Protocol
पशु उपयोग प्रोटोकॉल अलबर्टा विश्वविद्यालय में स्वास्थ्य विज्ञान पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.
उपकरण, पशु और ऑपरेटिव सेटअप 1. तैयारी
- प्रक्रिया से पहले सभी ठोस आहार 24 घंटे का एक नया, साफ पिंजरे अनुपस्थित लिए जानवरों स्थानांतरण. वे प्रक्रिया के समय तक पानी के लिए मुफ्त का उपयोग, और तरल आहार विज्ञापन उदारीकरण हो सकता है.
- प्रक्रिया के लिए आवश्यक उपकरणों आटोक्लेव. स्वच्छ ऑपरेटिंग सतह और 70% इथेनॉल के साथ संवेदनाहारी नाक शंकु.
- ऑपरेटिंग सर्जन के लिए सुविधाजनक है जो एक तरह से ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप, संवेदनाहारी मशीन और आपूर्ति के साथ ऑपरेटिंग सतह सेट करें. सर्जन की कोहनी हाथ और उपकरणों से अबाधित हथियारों के साथ, ऑपरेटिंग मेज पर आराम से आराम करने के लिए अनुमति दी जानी चाहिए. उपकरण, टांके, कपास swabs, और एक 10 मिलीलीटर सिरिंज प्रक्रिया के दौरान आसान पहुँच परमिट कि एक स्थान में रखा जाना चाहिए.
- सेट अपओवरहेड गर्मी दीपक ऑपरेटिंग सतह के लिए प्रक्रिया और प्रकाश के दौरान पशुओं के लिए गर्मी दोनों प्रदान करने के लिए.
- 0.9% नमक के साथ एक 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब, और ऑपरेटिंग सतह के पास पेट्रोलियम जेली और जगह के साथ एक 1.5 मिलीलीटर ट्यूब भरें.
नोट: सभी उपकरणों और शल्य चिकित्सा की आपूर्ति जीवाणुरहित. आंत transected है, क्योंकि प्रक्रिया ही बाँझ नहीं है. यह साफ-दूषित माना जाता है. संक्रमण के बहिर्जात सूत्रों की शुरूआत से बचने के उपाय करते हैं.
सम्मिलन के साथ 2. Ileocolic लकीर
- जानवरों श्वसन दर लगभग 30-40 साँस / मिनट के लिए धीमा कर देती है जब तक isoflurane vaporizer से नाक शंकु के माध्यम से / मिनट 2 एल के एक ऑक्सीजन का प्रवाह दर के साथ 4 isoflurane% प्रशासन द्वारा संज्ञाहरण प्रेरित. प्रक्रिया की शुरुआत करने से पहले कोई दर्द जवाब नहीं है यह सुनिश्चित करने के लिए माउस का हिंद पैर को मध्यम दबाव लागू करें. इस बिंदु पर, / मिनट 0.5 एल 2% isoflurane और ऑक्सीजन का प्रवाह नीचे बारी. रहकरप्रक्रिया के दौरान दर्द प्रतिक्रिया की जांच और तदनुसार isoflurane के प्रवाह दर को समायोजित.
- सर्जरी के दौरान सुखाने को रोकने, और पारदर्शी टेप का उपयोग कर सुरक्षित अंगों के साथ लापरवाह स्थिति में माउस को स्थिर करने के लिए आंखों को पेट्रोलियम जेली लागू करें.
- Povodine / आयोडीन समाधान के साथ पेट साफ है, और नया बाँझ दस्ताने में बदल जाते हैं.
- प्रावरणी और पेरिटोनियम बेनकाब करने के लिए कैंची विदारक तेज बिंदु का उपयोग पेट के ऊपरी midline में एक 1.5 सेमी त्वचा चीरा. पेरिटोनियल सामग्री का पर्दाफाश करने linea अल्बा के माध्यम से एक इसी तरह फैशन में प्रावरणीय / पेरिटोनियल परत खोलें.
- मनुष्य के लिए इसके विपरीत, माउस अंधान्त्र आम तौर पर पेट के ऊपरी बाएँ चक्र में पाया जाता है. पहचान लेते हैं, तो धीरे संदंश के साथ अंधान्त्र समझ और चीरा के माध्यम से इसे वितरित. प्रशंसक को सिक्त कपास swabs का प्रयोग बाहर लगभग पेट की सतह (चित्रा 1 ए) पर लिपटी एक बाँझ धुंध से अधिक अंधान्त्र से देने टर्मिनल शेषान्त्र के 3 सेमी.उजागर मल प्रक्रिया की संपूर्णता के दौरान 0.9% नमक के साथ नम रखा जाता है सुनिश्चित करें.
- ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप का उपयोग बृहदान्त्र (चित्रा 1 ए) के साथ बेहतर मेसेंतेरिक धमनी बंद शाखाओं में बंटी ileocecal धमनी को पहचानें. , Ileocecal धमनी से सटे avascular ऊतकों काटना घेरना और 5-0 रेशम टाई के साथ धमनी ligate. अगला, टर्मिनल शेषान्त्र के लिए क्षेत्रीय रक्त की आपूर्ति लगाने और ileocecal जंक्शन एक transection बिंदु 1.5-2 सेमी समीपस्थ चुनें. ऊपर के रूप में शेषान्त्र के इस भाग को शाखाओं ligate. माइक्रो कैंची विदारक साथ धमनियों फूट डालो.
- Transected समाप्त होता है (चित्रा 1 बी) के लिए पर्याप्त रक्त की आपूर्ति होती है सुनिश्चित करने शेषान्त्र और पेट की इस्कीमिक भाग फूट डालो. यह इसे और अधिक बारीकी से पेट के मेल खाता है तो लुमेन के व्यास को बढ़ाने के लिए एक 30 डिग्री के कोण पर विभाजित करके शेषान्त्र Spatulate को अक्सर उपयोगी है. आंत्र की ileocecal भाग हटा दिया गया है एक बार, संरेखितप्रत्येक की मेसेंतेरिक सीमाओं को सुनिश्चित धुंध पर शेषान्त्र और पेट की transected समाप्त होता है, गठबंधन कर रहे हैं.
- का उपयोग बृहदान्त्र की transected अंत करने के लिए शेषान्त्र की transected अंत approximating द्वारा सम्मिलन का निर्माण 8-0 polypropylene के टांके (चित्रा 1C) बाधित. Ileocolic सम्मिलन निर्विवाद है जब तक बाद टांके हर 0.5 मिमी रखा के साथ पहली सिलाई, मेसेंतेरिक सीमा पर रखा गया है. शेषान्त्र और पेट के माध्यम से सीवन सुई गुजर करते हैं, तो कटौती बढ़त लुढ़का नहीं है कि यह सुनिश्चित करें, और सुई काटने आंत्र की कटौती किनारों से 0.5 मिमी. एक ठेठ सम्मिलन 14 से 16 बाधित टांके की आवश्यकता होगी. सम्मिलन के माध्यम से सामग्री को मजबूर करने के लिए शेषान्त्र से अधिक बाहर करने के लिए एक कपास झाड़ू समीपस्थ रोलिंग द्वारा पूरा होने पर सम्मिलन की अखंडता और प्रत्यक्षता का परीक्षण करें. छोटी आंत सामग्री आज़ादी शाखामिलन संबंधी रिसाव के बिना बृहदान्त्र में पारित करना चाहिए.
- 10 मिलीलीटर सिरिंज से 0.9% खारा के 3-4 मिलीलीटर के साथ संपर्क में आंत्र कुल्लाआंत की सतह से मल को धो, और peritoneal गुहा में वापस आंत्र देने के लिए. 0.9% खारा के 2 मिलीलीटर का उपयोग peritoneal गुहा फ्लश, और फिर पार्श्व पेट की दीवार को कोमल दबाव लागू करने के द्वारा इस तरल पदार्थ नाली.
- एक 3-0 रेशम चल सीवन के साथ चीरा बंद करें, और isoflurane के प्रवाह को बंद. पोस्ट ऑपरेटिव दर्द नियंत्रण के लिए -buprenorphine- subcutaneously लंबे अभिनय नशा की 0.1 मिलीग्राम / किग्रा प्रशासन.
- वे तो मोबाइल हैं एक लगातार गरम पिंजरे को हस्तांतरण तक गर्मी दीपक के तहत पशुओं को ध्यान से देखें.
3. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल और निगरानी
- दिन के शेष के लिए संकट के संकेत के लिए एक लगातार गरम पिंजरे में जानवरों की निगरानी. तरल आहार और पानी विज्ञापन उदारीकरण के उपयोग के साथ एक नया बाँझ पिंजरे में वापस जानवरों की देखभाल की सुविधा के लिए जानवरों के स्थानांतरण. पशु 3-4 के समूहों में रखे जा सकते हैं.
- निम्नलिखित सुबह पोस्ट ऑपरेटिव जानवरों पर एक जांच करने,जानवरों संकट में नहीं दिखाई देते हैं. केवल तरल आहार फ़ीड. वे असहज (यानी, hunched आसन या कम से कम गतिविधि) दिखाई देते हैं उपचर्म buprenorphine की एक अतिरिक्त खुराक प्रशासन. पोस्ट ऑपरेटिव दिन 1 पर दोपहर में एक बार फिर जानवरों पर जांच करें.
- पोस्ट ऑपरेटिव 2 दिन की सुबह पशुओं को पूरी तरह से ठीक दिखाई देनी चाहिए. भोजन की खपत और stooling के साक्ष्य वसूली का सकारात्मक संकेत मिल रहे हैं. अब, जानवरों के लिए एक ठोस चाउ आहार फिर से शुरू.
नोट: संकट के लक्षण hunched आसन, गरीब संवारने, और कम से कम गतिविधि में शामिल हैं. संकट के लक्षण प्रमुख हैं, तो जानवरों euthanized किया जाना चाहिए. - जानवरों तक 2 एल / मिनट की एक हे 2 प्रवाह की दर पर 4 isoflurane% के साथ गहरे संज्ञाहरण उत्प्रेरण द्वारा जानवरों Euthanize पैर दबाव को अनुत्तरदायी हैं. ग्रीवा अव्यवस्था प्रदर्शन करना, और उचित euthanization के संकेत के लिए निरीक्षण करते हैं.
- दिशानिर्देश, तो संकेत के बारे में संस्थाओं की सिफारिशों को देखें बदलती हैंके लिए और चूहों में euthanization के उचित तरीकों.
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Representative Results
मृत्यु दर और वजन परिवर्तन के बाद सेशन.
129S1 जंगली प्रकार चूहों में आईसीआर निम्न मृत्यु दर ~ 5% आम तौर पर कर रहे हैं. नैतिकता का सबसे आम कारण सम्मिलन में आंत्र बाधा है. मृत्यु दर के अन्य कारणों शाखामिलन संबंधी रिसाव और बाधा आंत्र प्रमुख आंतरिक हर्निया शामिल हैं.
वजन घटाने के बाद operatively 14 दिन तक देखा है, लेकिन आम तौर पर गैर-महत्वपूर्ण है किया जा सकता है. चूहे पूरी तरह से पोस्ट ऑपरेटिव दिन 28 (चित्रा 2) द्वारा पूर्व ऑपरेटिव वजन आ जाते हैं.
तकनीक का Transferability
एक नए स्नातक छात्र (बीएम) नहीं पिछले शल्य चिकित्सा प्रशिक्षण के साथ एक ऑपरेटर तकनीक सीख सकता है, तो यह निर्धारित करने के लिए आईसीआर कार्यविधि को पूरा करने के लिए सिखाया गया था. प्रशिक्षण 8-0 नायलॉन सीवन का उपयोग सम्मिलन में इस्तेमाल उन लोगों के अनुरूप ही बाधित टांके प्रदर्शन करने के लिए सीखने के साथ शुरू हुआ. टांके एक लेटेक्स Glo भर में किए गए एक चीरा बंद करने के लिए प्रदर्शन किया गयाve. बी.एम. कुशलतापूर्वक फाड़ के बिना दस्ताने के माध्यम से टांके जगह करने में सक्षम था के बाद, वे एक का प्रयास करने से पहले तीन पूरी प्रक्रिया मनाया. पहले प्रक्रिया पूरी हो गई थी, के बाद वे फिर एक और प्रक्रिया मनाया और दो अधिक प्रयास किया. पूरा तीन जानवरों के पिछले दो जीवित और फूलने के लिए पर चला गया. पहले पशु कारण सम्मिलन में जटिलताएं euthanized किया गया था.
आंत्र चित्रा ileocolic लकीर और सम्मिलन के 1. चरणों. (ए) ileocecal क्षेत्र पेट से बाहर दिया. काला तीर ligated होने के लिए वाहिकाओं से संकेत मिलता है, धराशायी लाइनों कोलोन और टर्मिनल शेषान्त्र के लिए transection अंक से संकेत मिलता है. (बी) हटा ileocecal क्षेत्र, आंत्र की कटौती समाप्त होता है शेष रक्त की आपूर्ति काला तीर द्वारा प्रदर्शन किया है, गठबंधन कर रहे हैं. (सी) पूरा ileocolic अनसtomosis. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
मान व्हिटनी यू सांख्यिकीय परीक्षण द्वारा निर्धारित आधारभूत में चित्रा 2. पशु वजन, पोस्ट ऑपरेटिव दिन 14 और पोस्ट ऑपरेटिव दिन 28 भार में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन के बाद प्रक्रिया मनाया गया. आईसीआर (Ileocolic लकीर समूह), कंट्रोल (नॉन-ऑपरेटिव नियंत्रण).
आंतों के ऊतकों के माध्यम से टांके चित्रा 3. प्रतिनिधि पथ. एच ई शेषान्त्र (दाएं) और पेट (बाएं) सीवन पूर्वोत्तर के पथ प्रदर्शित करने के लिए लाइन में खड़ा कर रहे हैं की histologic वर्गों दागबात करने के लिए के माध्यम से बिंदु (एक) पर शुरू ऊतकों (धराशायी लाइन) के माध्यम से edle (ख). गाँठ बिंदु (ग) में बंधे होने चाहिए. कम म्यूकोसा अन्य ऊतकों से सम्मिलन में शामिल है कि ध्यान दें. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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Discussion
murine आईसीआर आंत्र रोग में सर्जरी के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक शक्तिशाली मॉडल है. यह लेख 95% की सफलता दर और ऊपर के बाद प्रक्रिया 28 दिनों के लिए स्थिर भार से परिलक्षित के रूप में कामयाब विफलता के साथ नहीं मुद्दों के साथ चूहों में आईसीआर प्रदर्शन करने की एक विधि का वर्णन है. सफल आईसीआर के लिए सबसे महत्वपूर्ण चुनौतियों सम्मिलन और शाखामिलन संबंधी लीक पर आंत्र अवरोधों से परहेज शामिल हैं.
बाधा को रोकने के लिए सर्जरी के लिए तकनीकी तत्वों सम्मिलन में लुमेन व्यास को अधिकतम करने के उद्देश्य से कर रहे हैं. Transection बिंदु पर शेषान्त्र की Spatulation चित्रा 1 ए में दर्शाया के रूप में एक 30 डिग्री के कोण पर मल विभाजित करके लुमेन व्यास बढ़ जाती है. सीवन सुई के साथ आंतों ऊतक के काटने ले जा रहा है, यह मल के किनारों उतारना और लगभग कटौती किनारे से 0.5 मिमी सुई पारित करने के लिए आवश्यक है. जरूरत से ज्यादा ऊतक की बड़ी काटने लुमेन संकीर्ण जाएगा. एक विकल्प ए वी के लिएसम्मिलन का निर्माण Kiernan एट अल. 15 द्वारा वर्णित के रूप में एक सुपाच्य स्टेंट के उपयोग के काम करने के लिए है जब OID luminal संकुचन. गैर-तकनीकी पहलुओं बाधा से बचने के लिए एक पर्याप्त छोटे सिवनी 4 चयन और एक दिन सर्जरी से पहले और सर्जरी के बाद 2 दिन जानवरों एक तरल आहार खिलाने से भारी luminal सामग्री से परहेज करना शामिल है.
पोस्ट ऑपरेटिव मृत्यु का दूसरा सबसे आम कारण शाखामिलन संबंधी रिसाव है. इस उलझन से बचना आंतों सम्मिलन के सिद्धांतों का कड़ाई से पालन की आवश्यकता है. पहली बार जा रहा पर्याप्त रक्त की आपूर्ति. आंत्र के क्षेत्र के लिए रक्त की आपूर्ति जहाजों ligated किया गया है resected जाने के बाद, आंत्र नेत्रहीन transection से पहले निरीक्षण किया जाना चाहिए. आंत्र की इस्कीमिक खंड सांवली दिखाई देगा; यह पूरी तरह से स्वस्थ किनारों छोड़ने हटाया जाना चाहिए. यह शेष आंत की कटौती किनारों से खून बह रहा है की एक छोटी राशि कल्पना करने के लिए महत्वपूर्ण है. एक पानी तंग अनसtomosis पूति के लिए अग्रणी luminal सामग्री के spillage से बचने के लिए भी आवश्यक है. यह (चित्रा 3) के टांके के बीच बड़े अंतराल से बचने, और आंत की सभी परतों सिलाई में शामिल हैं जो यह सुनिश्चित करके हासिल की है. घाव ताकत बहुत पहले दो पोस्ट ऑपरेटिव दिनों में कम हो जाता है, इस प्रकार ठीक से रखा टांके ताकत 16,17 प्रदान करने के लिए आवश्यक हैं. एक संभावित ख़तरा अनजाने ही म्यूकोसा transected बृहदान्त्र के लुमेन के बाहर तह कर सकते हैं म्यूकोसा भी शामिल है. इस संदंश के साथ लुमेन में वापस prolapsed म्यूकोसा कम करने धीरे serosa की कटौती बढ़त visualizing और से बचा जा सकता है.
शाम शल्य नियंत्रण शल्य तनाव, पेट में गड़बड़ी, और / या ileocecal वाल्व की हानि के संभावित confounding प्रभाव के लिए नियंत्रित करने के लिए आईसीआर मॉडल का उपयोग कर पढ़ाई की प्रयोगात्मक डिजाइन में विचार किया जाना चाहिए. प्राथमिक प्रश्न पर निर्भर करेगा नकली प्रक्रिया के चुनाव में पूछा जा रहा हैअध्ययन. अनुसंधान उद्देश्य ileocecal वाल्व हारने के बाद मेजबान प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए है अगर उदाहरण के लिए, तो यह जगह में ileocecal वाल्व जाते वक्त एक आंतों सम्मिलन किया जाता है, जिसमें एक दिखावा सर्जरी समूह में शामिल करने के लिए विवेकपूर्ण होगा. यह आमतौर पर लकीर तो ileocolic सम्मिलन 7,11 के रूप में एक ही फैशन में एक छोटी आंत सम्मिलन प्रदर्शन के बिना छोटी आंत transecting द्वारा किया जाता है. इस जांचकर्ताओं आंतों सम्मिलन के प्रभाव को नियंत्रित करने के द्वारा ileocecal वाल्व नुकसान के प्रभाव पर विशेष रूप से टिप्पणी करने के लिए अनुमति होगी. वैकल्पिक रूप से लक्ष्य ileocecal वाल्व के नुकसान पर विशेष रूप से टिप्पणी के बिना आंत्र लकीर और सम्मिलन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए ही है, तो फिर एक दिखावा सर्जरी एक laparotomy शामिल करना चाहिए, और आंत्र यह आईसीआर के लिए होगा के रूप में इलाज किया, लेकिन transection के बिना किया जाना चाहिए और सम्मिलन. इस शल्य तनाव और आंतों में गड़बड़ी के लिए नियंत्रण होगा. में वर्णित तकनीकप्रोटोकॉल के ऊपर आसानी से नकली प्रक्रियाओं के प्रदर्शन के लिए अनुकूलित किया जा सकता.
इस प्रोटोकॉल 1.5-2 टर्मिनल शेषान्त्र के सेमी और अंधान्त्र की संपूर्णता को हटा जो एक ileocolic लकीर, का वर्णन है, और निकट एक ऑपरेशन अक्सर ileocolic Crohn रोग के साथ रोगियों में प्रदर्शन mimics. / - - चूहों क्रोहन रोग पुनरावृत्ति 7,11 के अनुरूप छोटी आंत में सहज सूजन और फाइब्रोसिस विकसित जिसके बाद कोलाइटिस मॉडल इसी तरह की प्रक्रियाओं आईएल-10 में इस्तेमाल किया गया है. इस प्रक्रिया के सिद्धांतों भी रोग के अन्य मॉडलों के लिए आवेदन कर सकते हैं. Ileocolic सम्मिलन के साथ छोटी आंत के 50% को दूर करके, माउस मॉडल कम आंत सिंड्रोम 4-6 में अनुकूली आंतों विकास प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. भविष्य में यह भी कोलोरेक्टल कैंसर में सर्जरी के प्रणालीगत और स्थानीय प्रभाव के अध्ययन के लिए एक उपयोगी मॉडल हो सकता है.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LD101 liquid rodent diet | testdiet.com | ||
| 0.9% NaCl | Baxter | FKE1324 | Injection quality saline |
| Operating Microscope | Ziess | ||
| Isoflurane Anesthetic Vaporizer | Harvard Apparatus | 34-0483 | |
| Isoflurane | Abbott | 05260-05 | |
| Glass plate | For operating surface | ||
| Cotton swabs | |||
| Micro Castroviejo Needle holder, curved | World Precision Instruments | 503377 | |
| Castroviejo straight scissors | World Precision Instruments | 555530S | |
| Dissecting Scissors | World Precision Instruments | 15922 | |
| Dressing Forceps x 2 | World Precision Instruments | 500363 | |
| 5-0 silk pre-cut sutures | Ethicon | A182H | For vessel ligation |
| 8-0 Prolene on BV130-5 needle | Ethicon | 8732H | For anastomosis |
| 3-0 Silk on FS-2 needls | Ethicon | 8665G | For abdominal wall closure |
| Petroleum Jelly | Vaseline | ||
| 10 ml syringe | BD biosciences | ||
| Povidone-iodine 7.5% surgical Scrub | betadine.com | ||
| Heat lamps | |||
| buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Healthcare Ltd. | PL36699/0006 |
References
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