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Behavior

Perturbar reconsolidação do Medo Memória em seres humanos por um noradrenérgica β-Blocker

Published: December 18, 2014 doi: 10.3791/52151
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Clinical Psychology, University of Amsterdam

Abstract

O projeto básico utilizado em nossos estudos medo condicionado humanos em interromper reconsolidação inclui testes ao longo de diferentes fases ao longo de três dias consecutivos. No dia 1 - a fase de aquisição medo, os participantes saudáveis ​​são expostas a uma série de apresentações de imagem. Uma imagem de estímulo (CS1 +) é repetidamente emparelhado com um estímulo eléctrico aversivo (EUA), o que resulta na aquisição de uma associação medo, ao passo que um outro estímulo imagem (CS2-) nunca é seguido por um dos EUA. No dia 2 - a fase de reativação da memória, os participantes são re-expostos ao estímulo condicionado sem os EUA (CS1-), que normalmente desencadeia uma resposta de medo condicionado. Após a reactivação de memória se administrar uma dose oral de 40 mg de propranolol HCl, um antagonista do receptor β-adrenérgico que indirectamente tem como alvo a proteína necessária para a síntese reconsolidação através da inibição da fosforilação de CREB estimulada por noradrenalina. No dia 3 - a fase de testes, o participants são novamente expostos aos estímulos condicionados unreinforced (CS1- e CS2-), a fim de medir o efeito de reduzir o medo da manipulação. Este teste de retenção é seguido por um processo de extinção e a apresentação de gatilhos situacionais para testar o retorno de medo. Potencialização do olho piscar reflexo de sobressalto é medida como um índice para responder medo condicionado. O conhecimento declarativo da associação medo é medido através de avaliações on-line Expectativa dos EUA durante cada apresentação CS. Em contraste com a aprendizagem extinção, interrompendo reconsolidação tem como alvo a memória do medo inicial evitando assim o retorno do medo. Embora as aplicações clínicas ainda estão em sua infância, interrompendo reconsolidação da memória do medo parece ser uma nova técnica promissora, com a perspectiva de persistentemente amortecer a expressão da memória do medo em pacientes que sofrem de transtornos de ansiedade e outros transtornos psiquiátricos.

Introduction

Nossos cérebros estão programados para aprender. Os seres humanos estão bem equipados com a capacidade de aprender os potenciais perigos da vida e talvez ainda mais importante para aprender os preditores de perigo. Condicionamento aversivo pavloviano é uma excelente ferramenta para estudar o medo associativa aprendendo não apenas nos seres humanos, mas também através de uma ampla gama de organismos 1,2. Este procedimento envolve a apresentação de um estímulo inócuo biologicamente neutro condicionado (CS, por exemplo, um tom ou imagem) com um estímulo incondicionado nocivos ou prejudiciais (US), tipicamente um leve choque elétrico. Se o CS se torna um indicador confiável de os EUA, o CS vai desencadear respostas comportamentais condicionados típicos da espécie (por exemplo, o congelamento em ratos e potenciado reflexo do medo em humanos), que são conceituados como expressões de medo (ver 3 para comentários críticos sobre esta terminologia). Não só a investigação condicionamento aversivo adicionar a uma melhor compreensão do molecular e celularprocessos de aprendizagem e memória associativa medo 4, mas também fornece uma base para a compreensão da etiologia e evolução dos transtornos de ansiedade 5. Embora vale a pena mencionar que os transtornos de ansiedade não necessariamente resultam de experiências diretas condicionado, tais como eventos traumáticos. Eles também podem resultar de medo experiências de aprendizagem indiretos ou indiretos 6. Mas, independentemente do histórico de aprendizado, memória associativa medo faz parte do núcleo de transtornos de ansiedade. O paradigma de Pavlov condicionado não só demonstrou a sua utilidade na compreensão da origem das perturbações de ansiedade, é também um modelo de translação excelente para desenvolver e o tratamento dos transtornos de ansiedade avanço 5.

No laboratório, os dois processos mais extensivamente estudados para reduzir o medo aprendido são (1) a extinção e (2) uma ruptura da reconsolidação. Embora a formação de extinção - isto é, a não reforçada repetido reexposiçãoo CS 7,8 - é uma forma eficaz de estudos de estratégia ansiolítico, animais e de condicionamento do medo humano mostrar de forma fiável que a resposta de medo condicionado pode facilmente voltar por reexposição ao USS sem sinal (ou seja, a reintegração), uma mudança de contexto (ou seja, a renovação), ou a passagem do tempo (isto é, recuperação espontânea) 7,9,10. Um consenso tem vindo a construir esse aprendizado extinção não apaga a memória do medo inicial, mas em vez reflete a formação de uma nova memória inibitório. Como consequência, a memória do medo pode ressurgir resultando em um retorno de medo, mesmo após a extinção do medo originalmente sucesso. As várias fontes de recaída ainda são um grande desafio para a prática clínica.

Uma abordagem alternativa para diminuir o medo condicionado é responder a mais recentemente (re) descobriu procedimento de perturbar reconsolidação de memória por agentes farmacológicos. Este procedimento é muito promissor, uma vez que não só diminui a conditioNED medo de responder, mas parece até apagar a memória medo associativa, o que pode, eventualmente, resolver o problema da recaída.

Reconsolidação memória refere-se a um processo de duas fases, através da qual as memórias previamente consolidadas transferir para um estado transitório desestabilizado em recuperação e requerem um Restabilização dependente do tempo para persistir 14-18. A transcrição de genes, de proteína e síntese de ARN são necessárias para este Restabilização e oferecer uma janela de oportunidade para agentes amnésicos para afectar a memória do medo. Amnesia por medo aprendido tem sido demonstrado em animais por drogas (por exemplo, anisomicina) visando a síntese de proteína necessária 14,19,20 ou a liberação de neurotransmissores 21,22. A síntese da proteína pode também ser perturbado por noradrenérgico propanolol beta-bloqueador, o qual é suposto inibir a fosforilação de CREB estimulada por noradrenalina 23-25. O medo da redução dos efeitos de propranolol foram demonstradas emanimais e seres humanos 26-32. Numa série de estudos de medo condicionado discriminativos, que demonstraram consistentemente que o propranolol (40 mg) administrado antes ou após a reactivação de memória de forma eficaz para reduzir a resposta de sobressalto medo condicionado e impediu o retorno de medo em indivíduos saudáveis.

Prova de princípio

O projeto básico utilizado em nossos estudos medo condicionado humanos em interromper reconsolidação inclui testes ao longo de diferentes fases ao longo de três dias consecutivos separados por pelo menos 24 horas, a fim de (1) apoio (re) consolidação das memórias e (2) permitir que a droga para lavar antes do teste. No dia 1 - a fase de aquisição medo, os participantes saudáveis ​​são expostas a uma série de apresentações de imagem. Uma imagem de estímulo (CS1 +) é repetidamente pareado com um estímulo elétrico aversivo (US), resultando na aquisição de uma associação de medo, enquanto que um outro estímulo imagem (CS2) nunca é seguido por um dos EUA. No dia 2 - a fase de reativação da memória, re-exposição ao estímulo condicionado sem reforço (CS1-) geralmente desencadeia uma resposta de medo condicionado. Nesta fase, nós sistemicamente administrar 40 mg de propranolol HCl, um antagonista do receptor β-adrenérgico que indirectamente tem como alvo a proteína necessária para a síntese reconsolidação 25. Tendo em conta as concentrações plasmáticas de propranolol 33, administrou uma dose oral de propranolol 90 min antes da reativação da memória do medo em nossas primeiras experiências. No entanto, para um teste mais óptima de reconsolidação, o agente deve ser administrado amnésica após a reactivação de memória. Portanto, em nossas últimas experiências que sempre administrado propranolol após a reativação da memória com resultados muito semelhantes. No dia 3, - a fase de testes, a retenção da memória medo é testada 24 horas após a intervenção (isto é, primeiro teste de ensaio de 3 dias), seguido pelauma extinção procedimento e gatilhos situacionais para testar para o retorno do medo (ou seja, reintegração, renovação, recuperação espontânea, reaquisição rápida). Para determinar se o efeito de propranolol requer recuperação activa a memória de medo, o medicamento deve ser administrado a um outro grupo de medo condicionado sem reactivação da memória (isto é, condição de não-propanolol reactivação) 27,28. Usamos a potencialização do reflexo de sobressalto, como medida para medo condicionado responder e on-line classificações Expectativa dos EUA como um índice para a aprendizagem de contingência. A potencialização do reflexo de sobressalto é concebida como um índice específico e confiável de medo 34, auxiliada pela amígdala 35. O estímulo-provocando sobressalto mais comumente utilizado é o "sonda de sobressalto", um barulho alto, que é apresentado por meio de fones de ouvido durante um estímulo ou no intervalo entre as duas apresentações de estímulo (ou seja, os intervalos entre tentativas)

Em uma série de 10 experimentos consecutivos em amostras independentes 27-32,37-39 nós consistentemente replicado nosso achado original onde perturbar reconsolidação da memória do medo por um bloqueador beta-adrenérgico propranolol HCl efetivamente reduziu o reflexo condicionado de sobressalto e impediu o retorno do medo 27 . As observações de que a exposição a reforçadores primários (ou seja, reintegração), uma mudança de contexto (ou seja, de renovação) ou simples passagem do tempo (ou seja, a recuperação espontânea) não levam ao ressurgimento do medo condicionado respondendo como é geralmente observado após o treinamento extinção, apoiar a superioridade de perturbar reconsolidação sobre aprendizagem extinção. Em adição a estestécnicas de recuperação, aprendizagem reaquisição não revelou quaisquer poupanças da resposta de medo aprendido anteriormente. Em suma, estes resultados sugerem que interromper reconsolidação da memória do medo associativa por propranolol efetivamente reduziu a expressão emocional da memória do medo.

Além disso, testamos vários limites e condições necessárias para interromper reconsolidação: (1) A sessão de reativação da memória parece processualmente semelhante à formação de extinção (ou seja, a exposição sem reforço), mas deve envolver menos ensaios não reforçados do que a formação de extinção porque noradrenérgicos beta-bloqueadores (ie , propranolol) podem também interferir com a formação de memória em vez de extinção de direccionamento a memória receio originário 40,41; (2) a recuperação da memória não é suficiente para a reconsolidação de memória 18,31,42,43. Propranolol apenas reduziu o medo condicionado responder quando havia algo a ser aprendido durante a sess recuperaçãoion 31,32. A discrepância entre o que já foi aprendido e que pode ser aprendido em uma determinada sessão de recuperação (ou seja, erro de predição) parece ser necessário para induzir a reconsolidação da memória do medo associativa 32. Os resultados indicam que a ocorrência de um erro de predição é uma condição necessária para reconsolidação e proporcionar um instrumento útil para desenvolver e optimizar os tratamentos à base de reconsolidação para pacientes que sofrem de transtornos de ansiedade.

Protocol

Declaração de Ética: Nosso protocolo aprovado por médico atende os requisitos do Comitê de Ética do Departamento de Psicologia da Universidade de Amsterdam para testar participantes humanos.

1. Fixação dos potenciado pelo medo de sobressalto e Shock Eletrodos

  1. Assegurar a configuração experimental consiste de uma sala de atenuado-som dos participantes e uma sala separada experimentador.
  2. Use dois computadores com quatro telas de registro e acompanhamento respostas fisiológicas, bem como para a apresentação do roteiro experimental para os participantes.
  3. Prenda as coleiras adesivas de dupla face aos eletrodos de EMG.
  4. Limpe a pele do participante abaixo do olho direito ou esquerdo e na testa usando um algodão embebido em álcool. Instrua os participantes a manter os olhos fechados para evitar a irritação ocular potencial.
  5. Encher o centro dos eléctrodos EMG com electrólito altamente condutora gel, utilizando uma seringa. Não tente preencher os eletrodos através da aplicação de pequenas quantidades de gel, sucessivamente, pois isso aumenta o risco de bolhas de ar dentro do gel, que podem afetar negativamente as gravações.
  6. Anexar um dos eletrodos EMG abaixo da pálpebra inferior do olho esquerdo ou direito, em conformidade com o aluno em olhar para a frente. Anexar uma segunda aproximadamente 1 - 2 cm lateral para o primeiro na sequência da curvatura da pálpebra inferior. Anexar uma referência de terra na testa cerca de 1 cm abaixo da linha do cabelo. Ótimo posicionamento dos eletrodos em relação ao músculo podem necessitar de ajustes individuais.
  7. Aplicar uma gota do gel condutor sobre os eléctrodos de choque e ligá-las no punho superior esquerdo usando nylon cinta de velcro. Certifique-se a correia não está em muito apertado.
  8. Ajustar a intensidade do choque eléctrico 2-ms para cada participante individual. Informe os participantes que o choque deve ser "desconfortável, mas não doloroso".
  9. Manually acionar os choques. Comece com uma intensidade de 1 mA e continuar provocando choques individuais - aumentando gradualmente a intensidade em incrementos de 2 ou 3 mA - até que o participante indica que o choque é "desconfortável, mas não doloroso".
  10. Anote o nível de choque final e manter este nível durante todo o restante do experimento.

2. Medo de Aquisição - Dia 1

Duração cerca de 45 min.

  1. Instrua os participantes sobre a aplicação de choques e a possível administração de propranolol HCl. Além disso informá-los que HCl propranolol é usada para tratar a hipertensão. Obter o consentimento informado por escrito.
  2. Peneirar os participantes sobre a sua saúde e quaisquer condições que contra-indicam a tomar uma única dose de 40 mg de cloridrato de propranolol: gravidez, transtorno apreensão, transtorno respiratório, doenças cardiovasculares, doenças cardiovasculares em parentes de primeira linha, diâmetrobetes, doença do fígado ou dos rins, utilização actual de um medicamento anti-depressivo, ou psicose.
  3. Obter pressão arterial e da freqüência cardíaca, utilizando um esfigmomanômetro eletrônico. Peça aos participantes para remover seu braço das mangas e colocar o manguito firmemente na parte superior do braço. Instrua os participantes para relaxar e sentar-se com o seu braço levemente dobrados no mesmo nível que o seu coração e descansando confortavelmente em uma mesa ou outra superfície plana. BP deve estar acima de 90/60 mmHg e freqüência cardíaca acima de 60 bpm para inclusão no experimento.
  4. Administrar o Estado-Trait Anxiety Inventory 44 e Anxiety Sensitivity Index 45 quando um participante está clinicamente liberado. Também administrar o Aranha fóbico Questionnaire 46 ao utilizar imagens de aranhas como os estímulos condicionados.
  5. Posicione os participantes em frente a uma tela de computador e anexar os eletrodos EMG e de choque (ver secção 1 "Fixação da potenciado pelo medo Startle umd Choque Eletrodos ").
  6. Use dois processos de aprendizagem diferentes - veja os passos 2.6.1 e 2.6.2. Informar os participantes sobre as duas imagens diferentes eles vão ver na tela do computador. Instruí-los para monitorar a relação entre as imagens que estão vendo e quando um choque é recebido.
    1. Aprendizagem não Asymptotic: Informar aos participantes que uma das imagens será seguido pelo choque elétrico na maioria dos casos, enquanto o outro nunca será seguido pelo choque.
    2. Aprendizagem Asymptotic: Informar os participantes qual das duas imagens serão sempre seguidos pelo choque elétrico e qual a imagem que nunca vai ser seguidas pelo choque (ou seja, instruído aprendizagem medo).
  7. Informar os participantes sobre os barulhos que eles querem ouvir através dos auscultadores. Encomendá-los a não prestar atenção aos ruídos.
  8. Instrua os participantes para relatar a expectativa de um Duri choque elétricong a apresentação de todas as imagens, deslocando o cursor em escalas de avaliação contínua usando um mouse e apertar o botão esquerdo do mouse dentro de 5 segundos após o início do estímulo, a fim de confirmar a sua expectativa. Garantir escalas consistem em 11 pontos marcados a partir de ", sem dúvida nenhuma choque elétrico" através de "incerto" para "certamente um choque elétrico". Apresentar as escalas de forma contínua na parte inferior da tela do computador, a fim de apoiar os participantes a centrar a sua atenção nas imagens. Quando as imagens desaparecer o cursor deve retornar automaticamente para a posição "incerta".
  9. Direcione os participantes a manter seus olhos na tela e sentar-se o mais imóvel possível com os dois braços colocados em uma posição relaxada com os pulsos em cima da mesa na frente deles. Coloque os fones de ouvido. Apague as luzes e fechar a porta. Comece a experiência do outro quarto.
  10. Durante a aquisição de medo uma das duas imagens de co-termina com oshock: CS1, ao passo que o outro nunca é seguido pelo choque: CS2. Fazer uso de medo estímulos relevantes, a fim de fortalecer a associação medo durante a aquisição. Para fotos de instância de aranhas: números IAPS 1200-1201.
  11. Apresentar tanto o CS1 e CS2 por 8 s. Barulhos ou assustar sondas - 40 ms e 104 dB - são apresentados 7 seg após CS início; e para a CS1, estes são seguidos do choque eléctrico 2 ms a 500 ms mais tarde.
  12. Comece o medo real de aprendizagem, apresentando dez sondas de sobressalto de base para diminuir a reatividade de sobressalto inicial:
    1. Aprendizagem não Asymptotic: Apresente um total de 8 ensaios CS1 em um esquema de reforço de 75%: 6 ensaios CS1 são reforçadas por um choque - o primeiro eo quinto julgamento estão sem reforço. Mais ensaios clínicos atuais 8 CS2, bem como 8 ensaios NA durante as inter-intervalos ao julgamento.
    2. Aprendizagem Asymptotic: Apresente um total de 3 ensaios CS1 em um esquema de reforço de 100%: todos os ensaios CS1 são reinforced por um choque. Ensaios 3 CS2 ainda mais presente, bem como 3 ruído sozinho assustar sondas (NA) durante as inter-intervalos do julgamento.
  13. Contrabalançar a atribuição das imagens como CS1 e CS2 participantes de diâmetro. Aleatória a ordem de tipo ensaio dentro de blocos de CS1 - CS2 - NA tal que nenhum tipo de julgamento repete mais de duas vezes. Varie as inter-julgamento-intervalos - durante o qual os participantes exibir uma tela preta - entre 15 seg 20 seg e 25 seg, com média de 20 seg.
  14. Depois de completada a experiência separar os eléctrodos e deixar os participantes limpar o gel.
  15. Instrua os participantes para julgar a agradabilidade do choque sobre escalas de classificação de 11 pontos que variam de menos 5 (ie, desagradável) a 5 (ou seja, agradável).
  16. Explicitamente instruir os participantes para lembrar o que aprenderam durante a aquisição do medo, a fim de aumentar a retenção da contingência CS-US dias seguintes, bem comopara evitar que eles erroneamente esperando um esquema de contingência diferente durante os testes posteriores. Além disso, para facilitar as amostras de saliva no dia seguinte, instruir os participantes a abster-se de cafeína exercício e álcool durante a 12 horas e evitar alimentos e outros do que a água, bem como fumar e escovação durante o 2 hr bebidas antes da próxima sessão .
  17. Limpe os eletrodos com água após o uso: se livrar de todo o gel sem riscar qualquer parte da camada de AgCl. Após a limpeza, não limpar a água, mas use um conjunto diferente de eletrodos no próximo participante e permitir que o outro conjunto para secar ao longo do tempo.

3. Memória Reativação - Dia 2

Duração cerca de 105 min.

  1. Aleatoriamente atribuir os participantes ou o propranolol HCl ou pílula placebo condição com a restrição de que as condições são correspondidos em escores do IDATE o mais próximo possível, dado que traço anxiety determina os efeitos de redução do medo de perturbar reconsolidação 47. Combinar os participantes sobre os escores SPQ bem ao usar imagens de aranhas como os estímulos condicionados.
  2. Obter pressão arterial e da freqüência cardíaca, bem como amostras de saliva: instruir os participantes apenas para colocar o cotonete na boca por cerca de 3 min. Manter as Salivettes em menos de 25 ° C após a remoção.
  3. Para o propranolol condição sem reativação vá para o passo 4.8.1.
  4. Posicione os participantes na frente da tela do computador e anexar os eletrodos EMG e de choque (veja seção 1 "Fixação da potenciado pelo medo e choque Startle Eletrodos"). Comunicar aos participantes que a intensidade do choque permanecerá o mesmo.
  5. Informar os participantes de que as mesmas duas imagens serão apresentadas na tela do computador e pedir-lhes para se lembrar o que haviam aprendido no dia anterior - uma das imagens vai agaem ser seguido pelo choque elétrico em qualquer mais (ou seja, a aprendizagem não assintótica) ou todas (ou seja, de aprendizagem assintótica) casos, enquanto que o outro nunca será seguido pelo choque. Instrua os participantes para relatar a expectativa de um choque elétrico durante a apresentação de todas as imagens. Coloque os fones de ouvido e diminua as luzes. Feche a porta e iniciar a experiência do outro quarto.
  6. Comece a reativação da memória através da apresentação de 10 sondas de sobressalto de base para diminuir a reatividade de sobressalto inicial. Em seguida, apresente um único ensaio CS1 sem reforço seguido por um único ensaio de NA.
  7. Separe os participantes do experimental set-up e deixá-los limpar o gel. Sentá-los atrás da outra tabela.
  8. Administrar "duplo cego", uma dose oral de comprimido de placebo ou 40 mg de propranolol HCl. Pills devem ser cegado por uma farmácia ou colega independente do estudo. Mais um médico de plantão, com conhecimento do i protocolos considerado necessário após a administração da droga.
    1. Administrar "cego único" uma dose oral de 40 mg de propranolol HCl para o propranolol condição sem reactivação.
  9. Insira um período de repouso de cerca de 90 min. Oferecer as revistas participantes para ler. Limpe os eletrodos no mesmo período.
  10. Novamente obter BP e medições de freqüência cardíaca, bem como amostras de saliva.

4. Teste - Dia 3

Duração cerca de 45 min.

  1. Obter BP e medições de freqüência cardíaca.
  2. Posicione os participantes na frente da tela do computador e anexar os eletrodos EMG e choque. Novamente relatar aos participantes que a intensidade do choque permanecerá o mesmo.
  3. Instrua os participantes que as mesmas duas imagens serão apresentadas na tela do computador. Novamente instruir os participantes para relatar a expectativa de um choque elétrico durante a apresentação de toda a imagems. Coloque os fones de ouvido e diminua as luzes. Feche a porta e iniciar a experiência do outro quarto.
  4. Comece o experimento, apresentando 10 sondas de sobressalto linha de base. Durante extinção apresentar cerca de 12 ensaios CS1 e CS2 não reforçados, assim como 12 NA ensaios. Após extinção participantes obter três sem sinal USS: reintegração. Apresentar novamente os participantes com cerca de 4 ensaios unreinforced CS1 e CS2, bem como 4 ensaios NA seguintes USS sem sinal: teste de reintegração.
  5. Retire os eletrodos e deixar os participantes limpar o gel. Pagar aos participantes uma pequena quantidade para a sua participação no experimento. Limpe os eletrodos com água abundante.

Representative Results

Manipulação de verificação propranolol: Ao contrário do comprimido de placebo, ambas as pressões sistólica e diastólica, assim como a alfa amilase salivar deve diminuir de 90 minutos após a ingestão durante o propranolol reactivação de memória, o que indica que a manipulação da droga exercido o seu efeito fisiológico pretendido. BP e alfa-amilase salivar deve novamente retornar aos níveis basais no teste no dia 3.

US ratings Expectativa: Com o protocolo atual, você não pode esperar que os efeitos do tratamento propranolol sobre os ratings Expectativa dos EUA. Independentemente do tratamento farmacológico, os diferenciais dos EUA ratings Expectativa deve aumentar durante a aquisição de medo e diminuir durante a extinção de aprendizagem de 48 horas mais tarde. Além disso, a apresentação do USS sem sinal deverá resultar em um retorno das notas Expectativa de diferencial (Figura 1A-C).

(isto é, intacto expectativa de CS1-US) 31 é necessário mas não suficiente. Prosseguindo na idéia de que a função de reconsolidação é atualizar o traço de memória a um ambiente em constante mudança, a reativação da memória também deve envolver um erro de predição (PE: um descompasso entre o que se espera e que realmente acontece). Dado que as classificações de Expectativa dos EUA afectado pela manipulação propranolol, mudanças nas expectativas de ameaças de aquisição para testar (PE) pode servir como um indicador independente de desestabilização de memória (ver 32 para mais detalhes). Mas somente quando a reativação da memória segue aprendizagem assintótica, essas mudanças na expectativa ameaça may ser observados. No caso da aprendizagem não assintótica parcialmente reforçado, uma mudança nas expectativas de ameaças não é necessário para a desestabilização de memória. Daí um ensaio de recuperação também podem desencadear reconsolidação sem uma mudança nas expectativas após aprendizagem não assintótica.

Startle medo de responder: aquisição medo bem sucedida no dia 1 é demonstrado por um aumento no medo de sobressalto diferencial de responder (ou seja, contra CS1 CS2) a partir do primeiro para o último teste de aquisição (Figura 1D-F). Maior medo sobressalto respondendo ao estímulo que foi previamente combinado com o choque (CS1) em relação ao ruído sozinho durante a reativação da memória no dia 2 indica ainda que a memória do medo está bem consolidada.

Durante a fase de teste no dia 3 poderá esperar intacta medo sobressalto responder no grupo do placebo: sobressalto de responder ao CS1 deve ser h de grau superior em comparação com o CS2 no início do teste. Formação extinção reduz posteriormente o sobressalto diferencial de responder (ou seja, CS1 vs. CS2). Além disso, a apresentação do USS sem sinal deve resultar num rendimento de medo de responder ao CS1 em comparação com o CS2 (Figura 1D).

Contrariamente ao comprimido de placebo, a administração do propranolol HCl é esperado como resultado uma eliminação do diferencial de sobressalto medo de responder (ou seja, contra CS1 CS2) no início da fase de teste no dia 3. Além disso, pode esperar que o USS sem sinal não vai recuperar o medo de sobressalto responder (Figura 1E).

Note-se que o propranolol não deve ter quaisquer efeitos redutores de medo quando a pílula é administrado sem a reativação da memória no dia 2 (Figura 1F).

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Figura 1. Os ratings Expectativa de US aos ensaios CS1 e CS2 e assustar respostas de medo ao CS1, CS2 e ruído sozinho (NA) ensaios durante a aquisição, a reativação da memória, extinção e teste para o placebo (A, D), propranolol (b, E) e propranolol reativação no- (C, F) os grupos R-CS1 -.. refere-se a um julgamento reativação unreinforced Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussion

Em uma série de estudos que demonstram consistentemente que, independentemente do sexo, 40 mg do noradrenergic propranolol beta-bloqueador ou administrado antes ou após a reativação da memória efetivamente neutralizado o medo condicionado responder (ou seja, defensiva resposta de sobressalto). Nenhum dos quatro mecanismos de recaída - Reintegração, renovação, recuperação espontânea e reaquisição rápida - foram observados após interromper reconsolidação com propranolol 27-32,37-39. Vale ressaltar que os efeitos neutralizadores medo foram observadas apenas para a resposta de sobressalto defensiva, mas não para a classificação expectativa de ameaça nem para a condutância da pele. Os dados para o condicionamento electrodermal não são relatados aqui como os padrões gerais para o SCR não se afastam significativamente das classificações Expectativa. Na pesquisa o condicionamento do medo humano, vários índices de resposta condicionada (por exemplo, US-expectativa, SCR, r sobressaltoesposta, dilatação da pupila, a atividade neural) são normalmente obtidos por razões de validação cruzada 48. No entanto, existem agora provas convincentes de que os níveis de resposta diferentes não necessariamente agir em conjunto e podem mesmo dissociar umas das outras 3,27-32,34,37,49. Note-se que a resposta de sobressalto é um reflexo defensivo automática, que é potenciada em resposta a um CS que está associado com um dos EUA de valência negativa e geralmente não pode ser observada com USS de valência neutra ou positiva 49,50 (por exemplo, estimulação táctil ou tarefa de tempo de reacção). Assim, potencialização do reflexo de sobressalto defensiva é um índice confiável e específico de condicionamento aversivo 34. Em contraste, a SCR condicionado pode ocorrer independentemente da valência de os EUA 49,50. Dado que a valência afetiva de os EUA não modificar SCR, condicionado electrodermal é uma medida não-específico de excitação antecipatória. Portanto, acreditamos que o SCR é menos suited como medida comportamental na pesquisa condicionamento aversivo humano.

Se nós especular em traduzir esses achados para a prática clínica, vários problemas e potenciais limitações devem ser consideradas. Primeiro, ele pode ser questionado se a manipulação farmacológica pelo noradrenergic beta-bloqueador é realmente necessário para interromper o processo de reconsolidação ou se de um procedimento comportamental que visa a interferir com reconsolidação renderia um efeito neutralizador similar. Apesar de um tratamento de uma sessão de uma dose baixa de propranolol é claramente não tóxico, um procedimento inteiramente comportamental é sempre preferível sobre uma intervenção farmacológica. Há de fato um método alternativo em que a formação de extinção é apresentado dentro da janela de reconsolidação 51. Vários estudos falharam no entanto para replicar essas descobertas originais de Schiller et al. 29,52-54 mas ver 55,56. Para além destes resultados conflitantes, umaoutra limitação potencial da extinção no âmbito do processo de reativação seria que na prática clínica a resposta de medo geralmente não se extingue em um tratamento de exposição de uma sessão. Por exemplo, a exposição imaginária para pacientes com PTSD leva tradicionalmente dez sessões antes do medo desaparece 57. Assim, mesmo reconhecendo as desvantagens óbvias de um tratamento farmacológico simples em comparação a uma intervenção totalmente comportamental, acreditamos que a manipulação noradrenergic de reconsolidação de memória parece ser mais viável do que a extinção dentro da janela de reconsolidação.

A segunda questão diz respeito as condições ideais para acionar reconsolidação de memória. Há cada vez mais evidências de que os mecanismos mediadores da expressão comportamental do medo são claramente dissociada dos mecanismos mediadores do processo de reconsolidação 31,32,58-62. Por exemplo, estudos recentes em animais descoberto diferencial e r dissociáveiseceptors na amígdala basolateral mediando a expressão, desestabilização e restabilização de memórias do medo previamente condicionado 63,64. A expressão comportamental da memória do medo não é apenas dissociada de processos de mediação reativação da memória (ou seja, o acesso a um traço de memória), parece também não ser indispensável para reconsolidação para ocorrer 63. Como tal, o medo de expressão durante a reativação da memória não é informativo sobre se o traço de memória entra em uma fase instável. Tendo em conta que a desestabilização de memória é um pré-requisito para o noradrenergic beta-bloqueador de interferir com o processo de restabilização, uma questão importante é como podemos inferir desestabilização memória de sucesso na prática clínica. Uma série de descobertas indicam que um fator crucial na indução de reconsolidação e na demarcação de reconsolidação de qualquer recuperação da memória ou a consolidação de uma memória 40,65 romance é o grau de erro de predição induzida durante memrecuperação ory 31,32. Mas, dado que nenhum critério objectivo está disponível para determinar o grau óptimo de erro de predição, na prática clínica, os resultados laboratoriais correntes não podem ser facilmente convertidos para os protocolos de tratamento.

Outro desafio para traduzir a literatura da neurociência para a prática clínica diz respeito à validade ecológica do paradigma. As provas para interromper reconsolidação tem sido principalmente mostrado em animais e humanos para relativamente novos (um dia) e simples memórias do medo (ou seja, choque tom; choque de fotos). Não é auto-evidente que interromper reconsolidação de redes de memória, mais velhos, mais fortes e mais amplos, tais como em pacientes com PTSD é tão eficaz como foi demonstrado no laboratório para cued medo condicionado. Ainda com relação à variável dependente ainda não está claro se as observações dos estudos de laboratório em animais e humanos generalizar a pacientes com transtornos de ansiedade. A re medodução de efeitos são até agora demonstrada principalmente para a expressão comportamental de condicionamento aversivo (ou seja, o comportamento em roedores ou reflexo de sobressalto defensiva em humanos congelamento), com uma única exceção, onde demonstramos que também os sentimentos subjetivos de angústia foram neutralizados significativamente pelo bloqueio de noradrenergic reconsolidação de memória 37. Pode-se questionar se esses efeitos de redução de medo no laboratório são indicativos das experiências típicas de medo e comportamento de evitação característica dos pacientes com transtornos de ansiedade. Pesquisas futuras devem investigar se os resultados atuais, de fato generalizar a evasão comportamentos, um dos sintomas centrais de transtornos de ansiedade.

Em suma, embora o procedimento de condicionamento aversivo pavloviano é uma excelente ferramenta para estudar os mecanismos básicos da aprendizagem e da memória do medo, não podemos traduzir facilmente os resultados do laboratório para a prática clínica. Os insights que nós hav vindo a adquirir no ideal, limite e condições necessárias para a reconsolidação de memória deve ser considerada apenas como um ponto de partida para o desenvolvimento de tratamentos à base de reconsolidação. Por outro lado, o trabalho de investigação sobre a formação de extinção resultou em intervenções de exposição à base de extinção, que ainda pertencem aos tratamentos mais eficazes para desordens de ansiedade e outras desordens relacionadas. Tendo em conta que o bloqueio noradrenergic de reconsolidação de memória ofusca o efeito ansiolítico da aprendizagem extinção, interrompendo pontos reconsolidação a nova intervenção promissora para efetivamente reduzir medos excessivos e irracionais.

Disclosures

Autores têm nada a revelar.

Acknowledgments

Este trabalho é apoiado por uma concessão VICI (Merel Kindt) da Organização Holandesa para Pesquisa Científica.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2 computers with 4 screens Dell Optiplex 9010 Recording and monitoring physiological responses. Presenting the experimental script. 
Amplifier Developed by B. Molenkamp - University of Amsterdam Designed around a Burr Brown INA101 amplifier and ISO103 isolation stage. 
VSSRP98  Developed by B. Molenkamp - University of Amsterdam Physiological registration software. Record electromyography - EMG - activity using a bundled pair of electrodes wires connected to a front-end amplifier with an imput resistacne of 10 MΩ and a bandwidth of DC-1500 Hz. Raw EMG signals are integrated in the amplifier. Integrated EMG signals are sampled at 1,000 Hz and used for data analysis.
MATLAB MathWorks Analyzing data. Peak amplitudes are determined by taking the baseline 50 msec before probe onset to peak differences within 30 - 150 msec following probe onset and are recorded in microvolt.
Presentation NeuroBehavioral Systems Inc. - USA Stimulus presentation.
Constant current stimulator Digitimer Ltd. DS7A Generates electrical stimulation
Shock electrodes Made by B. Molenkamp - University of Amsterdam Ag electrodes of 20 mm x 25 mm with fixed inter-electrodes mid-distance of 45 mm.
Headphones Sennheiser Electronic GmbH & CO - Germany HD 25-1 II Presentation of startle probse and background noises.
EMG electrodes Made by B. Molenkamp - University of Amsterdam Three 7 mm sintered Ag-AgCl electrodes.
Double-sided adhesive collars MedCaT - the Netherlands 848125 13 mm x 5 mm. For attaching the EMG electrodes to the skin.
Conductive gel Signa Gel - Parker Laboratories Inc. - USA  224.550.011 Facilitates conduction from the skin to both the EMG and shock electrodes.
Alcohol swabs  Sanadep 0.5% - Microtek Medical - the Netherlands 3053800 For cleaning the skin of the participant.
Name Company Catalog Number Comments
Sphygmomanometer Omron Healthcare Europe B.V. - the Netherlands M4-I HEM-752-E Measuring blood pressures and heart rate.
Cotton salivettes Sarstedt - Germany 511.534 Obtaining salivary samples.
Curved tip syringe Monoject - Covidien - USA 412 Applies gel to EMG and shock electrodes.
Propranolol HCl - 40 mg and placebo pills  Huygens Apotheek - the Netherlands Pills should be identical in exterior.

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Perturbar reconsolidação do Medo Memória em seres humanos por um noradrenérgica β-Blocker
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Kindt, M., Soeter, M., Sevenster, D. Disrupting Reconsolidation of Fear Memory in Humans by a Noradrenergic β-Blocker. J. Vis. Exp. (94), e52151, doi:10.3791/52151 (2014).

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