Summary
Aqui, nós descrevemos um protocolo para a síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica com um forte momento magnético e um (NIR) absorção forte de infravermelho próximo. O protocolo também inclui a conjugação de anticorpos para as nanopartículas, através da unidade Fc para diversas aplicações biomédicas que requerem direccionamento específico molecular.
Abstract
Propriedades magnéticas e plasmonic combinadas em um único nanopartícula proporcionar uma sinergia que é vantajoso em algumas aplicações biomédicas, incluindo aumento de contraste em novas modalidades de imagem magnetomotrizes, captação simultânea e detecção de células tumorais em circulação (CTC), e imagiologia molecular multimodal combinada com terapia fototérmica de células cancerosas. Estas aplicações têm estimulado um interesse significativo no desenvolvimento de protocolos para a síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica com absorção óptica na região do infravermelho próximo (NIR) e um forte momento magnético. Aqui, nós apresentamos um novo protocolo para a síntese de tais nanopartículas híbridas que é baseada num método de microemulsão óleo-em-água. A característica única do protocolo aqui descrito é a síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica de vários tamanhos de blocos primários que também têm características magneto-plasmônicos. Esta abordagem produz nanopartículas com uma alta densidade de funcionalidades magnéticos e plasmonic que são distribuídos uniformemente em todo o volume de nanopartículas. As nanopartículas híbridos podem ser facilmente funcionalizados anexando anticorpos através da porção Fc deixando a porção Fab que é responsável pela ligação ao antigénio disponíveis para direccionamento.
Introduction
Nanopartículas híbridas, compreendendo diferentes materiais com propriedades físico-químicas distintas pode abrir novas oportunidades em aplicações biomédicas, incluindo imagens multimodal molecular, a administração de terapêutica e acompanhamento, nova triagem e testes de diagnóstico 1-3. A combinação de propriedades magnéticas e plasmonic num nanopartículas é de particular interesse uma vez que proporciona uma muito forte absorção de luz e dispersão de secções transversais associadas com ressonâncias plasmon e capacidade de resposta a um campo magnético. Por exemplo, as nanopartículas magneto-plasmonic foram usadas para aumentar o contraste de imagem de campo escuro de células marcadas por aplicação de uma modulação de sinal temporal, através de um electroíman externo 3-5. Mais recentemente, um princípio semelhante foi aplicada no desenvolvimento de uma nova modalidade de imagens - imagiologia magneto-fotoacústica, onde nanopartículas magneto-plasmónico permitir grandes melhorias em contraste rato e de sinal para fundoio 6,7. Mostrou-se também que as nanopartículas híbridas podem ser usadas para a captura e detecção de células tumorais em circulação em todo o sangue e in vivo 8,9 simultânea. Além disso, as nanopartículas magneto-plasmônicos são promissores agentes theranostic que podem ser usados para imagiologia óptica molecular e MR especifica combinada com a terapia de células cancerosas fototérmica 10.
Várias abordagens foram exploradas para a síntese de nanopartículas magneto-plasmónico. Por exemplo, Yu et al. Decomposição utilizado e a oxidação de Fe (CO) 5, em nanopartículas de ouro para formar haltere-bifuncionais como Au-Fe 3 O 4 nanopartículas 11. Wang et al. Sintetizaram nanopartículas de óxido de ferro revestidas com ouro usando o método de decomposição térmica 12. Alguns outros métodos baseiam-se em polímero de revestimento ou de amina moléculas funcionais a nanopartículas de núcleo magnético, seguido de deposição de agshell de idade sobre a superfície do polímero para criar o híbrido partículas 7,13. Além disso, as nanopartículas de óxido de ferro foram anexados ao nanobastões de ouro via interações eletrostáticas ou uma reação química 14,15. Embora estas abordagens produzir nanoestruturas magneto-plasmonic, que comprometem a algumas propriedades de extensão da combinação magneto-plasmónico como absorvância óptica na janela do infravermelho próximo (NIR), ou um forte momento magnético ambos os quais são altamente desejáveis em aplicações biomédicas. Por exemplo, haltere Au-Fe 3 O 4 nanopartículas tem um pico de ressonância de plasmon de a 520 nm, o que limita a sua utilidade in vivo devido à turvação elevado tecido nesta gama espectral. Além disso, as nanopartículas magneto-plasmónico produzidas por protocolos correntes estão limitados a apenas um ou alguns (11 a menos de 10) 14,15 metades superparamagnéticas (por exemplo, nanopartículas de óxido de ferro) que é significativamente menor do que poderia ser achquistada em uma nanoestrutura densamente. Por exemplo, a 60 nm de diâmetro das nanopartículas esféricas densamente pode conter na ordem de um milhar de 6 nanopartículas superparamagnéticas nm. Por conseguinte, existe uma grande margem para melhorar as propriedades magnéticas das nanopartículas híbridas. Além disso, alguns dos protocolos anteriormente descritos são relativamente complexas e requerem optimização cuidadosa, a fim de evitar a agregação das partículas durante a síntese 14,15.
Aqui, nós descrevemos um protocolo para a síntese de nanopartículas magneto-plasmónico com um forte momento magnético e uma forte absorvância NIR que aborda as principais limitações da técnica actual. A síntese tem suas origens no método 16 microemulsão óleo em água. Ele baseia-se na montagem de nanopartículas de um tamanho desejado de uma muito menores partículas primárias. Esta abordagem tem sido utilizada com sucesso para a produção de nanoestruturas de um único material, tal como ouro, óxido de ferro, e pri semicondutormary partículas 16. Nós alargado a síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica, por um lado, fazendo 6 nm de diâmetro de concha de ouro / núcleo de ferro óxido de partículas e, em seguida, montar as partículas híbridas primárias para a nanoestrutura esférico final. Montagem partículas primárias em nanopartículas não só permite melhorar as propriedades das nanopartículas constituintes, tais como realização de um momento magnético mais forte, preservando as propriedades superparamagnéticas, mas também tira proveito da interação entre nanopartículas individuais, criando assim novas características ausentes das nanopartículas constituintes, como a forte absorção óptica na janela de NIR. Este protocolo resulta nanopartículas híbridas com uma alta densidade de funcionalidades magnéticos e plasmonic. Depois de as partículas primárias são sintetizados, o nosso método é essencialmente uma reacção simples de um só recipiente. A força total de ressonância de plasmon de momento magnético e são determinadas por um certo número de partículas primárias e, utrasntes, pode ser facilmente otimizado de acordo com o pedido. Além disso, também desenvolvemos um procedimento para anticorpo conjugação com as nanopartículas híbridas para várias aplicações biomédicas que exigem segmentação específica molecular. Os anticorpos são ligados através da unidade Fc deixando a porção Fab que é responsável pela ligação ao antigénio disponíveis para direccionamento.
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Protocol
1. Aparelhos de Copos Preparação
- Usar equipamento de proteção adequado, ou seja, um jaleco, luvas descartáveis e proteção para os olhos.
- Conectar um balão de fundo redondo com um condensador e mergulhá-lo em um banho de óleo de silicone com uma monitorização de temperatura por um termómetro. Coloque uma fonte de calor (por exemplo, placa de aquecimento), sob o banho de óleo (Figura 1). Utilizar um termómetro capaz de medir a temperatura mais elevada do que 260 ° C.
Nanopartículas 2 Síntese de híbrido primário Magneto-plasmônicos
- Fazer Magnetic Núcleo Nanopartículas
- Adicionar 353,2 mg (1 mmol) de ferro acetilacetonato (III), 1 ml (2 mmol) de ácido oleico, 1 ml (2 mmol) oleilamina, 1,292 g (5 mmol) de 1,2-hexadecanediol, e 10 ml de éter de fenil a uma ronda frasco -bottom.
- Agita-se vigorosamente a mistura usando uma barra de agitação e aquece-magnética a 250-260 ° C durante 1 h sob refluxo. Em seguida, aguarde a solução para se refrescarpara baixo para a TA. Certifique-se de que a temperatura está abaixo de 260 ° C para evitar a ebulição do éter fenil e evitar uma explosão da mistura de reacção do balão de fundo redondo para o condensador.
ATENÇÃO: A mistura de reacção é extremamente quente e os produtos químicos podem causar irritação. Deve operar sob um exaustor e usar equipamentos de proteção individual adequados. Assegurar uma ventilação adequada para o banho de óleo.
NOTA: O banho de óleo mantido a 250-260 ° C de temperatura durante 1 hora durante a síntese das nanopartículas magnéticas. Em princípio, um vidro pirex pode ser utilizado para esta finalidade. No entanto, a temperatura máxima contínua de vidro Pyrex é ~ 260 ° C de acordo com a informação de vendedor. Portanto, um recipiente de metal proporciona uma opção mais segura para a reação, pois ele pode suportar uma temperatura mais elevada e durar mais tempo durante várias execuções.
- Deposição de uma concha de ouro em nanopartículas núcleo magnético
- Adicionar 411,5 mg (1,1 mmol) ace ouroTate, 0,25 ml (0,75 mmol) de ácido oleico, 1,5 ml (3,0 mmol) oleilamina, 775,3 mg (3 mmol) de 1,2-hexadecanediol, e 15 ml de éter de fenil para um balão de fundo redondo.
- Adicionar 5 ml de suspensão de nanopartículas magnéticas a partir do passo 2.1. Aquece-se a mistura de reacção a 180 ° C e manter sob refluxo durante 1 hora. Aguarde até que a solução para esfriar a temperatura ambiente.
- Adicionar 50 ml de etanol para precipitar as nanopartículas híbridos primários seguido de centrifugação a 3250 × g durante 15 min.
- Ressuspender o precipitado em 25 ml de hexano por meio de um banho de ultra-sons. Adicionar 25 ml de etanol para precipitar as nanopartículas híbridos primários. Centrifugar a 3.250 xg durante 15 min e ressuspender o precipitado em hexano. Repita este passo três vezes.
- Secam-se as nanopartículas híbridas primário precipitados em um excicador de vácuo S / N. Confirme que as partículas estão completamente secos.
Nanoclusters 3 Híbrido Magneto-plasmônicos Síntese e Separação Tamanho
- Adicionar a solução do passo 3,1-10 ml de solução aquosa de dodecil sulfato de sódio (2,8 mg / ml) em um frasco de vidro de 20 ml com tampas anexadas. Adicionar a suspensão de nanopartículas híbridas primário gota a gota para evitar a mistura das duas fases antes da etapa seguinte.
- Sonicar a solução de duas fases, em um banho de ultra-sons, durante 2 horas, seguido por aquecimento num banho de água a 80 ° C durante 10 min. Aguarde até que a solução para esfriar a temperatura ambiente.
- Encha de água para a linha de nível operacional do banho de ultra-sons. Centralize o frasco de vidro no banho de ultra-sons. Forma-se um emulsão imediatamente entre as duas fases. Agitar a solução de duas fases com a mão após o início da sonicação; isso facilita a mistura entre a fase que contém nanopartículas híbridos primários e a fase aquosa inferior.
NOTA: Lembre-se that do sonicador vai aquecer após 2 horas de operação.
- Encha de água para a linha de nível operacional do banho de ultra-sons. Centralize o frasco de vidro no banho de ultra-sons. Forma-se um emulsão imediatamente entre as duas fases. Agitar a solução de duas fases com a mão após o início da sonicação; isso facilita a mistura entre a fase que contém nanopartículas híbridos primários e a fase aquosa inferior.
- Centrifugar a suspensão a 100 nanocluster híbrido xg durante 30 min. Recolhe-se o precipitado e tanto o sobrenadante. Ressuspender o precipitado em 0,1 mM de citrato de sódio 10 min sob ultra-sons. O tamanho esperado das nanopartículas é ~ 180 nm de diâmetro.
- Transferir o sobrenadante do passo 3.3 para um novo tubo cónico.
- Centrifugar a suspensão a partir do passo 3.4 a 400 xg durante 30 min. Recolhe-se o precipitado e tanto o sobrenadante. Ressuspender o precipitado em 0,1 mM de citrato de sódio 10 min sob ultra-sons. O tamanho esperado das nanopartículas é ~ 130 nm de diâmetro.
- Transferir o sobrenadante do passo 3.5 para um novo tubo cónico.
- Centrifugar a suspensão a partir do passo 3.6 a 1.500 xg durante 30 min. Recolher o precipitado e ressuspender em citrato de sódio 0,1 mM menos de 10 min de sonicação. O tamanho esperado das nanopartículas é ~ 90 nm de diâmetro.
- Adicionar 300 _6, l nanocluster suspensão para um leitor de microplacas de 96 poços para medir um espectro de absorção de UV-Vis-NIR. Queda de 10 mL de suspensão nanocluster em malha de cobre revestido de carbono para TEM imagem.
4. Conjugação de Anticorpos Monoclonais para Nanoclusters
- Preparar solução de 100 ul de anticorpo monoclonal (1 mg / ml) em PBS, pH 7,2, por exemplo, anti-Receptor do Factor de Crescimento Epidérmico 2 (HER2) ou anticorpos anti-factor de crescimento epidérmico receptor 1 (EGFR).
- Adicionar a solução de anticorpo a partir do passo 4,1-3,9 ml de HEPES 4 mM, pH 7,2. Centrifugar a solução através de um filtro centrífugo 10 k MWCO em 3250 xg durante 20 minutos a 8 ° C. Ressuspender o anticorpo em HEPES 4 mM, pH 7,2, para um volume final de 100 ul.
NOTA: Este passo é realizado para substituir o suporte de dados original na solução de anticorpo com HEPES. - Adicionam-se 10 ul de 100 mM NAIO 4-100 ul de solução de anticorpo. Cubra o frasco de reação com um alfolha uminum à TA e mistura-se durante 30 min utilizando um agitador orbital.
- Extingue-se a reacção por adição de 500 ul de 1x PBS.
- Adicionar 2 ml de solução de ligante de 46,5 mM (dithiolaromatic PEG6-CONHNH 2) à solução do anticorpo a partir do passo 4.4 e agita-se durante 1 hora à temperatura ambiente.
- Filtrar a solução através de um filtro centrífugo 10 k MWCO em 3250 xg durante 20 minutos a 8 ° C. Ressuspender o anticorpo em 1x PBS, para um volume final de 100 uL, que conduz a uma concentração de anticorpo de ~ 1 mg / ml.
- Misturar 100 mL em suspensão nanocluster OD ~ 1,0 com 1 ml de anticorpos modificados a partir do passo 4.6 (1 mg / ml) durante 120 minutos à temperatura ambiente.
- Adicionar 10 ul de 10 -3 M de 5 kDa PEG tiol e agitar por 15 min à temperatura ambiente.
- Centrifuga-se a solução a 830 x g durante 3 min. Descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 100 ul de 2% w / v de PEG de 5 kDa, em PBS, pH 7,2.
- Medir o espectro de absorção das nanopartículas de anticorpo conjugado e comparar a tele absorbância espectro das nanopartículas nuas. Espere alguns nanômetros desvio para o vermelho após a conjugação.
- Se as nanopartículas agregar, como mostrado por uma mudança significativa, com um aumento na OD na região do vermelho-NIR, aumentar a concentração de PEG tiol de 5 x 10 -3 M. Além disso, aumentar o tempo de incubação com o tiol de PEG a 30 min e diminui a velocidade da centrífuga, em incrementos de 200 xg.
- Para o teste de rotulagem de células cancerígenas, adicione o anticorpo nanopartículas conjugados a partir do passo 4.9 para suspensão de células de câncer no Médio ou 1x PBS (1 ml ~ 10 6 células) e misture por 60 min.
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Representative Results
Um esquema para a síntese de nanopartículas magneto-plasmónico immunotargeted é mostrado na Figura 2. Primeiro, magnéticos Fe 3 O 4 nanopartículas de óxido de ferro são sintetizados através do método de decomposição térmica. Em seguida, um a cerca de 1 nm de ouro casca fina é depositado sobre as partículas de núcleo de óxido de ferro, através da decomposição térmica. As nanopartículas híbridos primários cerca de 6 nm servem como sementes para criar nanopartículas magneto-plasmónico, utilizando uma abordagem de microemulsão óleo-em-água. As nanopartículas são funcionalizados com anticorpos monoclonais para o direcionamento específico molecular.
O tamanho de como sintetizadas do núcleo de óxido de ferro nanopartículas é ~ 5 nm de diâmetro. Depois da deposição de concha de ouro no núcleo magnético, o tamanho de ferro primário do núcleo de óxido de ouro / shell nanopartículas aumenta a ~ 6 nm de diâmetro. As mudanças de cor marrom coloidais de nanopartículas de óxido de ferro para a vermelho-púrpura após a deposição da concha de ouro e,Finalmente, a cor púrpura-cinzento, após a montagem das partículas primárias em ~ 180 nm de diâmetro nanopartículas esféricas (Figura 3). Os espectros de UV-Vis que mostram núcleo de óxido de ferro primário / nanopartículas de ouro concha têm um pico característico de ressonância a 530 nm, que não está presente em partículas de óxido de ferro nus (Figura 4). Após a formação de aglomerados, o espectro altera acentuadamente e exibe uma forte absorção NIR larga (Figura 4).
As nanopartículas são conjugadas com anticorpos monoclonais para combater especificamente biomoléculas de interesse. O protocolo de conjugação utiliza um ligante de polietileno-glicol heterofuncional (PEG), que atribui a região Fc de anticorpos à superfície da nanocluster. Uma das extremidades do ligante tem uma porção hidrazida que interage com oxidado unidade de anticorpo glicosilado. A outra extremidade do agente de ligação contém um grupo di-tiol, o qual tem uma forte afinidade para a superfície das nanopartículas de ouro. Para demonstre segmentação molecular que escolhemos uma linha EGFR positivo câncer de pele de células (A-431) e uma linha de células de câncer de mama HER2 positivo (SK-BR-3). Nanoclusters foram funcionalizados com anticorpos anti-HER2 ou anti-EGFR ou seguido de mistura com A-431 ou as células SK-BR-3 do cancro, respectivamente. Na Figura 5, uma cor laranja brilhante, ouro no A-431 e SK-BR-3 células cancerosas indica específica molecular ligação de nanopartículas a receptores nas células cancerosas correspondente. Em contraste, nanoclusters PEGilados irrelevantes não interagem com as células cancerosas. Estes resultados mostram a especificidade molecular das nanopartículas funcionalizadas.
A Figura 1 uma montagem experimental para a síntese de nanopartículas de óxido de ferro / invólucro núcleo ouro primárias. Um balão de vidro de fundo redondo ligado a um condensador. A reacção é levada a cabo num banho de óleo, sob monitorização da temperatura por um termómetro.
Figura 2 Um esquema ilustrando as principais etapas na síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica immunotargeted. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3 imagens de TEM e cor de suspensões coloidais de nanopartículas: (Esquerda) nanopartículas de óxido de ferro do núcleo; (meio) nanopartículas de óxido de ferro revestido de ouro; nanopartículas (direita) híbrido magneto-plasmônica. Barra de escala para imagens de TEM é de 50 nm. ps: //www.jove.com/files/ftp_upload/52090/52090fig3highres.jpg "target =" _blank "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4 (A) de UV-Vis-NIR espectros de ferro do núcleo de óxido de nanopartículas (azul), nanopartículas de óxido de ferro revestidas a ouro (verde), e híbridos nanopartículas magneto-plasmónico (vermelho). (B) de UV-Vis-espectros NIR de nanopartículas de magneto-plasmônica híbridos com vários tamanhos: 90 nm (azul), 130 nm (verde) e 180 nm (vermelho). Todos os espectros são normalizados para um na absorção máximo para mostrar as diferenças de perfis espectrais. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. ank "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5 especificidade molecular do anticorpo conjugado com nanopartículas de magneto-plasmônica: (Esquerda) EGFR expressando células A-431 de câncer de pele incubadas com nanopartículas alvo-EGFR; (Médio) HER2 expressando células cancerosas da mama SK-BR-3 incubadas com nanopartículas alvo HER2; (Direita) A-431 células incubadas com nanopartículas PEGilados irrelevantes. A cor amarelo-laranja das células indica rotulagem sucesso pelas nanopartículas funcionalizadas; cor cinzento-azulado corresponde a uma dispersão de células endógenas. As imagens foram obtidas usando microscópio vertical com objetivo 20X de campo escuro e Xe lâmpada de excitação. A barra de escala representa 10 um._blank "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Filme 1. Este vídeo compara uma resposta das células de cancro A-431 marcados quer por nanopartículas primárias ou nanopartículas para um campo magnético externo. Ambos os tipos de partículas onde conjugados com anticorpos anti-EGFR para direccionamento específico do EGFR (+) células A431. Em primeiro lugar, um tubo de Eppendorf foi preenchido com uma suspensão de células marcadas. Em seguida, foi colocado um íman próximo ao tubo e do movimento de células foi fotografado de cerca de 10 mm de distância do íman. O filme da esquerda mostra células marcadas com nanopartículas primárias (6 nm de diâmetro) e o filme sobre o direito - células marcadas com nanopartículas de magneto-plasmônica (100 nm de diâmetro). Os filmes foram adquiridos usando um microscópio invertido no modo de campo claro com objetiva de 20x. A barra de escala é 100 um.
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Discussion
As etapas críticas na síntese bem-sucedida de nanopartículas de magneto-plasmônica incluem tornar altamente monodispersos ouro primário shell / núcleo de ferro óxido de nanopartículas e dirigir a auto-montagem das partículas primárias em nanopartículas. A proporção molar entre as partículas primárias e surfactantes desempenham um papel importante na determinação da distribuição do tamanho das nanopartículas. Distribuição de tamanho não uniforme das nanopartículas primárias podem causar a formação de grandes agregados durante a montagem de nanopartículas de magneto-plasmônica. Além disso, o método de formação de micro-emulsão nanocluster invoca tensioactivos anfifílicos: grupos de cauda hidrofóbica manter juntos nanopartículas primárias e grupos de cabeça hidrófilos estabilizar nanopartículas em uma solução aquosa. A concentração dos agentes de superfície determina a montagem nanocluster: uma concentração elevada conduziria à formação de nanopartículas ou partículas primárias mais pequenas individuais e uma baixa concentração resultaria na agregação das partículas.
Um raio hidrodinâmico de nanopartículas aumenta em ~ 10-15 nm após a conjugação anticorpo. Este aumento do diâmetro correlaciona well, com cerca de 12 nm de tamanho de um anticorpo IgG, que está ligado através da porção Fc da superfície de nanopartículas. Por conseguinte, a mudança no diâmetro hidrodinâmico é consistente com a química de conjugação direccional de anticorpos através da porção Fe que é implementado no protocolo. Potencial Zeta de nanopartículas muda de -47,6 mV antes anticorpo conjugação de -7.0 mV após a conjugação. A mudança da carga de superfície fornece uma evidência adicional de anticorpo conjugação de nanopartículas.
A característica única do protocolo aqui descrito é a síntese de nanopartículas de magneto-plasmônica de vários tamanhos de blocos primários que também têm características magneto-plasmônicos. Este método oferece uma maneira simples para, simultaneamente, controlar a força de características plasmonic e magnéticas dos nano-estruturas resultantes. Em contraste, os protocolos anteriores usado um conjunto de nanomaterial plasmônica e magnético, onde um material de serviu como molde para a deposição de um outro; Nesta abordagem, um material ocupa o volume e a outra superfície de nanoestruturas resultantes. Nanopartículas Magneto-plasmônicos relatados na literatura têm significativamente menor densidade e a quantidade total de partículas superparamagnéticas, em comparação com as nanopartículas feitas pelo nosso protocolo de 14,15. No nosso método porções magnéticas e plasmônicos são uniformemente distribuídas em todo o volume de híbridos nanopartículas magneto-plasmónico.
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Disclosures
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado em parte pelos subsídios NIH R01 e R01 EB008101 CA103830.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PYREX 50 ml round bottom boiling flask with short neck & 24/40 [ST] joint | Corning | 4320A-50 | Thermal decomposition reaction |
| PYREX 41 x 300 mm 5-bulb Allihn condenser with 24/40 [ST] outer/inner joints | Corning | 2480-300 | Thermal decomposition reaction |
| Silicone oil | Fisher | S159-500 | Oil bath |
| Hot plate stirrer | Corning | PC-351 | Heat the reacton with stirring function |
| Thermometer | ThermoWorks | 221-092 | Measure temperature |
| Iron(III) acetylacetonate | Fisher | AC11913-0250 | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Oleic acid 99% | Fisher | A195-500 | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Gold(III) acetate | Fisher | AA3974206 | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Hexane | Fisher | H292-1 | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Phenyl ether 99% | Fisher | AC13060-0025 | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| 1,2-Hexadecanediol 90% | Sigma | 213748-50G | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Oleylamine 70% | Sigma | O7805-100G | Material for primary hybrid nanoparticles synthesis |
| Sodium dodecyl sulfate | Fisher | BP166-100 | Cluster synthesis |
| Sodium citrate dihydrate | Sigma | W302600 | Cluster synthesis |
| Monoclonal anti-EGF receptor antibody | Sigma | E2156 | Cell labeling specificity test |
| Monoclonal anti-HER2 antibody | Sigma | AMAB90627 | Cell labeling specificity test |
| Sodium periodate | Sigma | 311448 | Oxidate Fc region of antibodies |
| Dithiolaromatic PEG6-CONHNH2 | SensoPath Technologies | SPT-0014B | Heterofunctional linker for antibody conjugation to nanoclusters |
| Methoxy-PEG-thiol, 5 k | Creative PEGworks | PLS-604 | Passivate the remaining gold surface after antibody conjugation |
| Amicon Ultra-4 centrifugal filter unit with Ultracel-10 membrane | Millipore | UFC801008 | Protein purification |
| HEPES | Sigma | H3375 | Buffer |
| PBS, 1x solution | Fisher | BP2438-20 | Buffer |
| UV-Vis spectroscopy | BioTek | Synergy HT | Obtain spectrum |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810R | Separation |
| Transmission Electron Microscope | FEI | TECNAI G2 F20 X-TWIN | Obtain morphology of nanostructures |
| Upright microscope | Leica | DM6000 | Obtain dark-field images |
| Sonicator | Branson | 1510 | Sonication |
| Carbon film 300 mesh grid | EMS | CF300-Cu | TEM imaging |
| 96-well plate | Corning | 09-761-145 | UV-Vis reading plate |
References
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