Protocol
动物使用协议批准了在阿尔伯塔大学的健康科学动物管理和使用委员会。
1.准备仪器，动物和手术的设置
- 动物转移到之前的程序所有的固体食物24小时的一个新的，干净的笼子里缺席。他们可能有自由饮水，并流质饮食即兴直到该过程的时间。
- 高压灭菌所需的程序的所有仪器。清洁操作表面和麻醉剂的鼻锥，用70％的乙醇。
- 设置的方式，这是舒适，手术医生用手术显微镜，麻醉机和用品的操作表面。外科医生的肘部应允许舒适地休息，在手术台上，用双手和双臂受通畅设备。器械，缝线，棉签，和10ml的注射器应该被放置在一个位置，它允许在操作过程中便于使用。
- 建立开销加热灯，以提供温暖的程序和光的操作表面中的动物。
- 填在50ml的锥形管中以0.9％的盐水，和1.5ml试管用凡士林和场所的操作表面附近。
注：所有的消毒仪器和手术用品。因为肠道被横切，该过程本身是不育的。它被认为是干净的污染。采取措施，避免引进感染的外源性来源。
2.回结肠切除吻合术
- 通过施用4％异氟烷以2升/分钟通过鼻锥从异氟烷蒸发器的氧流量诱导麻醉，直到动物呼吸速率减慢到大约30-40次/分。施加适当的压力，以鼠标的后足，以确保有之前启动过程没有疼痛反应。在这一点上，调低异氟烷至2％，氧流量0.5升/分。间歇在此过程中检查的疼痛反应，并相应地调整异氟醚的流量。
- 适用凡士林眼睛，以防止干燥手术过程中，并固定在鼠标的四肢用透明胶带固定仰卧位。
- 请用povodine /碘溶液的腹部，并转变成新的无菌手套。
- 让1.5厘米皮肤切口用锋利点解剖剪刀，以暴露筋膜和腹膜腹部的上部中线。通过白线打开以类似的方式筋膜/腹膜层腹膜内容露出。
- 而相比之下，人类，小鼠盲肠通常位于腹部的左上象限。一旦确定，轻轻抓住钳盲肠和通过切口提供它。用浸湿的棉签扇出约3cm回肠末端与盲肠在一个无菌纱布搭在腹部表面（ 图1A）延伸。确保该过程的全部过程中暴露的肠保持湿润以0.9％的盐水。
- 确定回盲动脉分支沿结肠（ 图1A）的肠系膜上动脉使用手术显微镜。剖析了相邻的回盲动脉的缺血性组织，包围并结扎用5-0丝线扎动脉。接下来，找到区域的血液供应，回肠末端，然后选择一个横切点1.5-2厘米近端回盲部。结扎分支为上述这部分回肠。划分微型解剖剪刀动脉。
- 分回肠和结肠确保有足够的血液供应，切断端部（ 图1B）的缺血部分。常常是有帮助通过它除以一个30度角，以增加腔的直径，从而它更紧密地结肠匹配到匙形回肠。一旦肠道回盲部已被删除，对齐回肠和结肠的纱布切断端部，从而确保每一个的肠系膜的边界对齐。
- 通过近似回肠的横切端使用结肠横切端构造吻合间断8-0聚丙烯缝合线（ 图1C）。所述第一线圈被放置在肠系膜边界，随后缝线置于每0.5毫米直到回结肠吻合术是水密的。当通过回肠和结肠缝合针，保证切割边缘不卷，和针叮咬为0.5毫米肠道的切割边缘。一个典型的吻合将需要14至16间断缝合。通过轧制棉签近端至远端在回肠通过吻合迫使内容完成时测试该吻合的完整性和通畅。小肠内容应自由地传递到不吻合口漏的结肠。
- 从10毫升注射器冲洗暴露的肠用3-4毫升0.9％盐水中的洗去粪便从肠的表面上，并提供肠放回腹腔。使用2毫升的0.9％盐水冲洗腹腔，然后通过施加轻微的压力于腹壁横向排水该流体。
- 关闭切口用3-0丝缝合线的运行，并终止异氟醚的流动。施用0.1毫克/千克的长效鸦片-buprenorphine-皮下手术后疼痛控制。
- 观察下加热灯的动物，直到他们的移动，然后将它们转移到一个不断升温的笼子。
3，术后护理和监测
- 监测动物在不断升温笼窘迫的迹象了一天的剩余部分。动物转回到了动物护理设施的新的无菌笼子访问流质饮食和水的即兴表演。动物可以被容纳在3-4组。
- 在手术后的动物进行检查，第二天早上，确保动物不会出现遇险。只喂流质饮食。如果出现不舒服（ 例如，弯腰驼背的姿势或活动极少）管理皮下丁丙诺啡的附加 剂量。检查动物再次在下午手术后第1天。
- 在手术后第2天上午的动物应该出现全面复苏。食品消费和stooling的证据是复苏的积极迹象。现在，恢复了坚实的食物饮食的动物。
注：窘迫的症状包括驼背的姿势，疏导差，最小的活动。如果窘迫的迹象很突出的动物应该被安乐死。 - 通过诱导用4％异氟烷深度麻醉，以2升/分钟的O 2流量，直至动物安乐死的动物是不响应足压。进行颈椎脱位，并遵守正确安乐死的迹象。
- 指引而有所不同，所以请参阅有关指示机构的建议对于和安乐死的小鼠的适当方法。
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Representative Results
死亡率和体重变化术后。
在129S1野生型小鼠以下ICR死亡率一般〜5％。道德的最常见原因是肠梗阻的吻合。死亡的其他原因包括吻合口瘘和内疝，导致肠梗阻。
体重减轻可以看出长达14天手术后，但一般不显著。小鼠倾向于通过手术后第28天（ 图2）完全恢复手术前的重量。
技术的可转让性
新的研究生（BM）被教导要执行ICR程序，以确定是否与以前没有手术培训的操作员可以学习的技术。训练开始学习如何执行单一间断缝合类似于在用8-0尼龙线缝合吻合术中使用。缝合线进行关闭跨乳胶GLO做一个切口已经。经过BM能够通过手套，以有效地把缝线不流泪，他们观察到之前尝试三种手续齐全。在第一步骤完成之后，它们再观察另一个程序，并企图2以上。这三只动物完成的，最后两个继续生存和发展。第一个动物安乐死因并发症吻合。
图1.阶段回结肠切除吻合的。（A）回盲部肠管的区域释放出腹部。黑色箭头表示血管被连接，虚线表示横断点结肠和回肠末端。 （ 二）拆除回盲部，肠管断端对齐，剩余的血液供应被证明了的黑色箭头。 （c）已完成回结肠阿纳斯tomosis， 请点击这里查看该图的放大版本。
图2.动物的重量为基准，28手术后14天及手术后的日子中的权重不显著观察到变化后的程序，通过曼-惠特尼ü统计测试来确定。 ICR（回结肠切除组），控制（非手术对照组）。
缝线穿过肠组织图3代表性路径。H＆E染色的回肠（右）和结肠（左）一字排开展示缝合线的ne轨迹的组织切片通过起始点（a）在所述组织中（虚线）通过对点edle（b）所示。结点应该（三）被捆绑。需要注意的是更少的粘膜包括在吻合口比其他组织。 请点击这里查看该图的放大版本。
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Discussion
鼠的ICR是可以用来研究手术中肠疾病的效果的强大的模型。本文介绍用95％的成功率和失败的蓬勃发展为以稳定的权重至28天手术后没有反映出来的问题进行ICR小鼠的方法。成功ICR最显著的挑战包括避免肠梗阻的吻合及吻合口漏。
技术要素的手术，以防止阻塞的目的是在吻合最大化内腔直径。回肠在横断点Spatulation通过将肠在如在图1A中所示的30度角增大管腔直径。当考虑用缝合针肠道组织的叮咬，它是必不可少的展开肠的边缘，并通过在针大约为0.5毫米的切割边缘。过组织大型叮咬会缩小流明。一个选项为AV当构成所述吻合是如由科尔南等人 15采用利用可消化支架的oid管腔变窄。非技术方面，以避免阻塞包括选择一个足够小的缝合线4，并避免笨重管腔内容由前一天手术2天手术后饲养动物的流质饮食。
手术后的死亡率的第二位最常见的原因是吻合口瘘。避免这种并发症，需要严格遵守肠吻合的原则。首先是充足的血液供应。后被切除的供血肠的区域中的血管被结扎肠应肉眼之前横断检查。肠缺血段会出现灰蒙蒙的;这应该是完全除去，留下健康的边缘。它以可视化少量从剩余肠的切割边缘的出血是非常重要的。阿水紧阿纳斯tomosis也是必不可少的，以避免管腔内容导致败血症溢出。这是通过避免缝合线之间大的间隙，并确保在肠道中的所有层都包括在线圈（ 图3）来实现的。伤口的强度大大减少，在头两个术后天，从而正确地放置缝线是必不可少的，以提供强度16,17。一个潜在的陷阱是不经意只包括黏膜的黏膜皱拢来了横断结肠腔。此，可避免由可视浆膜的切割边缘，并轻轻减少脱垂的黏膜回用钳子的内腔。
假手术对照应在使用ICR模型来控制对手术应激，肠操作，和/或回盲瓣的损失的潜在的混杂影响的研究实验设计考虑。被问的假程序的选择将取决于主要问题研究。例如，如果研究的目的是评估损失的回盲瓣后，主机的响应，那么这将是审慎的做法包括在其中，同时使回盲瓣到位肠吻合术进行假手术组。这通常是通过横切小肠而不切除，然后以相同的方式进行小肠吻合作为回结肠吻合7,11完成的。这将允许研究人员通过控制肠吻合术的效果特别评论的回盲瓣损失的影响。或者，如果目标是不仅要研究肠切除吻合的效果，而无需在回盲瓣的损耗评论具体地说，那么假手术应包括剖腹手术和肠道应视为它会为ICR，但没有横断吻合。这对于控制手术应激和肠道操作。中所描述的技术协议上面可以容易地适合于执行假程序。
这个协议描述了一种回结肠切除术，这消除1.5-2厘米末端回肠和盲肠的全部，并密切模仿患者回结肠克罗恩病频繁进行的操作。相似的程序已被用于在所述IL-10 - / -后小鼠发生自发性炎症和纤维化中的小肠类似于克罗恩病复发7,11结肠炎模型。这一过程的原理也可以适用于其他疾病的模型。通过去除小肠与回结肠吻合术的50％，小鼠模型已被用于研究在短肠综合征4-6自适应肠生长反应。在未来，这也可能成为研究大肠癌手术的全身和局部效应的有用模型。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LD101 liquid rodent diet | testdiet.com | ||
| 0.9% NaCl | Baxter | FKE1324 | Injection quality saline |
| Operating Microscope | Ziess | ||
| Isoflurane Anesthetic Vaporizer | Harvard Apparatus | 34-0483 | |
| Isoflurane | Abbott | 05260-05 | |
| Glass plate | For operating surface | ||
| Cotton swabs | |||
| Micro Castroviejo Needle holder, curved | World Precision Instruments | 503377 | |
| Castroviejo straight scissors | World Precision Instruments | 555530S | |
| Dissecting Scissors | World Precision Instruments | 15922 | |
| Dressing Forceps x 2 | World Precision Instruments | 500363 | |
| 5-0 silk pre-cut sutures | Ethicon | A182H | For vessel ligation |
| 8-0 Prolene on BV130-5 needle | Ethicon | 8732H | For anastomosis |
| 3-0 Silk on FS-2 needls | Ethicon | 8665G | For abdominal wall closure |
| Petroleum Jelly | Vaseline | ||
| 10 ml syringe | BD biosciences | ||
| Povidone-iodine 7.5% surgical Scrub | betadine.com | ||
| Heat lamps | |||
| buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Healthcare Ltd. | PL36699/0006 |
References
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