Summary
Protocol
Protocol voor Drosophila eierstok dissectie
- Feed vliegt met gist 1-2 dagen voorafgaand aan ontleden om vet te mesten de eierstokken.
- Verdoof vliegen met behulp van kooldioxide stroom.
- Met behulp van een pincet, selecteer een vrouwelijke vliegen.
- Dompel de vrouwelijke vlieg in 1X PBS.
- Pak de vlieg op het onderste thorax met een pincet.
- Sleepboot zachtjes op de onderbuik met een andere pincet tot de interne organen in de buik worden blootgesteld.
- Kijk voor het paar van de eierstokken en los van andere organen (bijvoorbeeld de darmen).
- Plagen elkaar de ovarioles (als eierstokken moeten worden gebruikt voor immunokleuring of in situ hybridisatie).
- Houden eierstokken in ijskoud 1X PBS, terwijl het ontleden van de volgende vliegen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier laten we zien een methode voor het ontleden van de eierstokken in Drosophila. Als de methode van het kweken van de verschillende celtypes die bestaan in het Drosophila eierstok is nog niet bepaald, is dit een snelle methode om de Drosophila ovarieel weefsel te verkrijgen. In wezen, laten we zien dat het ontleden van Drosophila eierstokken een eenvoudige twee-of drie-stappen-procedure betrekt. Verdere behandeling van deze ontleed eierstokken zijn afhankelijk van de downstream experimenten die zullen worden uitgevoerd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Forceps | Tool | Sigma-Aldrich | T43537 | |
| Glass dissecting dish | Tool | Pyrex | 7220-85 |
References
- Costa, A., et al. The Drosophila fragile X protein functions as a negative regulator in the orb autoregulatory pathway. Dev Cell. 8, 331-342 (2005).
- Tan, L., et al. An autoregulatory feedback loop directs the localized expression of the Drosophila CPEB protein Orb in the developing oocyte. Development. 128, 1159-1169 (2001).
