Abstract
Ryggmärgsskador (SCI) orsakar allvarlig neurologisk försämring och psykologiska, ekonomiska och sociala konsekvenser för patienter och deras familjer. Kliniskt, mer än 50% av SCI påverka halskotpelaren 1. Som en konsekvens av den primära skadan, uppträder en kaskad av sekundära mekanismer innefattande inflammation, apoptos och demyelinisering slutligen leder till vävnads ärrbildning och utveckling av intramedullära kaviteter 2,3. Båda representerar fysikaliska och kemiska hinder för celltransplantation, integration och förnyelse. Därför, forma hämmande miljö och överbryggande håligheter för att skapa en stödjande miljö för celltransplantation och förnyelse är en lovande terapeutiskt mål 4. Här är en kontusion / kompressions modell av livmoderhalscancer SCI använder en aneurysm klämma beskrivs. Denna modell är mer kliniskt relevant än andra experimentella modeller, eftersom fullständig transektion eller brister i sladden är sällsynta. Även i JÄMFÖRELSEn till vikten drop-modellen, vilket i synnerhet skador dorsum kolumner, periferi kompression av ryggmärgen verkar fördelaktig. Clip stängningskraft och varaktighet kan justeras för att uppnå olika skadornas svårighetsgrad. En ring fjäder underlättar exakt kalibrering och beständighet klipp kraft. Under fysiologiska förhållanden, syntetiska självorganiserande peptider (SAP) själv montera in nanofibrer och därmed vädjar för tillämpning i SCI 5. De kan injiceras direkt in i lesionen minimera skador på sladden. SAP är biokompatibla strukturer Stående byggnadsställningar för att överbrygga intramedullära kaviteter och därmed utrusta den skadade sladden för regenerativa behandlingar. K2 (QL) 6K2 (QL6) är en roman SAP infördes av Dong et en l. 6 I jämförelse med andra peptider, QL6 själv monterar in β-ark vid neutralt pH 6 .14 dagar efter SCI, efter den akuta fasen, SAP injiceras in i centrum av lesionen och neurala prekursorceller (NPC) är Injected in i angränsande dorsala kolonnerna. För att stödja cellöverlevnad, är transplantation i kombination med kontinuerlig subdural administrering av tillväxtfaktorer genom osmotiska mikropumpar för 7 dagar.
Introduction
Mer än 50% av ryggmärgsskador är relaterade till halskotpelaren. I den kliniska inställningen två stora patofysiologiska mekanismer beskrivs: den initiala kontusion av ryggmärgen och därefter, den pågående kompression orsakad av benfrakturer, blödningar eller vävnad svullnad.
De aneurysm clip kontusion / kompressionsmodell efterliknar både patofysiologiska mekanismer: knäppa klämman producerar en kontusion och varaktigheten av klippning representerar komprimering komponent, medger att kompressionen i kliniska situationer orsakade av benfrakturer, blödningar eller vävnad svällande senaste betydelsefulla längre. Den används aneurysm klippet modifieras av en ringfjäder garanterar exakt och reproducerbar klippning kraft. Särskilt i jämförelse med hemi-transektion eller kontusion modell, detta aneurysm clip modell härmar bästa kliniska miljöer. Medan patienter med bröstkorg skador lider paraplegi, de flesta patienter med cervikal injuries är tetraplegisk och helt beroende. Den anatomiska struktur livmoderhalscancer sladden visar dock stora skillnader jämfört med bröst- eller ländryggen, och därmed, behandlas särskilt i detta protokoll.
Utvecklingen av intramedullära kaviteter och vävnad ärrbildning finns hinder för återvinning och förnyelse. För att övervinna dessa hinder att använda ställningen material är en lovande strategi. Självorganiserande peptider kan injiceras direkt i epicentrum av lesionen. Där montera in nanofiber ställningar överbryggar hålrummet och förbättra den inhibitoriska miljön genom att minska inflammationen och vävnads skrämma. Medan stela material orsaka betydande skada i ryggmärgen under implantering, kan fluid peptiderna injiceras säkert och utan allvarlig ytterligare skada.
Bättre hämmande miljö med självorganiserande peptider innan stamcellstransplantation därmed stödja cell iIntegrationen, differentiering och slutligen, funktionell återhämtning efter cervikal ryggmärgsskada.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Följande försöksprotokoll godkändes av djurvård kommitté University Health Network (Toronto, Kanada) och är i enlighet med de riktlinjer som fastställts i guiden till skötsel och användning av försöksdjur som utarbetats av den kanadensiska rådet av djurvård .
1. Cervikal Aneurysm Clip kontusion / Kompressions Modell
- Före kirurgi autoklav instrument och hålla sterila förhållanden under hela surgcial förfarande genom att sätta instrumenten i en 70% alkohol bad.
- Söva Wistar råttor (250-270 g) med en kombination av syre (O2), dikväveoxid (N2O) (1: 1), och 1,8-2,2% isofluran och stödja spontan andning via en gas anestesi mask. För induktion av anestesi börja med 5% isofluran under 1 minut och minskar efteråt. Innan du börjar kirurgi, kontroll anestesidjup genom att ge en smärtsam stimulus (t.ex.. Vid tassarna). Applicera feta salvori ögonen för att undvika torrhet och förhindra efterföljande infektioner.
- Sätt råttorna på en värmedyna (37 ° C) och fixera huvudet i en stereotaktisk ram.
- Raka kirurgiska regionen runt halskotpelaren och desinficera med povidon jod och 70% alkohol.
- Gör en mittlinjeincision ovanför ryggraden från halskotan (C2) når till den framträdande processus av bröst kotkroppen 2 (T2).
- Skär genom det yttre lagret av ryggkotornas musklerna direkt på mittlinjen (för att undvika blödning) i en kranio-caudal riktning och ytterligare dissekera de djupare muskellagren rent ut tills du kommer till processus spinosus och lamellerna. Infoga upprullningsdon.
- Orientera framträdande processus spinosus av kotan kropps T2 att observera de riktade nivåerna för laminektomi. Efter identifiering och mikrokirurgisk beredningen av den valda lameller, skär genom ligamenti flavae att lossa lameller och processus spinosus. Slutligen cut genom lamellerna med ett ben Clipper lateral till ryggmärgen och ta dem försiktigt, undvika varje kompression av ryggmärgen själv.
OBS: Vanligaste nivåer är C5 / 6, C6 / 7, eller C7 / T1. Den perioperativa dödligheten ökar mer rostralt nivån av skada. Blödning från paravertebrala venösa sinus är vanligt och kan hanteras genom noggrann komprimering med svamp. - Innan du sätter klippet att traumatize sladden, identifiera nya nervrötter att skona dem från klippning (särskilt på nivå C5 / 6).
- För att säkerställa en smidig klipp induktion, lossa ventrala dura från ryggsidan av kotkropparna med en krok och förbereda en korridor för klippet.
- Slutligen sätter den öppna klippet och låt den knäppa stängs (snabb stängning) för att uppnå en kontusion skada. Clip stängningskraft och varaktighet bygellåsning bestämma intensiteten av trauma och graden av komprimering. Vanligen används är clip krafter mellan 15-35 g och en clipping varaktighet t.ex. 1 min. (Figur 1).
- Efter avlägsnande av klämman, anpassa musklerna i två skikt och stänga såret.
- Sluta anestesi och låt djuret vaknar under din ständig kontroll tills den återfår tillräcklig medvetenhet för sternala VILA. Slutligen satte råttan i en enda bur och följa postoperativa behandlingsriktlinjer.
- Eftersom djuren kämpar med allvaret i den här typen av skada, måste du ägna särskild uppmärksamhet åt postoperativa behandlingar:
- Administrera smärtstillande medel (Buprenorfin och Meloxikam i 3 dagar och 5 dagar, respektive och enligt de kliniska symtom).
- Ge ytterligare koksaltlösning subkutant för 3 dagar (två gånger per dag, 5-10 milliliter (ml)).
- Ge antibiotika i dricksvattnet 2 dagar före och fram till 7 dagar efter operation (t.ex. moxifloxacin)
- Kläm urinblåsan 2-3 gånger om dagen till dess att blåsfunktionen är konstantly uppenbara.
- Observera neurologiska underskott och fysiologiska tillstånd av de drivs djuren minst en gång om dagen.
2. Injektion SAP och NPCs (14 dagar efter skada)
- Inducera anestesi såsom beskrivits i 1.1. till 1,3, fixa huvudet av råtta i en stereotaktisk ram, ta bort stygnen eller lindade klipp, och desinficera såret och operationsområdet med povidon jod och 70% alkohol.
- Försiktigt dissekera paravertebrala muskler, sätter upprullningsdon, ta bort ärrvävnad mikroskopiskt från dura, och återexponera lesionsstället.
- Förbered AHP i en koncentration av 1% (vikt / volym) för att utföra en extracellulär matris-gel. QL6 SAP har en fysiologiskt kompatibel pH och behöver inte buffras före injektion. För visualisering av SAP i ryggmärgen, använd en fluorescerande derivat av QL6 (QL6-FITC).
- Injicera AHP (5 mikroliter (| il) in i centrum av lesionen, fördelade i två delar, varvid varje2.5 l bilateral om mittlinjen. Använd en Hamilton-spruta som är ansluten till den stereotaktiska ramen med en mikro glaskapillär (100 mikrometer (| im) ytterdiameter (OD)). Öppna dura försiktigt med spetsen på en vass nål och för in glaskapillär stereotaktiskt 2 millimeter (mm) i traumatiserade ryggmärgen.
- Efter injicering 1/3 av volymen, ta bort nålen till 1,5 mm djup, och efter ytterligare 1/3 till 1 mm. Efter injektion av hela volymen, och före avlägsnande av sprutan, vänta 5 minuter för att stabilisera gelbildning.
- För att generera NPC, använd vuxen dsRed möss (eller YFP positiva möss, grön) och isolera och odla dem från paraventrical zonen 4,18,21.
- Bedöma viabiliteten hos NPC genom trypanblå färgning indikerar närvaron av ~ 90% levande celler i cellsuspensionen. Späd cellerna i tillväxtmedium (50 x 103 levande celler / l) och sedan använda dem för celltransplantation.
- Gör fyra 2 pl (8 pl totala voLume, innehållande 4 x 10 5 NPC) intraspinala injektioner bilateralt vid 2 mm rostralt och stjärtfenan av skadan webbplats. Efter öppning av duran, sätt i Hamilton mikroglas kapillär 1,5 mm under den dorsala ytan av ryggmärgen och injicera 2 pl av cellsuspensionen. Välj en insprutningshastighet vid ca 0,5 | j, l / min (min).
- Vid slutet av varje injektion och före avlägsnande av kapillär ur sladden, vänta minst 1 minut tillåter vävnad stretching för att rymma den nya cellvolymen. (Figur 2)
3. Implantation av Subdural Pumpar för Growth Factor Application
- För att berika cerebrospinalvätskan (CSF) med tillväxtfaktorer stödja cellöverlevnad, använder mikro osmotiska pumpar utspädande tillväxtfaktorer under durally hela 7-14 dagar, med en utspädningshastighet av 0,5 ul / h, en kateter diameter på 0,04 cm OD, och en reservoarvolym på 100 | il.
- Välj vilka tillväxtfaktorer(T.ex. hjärna härledd tillväxtfaktor (BDGF), epidermal tillväxtfaktor (EGF), fibroblasttillväxtfaktor (FGF)), fyll pumparna 6-10 h före implantering och låt jämvikta pumparna i ett vattenbad vid 37 ° C.
- Omedelbart efter NPC injektioner, förbereda en subkutan urtag för att placera pumpen. Föredragna platser är sido flanker thoraco- bukhålan undvika stora lokala obehag av själva pumpen.
- För att få den högsta koncentrationen av tillväxtfaktorer, se till att den öppna spetsen av katetern slutar nära lesionsstället. Därför utför en skip-laminektomi av den intilliggande övre eller lägre nivå. Till exempel, om SCI är C7 / T1, utföra en liten laminektomi C5.
- Placera pumpen i den subkutana urtaget, förkorta katetern till nödvändig längd och fäst det med flera suturer (6,0) på paravertebrala muskler undvika varje förflyttning associerade förskjutning.
- Efter att ha öppnat dura (t.ex. vid C5) med vass spetsav en nål, införa katetern i subduralrummet och låt den glida i en kaudal riktning utan motstånd och utan skada ryggmärgen. Den överhoppade lamina av t.ex. C6 fungerar som extra fixeringspunkt och stabilisering av katetern.
- Kontrollera att katetern löper smidigt och inte vika.
- Stäng muskler genom lagret, och hud, med suturer eller klämmor. (Figur 3)
- Sluta anestesi och låt djuret vaknar under din ständig kontroll tills den återfår tillräcklig medvetenhet för sternala VILA. Slutligen, lägg tillbaka dem i en enda bur och följa postoperativa behandlingsriktlinjer.
- Ge särskild postoperativ behandling, även om, djur kan ha återhämtat delvis vid denna tidspunkt:
- Administrera smärtstillande medel (Buprenorthine och Meloxikam i 3 dagar och 5 dagar, respektive och enligt de kliniska symtom).
- Ge antibiotika i vattenflaskor 2 dagar innan dess att7 dagar efter operation (t.ex. moxifloxacin).
- Fortsätt att klämma urinblåsan, om det fortfarande är nödvändigt.
- Ge ytterligare subkutana vätskor, om råttorna verkar uttorkad.
- Håll observera neurologisk funktion och fysiologisk kondition drivs djuren minst en gång om dagen.
- Administrera immunosuppression behandling 2 dagar före NPC injektion och fram till 7 dagar efter transplanation (minocyklin) och fram offer (Sandimmune), respektive.
Bedömning 4. Vävnad
- Offra djur vid slutet av observationstiden (t.ex.. 4 veckor efter SCI) i djup anestesi (5% isofluran under 2-3 minuter) och BEGJUTA dem transkardiellt med 50 ml kall (4 ° C) saltlösning följt av 150 ml kall 4 % paraformaldehyd i 0,1 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS).
- Avlägsna ryggmärgen och placera den i 4% paraformaldehyd i 0,1 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS) under 24 h.
- Ge longitudinella kryosnitt med en tjocklek av <30 | im.
- För immunhistokemisk färgning av alla cellkärnor ger en bakgrund användning DAPI (1: 1000). DsRed positiva NPCs ser röda, visas QL-6 FITC grön, och båda därmed behöver inte färgas speciellt. (Figur 4).
- För svepelektronmikroskopi (SEM) låta prover blöt i glutaraldehyd vid 4 ° C under 2 h, dehydratisera dem långsamt i 10% ökningssteg av etanol under 5 min och placera dem i en trycksatt flytande CO2 sifon under 1 timme. Coat ställningar med guld med hjälp av en sputter bestrykare. Ta bilder med en Hitachi S-3400N svepelektronmikroskop. (Figur 5)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
När man utför den ovan beskrivna proceduren, kommer du få en SAP-byggnadsställning överbryggande håligheten och som erbjuder en förbättring av den inhiberande miljö, mindre vävnads skrämma och en ökning av NPC överlevnad. Figur 4 visar ett längdsnitt av en råttryggmärg erhålls vid skada plats 6 veckor efter SCI och fyra veckor efter QL6 SAP injektion och NPC transplantation. QL6 peptider framgångsrikt injiceras i sladden, aggregerade i epicentrum och diffus rostro-kaudalt i Penumbra. Elektronmikroskop avbildning visar vidare, i figur 5, monteringen av 1% (vikt / volym) QL6 peptider till en nanofiber byggnadsställning inom 2 h utspätt i PBS-lösningar.
Denna matris ger en förbättring av den hämmande miljö som bidrar till ökad cellöverlevnad och celldifferentiering, mindre vävnads ärrbildning och slutligen leder till en bättre chans för funktionell återhämtning.
ure 1 "src =" / filer / ftp_upload / 52105 / 52105fig1highres.jpg "/>
Figur 1: Klipp kontusion / kompressions aneurysm modell (A) Fotografera genom kirurgiska mikroskop efter laminektomi C7 / T1 och klipp kontusion / kompression av ryggmärgen på en råtta (B) Bild av klippet med ringfjäder garanterar exakt.. stängningskraft.
Figur 2: Injektionspunkter SAP och stamceller Grafisk illustration av insprutningspunkterna:. 2 stereotaktiskt utförda SAP injektioner i epicentrum av lesionen, följt av fyra injektioner av NPCs i angränsande rygg kolumner med ett avstånd på 2 mm kaudalt och rostral från epicentrum.
Figur 4: framgångsrik leverans av SAP: er och NPC i den cervikala ryggmärgen Fluorescerande färgning (DAPI bakgrund, blå) av ett längdsnitt av en traumatiserad ryggmärgen hos en råtta.. Märkta SAP (QL6-FITC, grön) har samman i epicentrum av lesionen. Injicerade NPCs (DsRed positiv, röd) har spritt irostralt och caudal riktningar. Skalstreck avser 5 mm.
Figur 5:. Nanofiber scaffold formation svepelektronmikroskop (SEM) bild som visar nanofiber scaffold bildning av monterade SAP: er. Skala bar avser 1 mikrometer).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Detta protokoll har utvecklats för att göra det möjligt för läsaren att utföra en cervikal skada modell hos råttor och att använda en kombinerad behandling tillvägagångssätt med SAP och NPC främjar bättre återhämtning efter livmoderhalscancer SCI.
Särskilt i jämförelse med andra livmoderhalscancer traumamodeller, såsom (hemi) -transection modell eller vikt droppe och hjärnskakning modeller, klippet kontusion / kompressionsmodellen representerar både stora patofysiologiska traumamekanismer - kontusion och kompressions och därför härmar bästa kliniska tillstånd. Medan det är väl etablerad för användning i råtta och mus bröstryggraden 7-11, har det nyligen anpassats för användning i halsryggraden. Detta var ett viktigt steg eftersom livmoderhalscancer ryggmärgsskador är den vanligaste ses i kliniken och livmoderhalscancer anatomi varierar betydligt från bröstryggen. Dessutom livmoderhalscancer SCI patienter som lider av tetrapares är angelägna om att återta åtminstone partiell motor fsmörjelse sina övre extremiteter.
Utmanande aspekter av experimentell livmoderhalscancer SCI är dock en hög dödlighet som ökar i en rostral riktning från C7 till C5 och kan nå upp till 20-30% i mitten och övre halsryggen. Vidare framväxande nervrötter (särskilt vid C5 / 6) är känsliga för manipulation, och i fall de inte bevaras, skador och irritation kan orsaka tugga av front tassar resulterar i behovet av en tidig offret av djuren. I allmänhet djur med cervikal ryggmärgsskada behöver mycket av postoperativ uppmärksamhet och omsorg och visar en längre kurs av återhämtning. Å andra sidan, utöver noggrann kirurgisk förberedelser, dessa frågor kan delvis lösas genom att anpassa svårighetsgraden av skadan genom att välja en lämplig klämma stängningskraft (t.ex. 15 till 35 g) och en lämplig klippning tid (t.ex. 1 min). Modifiera dessa parametrar leder till olika svårighetsgrader av skada (mild, Moderate, eller svår SCI). Dessutom kan det finnas en risk för kirurg beroende eller en ojämn fördelning av skadan. För att åtgärda dessa problem användningen av en klämma applikator är ett alternativ där klämman alltid släpps och därför stängas med samma hastighet och därmed hastigheten. Innan knäppa klippet är det obligatoriskt att se till att klämman har sin rätta position och omsluter hela ryggmärgen lika. Särskild kirurgisk utmaning ligger i att återexponering av lesionsstället tar bort ärrvävnad från dura. Det rekommenderas att denna procedur utförs mikro kirurgiskt, med hjälp av skarpa förberedelser, och undvika påtryckningar eller dra av den fasta sladden.
Självorganiserande peptider har identifierats som har potentialer för att överbrygga kaviteten och, dessutom, för att förbättra den inhiberande miljö vid lesionsstället slutligen även leder till axonal återbildning och groning 5, 12,13,14. QL-6 nanofibrer montera till byggnadsställningar överbryggandeden intramedullära kavitet och således kan ge en matris för axonal groning och regenerering och förbättra den inhibitoriska miljön före celltransplantation. Fördelarna med dessa peptider låg i sin låga viskositet (vätska) och neutralt pH. Särskilt i jämförelse med hög viskösa hydrogeler eller vävnadsstöd, kan SAP lätt sprutas in i skadade ryggmärgen och ytterligare skador som härrör från själva injektionen är begränsade.
Även QL6 Nanofiber själva kan förbättra cellöverlevnad 4,15, ändå verkar användningen av tillväxtfaktorer för att vara fördelaktigt 16,17,18,19,20,21. De kan administreras antingen genom hydrogeler släppa tillväxtfaktorer 22, eller genom ansökan via osmotiska pumpar (enligt ovan). Osmotiska pumpar kopplade till subdural katetrar erbjuder fördelen av en kontinuerlig och kontrollerad frisättning och därmed, anrikning av halsryggmärgsvätska (CSF). Placering av subdural katetern är emellertid challenging särskilt med avseende på stora ärrbildning som kan ha inträffat efter några veckor efter skadan.
För att ge goda vävnads förutsättningar för NPC överlevnad och integration, har flera studier valt injektionspunkter i den intilliggande vita substansen, 2 mm rostral eller kaudalt om skadestället och inte direkt i epicentrum av lesionen 4,15,18. Där NPCs har en bättre chans att överleva, integration och differentiering till astrocyter oligodendrocyter eller nervceller, och kan migrera mot eller in i lesionen resulterar i axonal groning och förbättrad axonal anslutning.
Efter maste dessa tekniker här föreslagna protokollet makt som ska antas av de enskilda användarna enligt deras behov och intressen som omfattar ändringar av nivån och svårighetsgrad av skadan, användningen av olika typer eller cell tillväxtfaktorer, eller tillägg av andra neuro skyddande ämnen .
ISammanfattningsvis, kombinerad behandling med SAP och NPCs kan erbjuda ett nytt och lovande strategi vinna de mest utmanande hinder i behandlingen av SCI: håligheter och vävnad ärrbildning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Vi vill tacka för finansieringen stöd för detta arbete från de kanadensiska Institutes of Health Research (CIHR), till Krembil Family Foundation, Halbert professur i Neural Repair and Regeneration, Phillip och Peggy DeZwirek, och Gordon Yao för bidraget Figur 2 . Klaus Zweckberger har finansierats av ett anslag från "Deutsche Forschungsgesellschaft" (DFG).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aneurysmal clip | SharpTech | ||
| Surgical microscope | Leica | ||
| Micro injection system | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Small animal stereotaxic instrument | David Kopf Instruments | ||
| Hamilton syringe | Hamilton company | ||
| Subdural pumps |  Alzet osmotic micro pump 1007D |
||
| Surgical instrument | Fine Science tools | ||
| Isoflurane USP | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | ||
| 0.9% Sodium Chloride injection USP | Baxter | ||
| 7.5% Povidone iodine | Purdue Pharma | ||
| 70% Isopropyl alcohol USP | GreenField Ethanol Inc. | ||
| QL6 SAP | Covidien | ||
| 0.4% Trypan blue | Gibco | ||
| Platelet-Derived Growth Factor (PDGF) | Sigma | ||
| Epidermal Growth Factor (EGF) | Sigma | ||
| Fibroblast Growth Factor (FGF) | Sigma |
References
- Sekhon, L. H., Fehlings, M. G. Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury. Spine (Phila Pa 1976). 26, S2-S12 (2001).
- Fehlings, M. G., Tator, C. H., Linden, R. D. The relationships among the severity of spinal cord injury, motor and somatosensory evoked potentials and spinal cord blood flow). Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 74, 241-259 (1989).
- Thuret, S., Moon, L. D., Gage, F. H. Therapeutic interventions after spinal cord injury. Nat Rev Neurosci. 7, 628-643 (2006).
- Iwasaki, M., Wilcox, J. T., Nishimura, Y., Zweckberger, K., Suzuki, H., Wang, J., Liu, Y., Karadimas, S. K., Fehlings, M. G. Synergistic effects of self-assembling peptide and neural stem/progenitor cells to promote tissue repair and forelimb functional recovery in cervical spinal cord injury. Biomaterials. 35, 2617-2629 (2014).
- Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 6728-6733 (2000).
- Dong, H., Paramonov, S. E., Aulisa, L., Bakota, E. L., Hartgerink, J. D. Self-assembly of multidomain peptides: balancing molecular frustration controls conformation and nanostructure. J Am Chem Soc. 129, 12468-12472 (2007).
- Rivlin, A. S., Tator, C. H. Effect of duration of acute spinal cord compression in a new acute cord injury model in the rat. Surg Neurol. 10, 38-43 (1978).
- Poon, P. C., Gupta, D., Shoichet, M. S., Tator, C. H. Clip compression model is useful for thoracic spinal cord injuries: histologic and functional correlates. Spine (Phila Pa 1976). 32, 2853-2859 (2007).
- Fehlings, M. G., Tator, C. H. The relationships among the severity of spinal cord injury, residual neurological function, axon counts, and counts of retrogradely labeled neurons after experimental spinal cord injury. Exp Neurol. 132, 220-228 (1995).
- Joshi, M., Fehlings, M. G. Development and characterization of a novel, graded model of clip compressive spinal cord injury in the mouse: Part 2. Quantitative neuroanatomical assessment and analysis of the relationships between axonal tracts, residual tissue, and locomotor recovery. J Neurotrauma. 19, 191-203 (2002).
- Joshi, M., Fehlings, M. G. Development and characterization of a novel, graded model of clip compressive spinal cord injury in the mouse: Part 1. Clip design, behavioral outcomes, and histopathology. J Neurotrauma. 19, 175-190 (2002).
- Cigognini, D., Satta, A., Colleoni, B., Silva, D., Donegà, M., Antonini, S., Gelain, F. Evaluation of early and late effects into the acute spinal cord injury of an injectable functionalized self-assembling scaffolds. PLoS One. 6 (5), e19782 (2011).
- Hou, T., Wu, T., Wang, L., Liu, Y., Li, M., Long, Z., Chen, H., Li, Y., Wang, Z. Cellular prostheses fabricated with motor neurons seeded in self-assembling peptides promotes partial functional recovery afters spinal cord injury in rats. Tissue eng Part A. 18 (9-10), (2012).
- Gelain, F., Cigognini, D., Caprini, A., Silva, D., Colleoni, B., Donegà, M., Antonini, S., Cohen, B. E., Vescovi, A. New bioactive motifs and their use in functionalized self-assembling peptides for NPC differentiation and neural tissue engineering. Nanoscale. 4 (9), 2946-2957 (2012).
- Liu, Y., Ye, H., Satkunendrarajah, K., Yao, G. S., Bayon, Y., Fehlings, M. G. A self-assembling peptide reduces glial scarring, attenuates post-traumatic inflammation and promotes neurological recovery following spinal cord injury. Acta Biomater. 9, 8075-8088 (2013).
- Rosner, J., Avalos, P., Axosta, F., Liu, J., Drazin, D. The potential for cell therapy combined with growth factors in spinal cord injury. Stem Cell Int. , 826754 (2012).
- Lu, P., Wang, Y., Graham, L., McHale, K., Gao, M., Wu, D., Brock, J., Blesch, A., Rosenzweig, E. S., Havton, L. A., Zheng, B., Conner, J. M., Marsala, M., Tuszynsky, M. H. Long distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury. Cell. 150, 1265-1273 (2012).
- Karimi-Abdolrezaee, S., Schut, D., Wang, J., Fehlings, M. G. Chondrioitinase and grwoth factors enhance activation and oligodendrocyte differentiation of endogenous neural precursor cells after spinal cord injury. PLoS One. 7 (5), e37589 (2012).
- Awad, B. I., Carmody, M. A., Steinmetz, M. P. Potential role of growth factors in the management of spinal cord injury. World Neurosurg. (13), 1875-8750 (2013).
- Kojima, A., Tator, C. H. Intrathecal administration of epidermal growth factor and fibroblast growth factor 2 promotes ependymal proliferation and functional recovery after spinal cord injury in adult rats. J Neurotrauma. 19 (2), 223-238 (2002).
- Karimi-Abdolrezaee, S., Eftekharpour, E., Wang, J., Cindi, M. M., Fehlings, M. G. Delayed trasplantation of adult neural presursor cells promotes remyelination and functional neurological recovery after spinal cord injury. J Neurosci. 26 (13), 3377-3389 (2006).
- Burdick, J. A., Ward, M., Liang, E., Young, M. J., Langer, R. Stimulation of neurite outgrowth by neurotrophins delivered from degradable hydrogels. Biomaterials. 27, 452-459 (2006).
