Introduction
Почек имеет важное значение для гомеостаза жидкости, регулирования артериального давления и фильтрации отходов из организма. Хотя млекопитающие способны отремонтировать существующие нефронов после травмы, используя дифференцированные эпителиальные клетки 1-4, они, кажется, не хватает бассейн зарезервированных стволовых клеток 5 и не в состоянии сформировать новые нефронов De Novo. В отличие от млекопитающих, взрослые рыбы способны образовывать новые нефронов на протяжении всей взрослой жизни, чтобы поддержать рост рыбы и в ответ на повреждение 6,7. Данио, Danio rerio, является бесценным модельный организм для изучения регенерации органов 8-10 и имеет потенциал, чтобы обеспечить мощные идеи в приложения для проектирования ремонт почек человека. Tg (Lhx1a: EGFP) трансгенной 11 было показано, что метка пул клеток-предшественников нефрона в почках взрослых данио 12, однако механизмы, контролирующие реакцию lhx1a + клеток на повреждение REmain неясно.
Аминогликозид гентамицин широко используется антибиотик с известными нефротоксических и ототоксичных воздействия на человека 13. Внутрибрюшинное инъекции гентамицина установлено методом индукции острого повреждения почек у рыб 6. Эта травма в рыбных имитирует потерю эпителия канальцев и клубочков рубцов, что происходит в организме человека после передозировки гентамицин 14. Стимулирование травмы у рыбок данио по гентамицин инъекции удобный способ вызывать сильное, синхронный ответ регенерации, со многими новыми нефронов, производимых и одновременно исходя через этапы формирования, пролиферации и дифференцировки.
Этот протокол детали наш метод для надежной и воспроизводимой травмы во взрослом данио почки с использованием неинвазивного визуальный процесс отбора, чтобы минимизировать выбросы. Мы воспользоваться тем, что травмы с гентамицином приводит к смерти эпителиальной ткани почек и форматион почечных канальцев отливок, который затем накапливаются в массы в мезонефрические протоков и клоаки. Они передаются от рыбы и может быть визуально в воде. Это позволяет для скрининга рыбы с сильным несмертельного травмы, которые затем могут быть объединены для дальнейших экспериментов. Минимизация числа неповрежденной рыбы или рыбы, которые умирают, не дожив до конечной точки эксперимента приводит к более равномерному и эффективному сбору и анализу данных. Кроме того, никаких специальных устройств или реагенты не требуются, что делает этот метод экономически эффективным и подходящим для использования в учебном или преподавательской обстановке. Используя наш метод, здесь мы показываем возрастающие эффекты гентамицина дозы на регенерацию почек, а также влияние повышенной температуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
О себе этика:: Примечание Все эксперименты были проведены в соответствии с Массачусетского общего госпиталя руководящих принципов для использования животных в исследованиях.
1. Предварительная подготовка
- Определите, сколько взрослых данио 6-12 месяцев, чтобы ранить. План травмировать 10-20% больше рыбы, чем будет необходимо. Для того, чтобы минимизировать изменчивость, использование же возраста родной брат рыбу воспитан вместе в одном баке, так что они примерно одинакового размера и имеют меньше генетической изменчивости. Женские рыб намного легче придать по сравнению с мужской рыбы, из-за большего объема живота. Тем не менее, мужчины и женщины дают сходные результаты.
- При выполнении эксперимента впервые, построить кривую дозы для определения соответствующего гентамицина дозировка для конкретного штамма рыбы. Испытание каждой новой партии гентамицина перед использованием в экспериментах, так как чистота гентамицина варьируется от партии к партии. Правильное дозировка должна определяться путем оценки Expressiна травмирования маркеров, таких как lhx1a. (Смотрите рисунок 1А - D).
- Подготовка гентамицин решение. Гентамицин раствор можно хранить в -20 ° C и оттаивали для последующего использования. Например, для 80 мг / кг (80 мг гентамицина / кг массы тела) в рыбе весом 0,5 г, приготовить 2 мг / мл гентамицина в фосфатно-солевом буфере в качестве удобного рабочего раствора. Это обеспечивает 20 мкл гентамицина для внутрибрюшинной инъекции в рыбу.
ПРИМЕЧАНИЕ: В общем, 80-120 мг / кг добиться хороших результатов, но дозах, как 40 мг / кг может быть целесообразно. Гентамицин также может быть приобретен в растворе, чтобы минимизировать опасные воздействия персонала лаборатории.
Примечание: гентамицин в высоких дозах может быть токсичным. Надевайте перчатки и маску, когда весом порошок. - Подготовьте 100 мл 0,016% Tricaine воды обезболивающее рыбу. Подготовка 25x запас Tricaine (4 г / 1 л), растворенного в стерильной воде MilliQ доведения рН до 7 и хранят при температуре 4 ° С до использования. Развести 4 мл в 100 мл воды рыбы на рабочей концентрации 0,016%.
ПРИМЕЧАНИЕ: Tricaine является анестетиком и кожи раздражитель, надевать перчатки. - Сделайте рыба совок из пластиковой пипетки передачи путем разрезания лампы в форме совка и резки 2 слота в нижней части, чтобы слить воду. Нагрузка 1мл шприцы (с 10 мкл градаций) с подготовленной гентамицин решения и приложить 30½ G иглу. Удалить пузырьки воздуха. Поверните иглу на шприц, чтобы убедиться, что угловой наконечник на иглу отворачивается и шприцев маркировка лицом вперед и читаемым. Для контроля инъекций, подготовке шприц и иглу стерильной PBS.
- Подготовка масштаб с чистой поверхностью или взвесить лодку, а также бумажные полотенца для сушки рыбы и рыбы для проведения для инъекций.
- Подготовка отдельных мелких пол-литровых контейнеров с крышками для проведения рыбу для наблюдения в течение ночи после инъекции. Маленькие прозрачные пластиковые спаривания клетки могут быть использованы для этой цели. Этиконтейнеры не должны быть белыми - в идеале они должны быть ясными, что белые эпителиальные слепки пролитой рыбы можно наблюдать на черном скамейке наверху. Заполните каждый контейнер с достаточно рыбы воды рыба плавать комфортно.
2. внутрибрюшинного введения гентамицина
- Обезболить рыбу в 0,016% растворе Tricaine в воде рыба. Подождите, жаберных скорости вентиляции, чтобы замедлить и рыбы больше не реагируют на нажатие.
- Зачерпнуть рыбу, используя рыбу совок, двигаясь от головы к хвосту, чтобы избежать ранения жабры или плавники. Поместите рыбу на бумажные полотенца, чтобы поглотить лишнюю воду, повернув рыбу мягко на бок и стряхните воду из ковшика.
- Зачерпнуть рыбу снова и поместите его в весовой лодке на нулевую отметку шкалы и взвесить рыбу. Округление до ближайшего 0,25 г, и рассчитать необходимое количество гентамицина вводить.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для 0,5 г рыбы используют инъекции 20 мкл на 80 мг / кг доза. - Зачерпнуть рыбу снова и поместите его на сухой сложенной бумажным полотенцем. Если инъекционных используя правую руку, держать бумажное полотенце в левой руке и поместить голову рыбы, указывающая влево, с живота легко доступны.
- Держите шприц с иглой под углом 45 ° к коже живота, передней к клоаке. Введите иглу под кожу, а затем уменьшить угол и сдвиньте иглу вперед под кожу, избегая внутренние органы. Нажмите на поршень соответствующую сумму, паузу, чтобы убедиться, что жидкость не выходит вокруг иглы, то извлеките иглу. Если проведение рыбы устойчивый является проблемой, скобки локти туловища для стабилизации их.
ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте перчатки при работе гентамицин решение. - Падение каждую рыбу в отдельный контейнер. Соблюдайте рыбу и обеспечить его восстановление от анестезии. Держите рыбу на 28,5 ° С в течение ночи.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если рыба не возродить сразу, используйте пластиковые трансфер пипетки для орошения воду по ее жабры, чтобы возродить его. - Используйте тот же шприц и иглу при введении несколько рыбу в той же дозе гентамицина. Утилизировать использованный шприц и иглу в соответствующей биологической контейнер для острых предметов.
3. Сообщение впрыска Наблюдение травмы
- На следующий день (1 день после травмы), поместите рыбу вводят в контейнере на темной поверхности. Белые слепки мертвой эпителиальной ткани из организма пострадавших рыбы должно быть видно. (Смотрите рисунок 1E - H). Если нет слепки, или рыба не пострадал путем инъекции гентамицина (либо доза была слишком низкой, или некоторые из гентамицина утечки в процессе инъекции) или рыбу серьезные травмы в результате полной закупорки мочеточников и клоаки с отшелушиваются ткани.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если рыба не в состоянии очистить слепки из своего тела она, как правило, умирают в течение 2-3 дней и, следовательно, непригодными для большеанализы. Если не видны слепки, усыпить рыбу в воде Tricaine погружением, по крайней мере 10 минут после движение жаберных останавливается. - Если видны белые слепки ткани, установить рыбу в сторону и продолжить проверку других рыб. Соответствующую дозу гентамицина приведет к 80-90% рыб будучи пригодным для использования. Бассейн травмированного рыбу, а затем разделить их на несколько групп лечения, если это необходимо.
4. Уход Восстановление рыбы
- Держите рыбу в чистой воде и непереполненные среды. Грязная вода и скученность приведет к инфекциям и нежелательной смерти. Постарайтесь, чтобы не более чем 6 рыба / 500 мл рыбного воды и менять воду ежедневно, если это возможно.
ПРИМЕЧАНИЕ: Это минимальный объем для сохранения пространства или, если следователь желает, чтобы проводить эксперименты, используя дорогие процедуры наркотиков. - Не кормить рыбу, пока 3 дня после травмы не. Восстановление рыба не будет есть в первом, и любая пища в резервуаре будет разлагаться и способствовать бактерий грowth. Начиная с 3-х дней после травмы, кормить небольшое количество раз в день.
5. Анализ Пострадавшие почек
- Ибо в гибридизация для выражения lhx1a мРНК, почки могут быть собраны из рыбы в требуемых временных точках. Эвтаназии рыбу в воде Tricaine на льду, по крайней мере 10 мин, пока движение жаберных упора, затем удалить голову бритвой, и открыть полости тела и удалить внутренние органы щипцами.
- Оставьте почку на место (пигментированной органа, прикрепленной к спинной стенке тела) и зафиксировать рыбу в 4% параформальдегида в PBS в течение ночи. Рассеките из почки 15 и продолжить стандарта в гибридизация.
- Вкратце, мыть почки в PBST (фосфатный буферный раствор 0,5% Tween 20), проницаемыми протеиназой К в PBST (10 мкг / мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. После зафиксировать 4% параформальдегида, и снова промывают PBST.
- Затем предварительно гибридизацию почки в течение ночи при 68; ° С в буфере для гибридизации (50% формамида, 5x SSC, 50 мкг / мл гепарина, 500 мкг / мл тРНК, 0,1% Tween 20, рН 6,0).
- Инкубируйте образцы дигоксигенином меченным зондом гибридизации в буфере, затем промыть в течение 5-10 мин каждый с 100%, 75%, 50%, 25% буфера гибридизации при 68 ° С, затем перешел к комнатной температуре и мыть дважды в течение 30 мин с 2 x SSC с 0,1% Tween 20, и мыть два раза в течение 30 мин с 0,2 x SSC с 0,1% Tween 20.
- Уравновешивают образца 3x 5 мин в МАВ (0,1 М малеиновой кислоты, 0,15 М NaCl, рН 7,5) и блокируется в течение ночи при 4 ° С в МАВ с 10% козьей сывороткой. Затем образцы инкубируют в течение ночи в анти-дигоксигенин-AP Fab 1: 5000 в МАБ.
- Промыть образец 5x в течение 1 часа в МАВ, и уравновешивают 3 раза в течение 15 мин в NTMT (0,1 М Трис pH9.5, 0,05 М MgCl 2, 0,01 М NaCl, 50 мкл Tween 20).
- Затем обработайте почки с НБТ / БХИФ обнаружить сигнал. Fix почки с 4% параформальдегида и инкубировали в диметилформамиде с Ремове избыток НБТ / BCIP, отбеленные ночь в деионизированной воде. Вымойте почки, а затем сфотографировать в PBST с 50% глицерина под покровное.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Гентамицин травмы могут быть подтверждены визуально наблюдения почечных эпителиальных отливок в воде (рис 1). Различные дозы гентамицина были использованы, чтобы ранить взрослых дикого типа данио TuAB, что приводит к увеличению числа lhx1a + сотовой агрегатов в регенерирующей почки (рис 1А - D). Белые слепки можно легко увидеть в воде 1 день после травмы (рис 1E - Н). Низкая доза гентамицина привели в большинстве рыб, не имеющих слепки, а более высокие дозы в результате более 75% рыбы, имеющие отливок (рис 1I). Во всех группах, выбирая для рыб с отливок привело к более высоким средним уровнем травмы (рис 1J).
После визуального подтверждения травмы, рыба может быть объединены, а затем разделить на контрольных и лечения групп для экспериментов (рис 2). Дикого типа TuAB взрослых данио были ранены с 80мг / кг доза гентамицина. Однажды после травмы, рыба с отливок были отобраны, объединяли, а затем разделить на тепловой шок и не теплового шока групп. Теплового шока рыбы были подвергнуты 37 ° С в течение 16 ч в течение ночи и периода отдыха 8 ч при 28,5 ° C в день. В течение 4 дней и 7 дней после травмы рыбы были зафиксированы на весь горе в гибридизация и уровень травмы оценивали по плотности lhx1a + агрегатов. Тепловой удар сам по себе не производят реакцию травмы (Фигура 2А, D), но теплового шока ускоряет реакцию в поврежденных рыб по сравнению с отсутствием теплового шока управления (фиг.2В, С, G). не на 7 дней после травмы больше не было существенной разницы между группами пострадавших (рис E, F, H).
<сильный> Рисунок 1: Регенерация в ответ на острое повреждение почек по гентамицин является дозозависимым (- Д) выражение LHX 1 мРНК отмечает сотовые заполнители, которые новые нефрон предшественники.. () Через 7 дней после инъекции внутрибрюшинно управления, дикого типа TuAB взрослых данио обычно имеют 0-2 LHX 1а + клеточные агрегаты в целой почки. (B - D) через 7 дней после инъекции гентамицина дисплея рыб многих LHX 1а + клеточных агрегатов, указывающий надежные neonephrogenesis.This ответ зависит от дозы, при более высоких концентрациях гентамицина в результате чего более LHX 1 A + кластеров. (Е - Н) 1 день после инъекции гентамицина, рыба выделяют белые слепки, состоящие из мертвых эпителиальных тканей из почек. (Е) коллекция слепков из в общей сложности 12 рыб, показывая разнообразиеформ и размеров. Обратите внимание на разницу между белыми отливок, указывающих травмы по сравнению с красновато-оранжевой переваривается артемии. (F - Н) Примеры отливок, полученных от отдельных рыб через 1 день после травмы, позволяя воду в баке для урегулирования, пипетки осадок, и наблюдение под микроскопом. (F) без каких-либо Экскременты отливок, что указывает на отсутствие повреждения из рыбы, обработанной 40 мг / кг. (G), среднего размера бросает с указанием травмы от рыбы, обработанной 60 мг / кг. (Н) Большие броски с дополнительным отторгнутый ткани с указанием травмы от рыбы, обработанной 80 мг / кг. (I), в процентах потерпевшего рыбы с отливок увеличивается при 60 мг / кг и 80 мг / кг. (J) После 7 дней, вводят рыбы были обработаны для всей горе в гибридизация для оценки травм. Lhx1a + агрегаты были подсчитаны в одном 5-кратным снимка в самом широком роINT каждого почек и почечной области была измерена с помощью ImageJ. Среднее число агрегатов / мм 2 показана для каждой дозы. В каждом случае рыба с отливок имели более высокий средний чем в общей группе на каждую дозу. р <0,5 для 40 мг / кг по сравнению с 80 мг / кг. Бар Шкала в AD = 0,2 мм, Е = 1 мм, 2 мм FH =.
Рисунок 2:. Температура зависит регенерация 24 часа в сутки, после гентамицина инъекции, ранены дикого типа TuAB взрослых данио с отливок, объединяли и затем разделяется на группы теплового шока и не теплового шока группы. Рыба выдерживали при 37 ° С в течение 16 ч в течение ночи каждую ночь после с периодом отдыха 8 ч при 28,5 ° C в течение каждого дня. (А, D) Контроль пострадал рыбу не выразить lhx1a после теплового шока. (B, C) Тепло шОк ускоряет реакцию регенерации, с более кластеров уже появляются на 4 дня после травмы по сравнению с потерпевшей рыбы без теплового шока (р <0,5, т-тест Стьюдента). (E, F) После 7 дней, нет никакой существенной разницы между потерпевшими рыбы, обработанной теплового шока и не теплового шока. (G, H) Количественное определение травмы путем подсчета lhx1a + агрегатов на мм 2. Каждая точка представляет собой отдельную рыбу. Количество рыбы и среднего ответ указаны выше каждой группы. Масштаб бар = 0,2 мм.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Данио идеально подходит для изучения регенерации взрослых органов, включая взрослых мезонефрические почек 6. Недавние исследования воспользовались молекулярных маркеров и новых трансгенных линий репортер лучше характеризуют действия, которые происходят во время регенерации нефрона и то, что клетки могут быть ответственны 7,12. Наблюдение мочевых отливок был использован на протяжении более века, чтобы диагностировать заболевание почек у людей 16. Здесь мы используем присутствие отливок в качестве простого, неинвазивного и ранним индикатором степени острого повреждения почек после введения гентамицина. Заметим, что рыбы, которые не производят забросы либо лишь слегка ранен (и не образуют новых нефронов) или слишком ранения, чтобы восстановить и обычно умирают в течение первых 3 дней. Таким образом, важным шагом в протоколе является индивидуальный наблюдение рыбы после травмы, а также наличие мочевого ставит в качестве индикатора надлежащего уровня травмы. Мы также видим, выражение lhx1aв агрегатах, начиная с 4-й день после травмы. Это указывает на то, что первые 3 дня после повреждения являются важным период восстановления.
Если большое количество рыбы пострадал, или слишком много рыбы умирают в течение эксперимента, проверить, чтобы убедиться, что внутрибрюшинные инъекции делаются правильно. Это может помочь, чтобы добавить нетоксичную краску, такие как феноловый красный с гентамицина решения для визуализации любой утечки во время инъекции. Маркировка иглу с перманентным маркером или кусочком ленты 2 мм от кончика может служить в качестве руководства для предотвращения нажатия иглу слишком далеко в рыбу. Кроме того, дозировка гентамицина возможно, должны быть скорректированы. Вводят рыбу с диапазоном доз гентамицина и проверить почки на экспрессию мРНК lhx1a либо в гибридизация или количественной ОТ-ПЦР.
Ограничение этого метода является то, что требуется жилье индивидуальный рыбу на ночь, прежде чем выбрать ранения рыбыэкспериментирование. Чтобы исследовать очень рано события в регенерации (в течение первых 24 часов после травмы) рыба, возможно, потребуется пройти непрерывный экспериментальное лечение, даже во время индивидуального периода наблюдения. Стоимость лечения отдельных рыб с препаратами, например, может быть очень высокой. Наша методика является усовершенствованием существующего метода острого повреждения почек с использованием гентамицин, потому что он позволяет исследователю устранить выбросы, используя неинвазивный визуальный процесс отбора. Этот надежный, равномерное и воспроизводимое модель травмы теперь могут быть использованы для эффективного тестирования гипотез о регенерации почек у взрослых рыбок данио.
Мы заметили, что, хотя регенерация происходит как в мужской и женской данио (все данные, показанные здесь, от самок), регенерация в ответ на гентамицин инъекции у мужчин гораздо более изменчивы. Это может быть из-за технических причин, потому что их тела длинные, тонкие и более мускулистым, в то время как женщины имеют гораздо больший бЭлли с рыхлой, тонкой кожи, что позволяет легче инъекции и больший брюшную полость для размещения объемов закачки без утечки. Альтернативная возможность, что андрогены, произведенные самцов может иметь некоторое влияние на процесс регенерации 17. Nachtrab др. Обнаружили, что эффект андрогенов зависит штамм, который указывает, что генетический фон может модулировать уровни андрогенов. Незначительные изменения в генетической фоне TuAB рыбы, используемых в нашем исследовании можно объяснить изменчивость видел у мужчин, но по-видимому андрогены не только источником изменчивости и других генетических локусов может внести свой вклад в неоднородности в ответ на повреждение. Мы также обнаружили, что различные трансгенные линии данио могут по-разному реагировать гентамицина травмы. Например, Tg (Lhx1a: GFP), 12 линии в руках требуется 120 мг / кг в течение эффективного индукции травмы (данные не показаны). Эти наблюдения подчеркивают важность использования однополые Сиблин контролирует в исследованиях травмы к минимуму экспериментальной изменчивости.
Многие трансгенные линии данио использовать теплового шока чувствительный промотор в качестве средства, чтобы индуцировать экспрессию трансгена. Так данио являются пойкилотермных и не регулировать свою температуру тела, они вынуждены выполнять физиологические функции при температуре окружающей их среды. В контексте экспериментов с использованием hsp70-промотор, чтобы выразить доминирующие трансгены модулировать реакцию регенерации, мы неожиданно обнаружено, что реакция регенерации был ускорен высокой температуре. Таким образом, определение влияния температуры на ответ регенерации в данной системе становится важно планировать сроки экспериментов (захвата пик ответ регенерации например) и делает сравнение с регенерацией при нормальных температурах проблемных. Другие индуцибельные системы, использующие, например, CreERT и тамоксифен для индукции трансгенной может быть лучше подходит тO исследования регенерации почек взрослого. Точно так же, новые генетические методы индукции травмы, такие как CreERT активации токсичных трансгенов или индуцируемого повреждения, используя бактериальный нитроредуктазы / метронидазол 18,19 расширит диапазон возможных экспериментов, чтобы лучше понять neonephrogenesis и регенерации почек.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| gentamicin sodium sulfate | Sigma | G1264 | TOXIC, purity varies from batch to batch |
| plastic transfer pipets | Fisher | 13-711-7M | |
| 1 ml Norm-Ject syringes | Electron Microscopy Sciences | 72520 | green plastic syringes, ordinary 1 ml syringes are OK, but harder to read accurately |
| 30 G1/2 needles | Becton Dickinson | 305106 | |
| ethyl 3-aminobenzoaate methanesulfonate salt (tricaine) | Sigma | A5040 | IRRITANT |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Make 4% in 1x PBS for working solution |
References
- Humphreys, B. D., et al. Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury. Cell Stem Cell. 2, 284-291 (2008).
- Humphreys, B. D., et al. Repair of injured proximal tubule does not involve specialized progenitors. Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 9226-9231 (2011).
- Guo, J. K., Cantley, L. G. Cellular maintenance and repair of the kidney. Annu Rev Physiol. 72, 357-376 (2010).
- Cirio, M. C., de Groh, E. D., de Caestecker, M. P., Davidson, A. J., Hukriede, N. A. Kidney regeneration: common themes from the embryo to the adult. Pediatr Nephrol. , (2013).
- Little, M. H., Bertram, J. F. Is there such a thing as a renal stem cell. J Am Soc Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).
- Reimschuessel, R. A fish model of renal regeneration and development. ILAR J. 42, 285-291 (2001).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. Heart regeneration in zebrafish. Science. 298, 2188-2190 (2002).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Dev Biol. 320, 161-174 (2008).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Swanhart, L. M., et al. Characterization of an lhx1a transgenic reporter in zebrafish. Int J Dev Biol. 54, 731-736 (2010).
- Diep, C. Q., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-100 (2011).
- Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kidney Int. 79, 33-45 (2011).
- Hentschel, D. M., et al. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am J Physiol Renal Physiol. 288, F923-F929 (2005).
- Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. Dissection of the adult zebrafish kidney. J Vis Exp. , (2011).
- Fogazzi, G. B., Cameron, J. S. Urinary microscopy from the seventeenth century to the present day. Kidney Int. 50, 1058-1068 (1996).
- Nachtrab, G., Czerwinski, M., Poss, K. D. Sexually dimorphic fin regeneration in zebrafish controlled by androgen/GSK3 signaling. Curr Biol. 21, 1912-1917 (2011).
- Zhou, W., Hildebrandt, F. Inducible podocyte injury and proteinuria in transgenic zebrafish. J Am Soc Nephrol. 23, 1039-1047 (2012).
- Huang, J., et al. A zebrafish model of conditional targeted podocyte ablation and regeneration. Kidney Int. 83, 1193-1200 (2013).
