Introduction
Njuren är nödvändig för fluid homeostas, blodtrycksreglering och filtrering av avfall från kroppen. Även däggdjur kan reparera befintliga nefroner efter skada med hjälp av differentierade epitelceller 1-4, de verkar sakna en pool av reserverade stamceller 5 och inte kan bilda nya nefroner de novo. I motsats till däggdjur, vuxna fiskar kan bilda nya nefroner hela vuxenlivet för att stödja tillväxten av fisk och som svar på skada 6,7. Den zebrafisk, Danio rerio, är en ovärderlig modellorganism för studier av organregenere 8-10 och har potential att ge kraftfulla insikter ansökningar om ingenjörs reparation av mänskliga njurar. Tg (Lhx1a: EGFP) transgen 11 har visat sig märka en pool av nefronet stamceller i den vuxna zebrafisk njuren 12, men mekanismer som styr svaret från lhx1a + celler till skada rEmain oklar.
Aminoglykosiden gentamicin är en allmänt använd antibiotikum med kända nefrotoxiska och ototoxiska effekter på människor 13. Intraperitoneal injektion av gentamicin är en etablerad metod för att inducera akut njursvikt i fisk 6. Denna skada på fisk härmar förlusten av rörformiga epitel och ärrbildning i glomeruli som inträffar hos människa efter gentamicin överdos 14. Induktion skada i zebrafisk av gentamicin injektion är ett bekvämt sätt att framkalla en stark, synkron förnyelse svar, med många nya nephrons produceras och samtidigt fortsätter genom olika stadier av bildning, proliferation och differentiering.
Detta protokoll detaljer vår metod för robust och reproducerbart skada i den vuxna zebrafisk njuren genom att använda en icke-invasiv visuell screening process för att minimera extremvärden. Vi tar fördel av det faktum att skadan med gentamicin leder till döden av epitelial njurvävnad och formatjon av njurtubulis kast, varpå dessa ansamlas i massor i mesonephric kanaler och kloak. Dessa leds av fisk och kan observeras visuellt i vattnet. Detta ger oss möjlighet att screena för fisk med stark nonlethal skada, som sedan kan slås samman för ytterligare experiment. Minimera antalet oskadade fisk eller fisk som dör innan de når slutpunkten av experimentet leder till en mer enhetlig och effektiv datainsamling och analys. Dessutom krävs inga särskilda anordningar eller reagens som krävs, vilket gör denna metod kostnadseffektiva och lämpliga för användning i en akademisk eller undervisning inställning. Med vår metod, här visar vi de ökande effekterna av gentamicin dos på njure förnyelse samt effekten av ökad temperatur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Etik uttalande: Alla experiment genomfördes i enlighet med Massachusetts General Hospital riktlinjer för användning av djur i forskning.
1. förväg preparering
- Bestäm hur många vuxna zebrafisk 6-12 månader gamla till skada. Planera att skada 10-20% mer fisk än vad som behövs. För att minimera variabiliteten, användning åldersmatchade syskon fisk föds upp tillsammans i samma tank så att de är ungefär samma storlek och har mindre genetisk variation. Kvinnliga fisk är mycket lättare att injicera i jämförelse med den manliga fisk, på grund av den större kapacitet av buken. Men män och kvinnor ger liknande resultat.
- När man gör experimentet för första gången, plotta en kurva dos för att bestämma den lämpliga gentamicin dos för en specifik stam av fisk. Testa varje nytt parti gentamicin före användning i experiment eftersom renheten hos gentamicin varierar från parti till parti. Rätt Dosering ska bestämmas genom att bedöma expressipå skademarkörer såsom lhx1a. (Se figur 1A - D).
- Bered gentamicinlösning. Gentamicin stamlösning kan förvaras i -20 ° C och tinas för senare användning. Till exempel för en 80 mg / kg dos (80 mg gentamicin / kg kroppsvikt) i en fisk som väger 0,5 g, förbereda 2 mg / ml gentamicin i fosfatbuffrad saltlösning som en bekväm arbetslösning. Detta ger en 20 pl gentamicin för intraperitoneal injektion i fisken.
OBS: I allmänhet 80-120 mg / kg uppnå goda resultat, men doser så låga som 40 mg / kg vara lämplig. Gentamicin kan också köpas i lösning för att minimera farlig exponering för laboratoriepersonal.
OBS: Gentamicin i höga doser kan vara giftiga. Använd handskar och mask när vägning pulver. - Bered 100 ml 0,016% tricaine vatten för anesthetizing fisk. Bered en 25x lager av tricaine (4 g / 1 L) upplöst i sterilt milliQ vatten justera till pH 7 och förvara vid 4 ° C fram till användning. Späd 4 ml i 100 ml av fisk vatten för en arbetskoncentration av 0,016%.
OBS: Tricaine är ett bedövningsmedel och hudirriterande, handskar vid hantering. - Gör en fisk ösa ur en plast överföringspipett genom att skära löken i en skopa form och skär 2 slitsar i botten för att tömma vatten. Last 1 ml sprutor (med 10 pl graderingar) med beredda gentamicin lösning och bifoga en 30½ G nål. Ta bort eventuella luftbubblor. Vrid nålen på sprutan för att vara säker på att den vinklade spetsen på nålen vänd bort och sprutan markeringarna är riktade framåt och läsbar. För kontroll injektioner, förbereda en spruta och nål med steril PBS.
- Förbered en skala med en ren yta eller väga båt samt pappershanddukar för att torka fisk och för att hålla fisk för injektion.
- Förbered enskilda små behållare halv-liters med lock för att hålla fisk för observation över natten efter injektion. Små genomskinliga plast parning burar är användbara för detta ändamål. Dessabehållare bör inte vara vit - helst bör de vara klart så att de vita epitelceller avgjutningar skjul av fisken kan observeras på en svart bänk. Fyll varje behållare med tillräckligt med fisk vatten för fisken att simma bekvämt.
2. intraperitoneal injektion av gentamicin
- Söva fisken i 0,016% tricaine lösning i fisk vatten. Vänta på gäl ventilationsgraden att sakta och för fisken att inte längre svarar på beröring.
- Scoop upp fisken med hjälp av fisk scoop, flyttar från huvudet mot svansen för att undvika skada gälarna eller fenor. Placera fisken på hushållspapper för att absorbera överflödigt vatten genom att vrida fisken ut försiktigt på sin sida och skaka av överflödigt vatten från skopan.
- Scoop upp fisken igen och placera den i väga båten på Nollad skala och väga fisken. Runda till närmaste 0,25 g, och beräkna den lämpliga mängden gentamicin att injicera.
OBS: För en 0,5 g fisk använda en 20 pl injektion vid 80 mg / kg dos. - Scoop upp fisken igen och placera den på en torr vikta pappershandduk. Om injicera använder höger hand, håller pappershandduk i vänster hand och placera fisken huvud pekar åt vänster, med magen lättillgänglig.
- Håll sprutan med nålen i 45 ° vinkel mot huden på magen, främre till kloak. Tryck nålen precis under huden, sedan minska vinkeln och skjut nålen framåt under huden, undvika de inre organen. Tryck in kolven rätt mängd, pausa för att se till att ingen vätska kommer ut runt nålen, sedan dra nålen. Om du håller fisken stadigt är ett problem, att stag armbågarna mot bålen stabilisera dem.
OBS: Använd handskar vid hantering av gentamicin lösning. - Släpp varje fisk i en enskild behållare. Observera fisk och säkerställa att det återvinns från anestesi. Håll fisk på 28,5 ° C över natten.
OBS: Om fisken inte återuppliva omedelbart, använder en plast transfer pipett att vattna vatten över sina gälarna att återuppliva den. - Använd samma spruta och kanyl när du injicerar flera fisk med samma dos av gentamicin. Kassera den använda sprutan och nålen i lämplig biologiskt avfallsbehållare.
3. efter injektion Observation av skada
- Nästa dag (1 dag efter skada), placera den injicerade fisk i sin behållare på en mörk yta. Vita avgjutningar av döda epitelvävnad utsöndras av de skadade fisk ska vara synliga. (Se Figur 1E - H). Om det inte finns några kastar antingen fisken var inte skadas av gentamicin injektion (antingen dosen var för låg, eller en del av gentamicin läckte under insprutningsprocessen) eller fisken var svårt skadade vilket resulterade i fullständig blockering av urinledare och cloaca med sloughed vävnad.
OBS: Om fisken inte kan rensa avgjutningar från sin kropp kommer vanligtvis dör inom 2-3 dagar och är därför oanvändbar för längreanalyser. Om inga avgjutningar är synliga, euthanize fisken i tricaine vatten genom nedsänkning under minst 10 min efter gill rörelsen stannar. - Om vita vävnads avgjutningar är synliga, ställa fisken åt sidan och fortsätta kontrollera andra fiskar. En lämplig dos av gentamicin kommer att resultera i 80 till 90% av fisken är användbar. Pool den skadade fisk och sedan dela upp dem i olika behandlingsgrupper om så önskas.
4. Skötsel av Återställa Fish
- Håll fisk i rent vatten och uncrowded miljö. Smutsigt vatten och trängsel kommer att leda till infektioner och oavsiktliga död. Försök att hålla högst 6 fisk / 500 ml fisk vatten och byta vatten dagligen om möjligt.
OBS: Detta är en minimivolym för bevarande av rymden eller om utredaren vill utföra experiment med dyra läkemedelsbehandlingar. - Inte mata fiskarna fram till 3 dagar efter skada. Återställa fisk äter inte i början, och någon mat i tanken kommer att sönderdelas och främja bakterie growth. Med början vid 3 dagar efter skada, mata en liten mängd en gång om dagen.
5. Analys av skadade Njurar
- För in situ hybridisering för lhx1a mRNA-uttryck, kan njurarna skördas från fisk vid önskade tidpunkter. Euthanize fisken i tricaine vatten på is åtminstone 10 min tills gill rörelse stannar sedan bort huvudet med ett rakblad och öppna kroppen hålighet och ta bort de inre organen med pincett.
- Låt njuren på plats (pigmenterad organ fäst på rygg kroppen väggen) och fixera fisken i 4% paraformaldehyd i PBS över natten. Dissekera ut njuren 15 och fortsätta med standard in situ hybridisering.
- I korthet, tvätta njurarna i PBST (fosfatbuffrad saltlösning 0,5% Tween 20), permeabiliserades med proteinas K i PBST (10 | ig / ml) under 1 h vid rumstemperatur. Post-fix med 4% paraformaldehyd, och tvättades igen med PBST.
- Därefter för-hybridiseras njurarna över natten vid 68; ° C i hybridiseringsbuffert (50% formamid, 5 x SSC, 50 | j, g / ml heparin, 500 | ig / ml tRNA, 0,1% Tween 20, pH 6,0).
- Inkubera proverna med digoxigenin märkt prob i hybridiseringsbuffert, tvätta sedan i 5-10 min vardera med 100%, 75%, 50%, 25% hybridiseringsbuffert vid 68 ° C, sedan flyttas till rumstemperatur och tvätta två gånger under 30 min med 2x SSC med 0,1% Tween 20, och tvätta två gånger under 30 minuter med 0,2 x SSC med 0,1% Tween 20.
- Jämvikta provet 3x 5 min i MAB (0,1 M maleinsyra, 0,15 M NaCl, pH 7,5) och blockerades över natten vid 4 ° C i MAB med 10% getserum. Sedan inkubera prover natten i anti-digoxigenin-AP Fab 1: 5000 i MAB.
- Tvätta provet 5x under 1 h i MAB och jämvikta 3x under 15 min i NTMT (0,1 M Tris pH 9,5, 0,05 M MgCl2, 0,01 M NaCl, 50 ^ il Tween 20).
- Behandla sedan njurarna med NBT / BCIP att upptäcka signalen. Fäst njurarna med 4% paraformaldehyd och inkuberades i dimetylformamid till Remove överskott NBT / BCIP, blekt natten i avjoniserat vatten. Tvätta njurarna och sedan fotografera i PBST med 50% glycerol under ett täckglas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Gentamicin skada kan bekräftas visuellt genom observation av njur epitelceller avgjutningar i vattnet (Figur 1). Olika doser av gentamicin användes för att skada vuxen vildtyp TUAB zebrafisk, vilket resulterar i allt fler lhx1a + cellulära aggregat i regenererande njuren (Figur 1A - D). Vita avgjutningar kan lätt ses i vattnet 1 dag efter skada (Figur 1E - H). En låg dos av gentamicin resulterade i de flesta fiskar som inte har några kast, medan högre doser resulterade i över 75% av fisk med avgjutningar (figur 1I). I alla grupper, att välja för fisk med avgjutningar resulterade i en högre genomsnittlig skadenivån (figur 1J).
Efter visuell bekräftelse av skada, kan fisk slås samman och sedan delas upp i kontroll- och behandlingsgrupper för experiment (Figur 2). Vildtyp TUAB vuxna zebrafisk skadades med ett 80mg / kg dos av gentamicin. En dag efter skada, var fisk med avgjutningar valt samman och sedan delas upp i värmechock och inga värmechockgrupper. Värmechock fisken exponerades för 37 ° C under 16 h över natten och en 8 h vilotid vid 28,5 ° C varje dag. Vid 4 dagar och 7 dagar efter skada fisk fixerades under hela montera in situ hybridisering och skadenivå bedömdes genom densiteten hos lhx1a + aggregat. Värmechock ensamt inte producerar en skada svar (figur 2A, D), men värmechock accelererar svaret i skadade fisk jämfört med inga värmechock kontroller (fig 2B, C, G). Av 7 dagar efter skada det inte längre fanns en signifikant skillnad mellan skadade grupper (Figur E, F, H).
<strong> Figur 1: Regeneration som svar på akut njursvikt genom gentamicin är dosberoende (A - D) lhx 1 mRNA uttryck markerar cellaggregat, som är nya nephron stamceller.. (A) 7 dagar efter kontroll ip injektion, vildtyp TUAB vuxna zebrafisk har normalt 0-2 lhx 1a + cellulära aggregat i hela njuren. (B - D) 7 dagar efter gentamicin injektion fish display många lhx 1a + cellulära aggregat, vilket tyder på robusta neonephrogenesis.This svar är dosberoende, med högre koncentrationer av gentamicin resulterar i fler lhx 1 a + kluster. (E - H) 1 dag efter injektion av gentamicin, fisk utsöndrar vita kast bestående av döda epitelvävnad från njurarna. (E) En samling av avgjutningar av totalt 12 fiskar som visar de olikaolika former och storlekar. Observera skillnaden mellan vita kast indikerar skada jämfört med rödaktigt-orange diger artemia. (F - H) Exempel på avgjutningar uppsamlade från enskilda fiskar 1 dag efter skada genom att låta vattnet i tanken för att sedimentera, pipettering sedimentet ut och observation under ett mikroskop. (F) avföring utan avgjutningar, vilket indikerar ingen skada från en fisk behandlad med 40 mg / kg dos. (G) medelstora kastar indikerar skada från en fisk behandlad med 60 mg / kg dos. (H) Större avgjutningar med ytterligare sloughed vävnad indikerande skada från en fisk behandlad med 80 mg / kg dos. (I) Den procentuella andelen skadade fisk med avgjutningar ökas vid 60 mg / kg och 80 mg / kg. (J) Efter 7 dagar, injicerade fisk bearbetades för hela montera in situ hybridisering för att bedöma skadan. Lhx1a + aggregat räknades i en enda 5x bild tagen vid det bredaste point av varje njure och njurområdet mättes med hjälp av ImageJ. Genomsnittligt antal aggregat / mm 2 visas för varje dos. I varje fall, fisk med avgjutningar hade en högre genomsnittlig än den totala gruppen vid varje dos. p <0,5 för 40 mg / kg jämfört med 80 mg / kg. Skalstreck i AD = 0,2 mm, E = 1 mm, FH = 2 mm.
Figur 2:. Temperaturberoende regenerering 24 timmar efter gentamicin injektion, skadade vildtyp TUAB vuxna zebrafisk med avgjutningar slogs samman och sedan delas upp i en värmechock grupp och ingen värmechock grupp. Fisk upprätthölls vid 37 ° C under 16 h över natten varje natt efteråt med en 8 h viloperiod vid 28,5 ° C under varje dag. (A, D) Kontroll oskadad fisk inte uttrycka lhx1a efter värmechock. (B, C) Värme shock accelererar regenere svar med flera grupper som redan uppträder vid 4 dagar efter skada jämfört med skadad fisk utan värmechock (p <0,5, t-test). (E, F) Efter 7 dagar, det finns ingen signifikant skillnad mellan skadad fisk behandlad med värmechock och ingen värmechock. (G, H) Kvantifiering av skada genom att räkna lhx1a + aggregat per mm 2. Varje punkt representerar en individuell fisk. Antal fiskar och genomsnittlig respons indikeras ovanför varje grupp. Skalstreck = 0,2 mm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den zebrafisk är idealiska för att studera regeneration av vuxna organ, inklusive den vuxna mesonephric njuren 6. Nyligen genomförda studier har utnyttjat molekylära markörer och nya transgena reporter linjer för att bättre karaktärisera de steg som inträffar under nefronet förnyelse och vilka celler kan vara ansvarig 7,12. Observation av urin kast har använts i över ett sekel för att diagnostisera njursjukdom hos människor 16. Här använder vi förekomsten av avgjutningar som ett enkelt, icke-invasiv och tidig indikator på omfattningen av akut njursvikt efter gentamicin injektion. Vi observerar att fisk som inte producerar avgjutningar antingen bara milt skadade (och inte bilda nya nefroner) eller alltför skadad för att återhämta sig och oftast dör inom de första 3 dagarna. Därför är ett kritiskt steg i protokollet individuell observation av fisk efter skada, och närvaron av urin kastar som en indikator på rätt skadenivåer. Vi ser också lhx1a uttrycki aggregat med start på dag 4 efter skada. Detta tyder på att de 3 första dagarna efter skada är en avgörande period för återvinning.
Om ett stort antal fiskar är oskadda, eller för många fiskar dör under försöket, kontrollera att se till att de intraperitoneala injektioner görs på rätt sätt. Det kan hjälpa att lägga till ett icke-toxiskt färgämne, såsom fenolrött till gentamicinlösning att visualisera eventuella läckage under injektion. Märkning nålen med en permanent markör eller en bit tejp 2 mm från spetsen kan tjäna som en guide för att förhindra att trycka nålen för långt in i fisken. Dessutom kan doseringen av gentamicin behöva justeras. Injicera fisk med ett intervall av gentamicin doser och testa njurarna för expression av lhx1a-mRNA, antingen genom in situ-hybridisering eller kvantitativ RT-PCR.
En begränsning av denna teknik är att den kräver bostäder enskilda fiskar över natten innan du väljer skadad fiskexperimenterande. För att undersöka mycket tidiga händelser i regenerering (inom de första 24 timmar efter skada) fisk kan behöva genomgå kontinuerlig experimentell behandling, även under de enskilda observationsperioden. Kostnaden för behandling av enskilda fiskar med läkemedel, till exempel, kan vara mycket hög. Vår teknik är en förbättring jämfört med den nuvarande metoden för akut njursvikt genom att använda gentamicin, eftersom det gör det möjligt för forskare att eliminera extremvärden genom att använda en icke-invasiv visuell screening process. Denna robusta, enhetlig och reproducerbar skada modellen kan nu användas för att på ett effektivt sätt att testa hypoteser om njure förnyelse i den vuxna zebrafisk.
Vi observerade att även regenerering sker i både manliga och kvinnliga zebrafisk (alla data som visas här är från hondjur), är förnyelse som svar på gentamicin injektion hos män betydligt mer varierande. Detta kan bero på tekniska skäl, eftersom deras kroppar är långa, tunna och mer muskulös, medan honorna har en mycket större bElly med lösare, tunnare hud, vilket gör det lättare injektion och en större bukhålan för att rymma injektion volymer utan läckage. En alternativ möjlighet är att androgener produceras av män kan ha viss effekt på regenereringsprocessen 17. Nachtrab et al. Fann att effekten av androgener var stam beroende, vilket tyder på att den genetiska bakgrunden kan modulera androgennivåer. Små variationer i genetisk bakgrund av TUAB fisk som används i vår studie kan förklara variationen ses hos män, men förmodligen androgener är inte den enda källan till variation och andra genetiska loci kan bidra till heterogenitet i svar på skada. Vi har också funnit att olika transgena linjerna av zebrafisk kan reagera olika på gentamicin skada. Till exempel, är Tg (Lhx1a: GFP) 12 linje i våra händer kräver 120 mg / kg för effektiv induktion av skada (data ej visade). Dessa observationer betona vikten av att använda samma kön sibLing kontroller i skadestudier för att minimera experimentell variabilitet.
Många zebrafisk transgena linjerna använda en värmechockkänslig promotor som ett medel för att inducera uttryck av en transgen. Eftersom zebrafisk är växelvarma och inte reglera sin kroppstemperatur, de tvingas att utföra fysiologiska funktioner vid en temperatur av sin omgivning. I samband med experiment med användning av hsp70-promotorn för att uttrycka dominanta transgener för att modulera regenereringssvar, oväntat observerade vi att regenereringsresponsen påskyndas genom högre temperatur. Därför bestämma effekten av temperaturen på regenereringssvar i ett givet system blir avgörande för att planera tidpunkten för experiment (fånga toppen av regenereringssvaret till exempel) och gör jämförelser regenerering vid normala temperaturer problematiska. Andra inducerbara system som använder till exempel CreERT och tamoxifen för transgen induktion kan vara bättre lämpade to studier av vuxna njure förnyelse. Likaså nyare genetiska metoder för skade induktion såsom CreERT aktivering av giftiga transgener eller inducerbar skada genom att använda bakterie nitroreduktas / metronidazol 18,19 kommer att bredda utbudet av möjliga experiment för att bättre förstå neonephrogenesis och njure förnyelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| gentamicin sodium sulfate | Sigma | G1264 | TOXIC, purity varies from batch to batch |
| plastic transfer pipets | Fisher | 13-711-7M | |
| 1 ml Norm-Ject syringes | Electron Microscopy Sciences | 72520 | green plastic syringes, ordinary 1 ml syringes are OK, but harder to read accurately |
| 30 G1/2 needles | Becton Dickinson | 305106 | |
| ethyl 3-aminobenzoaate methanesulfonate salt (tricaine) | Sigma | A5040 | IRRITANT |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Make 4% in 1x PBS for working solution |
References
- Humphreys, B. D., et al. Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury. Cell Stem Cell. 2, 284-291 (2008).
- Humphreys, B. D., et al. Repair of injured proximal tubule does not involve specialized progenitors. Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 9226-9231 (2011).
- Guo, J. K., Cantley, L. G. Cellular maintenance and repair of the kidney. Annu Rev Physiol. 72, 357-376 (2010).
- Cirio, M. C., de Groh, E. D., de Caestecker, M. P., Davidson, A. J., Hukriede, N. A. Kidney regeneration: common themes from the embryo to the adult. Pediatr Nephrol. , (2013).
- Little, M. H., Bertram, J. F. Is there such a thing as a renal stem cell. J Am Soc Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).
- Reimschuessel, R. A fish model of renal regeneration and development. ILAR J. 42, 285-291 (2001).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).
- Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. Heart regeneration in zebrafish. Science. 298, 2188-2190 (2002).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Dev Biol. 320, 161-174 (2008).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Swanhart, L. M., et al. Characterization of an lhx1a transgenic reporter in zebrafish. Int J Dev Biol. 54, 731-736 (2010).
- Diep, C. Q., et al. Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish. Nature. 470, 95-100 (2011).
- Lopez-Novoa, J. M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A. I., Lopez-Hernandez, F. J. New insights into the mechanism of aminoglycoside nephrotoxicity: an integrative point of view. Kidney Int. 79, 33-45 (2011).
- Hentschel, D. M., et al. Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease. Am J Physiol Renal Physiol. 288, F923-F929 (2005).
- Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. Dissection of the adult zebrafish kidney. J Vis Exp. , (2011).
- Fogazzi, G. B., Cameron, J. S. Urinary microscopy from the seventeenth century to the present day. Kidney Int. 50, 1058-1068 (1996).
- Nachtrab, G., Czerwinski, M., Poss, K. D. Sexually dimorphic fin regeneration in zebrafish controlled by androgen/GSK3 signaling. Curr Biol. 21, 1912-1917 (2011).
- Zhou, W., Hildebrandt, F. Inducible podocyte injury and proteinuria in transgenic zebrafish. J Am Soc Nephrol. 23, 1039-1047 (2012).
- Huang, J., et al. A zebrafish model of conditional targeted podocyte ablation and regeneration. Kidney Int. 83, 1193-1200 (2013).
