Summary
الغدة الدمعية (LG) هي جهاز المتفرعة التي تنتج مكونات المائية للدموع اللازمة للحفاظ على صحة العين والرؤية. نحن هنا وصف الفئران LG تشريح والثقافة فيفو السابقين تقنيات فك مسارات الإشارات المشاركة في LG التنمية.
Abstract
الغدة الدمعية (LG) تفرز الدموع المائية اللازمة للحفاظ على بنية ووظيفة القرنية، وهي النسيج الشفاف الأساسية للرؤية. في الإنسان يقيم في LG واحدة في المدار فوق نهاية الجانبية من كل عين تقديم الدموع على سطح العين خلال 5 - 3 قنوات. الماوس لديه ثلاثة أزواج من الغدد العين الرئيسية، والأكثر درس منها الغدة الدمعية exorbital (LG) الواقعة الأمامي وبطني إلى الأذن. على غرار أجهزة غدي أخرى، فإن إل جي تطور من خلال عملية التشكل المتفرعة الظهارية التي برعم الظهارية واحد داخل اللحمة المتوسطة المختصرة يخضع جولات متعددة من برعم وتشكيل لاصق لتشكيل شبكة مترابطة معقدة من عنيبات إفرازية والقنوات. وقد تم توثيق هذه العملية معقدة بشكل جيد في العديد من أجهزة الظهارية أخرى مثل البنكرياس والغدة اللعابية. ومع ذلك، فقد كانت LG أقل تكتشف الكثير وآليات السيطرة على التشكل وضعيفة تحتوقفت. نعتقد أن هذا التمثيل الناقص كنظام النموذج هو نتيجة للصعوبات المرتبطة الحقائق، تشريح وزراعة وLG. وبالتالي، هنا وصفنا التقنيات لتشريح الجنينية الحصاد وبعدها LG وطرق فيفو السابقين الثقافة من الأنسجة.
Introduction
الغدة الدمعية (LG) هي المسؤولة عن إفراز المسيل للدموع المائي الحرج لحدة البصر والصحة، والصيانة، وحماية خلايا سطح العين. النتائج LG الخلل في واحدة من اضطرابات العين الشائعة والمنهكة: مرض العين الجافة تعاني من نقص مائي، التي تتميز تهيج العين، والحساسية الخفيفة، وانخفضت الرؤية 1. في الإنسان يقيم LG في المدار فوق نهاية الجانبية للعين حيث 5 - 3 مطرح الدموع القنوات ديعة على سطح العين. الماوس لديه ثلاثة أزواج من الغدد العين الرئيسية، والأكثر درس منها الغدة الدمعية (LG) الواقعة الأمامي وبطني إلى الأذن (exorbital) بالدموع السفر إلى العين عبر القناة المفرغة واحد. على غرار أجهزة غدي أخرى، فإن إل جي تطور من خلال عملية التشكل المتفرعة الظهارية التي برعم الظهارية واحد داخل اللحمة المتوسطة المختصرة يخضع جولات متعددة من برعم وتشكيل لاصق للم شبكة مترابطة معقدة من عنيبات إفرازية والقنوات (الشكل 1) 2. خلال تطوير يصبح ظهارة أوعية دموية، وكذلك بشدة معصب من قبل الأعصاب الحركية للعقدة الجناحية وإلى حد أقل من قبل الأعصاب متعاطفة من العقدة الرقبية العلوية 3. التفاعل بين كل هذه الخلايا، أي أنواع الخلايا العصبية، الظهارية، البطانية والوسيطة، ضرورية لوظيفة وصيانة الأنسجة الكبار. ومع ذلك، فإن الآليات الجزيئية الكامنة تنسيق LG التنمية والتجدد وكذلك كيف يرشد نوع الاتصال بين الخلايا هذه العمليات لا تزال غير واضحة.
وقد سمح ظهور الجنينية الثقافة فيفو السابقين تقنيات تحديد مسارات النمو والتجدد في العديد من الأجهزة المتفرعة 4. زراعة فيفو السابقين يعطي للباحث القدرة على التعامل مع الجهاز (ليالميكانيكي أو وراثية أو كيميائية) في ظل ظروف محددة بالإضافة إلى تميز الجهاز وتطوير خلية خلية التفاعل في الوقت الحقيقي. إل جي exorbital من الفأرة هي قابلة للغاية لهذه التقنية وحددت الدراسات التي أجريت مؤخرا الأنظمة التي تنظم تطوره 2،5 الإشارة. ومع ذلك، على الرغم من الحاجة إلى فهم الاشارات الجزيئية التي تقوم عليها LG التطوير والتجديد، وأنه لا يزال حاليا دراسة سلوكه، على الأرجح بسبب الصعوبات التقنية في عزل الجهاز. في هذه الورقة، ونحن تصف كيفية عزل وتنفيذ فيفو السابقين الثقافة من الفئران الجنينية LG لتحديد البرامج التنموية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم تنفيذ جميع الأعمال الحيوان تحت يتفق تماما مع التوصيات الواردة في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من المعاهد الوطنية للصحة. وتمت الموافقة على البروتوكول من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) من جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو.
1. الفأر الجنينية الغدد الدمعية (LG): حصاد وتسليخ مجهري
- وفقا للإجراءات المعتمدة من الحيوانات المؤسسية لجنة أخلاقيات البحث العلمي، والموت ببطء توقيت الحوامل CD-1 (أو المعدلة وراثيا) من الإناث مع ارتفاع CO 2 الاستنشاق، تليها تأكيد خلع عنق الرحم للأجنة الحصاد في اليوم الجنينية المناسب. تعيين يوم المهبلي اكتشاف المكونات E0.
ملاحظة: الغدد الدمعية (خطابات الضمان) يمكن حصادها من برعم واحد E14 المرحلة فصاعدا. ومع ذلك، E16 (من 5 - 10 براعم) الأجنة تعطي نتائج أكثر اتساقا للثقافة فيفو السابقين. - تعقيم الخامسالجانب entral من الفأرة باستخدام الايثانول 70٪. قرصة الجلد وإجراء شق في خط الوسط مع مقص جراحي معقم. قطع طريق الجلد أو الغشاء البريتوني لفضح تجويف البطن. إزالة قرون الرحم 2 عن طريق قطع على طول مسراق الرحم على رأس كل قرن الرحم ومكان في برنامج تلفزيوني الباردة (الفوسفات مخزنة المالحة) أو DMEM سائل الاعلام F12 تستكمل مع 100 U / البنسلين مل و 100 ميكروغرام / مل الستربتومايسين.
- باستخدام ملقط (رقم 5)، وإزالة الأجنة من الحويصلات الأمنيوسي ووضع في طبق بتري معقمة الثانية تحتوي على برنامج تلفزيوني الباردة. يجب الحرص على عدم لمس العينين أو منطقة الرأس.
- وضع الجنين على مجهر تشريح مع قاعدة تضوء. إذا كان الجنين هو <E17، نفذ الخطوات 1،5-1،7. إذا الأجنة> E17، قد تكون هذه الخطوات مفيدة ولكنها ليست ضرورية، لذلك انتقل إلى الخطوة 1.8.
- قطع الرأس عن الجذع أسفل الفك السفلي (الخطوة 1، الشكل 2) النقيبالجا مشرط معقم (# 10 شفرة). تدوير الرأس بحيث يكون الفك السفلي هو الآن على لوحة تشريح. استخدام ملقط لتحقيق الاستقرار في الرأس ومشرط لإزالة حوالي ¼ من الجانب الظهري من المخ (الخطوة 2، 1 قطع شارع، الشكل 2) - وهذا أمر مهم خاصة عندما يصلب الغضروف حول E15.
- توجيه رأسه بحيث يمكن أن تخترق مشرط الأنف بين العينين. اجراء خفض خلال وسط الرأس، بحيث العيون الآن على نصفين منفصلين (الخطوة 2، 2 قطع الثانية، الشكل 2).
- باستخدام اثنين # 5 ملقط، تأخذ نصف واحد من الرأس وإزالة الأنسجة الزائدة (راجع الخطوة 3، الشكل 2). تأكد من توجيه رئيس حتى لا يتم فقدان LG (الموجود في الركن الخلفي السفلي للعين) في هذه العملية إزالة. إزالة الشلل الزائد والغضاريف، والأنسجة الأنفية المحيطة بها، وتحت العين. منذ الغدة هي بالكاد مرئية في هذه المرحلة، وضمان العين وموجهة بشكل صحيح بعد إزالة الأنسجة الزائدة رس تجنب فقدان موقع LG.
- انتزاع بعناية البشرة من الخلفية، الزاوية السفلى من العين مع ملقط على حد سواء. إزالة الجلد عن طريق سحب بعناية مفتوحة مع ملقط لفضح LG. استخدام إضاءة إضافية فوق وتحت الأنسجة لمساعدة تصور LG.
ملاحظة: LG، يمكن تمييزها من خلال مظهره كما برعم على القناة ضمن أكثر قتامة، اللحمة المتوسطة المختصرة، يجب أن تكون واضحة في هذه المرحلة. - تبدأ بعناية لتشريح LG واللحمة المتوسطة المرتبطة بها (الرجوع إلى الرسم التخطيطي والصور) بعيدا عن الأنسجة المحيطة بها باستخدام ملقط، والحرص على عدم انتزاع LG أو القناة المرتبط به. مرة واحدة الغدة خالية من الأنسجة المحيطة بها، وإزالة بلطف الغدة بأكملها تجتاح ظهائر المحيطة بالعين في قاعدة القناة LG. الحرص على الحفاظ على اللحمة المتوسطة المحيطة ظهارة، والتي يمكن ملاحظتها بأنه اللحمة المتوسطة المختصرة التي invaginates في ظهارة.
ملاحظة: بعض إزالة إضافية من TISSUه (أي شظايا العظام الصغيرة والعضلات والنسيج الضام) قد يكون ضروريا لتجنب الإشارات العوامل / النمو من الأنسجة المجاورة. - للثقافة والحصاد 5 - 4 الغدد وما يرتبط بها من اللحمة المتوسطة في لوحة (ومطلي خطابات الضمان فور تشريح)؛ جمع ما لا يقل عن 14 الغدد في 100 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي العازلة تحلل لRT-PCR 6.
2. إعداد لوحات للفيفو السابقين الثقافة
ويستند هذا الإجراء على أن يعمل للغدة اللعابية تطوير 7،8.
- إضافة 200 ميكرولتر من DMEM F12 (تستكمل مع 100 U / البنسلين مل و 100 ميكروغرام / الستربتومايسين مل) سائل الإعلام والثقافة مع 50 ميكروغرام / مل حمض الاسكوربيك و 50 ميكروغرام / مل هولو-ترانسفيرين إلى 50 مم طبق قطره microwell ذات القاع الزجاجي 7.
ملاحظة: تم اختيار DMEM F12 كما كنا في السابق وجدت أنه لتعظيم التشكل في الغدة اللعابية الجنينية. - تطفو على 13 ملم البومرشح غشاء onate مع 0.1 ميكرون المسام على رأس وسائل الإعلام.
- خطوة اختيارية: تمييع 3-D laminin 1: 1 مع DMEM / F12 لجعل تركيز النهائي من 3 ملغ / مل (استخدم 200 ميكرولتر ماصة لخلط بلطف، الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة إذا ظهرت فقاعات). إضافة 15 ميكرولتر من هذا المخفف 3-D laminin لتصفية.
ملاحظة: تم العثور على هذا التخفيف ليكون الأمثل للحفاظ على LG 3D في الدولة دون المساس المتفرعة الظهارية. ومع ذلك، فإنه ليس من الضروري لثقافة LG. - وضع 5 - 4 LG على مرشح أو في laminin. ثقافة خطابات الضمان فيفو السابقين ل24 - 48 ساعة (الشكل 3) أو إصلاح مع PFA 4٪ لمدة 20 دقيقة لمزيد من التحليل قبل QPCR أو المناعية (الشكل 4). لتحليل QPCR من الأنسجة الغدية الجنينية، يرجى الرجوع إلى Rebustini وآخرون، 2011. لتحليل مناعي من الأنسجة الجنينية غدي يرجى الرجوع إلى الاستشهادات التالية: هوفمان وآخرون، (2002)، وشتاينبرغ ه.ر آل.، (2005).
3. الفأرة بعد الولادة والغدد الدمعية الكبار (LG): تشريح
- الموت ببطء الماوس ما بعد الولادة وفقا للمعايير المناسبة جنة أخلاقيات الحيوان. لالجراء بعد الولادة يوم 8 أو أقل، الموت ببطء بقطع الرأس مع مقص العقيمة. ليوم ما بعد الولادة 8 أو السن، رش الفراء مع الايثانول 70٪.
- لتحديد موقع LG، وضع الماوس الوحشي الجانب حتى تشريح تحت المجهر مع إضاءة من فوق. ملاحظة: يتم يحد LG ما بعد الولادة وتعليم الكبار من خلال الشريان السباتي، والعضلات الماضغة والأدمة (انظر الشكل 5).
- باستخدام مقص تشريح الصغيرة، وجعل شق صغير في البشرة أفقيا من حيث يجب أن يكون موجودا في LG.
- باستخدام ملقط، وسحب تفتح البشرة تجاه الأذن لفضح LG.
- استخدام ملقط لتخفيف بلطف LG من الأنسجة المحيطة.
- مرة واحدة يتم تحرير LG من الأنسجة المحيطة، وإزالة بعناية LG من قبل القناة،بواسطة تجتاح حيث القناة وظهائر المحيطة بالعين الاتصال (الشكل 1).
- خطابات الضمان في وضع RNA العازلة تحلل لRT-PCR، أو إصلاح مع PFA 4٪ لمدة 20 دقيقة للالمناعية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
إل جي تطور من خلال عملية الظهارية التشكل المتفرعة. صور Brightfield من خطابات الضمان الجنينية تشريح في E14، E15، E16، E17، وP2 توضح هذا الحدث.
الشكل 1. LG تطور من خلال عملية الظهارية المتفرعة التشكل. Brightfield صور من خطابات الضمان الجنينية تشريح حديثا في E14، E15، E16، E17 و P2. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
لاحظ أنه كلما زاد ظهارة في الحجم، وكمية من اللحمة المتوسطة النقصان. وصفت الخطوات التجريبية لتسليخ مجهري من خطابات الضمان الجنينية في الشكل 2.
ضمن صفحة = "دائما"> 
الشكل 2. تخطيطي من الخطوات المتبعة في LG تسليخ مجهري من أجنة الفئران. رسم تخطيطي للتشريح وإزالة LG من الفأر الجنينية. الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
للثقافة LG نحن نستخدم بشكل روتيني الأجنة E16 بسبب الاتساق في النمو خارج الحي. كما هو مبين في الشكل (3)، LG في فيفو السابقين الشروط الثقافة تتطور بطريقة مماثلة لغدة في الجسم الحي (قارن إلى الشكل 1).
3. الرقم السابقثقافة المجراة من E16 خطابات الضمان يلخص في التشكل الجسم الحي. وقد استمدت خطابات الضمان E16 من Pax6، لجنة المساواة العرقية والأجنة GFP، حيث يتم التعبير عن GFP بواسطة ظهارة. واتخذت صورة الفلورسنت متتالية من هذه الغدة واحدة في 0، 3، 6، 12، 24، و 48 ساعة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
هنا قمنا بتوظيف Pax6، لجنة المساواة العرقية، GFP (وتسمى أيضا لو-لجنة المساواة العرقية 5) الأجنة لتسليط الضوء على الخلايا الظهارية، والسماح لنا بأخذ الصور الفلورسنت متتالية من ظهارة المتفرعة خلال الفترة الثقافة 48 ساعة. الفئران إيواء Pax6، لجنة المساواة العرقية، GFP التحوير يمكن الحصول عليها من JAX: تيراغرام (Pax6، لجنة المساواة العرقية، GFP) 1Pgr ولكنها ليست ضرورية لتشريح الغدة والثقافة.
ثقافات أو حديثا تشريح LG ويمكن بعد ذلك أن تكون ثابتة لتحليل مناعي الشكل 4 ثانيةهاوس التصور من 4 مقصورات الخلوية، واللحمة المتوسطة، ظهارة (EpCAM)، الأعصاب (Tubb3) والأوعية الدموية (PECAM)، في LG E16 من النوع البري (CD1) الجنين.
ويتكون الرقم 4. LG من أنواع الخلايا متعددة بما في ذلك الظهارية، الخلايا العصبية والخلايا البطانية. كان immunostained E16 LG للخلايا الظهارية (Epcam والأخضر)، الخلايا العصبية (Tubb3 والأحمر) والخلايا البطانية (PECAM، السماوي). الرجاء الضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
لتشريح الأنسجة حديثا أنه من الأسهل لتضمين أولا LG في laminin، كما حدث للثقافة، وذلك لشل حركة غدة لتثبيت والتعامل معها لاحقا. الشكل 5 يظهر التخطيطيللتشريح بعد الولادة / البالغين LG.
الرقم 5. تخطيطي من الخطوات المتبعة في LG تسليخ مجهري من الماوس ما بعد الولادة وتعليم الكبار. رسم تخطيطي للتشريح وإزالة LG إما بعد الولادة أو الكبار الماوس. تم استخدام Pax6، لجنة المساواة العرقية، GFP ما بعد الولادة يوم 30 الماوس لتصور موقف LG والقناة المرتبطة بها. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
وقد تصور موقف ما بعد الولادة / البالغين LG باستخدام Pax6، لجنة المساواة العرقية، GFP الماوس.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
براعة للثقافة والتلاعب LG فيفو السابقين يوفر مزايا هامة لدراسة تطورها. وهذا يشمل السرعة التي يستطيع الباحث لاختبار الفرضيات والعديد من الاضطرابات التي يمكن القيام بها لتقييم مدى الظهارية، الخلايا العصبية، والخلايا البطانية mesencyhmal تتفاعل لتشكيل الجهاز. ومع ذلك، هناك عدد من المحاذير عند استخدام هذا النموذج. أولا، بحكم عزلتها لم تعد مرتبطة الغدة إلى الأوعية الدموية الطرفية أو الجهاز العصبي، والتي قد تؤثر على مسارات الإشارات التي يجري اختبارها إذا كانوا يعملون جنبا إلى جنب مع إشارات ألقاها الأعصاب أو الأوعية الدموية 9،10. ثانيا، قد توفر الأنسجة المحيطة غير إل جي LG العوامل التي تنظم تطوير 4. لتجنب هذا يجب إزالة مكونات الأنسجة الأخرى غير الوسيطة قبل الثقافة. ثالثا، في الوقت الحالي نحن لسنا قادرون على توفير الظروف اللازمة لcytodifferent كاملةينتقم في منديل وظيفية بالكامل. هذا هو الحال بالنسبة لجميع أجهزة مثقف فيفو السابقين، ومن المرجح نتيجة لأسباب متعددة منها عدم والأوعية الدموية والأعصاب وظيفية و / أو القوات الميكانيكية من الأنسجة المحيطة بها. على الرغم من هذه المحاذير، أظهرت الآليات التي اكتشفت في الثقافة فيفو السابقين إلى تلخيصها في التجارب اللاحقة في الجسم الحي، مما يجعل هذا النظام القوي لاختبار فرضيات جديدة 8،11.
وقد تبين أن مسارات التنمية والتجدد تتداخل بشكل كبير، مشيرا إلى أن نظام الثقافة فيفو السابقين يمكن أيضا أن تستخدم لدراسة الجهاز تجديد 12. على الرغم من أننا لم يتضح هذا الجانب نحن هنا، وغيرهم، وقد أظهرت سابقا الغدة اللعابية الجنينية يمكن أن تستخدم لنمذجة آثار الإشعاع العلاجي على تلفها وتجديد 13. هناك حاجة لدراسات مستقبلية لاستكشاف استخدام نظام LG خارج الحي كمانموذج لتجديد الأنسجة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
يود المؤلفون أن نعترف التمويل المقدم من برنامج UCSF تخصيص الموارد.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM/F12 without HEPES | SH3027101 | Thermo Scientific | |
| Penicillin-Streptomycin | P0781 | Sigma-Aldrich | |
| Albumin solution from bovine serum | A9576 | Sigma-Aldrich | |
| Paraformaldehyde 16% Solution | 15710 | Electron Microscopy Sciences | Diluted to 4% in 1x PBS |
| Phosphate Buffered Saline 10x | BP665-1 | Fisher Scientific | |
| Phosphate Buffered Saline 1x | Prepared from 10x stock | ||
| holo-Transferrin bovine | T1283 | Sigma-Aldrich | 25 mg/ml stock solution in water. Freeze single-use aliquots at -20 °C. Add to DMEM/F12 media to a final concentration of 50 μg/ml. |
| L-ascorbic acid (Vitamin C) | A4544 | Sigma-Aldrich | 25 mg/ml stock solution in water. Freeze single-use aliquots at -20 °C. Add to DMEM/F12 media to a final concentration of 50 μg/ml. |
| BioLite 100 mm Tissue Culture Treated Dishes | 130182 | Thermo Scientific | Non-tissue culture-treated plates can also be used. |
| Stereo Microscope with substage iluminator | Stemi 2000 | Carl Zeiss | Any stereo dissecting microscope can be used that has a transmitted light base. |
| Substage Illuminator Base for Stereo Microscope | TLB 4000 | Diagnostics Instruments, Inc. | |
| Falcon 35 mm Tissue Culture Treated Dishes | 353001 | Corning | Non-tissue culture-treated plates can also be used. |
| 50 mm uncoated glass bottom dishes | P50G-1.5-14-F | MatTek Corporation | |
| Widefield fluorescence microscope | Axio Observer Z1 | Carl Zeiss | Any fluorescence microscope (upright, inverted or stereo dissecting microscope) can be used to monitor GFP expression at low magnification with an attached digital camera. |
| Confocal Microscope | TCS SP5 | Leica Microsystems | Confocal microscopy is necessary to see detailed cell structures. Any confocal microscope can be used. |
| SWISS Micro-Fine Forceps, #5 (11.2 cm) | 17-305X | Integra LifeSciences Corporation | Fine tips are required for removing mesenchyme from epithelium. Tungsten needles can also be used. |
| Dumont Standard Tip Forceps, #5 (11 cm) | 91150-20 | Fine Science Tools (USA), Inc. | Ideal for harvesting glands from embryos. |
| Reusable Plastic Surgical Knife Handles, style no. 3. | 4-30 | Integra LifeSciences Corporation | |
| Stainless Steel Sterile Surgical Blades, no. 10 | 4-310 | Integra LifeSciences Corporation | |
| RNAqueous-Micro Total RNA Isolation Kit | AM1931 | Life Technologies | |
| Cultrex 3D Culture Matrix Laminin I | 3446-005-01 | Trevigen | 6 mg/ml stock diluted 1:1 with DMEM/F12 |
| Timed-pregnant Crl:CD1(ICR) mice | Charles River Labs | Embryos are harvested on day 14 (with day of plug discovery designated as day 0). | |
| Nucleopore Track-Etched Hydrophilic Membranes, 0.1 μm pore size, 13 mm | 110405 | Whatman | |
| Timed-pregnant Pax6-Cre, GFP mice | Tg(Pax-Cre, GFP)1Pgr | The Jackson Laboratory | Optional mice for learning how to locate the LG. |
References
- Liu, K. C., Huynh, K., Grubbs, J., Davis, R. M. Autoimmunity in the pathogenesis and treatment of keratoconjunctivitis sicca. Current allergy and asthma reports. 14, 403 (2014).
- Makarenkova, H. P., et al. FGF10 is an inducer and Pax6 a competence factor for lacrimal gland development. Development. 127, Cambridge, England. 2563-2572 (2000).
- Dartt, D. A. Neural regulation of lacrimal gland secretory processes: relevance in dry eye diseases. Progress in retinal and eye research. 28, 155-177 (2009).
- Nigam, S. K. Concise review: can the intrinsic power of branching morphogenesis be used for engineering epithelial tissues and organs. Stem cells translational medicine. 2, 993-1000 (2013).
- Qu, X., et al. Glycosaminoglycan-dependent restriction of FGF diffusion is necessary for lacrimal gland development. Development. 139, Cambridge, England. 2730-2739 (2012).
- Rebustini, I. T., et al. MT2-MMP-dependent release of collagen IV NC1 domains regulates submandibular gland branching morphogenesis. Developmental cell. 17, 482-493 (2009).
- Hoffman, M. P., et al. Gene Expression Profiles of Mouse Submandibular Gland Development: FGFR1 Regulates Branching Morphogenesis in Vitro Through BMP- and FGF-Dependent Mechanisms. Development. 129, 24-5778 (2002).
- Steinberg, Z., et al. FGFR2b signaling regulates ex vivo submandibular gland epithelial cell proliferation and branching morphogenesis. Development. 132, Cambridge, England. 1223-1234 (2005).
- Knox, S. M., et al. Parasympathetic innervation maintains epithelial progenitor cells during salivary organogenesis. 329, Science. New York, N.Y. 1645-1647 (2010).
- Magenheim, J., et al. Blood vessels restrain pancreas branching, differentiation and growth. Development. 138, Cambridge, England. 4743-4752 (2011).
- Jaskoll, T., et al. FGF10/FGFR2b signaling plays essential roles during in vivo embryonic submandibular salivary gland morphogenesis. BMC developmental biology. 5, 11 (2005).
- Takasato, M., et al. Directing human embryonic stem cell differentiation towards a renal lineage generates a self-organizing kidney. Nature cell biology. 16, 118-126 (2014).
- Knox, S. M., et al. Parasympathetic stimulation improves epithelial organ regeneration. Nature communications. 4, 1494 (2013).
