Abstract
여기에서 우리는 급성 뇌 조각의 준비를위한 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 크게 결과의 품질을 결정하는 전기 생리 패치 클램프 실험을위한 중요한 요소이다. 이 절차를 절단하는 동안 냉각 단계를 생략하는 성숙한 동물에서 매우 유수의 뇌 구조를 다루는 특히, 건강한 슬라이스와 세포를 얻는 데 도움이되도록 표시되었습니다. 승온 만에 추측 할 수 신경 건강을 지원함으로써 정확한 메커니즘은, 그것이 그 추론하기 위하여 스탠드에도 가능한 한 슬라이싱이 수행되는 온도는 온도 관련 아티팩트를 방지하는 생리 학적 조건에 근접한다. 이 방법의 또 다른 중요한 장점은 절차의 단순성 때문에 짧은 준비 시간이다. 증명 방법에서는 성인 마우스는 사용되지만 동일한 과정 어린 마우스뿐만 아니라 래트에 적용 할 수있다. 또한, 다음 패치 카스티A 실험 수평 소뇌 슬라이스 수행되지만 동일한 절차가 다른 평면뿐만 아니라 뇌의 다른 후방 영역에서 사용될 수있다.
Introduction
제시된 방법의 목적은, 특히 성인 또는 이전 동물을 사용하는 경우, 시험 관내 전기 생리 학적 실험을 위해 고품질 급성 뇌 조각을 얻을 수있다.
두 우아한 문장 Skrede과 Westgaard 1에 의해 설명 된 바와 같이 급성 뇌 분할 방법은, 현대 신경 과학 연구의 기초 중 하나가되었습니다 전 세계적으로 수많은 변형에 사용된다. 슬라이스 품질 슬라이스 당 뉴런 생활의 수에 반영되는 시간의 기간 동안 세포는 조직의 무결성뿐만 아니라 자신의 전기 생리 학적 및 형태 학적 특성을 유지한다. 또한, 안정된 기록 용 최대 기간은 조각의 품질에 의존한다. 따라서, 수십 따라, 원래 슬라이싱 방법은 상기 절단 조성물의 복잡한 변형에 의해 종종 2-10을 절단 후 슬라이스 복구를 강화하기 위해 개별 연구 그룹에 의해 개발 된 오뿐만 아니라 냉각 생리 솔루션과 동물의 내 심장 미리 관류 (예 : 아스 코르 빈산, 티오 우레아 또는 H 2 O 2를 추가하는 등) R 복구 솔루션.
최근 11를 표시 한 바와 같이, 슬라이스 동안 생리적 온도는 신경 세포의 건강에 냉각보다 더 도움이 될 것 같다; 성인 (2~8개월) 설치류와 함께 작업 할 때 개선이 가장 눈에 띄는입니다. 극적인 온도 변화를 방지 인해 이러한 가소성 (13)와 이온 채널 반응 속도 13, 14 등의 세포에서 온도에 따라 프로세스에 아티팩트를 방지 할 수 있습니다. 이러한 변화는 막 전압 및 세포 내 칼슘 신호, 스파이크 임계 값에 영향을 미치는, 모양 스파이크 수 있습니다.
여기서 제시된 "핫"급성 슬라이스 제조 방법은, 임의의 뇌 영역에서 고품질의 급성 뇌 조각을 획득 소뇌 피질 및 해마, 뇌간 16 핵을 포함하는 일반적인 절차 </ SUP>뿐만 아니라 후각 망울로, 모두 쥐와 생쥐.
특히, 생리적 온도 슬라이싱 절차는 절단 날이 거의 완벽하게 수평 진동 및 구조적 결함이없는 것을 필요로한다. 정밀 이전 슬라이서 모델 달성하지 않을 수 있습니다; 저온 대사 수차의 비용해도, 기계적 손상 조직 저항력 만들 것 같은 경우에, 우리는 동결 - 냉각 조건 슬라이스 준비를 수행 권장.
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Protocol
이 프로토콜에 설명 된 모든 실험 절차는 히브리 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 슬라이스에 대한 솔루션 및 도구 준비
- 표 1에 기재된 이온을 함유하는 표준 생리 용액 (SPS)의 1 L를 준비한다.
- 탈 이온수 (0.055 μS / cm의 전도도) 1,000 ml로 채워진 저장소 유리 병에 미리 10 배의 최종 농도에서의 염을 함유하는 스톡 용액을 준비한다. 소금 (염화나트륨, KCl을, KH 2 PO 4, 황산)을 추가하고 완전히 용해 될 때까지 저어. 4 ℃에서 원액을 저장합니다.
- 실험 당일 최종 SPS 용액을 확인. 자기 교반 막대를 이용하여 글루코스 (3.6 g)과의 NaHCO3 (2.18 g)을 용해, 정제수 700 ml의 스톡 용액 100 ㎖를 첨가하고, 그 다음 1 L. 정제수 위로 추가
- soluti를 평형에서 ~ 20 분 동안 95 % O 2 / 5 % CO 2 가스 처리를하여. 이 후, 1 M CaCl2를 용액 2 ㎖를 추가합니다.
- 다음과 같은 도구 (그림 1)를 조립합니다.
- 두개골을 여는 큰 가위 잘린 다른 도구, 작은 수술 가위를 준비, 뇌를 노출 뇌의 원하는 부분을 해부를 위해 블레이드와 메스 두개골을 리프팅을위한 좋은 팁 집게는 슬라이스를 조작하기위한 작은 주걱한다 해부하는 뇌의 부분.
- 또한, 뇌에서 초과 액체를 제거하기 위해 필터 종이의 작은 조각을 준비, 뇌에 대 한 두 개의 작은 페트리 접시에 뇌를 붙이는 포함 따뜻하게 정제 물과 SPS, 및 시아 노 아크릴 레이트 접착제에 대해 두 개의 유리 500 ml의 비커에 해부한다 분할 단계.
- 분할 및 복구 차에 슬라이스 화장실에서 조각을 이동하는 입이 큰 유리 파스퇴르 피펫 동안 조각을 처리하기위한 작은 브러시를 준비합니다mber. 따뜻한 슬라이스 화장실에서 박테리아의 성장을 방지 할 수있는 도구를 소독. 또한, 깨끗한 실험실 장갑을 사용합니다.
- 깁과 에드워즈 (15)에 의해 기술 등의 침수 슬라이스 복구 챔버를 준비합니다. 지속적으로 95 %, O2 / 5 % CO 2로의 SPS를 가스와 36 ° C로 유지한다. 가스 처리에 슬라이스가 손상 될 수 욕조에 갇혀 작은 기포가 발생하지 않는 것을 확인하십시오.
- 따뜻한 ~ 자석 교반기 또는 수조에 히터 접시에 36 ° C의 SPS 300 ml의. 히터 플레이트가 사용되는 경우, 이온 침전 될 수 과열로부터 용액을 방지하기 위해주의를 기울여야. 경우는, 대신에 이전의 냉각 따뜻한 신선한 SPS 발생합니다.
- 전기 주전자를 사용하여 끓여 정제수 ~ 500 ml의를 가져오고, 비커, 슬라이싱 온도보다 약간 따뜻한 물을 얻기 위해 차가운 물로 300 mL로 결합한다. 이 잘린 동안 정제 물을 데워 사용하고 remai를 사용나중에 분할 목욕의 생리적 온도를 유지하기위한 삶은 물 닝.
- 복강 내에 펜토 바르 비탈 0.1 ㎖ (60 ㎎ / ㎖)을 주입하여 마우스를 마취시키다. 몇 분 후 동물이 감각의 부족을 확인하기 위해 강력한 발가락 또는 꼬리 핀치에 응답하지 않습니다 있는지 확인하십시오.
2. 뇌를 해부
- 두개골의 뒷면 근처 큰 가위로 목을 절단하여 마우스를 빠르게 목을 벨, 그리고 머리가 초과 혈액을 씻어 따뜻하게 정제수로 비커에 빠질 수 있습니다.
- 아마도 작은 가위로 목을 더 제거, 목의 근육과 피부 아래 두개골에서 난원 매그넘 노출.
- 명확 두개골의 개구를 안내하기 위해 두개골 봉합을 볼 수 있도록 두개골 위에 피부를 당겨.
- 난원 매그넘을 통해 작은 가위의 하단 끝을 삽입하고 즉시 기수를 돌려 열린 두개골을 잘라측면. 부드럽게 눈과 frontoparietal 봉합 뒤에 위치로 정수리 뼈까지의 측면 가장자리를 따라 잘라; 그 다음, (도 2a에 녹색 점선 참조) 두개골의 중심을 향해 회전과 두개골의 다른쪽에 정중선을 가로 질러.
- 좋은 팁 집게를 사용하여 (그림 2A 노란색 점선 화살표 참조) 뇌를 노출 비스듬히 frontoparietal 모서리에서 두개골을 들어 올려 비스듬히 당겨합니다. 두개골 들어 올릴 때 뇌가 장소에 머물 수 있도록 두개골, 머리의 뼈 또는 피부에 부착되지 않았는지 확인합니다. 뇌가 두개골로 움직이는 경우, 두개골과 뇌 사이의 결합 조직을 제거하는 작은 가위를 사용한다.
- 뇌가 노출되면, 뇌가 건조하는 것을 허용하지 않는다. 두개골과 따뜻하게 가득 페트리 접시의 뇌를 유지하면서 따라서, 다음 단계를 수행, SPS를 가스실.
- 전자에 사용되는 뇌의 일부를 분리메스와 주걱을 이용하여 뇌의 나머지 xperiment. 소뇌를 사용하는 경우, (그림 2B-D에 붉은 라인을 따라) 중뇌와 뇌교를 통해 하나의 컷에 의해 전뇌에서 분리하고 신선한 포함하는 작은 페트리 접시로 이동, SPS를 가스실.
- 수평면에서 소뇌를 슬라이스 할 때 무대를 절단에 뇌를 붙이는 직선과 넓은 기반을 형성하는 뇌간을 제거합니다. 전뇌에서 절단 된면이 아래로 향하도록 간단히 필터 종이의 젖은 부분에 소뇌를 배치합니다.
- (그림 2B에서 파란색 선으로 표시됨)의 기본을 형성하는 메스와 뇌간을 차단하고, SPS에 소뇌를 반환합니다. 절단의 다른면이 필요할 때, 그에 따라 소뇌 블록 (그림 2C & D에 파란색 선)을 트림.
3. 뇌 조각화
- 가 D가되는 것을 확인하는 의해 절단 단계 준비공예, 무대의 중앙에 superglue의 작은 방울을 적용하기 전에.
- 올바른 쪽이 위로 주걱을 사용하여 SPS에서 뇌 블록을 들어 올리고 필터 종이의 작은 조각을 사용하여 뇌에서 초과 액체를 제거합니다. 그런 다음, 하나의 움직임, 무대에서 접착제의 드롭에 주걱의 두뇌를 밀어 넣습니다.
- 건조으로부터 뇌 조직의 측면에 닫 실행 한 접착제를 방지하기 위해, 파스퇴르 피펫 SPS의 몇 방울을 적용하고 슬라이싱 챔버에서 절단 단을 배치. 관심 영역 (예 : 소뇌 피질) 블레이드를 향하도록 뇌 블록을 맞추고, 따라서 분리되기 전에, 기계적 압력의 최소량을 실시한다.
- 끊임없이 절단 실에서 SPS 가스 처리뿐만 아니라 34-37 ° C에서의 온도를 유지하면서 제조업체의 지시에 따라 각 조각을 잘라. 통근자를 충전함으로써,이 범위에서 절단 실의 온도 유지가온 정제수 온도가 너무 낮게 떨어질 때마다 물 교체와 슬라이서의 알 챔버.
참고 : 분할 매개 변수를 실험적으로 검토되고있는 조직과 신경 세포의 각 유형을 찾을 수 있어야합니다. 세라믹 블레이드와 소뇌 골지 세포와 캠든 SMZ 700 슬라이서의 경우 0.75 mm의 진동 진폭 65 Hz에서 0.05 mm / sec의 속도의 발전을 사용; 소뇌 핵 신경 세포 높은 진폭과 주파수 (1mm, 90 Hz에서, 각각)와 느린 진행 속도 (0.01-0.02 mm / 초)을 권장합니다. 골지과 소뇌 핵 신경 세포 모두를 들어, 슬라이스 두께 300 μm의를해야한다. - 슬라이싱 동안, 조각 자체에 접어 허용하지 않습니다. 부드럽게 바람직뿐만 아니라 실험에 관심이있는 지역에서 조각을 터치, 부드러운 브러시로를 지원함으로써이 문제를 방지합니다. vibratome 블레이드를 만지지 브러시를 방지하기 위해주의; 특히 세라믹 블레이드 경우에도 광 접촉블레이드가 손상 될 수 있습니다.
- 입이 큰, 화재 광택 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 챔버를 유지 / 복구에 분할 실에서 각 조각을 이동합니다.
- 슬라이스 실험을 시작하기 전에 최소한 1 시간 동안 챔버 휴식하자. 이 손상되거나 죽어가는 조직과 세포의 분해를 허용함으로써 청소기 슬라이스 표면에 발생합니다. 처음 시간 동안 34-36 ° C의 범위의 챔버 내에 SPS의 온도 유지; 슬라이스는 슬라이스가 손상되거나이 떠 할 수 기포에 감동되지 않도록.
4. 실험
- 1 시간 후, 복구 챔버 온도를 실온 (17 ~ 25 ° C에서)까지 냉각 할 수 있습니다.
NOTE :이 슬라이스는 박테리아의 성장뿐만 아니라 세포 대사를 느리게하여 사용할 수있는 기간을 연장시킬 수있다. 이 기간은 뇌 영역 및 세포의 종류에 따라 달라집니다. 예를 들어, 골지체 특정 유형의 세포 조각이 건강한 것으로 판명 될 수있다8 시간 다른 유형 반면 절단 후 만 6 시간 지속. - 1 시간이 슬라이스에서 전달 된 후, 다양한 전기 생리학 실험에 대한 슬라이스를 사용합니다.
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Representative Results
기술 된 방법으로 제조 슬라이스 다양한 전기 생리 및 optogenetic 실험에 사용될 수있다. 도 3a 및도 3c에서, 우리는 각각의 차동 간섭 (DIC) 하에서 광학 보아 수평 소뇌 슬라이스 관상 대뇌 피질 슬라이스의 대표적인 예를 나타낸다. 소뇌 슬라이스에서, 소뇌 뉴런 여러 종류의 용이, 그들의 위치 및 셀 체형에 의해 인식 될 수있는 전기 생리 녹화 대상으로 허용한다. 그림 (b)와 3D에서, 예 표시됩니다 자발적으로 활동 소뇌 골지 세포와 대뇌 피질의 피라미드 세포에서 현재 클램프 모드에서 전체 셀 패치 클램프 녹음에서 추적합니다. 핫 슬라이스 뇌로부터 얻어지는 전기 생리 및 optogenetic 레코딩의 품질의 다른 예는 황과 Uusisaari 11 레플러 등. (16)에서 찾을 수있다.
| 농도 [mm]가 | 무게 (g / L) | |
| 염화나트륨 | (124) | 72.5 |
| 의 KCl | 3 | 2.23 |
| KH 2 PO 4 | 1.2 | 1.63 |
| 망초 * 6H 2 O | 1.9 | 4.3 |
| 포도당 | (20) | 3.6 |
| 의 NaHCO3 | (26) | 2.18 |
| 염화칼슘 2 | 2 | 1.109 |
표준 생리 학적 솔루션의 표 1. 구성.
도구 1. 배열을 그림. 1. 큰 가위, 2. 작은 수술 가위, 블레이드 # 11 3. 메스, 4. 파인 팁 집게, 5. 작은 주걱, 6. 작은 페트리 접시, 탈 이온수 7. 유리 비커, 따뜻하게 가세 8. 유리 비커D 생리 솔루션, 9. 슈퍼 접착제 (10) 얇은 브러쉬, (11) 파스퇴르 피펫, 12 작은 주사기, 펜 토바 비탈 (13), (14) 필터 논문, (15) 절단 단계.
. 뇌를 노출 두개골의 구멍을 묘사 한 그림 2. 두개골과 뇌 해부의 도식 표현 (A) 그리기 (B - D). 세 가지 주요 슬라이싱 평면의 뇌를 절단면을 설명하는 개략도. 파란색 선은 뇌에 접착 될에 비행기를 나타냅니다.
도 3에있어서의 대표적인 결과. (A) 수평 소뇌 슬라이스 오입증 방법으로 btained. 세 소뇌 피질의 주요 층 (과립 세포층, GC 층; 조롱박 뉴런 층, PN 층, 분자 층, ML)뿐만 아니라, 백질 (WM)가 표시된다. 패치 - 클램프 전극 개략적 골지체 셀 (GOC) (스케일 바 :도 40㎛) 상에 드로잉된다. (B) 실시 예는 기록 전류 클램프 패치 - 클램프 전극 얻어진다 A.에 도시 골지체 셀로부터 녹화 모드. (블랙 : 여섯 회색 흔적 중 대표적인 추적). (C) 관상 대뇌 피질 슬라이스가 입증 방법으로 얻을. 두피 피라미드 세포 패치 - 클램프 전극의 모식도와 함께 도시되어있다. (D) 실시 예 패치 클램프 기록을, 전류 클램프 모드 (C)에 도시 된 피라미드 형 전지.에서 여기를 클릭하세요 이것의 더 큰 버전을 표시 할 그림.
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Discussion
우리는 생리 대신 빙냉 온도 마우스로부터 급성 뇌 조각을 제조하는 방법을 보여준다.
또한, 추운 상태로 제조와 비교시 따뜻한 조건에서 얻어진 조각의 품질이 우수하다는 11 도시 슬라이서 블레이드 최소한 수직 진동을 가지고 제공되었다. 생리적 온도에서 슬라이스는 단일 셀의 수차뿐만 아니라 네트워크 동작에 명시 할 수있다 대사 과정 17 ~ 19의 변화에 관련된 것과 낮은 온도에 의한 생리 학적 유물을 방지 할 수 있습니다. 또한, 슬라이싱 절차가 분명히 불필요한 지연없이 완료되어야하더라도, 용액이 너무 뜨거워 질 전에 절단을 완료하기 위해 빙냉 조건 슬라이싱 때 그대로 (슬라이싱과 서둘러하고 방지 할 필요가 없다 조직의 오래 지속 동결에 의한 손상). 따라서, 느린 절삭 속도는 우리가 될 수 있습니다ED. 이것은 매우 섬세한 구조를 자르는 경우에 도움이 될 수 있습니다. 마지막으로, 두 용액의 뇌의 냉각 단계를 생략하는 것은 상당히 절차뿐만 아니라 복잡도에 필요한 시간의 양을 감소시킨다. 차가운 온도로 용액의 냉각 실험 자체 더 많은 시간을 남기고 생리적 온도로 용액의 온난화보다 약 40 분 이상이 필요하다.
이는 0 ° C의 절단과 비교하여 20 ° C의 절단 조각을 검사 할 때 GAD67-GFP 마우스에서의 피질 뉴런 형광의 세기가 강한 것으로 밝혀졌다 (20). 이것은 더 차가운 온도에 공격 태도를 보여준 것은 신경 세포의 생존에 FL 영향력에 해로운을 발휘하는 개념을 지원합니다. 한편, 동일한 종이에 형광 신경 세포의 밀도가 20 ° C에서 절단에 비해 37 ° C에서 얻어진 슬라이스 감소되었음을 나타내었다. 결과에 논란이 아리 있습니다Z-편향은 고려 사항에서 촬영되지 않은 사실에서 그 자체. 전술 한 바와 같이, Z-편향 블레이드의 품질 및 속도와 슬라이서의 다른 설정에 더하여, 생리적 온도 슬라이싱 조직 품질에 강한 영향을 미친다.
절차의 중요한 부분 중 하나는 슬라이싱 전에 슬라이서 블레이드의 미세 조정을 포함한다. 슬라이싱 가능성 강성 지질막의 "균열"수직뿐만 아니라 수평 절단을 수반 빙냉 용액을 사용하는 경우와 달리, 생리 학적 조건에서 z 방향의 슬라이서 블레이드의 움직임은 조직에 손상을 일으킬 것이다. 이를 최소화하기 위해, 블레이드는 단단하고 가능한 똑바로해야한다; 우리의 경험에서, 기존의 면도날은 사용할 수있을 너무 많은 결함을 가지고있다. 특히 vibratome 사용을 위해 설계된 고품질의 스테인레스 스틸 블레이드는 더 나은,하지만 최상의 결과를 위해 우리는 단일 경 사진 CERAM 제안IC 블레이드. 또한, 우리는 강력하게이 직접 조각의 품질에 영향을 미치는으로 블레이드의 완벽한 수평 정렬을 위해 상당한 시간을 보내는 것이 좋습니다. 우리는 Z 평면에서 진동이 0.5㎛ 미만인되도록 블레이드 배향의 튜닝을 허용 캠든 700SMZ 슬라이서를 사용한다. 실제로, 핫 슬라이싱 방법의 가장 중요한 한계는 슬라이서 블레이드 품질 및 안정성에 대한 의존도이다. 이러한 요구 사항이 충족 될 수없는 경우, 이러한 부분적으로 동결되는 것을 삼투압 변화로 빙냉 용액에 슬라이싱 단점에도 불구하고, 대신 전통적인 빙냉의 절단 방법을 사용하는 것이 바람직하다.
입증 방법은 소뇌의 수평 조각을 얻는 데 사용된다; 또는 중뇌뿐만 아니라 뇌간 - 단순한 변형과 같은 방법은 많은 다른 전단의 영역에서, 관상 또는 시상면 하나로 슬라이스를 얻기 위해 사용될 수있다. 전뇌와 olfact의 가장 앞쪽 부분의 슬라이스모리 시스템은 두개골 이들 부품의 손상을 방지하기 위해 더 전방 절단 예정. 우리는 의도적으로 간단하고 가능한 한 짧은 방법을 유지하고 동물의 사전 관류를 사용하지 않으며, 우리는 절단에 대한 생리 학적 솔루션의 모든 구성 요소를 대체 않습니다. 이 방법은 관심있는 특정 신경 세포 아형에 따라 수정 될 수있다. 이는 절삭 용액 (서두에서 참조 문헌에 기술 된 바와 같이)의 변형이 상기 결과 슬라이스의 생존과 견고성을 향상시킬 가능성이있다. 일반적으로, 상기 방법은 일반적으로 전기 생리 학적 기록에 사용되는 대부분의 다른 일반적인 생리적 솔루션과 호환되어야한다.
여기에 표시된 방법에있어서, 슬라이스 300 μm의 두께 절단한다. 최적 슬라이스 두께가 얇게 뇌 영역 및 대상의 세포에 의존한다. 네트워크 무결성 고려 사항은 슬라이스보다 얇은 250 μm의, 때문에 확산 제한의 최대이어야한다슬라이스 두께의 한계 당 ~ 400 ~ 450 μm의입니다.
조직에 아주 작은 불안정성이 평평하지 않거나 사용할 수없는 조각을 초래할 수 있으므로이 방법에서 중요한 단계는 절단 단계로 뇌를 접착 간주한다. 따라서,주의가 접착제 강하로 하강 할 때 뇌 표면이 과량 SPS이 없다는 것을 확인하기 위해주의해야한다; 또한, 너무 많은 접착제는 뇌가 무대에 고르지 않게 거짓말을하고 아마도 슬라이스 도중 무대에서 분리가 발생합니다. 또한, 과량의 접착제는 블레이드를 손상시킬 수있는, 슬라이스 내로 불균일성을 도입하는 것 외에도, 조직 측에 크리프하고 있습니다.
입증 된 뜨거운 방법에 얼음처럼 차가운 방법에서 분할 프로토콜을 변경할 때 상승 수있는 몇 가지 어려움이있다. 어려움 중 하나는 슬라이스에서 박테리아의 출현이다. 이러한 이유로 툴, 챔버, 및 절차 전에 에탄올로 슬라이싱 욕 소독하는 것이 중요하다. 또한, 회전1 시간 후에 회수 조에서 가열 시스템 오프 박테리아 성장을 느리게.
마지막으로, 생리적 온도에서 잘라 조각에서 신경 세포의 건강 개선은 또한 자신의 고유 특성의 변화가 발생할 수 있음을 강조한다. 따라서, 실험 냉 방법을 사용하여 수행 이전 작품 이상 프로젝트의 일부 경우, 특히 냉온 방법 모두 슬라이스에서 얻은 결과의 초기 비교를 수행하는 것이 바람직하다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pentobarbital | CTS | 170066 | Concentration: 60 mg/ml in physiological saline. |
| Big scissors | FST | 14001-16 | Any large scissors or a guillotine with sufficiently sharp edges can be used for decapitation |
| Iris scissors | Prestige medical | 48,148 | Any fine tip scissors can be used, provided the scissor blades are not longer than 1.5–2 cm |
| Fine tip forceps | FST | 11254-20 | |
| Scalpel | FST | 91003-12 | |
| Scalpel blade #11 | FST | 10011-00 | |
| Small spatula | Fisher | 2350 | |
| Filter paper | Any laboratory brand can be used. | ||
| Petri dishes | Duroplan | Z231509-1 | |
| Glass beakers | SCHOT | 10022846 | |
| Pasteur pipette | Maple Leaf Brand | 14672-029 | |
| Super glue | LOCTITE | 4091361/1 | |
| Slicer | Campden | 7000-smz | |
| Ceramic slicing blade | Campden | 7550-1-C | |
| Magnetic heater/stirrer | For heating up the SPS for the procedure | ||
| Electric kettle | For heating up water for temperature control | ||
| Slice recovery chamber + heating unit | Warner instruments | BSC-HT + BSC-BUW | Home-built models may also be used. |
| Thermometer | For monitoring SPS temperature during dissection and slicing |
References
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