble brukt til å skade voksen villtype TuAB sebrafisk, noe som resulterer i stadig flere lhx1a + cellulære aggregater i regenererende nyre (Figur 1A - D). Hvite kaster kan lett sees i vannet en dag etter skade (Figur 1E - H). En lav dose av gentamicin resulterte i de fleste fisk som ikke har noen kaster, mens høyere doser resulterte i over 75% av fiske ha avstøpninger (figur 1i). I alle grupper, velge for fisk med kast resulterte i en høyere gjennomsnittlig skadenivået (figur 1J).
Etter visuell bekreftelse av skade, kan fisken bli slått sammen og så delt opp i kontroll- og behandlingsgrupper for eksperimenter (figur 2). Hvete TuAB voksne sebrafisk ble skadet med en 80mg / kg dose av gentamicin. En dag etter skade, ble fisk med kaster valgt, samlet og deretter delt inn i heat shock og ingen varmesjokk grupper. Varmesjokk fisk ble utsatt for 37 ° C i 16 timer over natten og en 8 timers hvileperiode ved 28,5 ° C hver dag. På fire dager og 7 dager etter skade fisken ble løst for hele mount in situ hybridisering og skadenivået ble vurdert av tetthet av lhx1a + aggregater. Varmesjokk alene ikke gir et skade respons (figur 2A, D), men varmesjokk akselerer reaksjons i skadet fisk sammenlignet med ingen varmesjokk kontroller (figur 2B, C, G). Ved 7 dager etter skade det ikke lenger var en signifikant forskjell mellom gruppene skadde (fig E, F, H).
<strong> Figur 1: Regeneration respons på akutt nyreskade ved gentamicin er doseavhengig (A - D) lhx en en mRNA uttrykk markerer cellulære aggregater, som er nye nephron stamfedre.. (A) 7 dager etter kontroll ip injeksjon, hvete TuAB voksen sebrafisk har normalt 0-2 lhx 1a + cellulære aggregater i hele nyre. (B - D) 7 dager etter gentamicin injeksjon fisk skjerm mange lhx 1a + cellulære aggregater, som indikerer robuste neonephrogenesis.This respons er doseavhengig, med høyere konsentrasjoner av gentamicin resulterer i flere lhx en A + klynger. (E - H) 1 dag etter injeksjon av gentamicin, fisk skiller hvite avstøpninger som består av døde epitelvev fra nyrene. (E) En samling av avstøpninger fra totalt 12 fisk viser variasjonenformer og størrelser. Merk forskjellen mellom hvite kaster indikerer skader sammenlignet med rødoransje fordøyd artemia. (F - H) Eksempler på avstøpninger som er samlet fra individuelle fisker 1 dagen etter skade ved å la vannet i tanken til å sedimentere, pipettere sedimentet ut og observere under et mikroskop. (F) Ekskrementer uten kast, som indikerer ingen skader fra en fisk behandlet med 40 mg / kg dose. (G) Medium størrelse kaster indikerer skade på grunn av en fisk behandlet med 60 mg / kg dose. (H) Større kast med ekstra sloughed vev indikerer skader fra en fisk behandlet med 80 mg / kg dose. (I) Prosent skadet fisk med kast økes ved 60 mg / kg og 80 mg / kg. (J) Etter 7 dager injisert fisk ble bearbeidet for hel mount in situ hybridisering for å vurdere skade. Lhx1a + aggregater ble tellet i en enkelt 5x bilde tatt på det bredeste point av hver nyre og nyrene ble målt ved bruk av ImageJ. Gjennomsnittlig antall aggregater / mm 2 er vist for hver dose. I hvert tilfelle, fisk med kaster hadde et høyere gjennomsnittlig over den samlede gruppe ved hver dose. p <0,5 til 40 mg / kg sammenlignet med 80 mg / kg. Scale bar i AD = 0,2 mm, E = 1 mm, FH = 2mm.
Figur 2:. Temperaturavhengig regenerering 24 timer etter gentamicin injeksjon, skadet hvete TuAB voksen sebrafisk med kastene ble slått sammen og deretter delt inn i et varmesjokk gruppe og en ingen varme sjokk gruppe. Fisken ble opprettholdt ved 37 ° C i 16 timer over natten hver natt etterpå med en 8 timers hvileperiode ved 28,5 ° C i løpet av hver dag. (A, D) Kontroll uskadd fisk uttrykte ikke lhx1a etter varmesjokk. (B, C) Heat shflokken akselererer regenereringen respons, med flere klynger som allerede fremkommer på 4 dager etter skade sammenlignet med skadet fisk uten varmesjokk (p <0,5, t-test). (E, F) Etter 7 dager er det ingen signifikant forskjell mellom skadet fisk behandlet med varmesjokk og ingen varmesjokk. (G, H) Kvantifisering av skade ved å telle lhx1a + aggregater per mm 2. Hvert punkt representerer en enkelt fisk. Antall fisk og gjennomsnittlig responstid er indikert ovenfor hver gruppe. Scale bar = 0,2 mm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sebrafisk er ideell for å studere regenerering av voksne organer herunder voksen mesonefrosgangen nyre 6. Nyere studier har tatt nytte av molekylære markører og nye transgene reporter linjer for å bedre karakter trinnene som oppstår under nephron regenerering og hva cellene kan være ansvarlig 7,12. Observasjon av urin avstøpninger har blitt brukt i over et århundre å diagnostisere nyresykdom hos mennesker 16. Her bruker vi nærvær av avstøpninger som en enkel, ikke-invasiv og tidlig indikator på graden av akutte nyreskade etter gentamicin injeksjon. Vi observerer at fisk som ikke produserer kaster er enten bare mildt skadet (og ikke danne nye nephrons) eller for skadet til å gjenopprette og dør vanligvis i løpet av de første tre dagene. Derfor er et kritisk trinn i protokollen er den enkelte observasjon av fisk etter skade, og tilstedeværelsen av urin kaster som en indikator på skade riktige nivåer. Vi ser også lhx1a uttrykki aggregater starter på dag 4 etter skade. Dette indikerer at de første tre dagene etter skade er en avgjørende periode for å bli frisk.
Hvis et stort antall fisk er uskadd, eller for mange fisk dør i løpet av forsøket, må du kontrollere at intraperitonale injeksjoner blir gjort riktig. Det kan hjelpe å legge til et ikke-toksisk farvestoff, slik som fenol-rødt til gentamicin løsningen for å visualisere eventuelle lekkasjer under injeksjon. Merking nålen med en permanent markør eller et stykke tape 2 mm fra spissen kan tjene som en veiledning for å unngå å skyve nålen for langt inn i fisken. Dessuten kan doseringen av gentamicin trenger å justeres. Injiser fisk med en rekke doser gentamicin og teste nyrene for ekspresjon av lhx1a mRNA, enten ved in situ hybridisering eller kvantitativ RT-PCR.
En begrensning av denne teknikken er at det krever boliger enkeltfisk over natten før du velger skadet fisk foreksperimentering. For å undersøke svært tidlige hendelser i regenerering (innen de første 24 timer etter skade) fisk kan være nødvendig å gjennomgå kontinuerlig eksperimentell behandling, selv under den enkelte observasjonsperioden. Omkostningene ved å behandle individuelle fisk med legemidler, for eksempel, kan være meget høy. Vår teknikk er en forbedring av den eksisterende fremgangsmåte for akutte nyreskade ved hjelp av gentamicin, fordi det tillater forskeren til å eliminere utliggere ved å benytte en ikke-invasiv visuell screening prosessen. Dette robust, ensartet og reproduserbar skade-modell kan nå brukes til effektivt å teste hypoteser om nyre regenerering i den voksne sebrafisk.
Vi observerte at selv om regenerering skjer i både mannlige og kvinnelige sebrafisk (alle data som er vist her er fra kvinner), regenerering svar på gentamicin injeksjon hos menn er mye mer variabel. Dette kan være på grunn av tekniske årsaker, fordi kroppene deres er lang, tynn og mer muskuløs, mens kvinner har en mye større belly med løsere, tynnere hud, slik at enklere injeksjon og større bukhulen å imøtekomme injeksjonsvolumer uten lekkasje. En alternativ mulighet er at androgener produsert av hanner kan ha en viss innvirkning på regenereringen 17. Nachtrab et al. Fant at virkningen av androgener var stamme avhengig, noe som indikerer at genetisk bakgrunn kan modulere androgennivåer. Små variasjoner i genetisk bakgrunn av de TuAB fisk som brukes i vår studie kan forklare variasjonen sett hos menn, men antagelig androgener er ikke den eneste kilden til variasjon og andre genetiske loci kan bidra til heterogenitet i respons til skade. Vi har også funnet at ulike transgene linjer av sebrafisk kan reagere forskjellig på gentamicin skade. For eksempel, Tg (Lhx1a: GFP) 12 linje i våre hender krever 120 mg / kg for effektiv induksjon av skade (data ikke vist). Disse observasjonene markere betydningen av å bruke samme kjønn sibling styrer i skade studier for å minimere eksperimentell variabilitet.
Mange sebrafisk transgene linjer bruke en varmesjokk promoter følsom som et middel for å indusere ekspresjon av et transgen. Siden sebrafisk er vekselvarme, og ikke regulere kroppstemperaturen, blir de tvunget til å utføre fysiologiske funksjoner ved temperaturen i omgivelsene. I forbindelse med forsøkene ved hjelp av hsp70 promoter for å uttrykke dominerende transgener for å modulere regenerering respons, vi uventet observert at regenereringen responsen ble akselerert ved høyere temperatur. Derfor, å bestemme effekten av temperatur på regenerering respons i et gitt system blir avgjørende for planlegging av tidspunktet for forsøkene (fange toppen av regenereringssonen respons for eksempel) og gjør forhold til regenerering ved normale temperaturer problematisk. Andre induserbare systemer som bruker for eksempel CreERT og tamoxifen for transgenet induksjon kan være bedre egnet to studier av voksne nyre regenerering. Tilsvarende nyere genetiske metoder for skade induksjon som CreERT aktivering av giftige transgener eller induserbar skade ved bruk av bakterie nitroreductase / metronidazol 18,19 vil utvide utvalget av mulige eksperimenter for å bedre forstå neonephrogenesis og nyre gjenfødelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| gentamicin sodium sulfate | Sigma | G1264 | TOXIC, purity varies from batch to batch |
| plastic transfer pipets | Fisher | 13-711-7M | |
| 1 ml Norm-Ject syringes | Electron Microscopy Sciences | 72520 | green plastic syringes, ordinary 1 ml syringes are OK, but harder to read accurately |
| 30 G1/2 needles | Becton Dickinson | 305106 | |
| ethyl 3-aminobenzoaate methanesulfonate salt (tricaine) | Sigma | A5040 | IRRITANT |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Make 4% in 1x PBS for working solution |
References
- Humphreys, B. D., et al. Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury. Cell Stem Cell. 2, 284-291 (2008).
- Humphreys, B. D., et al. Repair of injured proximal tubule does not involve specialized progenitors. Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 9226-9231 (2011).
- Guo, J. K., Cantley, L. G. Cellular maintenance and repair of the kidney. Annu Rev Physiol. 72, 357-376 (2010).
- Cirio, M. C., de Groh, E. D., de Caestecker, M. P., Davidson, A. J., Hukriede, N. A. Kidney regeneration: common themes from the embryo to the adult. Pediatr Nephrol. , (2013).
- Little, M. H., Bertram, J. F. Is there such a thing as a renal stem cell. J Am Soc Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).
- Reimschuessel, R. A fish model of renal regeneration and development. ILAR J. 42, 285-291 (2001).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. Heart regeneration in zebrafish. Science. 298, 2188-2190 (2002).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Dev Biol. 320, 161-174 (2008).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Swanhart, L. M., et al. Characterization of an lhx1a transgenic reporter in zebrafish. Int J Dev Biol. 54, 731-736 (2010).
- Diep, C. Q., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-100 (2011).
- Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kidney Int. 79, 33-45 (2011).
- Hentschel, D. M., et al. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am J Physiol Renal Physiol. 288, F923-F929 (2005).
- Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. Dissection of the adult zebrafish kidney. J Vis Exp. , (2011).
- Fogazzi, G. B., Cameron, J. S. Urinary microscopy from the seventeenth century to the present day. Kidney Int. 50, 1058-1068 (1996).
- Nachtrab, G., Czerwinski, M., Poss, K. D. Sexually dimorphic fin regeneration in zebrafish controlled by androgen/GSK3 signaling. Curr Biol. 21, 1912-1917 (2011).
- Zhou, W., Hildebrandt, F. Inducible podocyte injury and proteinuria in transgenic zebrafish. J Am Soc Nephrol. 23, 1039-1047 (2012).
- Huang, J., et al. A zebrafish model of conditional targeted podocyte ablation and regeneration. Kidney Int. 83, 1193-1200 (2013).
