Abstract
对粘膜病原体的早期防御由双方的上皮屏障和先天免疫细胞。两者的免疫竞争，他们的互通，是极为重要的保护，防止感染。上皮细胞和先天免疫细胞与病原体的相互作用被最佳研究在体内 ，其中复杂的行为展开在时间和空间。然而，现有的模式不允许与病原体战斗在粘膜水平易时空成像。
这里开发的模型创建粘膜感染通过直接注射的真菌病原体， 白色念珠菌 ，进入斑马鱼幼鱼的鳔的。所得感染使上皮和先天免疫细胞行为高分辨率成像贯穿粘膜病的发展。该方法的多功能性允许主机的询问来探测免疫事件导致的pH的详细序列agocyte招募和检查特定的细胞类型并在保护分子途径中的作用。此外，病原菌的免疫攻击的功能的行为可以同时使用荧光蛋白表达C.成像白色念珠菌 。所述宿主 - 病原体相互作用的增加的空间分辨率，也可以使用所描述的快速鳔夹层技术。
这里所描述的粘膜感染模型很简单，重现性好，使其成为粘膜念珠菌病的研究中一个有价值的工具。该系统还可以是大致平移的其他粘膜病原体如结核分枝杆菌，细菌或病毒的微生物，通常通过上皮表面感染。
Protocol
注：所有斑马鱼护理协议和实验按照根据机构动物护理和使用委员会（IACUC）协议A2012-11-03 NIH的指导方针进行。
1.斑马鱼饲养到4天受精后
- 收集AB斑马鱼，或任何其他的转基因系中，第一3小时受精后内，如图另一视频34。
- 120孵育鸡蛋含有150ml E3媒体15cm的培养皿（5毫米氯化钠，0.17毫米氯化钾，0.33毫米氯化钙2; 0.33毫米氯化镁2 2毫米的HEPES，pH值6.8）与亚甲蓝（0.3微克/毫升决赛浓度）在33°C培养箱12/12光/暗光周期。
- 6小时与E3 + PTU（1-苯基-2-硫脲，10微克/毫升最终浓度）后更换介质并除去死卵。
- 孵育4天，在33℃下，2天后交换用新鲜的E3 + PTU介质。
2.jection微针准备
- 拉硼硅毛细管（外径1.2毫米; ID0.69毫米）插入用针拔出器具有以下设置的微针（550热; 0拉; 130速度; 110时间）。
注：设置将有所不同，从灯丝到灯丝，得到类似形状的微针晶（ 见图1），并将需要重新调整每当一个新的灯丝安装。 - 填充的微针与3微升的0.4微米过滤的磷酸盐缓冲盐水（PBS; 137mM的氯化钠; 2.7毫米氯化钾; 10毫的Na 2 HPO 4; pH值7.4; 1.8毫KH 2 PO 4）用20微升微加载移液器提示。
- 设置在连接到一压力喷射系统的显微上的微量夹持微针。设置注射压力到30 PSI和脉冲持续时间为30毫秒。
- 使用培养皿用蒸馏水，降低微针，直到针的1/5是在水中。夹在微针的WiTH略低于水位细镊子。使微针出来的水，并推踏板几次直到大丸剂出现。
- 通过降低上层叠用一滴类型的浸油血球微针测量丸药的直径。调整的脉冲持续时间，以获得所需的体积（ 见表1）。
- 为丸将背压保持稳定的油（降低的压力，如果推货量增加，增加的背压，如果药量减少）。记录脉冲的持续时间对于每个微针。
- 通过使用微加载枪头吸它从微针除去PBS中并排出遗留PBS中通过将其背面上的注射器和翻转的连续脉冲开关。保留每个微针。
3. 念珠菌准备
- 连胜白色念珠菌转化密码子优化dTomato，GFP，BFP，EOS或远端红色从冷冻的储存（-80℃的库存中的25％的甘油），使用无菌的木销钉到酵母peptine葡萄糖（YPD）琼脂板（10克/升酵母提取物，将20g / L的蛋白胨20克/升的葡萄糖20克/升琼脂;高压灭菌并倾25毫升在培养皿中），并孵育过夜，在30℃。
- 使用无菌木销钉挑选一个菌落，接种到5ml YPD液体（10克/升酵母提取物，将20g / L的蛋白胨20克/升葡萄糖的，高压灭菌并在无菌条件下等分在5毫升在16×150毫米的玻璃培养管）。
- 孵育过夜，在30℃的辊筒在60rpm。
- 收集1毫升C的白色念珠菌培养和移植到1.7毫升无菌离心管中。
- 离心机在5000 XG一对夫妇秒。清空上清液，彻底地加入1毫升无菌PBS，旋涡。重复此两次。
- 在无菌PBS 1000：通过稀释1毫升股票1计数使用血球殖民地。
4.注射在斑马鱼在鳔
- 用于在33℃的培养箱中30分钟，温热的注入培养皿（2％琼脂糖）。
- 在所需的时间，从含有鱼用25毫升吸管没有吸引任何斑马鱼来注入15厘米培养皿取出的150毫升E3 + PTU 100。
- 麻醉4单丝旦斑马鱼加入2毫升4毫克/毫升的缓冲三卡因甲磺酸库存（TR）至其余的50毫升介质（最终浓度200微克/毫升），并等待15分钟。
- 在解剖显微镜下，用一个充气的鳔鱼的选择。鱼，也可以在那个时候筛选均匀的表型，如在MPO中性粒细胞的分布：使用表面荧光解剖显微镜GFP线。
- 淡化C.白念珠菌库存从其原始浓度（ 步骤3.8），以1.5×10 7菌落形成每毫升（CFU / ml）的单元在PBS。
- 转移30斑马鱼上使用塑料移送管注入培养皿TTE并取出多余的介质。
- 用钓鱼线工具（0.012英寸直径的渔线超粘成硼硅毛细管），使3系的10条鱼，通过举办注射菜纵向和垂直定向的鱼。
- 取出多余的介质。
- 彻底涡管1.5×10 7 CFU /毫升C.白色念珠菌 。
- 填写一个微针3微升的C.使用白色念珠菌新的微加载枪头，并设置脉冲持续时间，以适当的设置（见步骤2.9）。
- 旋转注入培养皿进行的微针和鱼的头部之间20°的角度，针对向着鳔（ 图3A）的背面。
- 推微针插入鳔，确保针的孔是在管腔，并按下踏板一次。
- 重复每个鱼和充斥菜E3的转移到恢复盘（25毫升E3 + PTU）ð排空进入复苏菜。
- 另外30鱼转移到注塑菜。
- 重复注射了新的微针充满了彻底涡旋C.白色念珠菌 。
- 完成注射PBS对照，如果需要的话，使用不同的喷射盘以避免污染，并转移到一个单独的恢复盘（ 步骤4.10）。
5.筛选鱼的期望接种
- 制备40毫升0.4％低熔点琼脂糖溶液（LMA）加入160毫克低熔点琼脂糖至40的E3毫升，通过微波直至溶解，并冷却到37℃沸腾。添加400微升的TR（最终浓度200微克/ ml）的一次冷却的。
- 30分钟后恢复，如所述（ 步骤4.3仅使用1毫升TR入25毫升的E3 + PTU，最终浓度200微克/毫升）麻醉的鱼。
- 转让30鱼（用尽可能少的媒体越好）〜2毫升LMA的重量船。
- 抽吸个体鱼用移液管和板用1滴的LMA的鱼到96井板成像，仅使用10×6的中央的孔中。
- 重复，直到所有的鱼屏幕加载到成像板。
- 让媒体在室温下固化5分钟。
- 位置就在自己身边的鱼，确保他们在与玻璃底部接触。
- 使用20X客观上倒落射荧光/共聚焦显微镜和适当的过滤器，记录C.数量白色念珠菌酵母细胞中的每条鱼的鳔。
- 选择具有15-25酵母细胞的鱼在鳔（或期望的接种物），安乐死非选择鱼（TR在E3的800微克/毫升），并通过用50 E3 + PTU毫升选定鱼返回深培养皿加入3滴的E3到成像板选择的孔和用塑料移液管吸出鱼。
- 孵育在33℃下进行所需的持续时间。
6.成像鱼后筛选
- 在所需的时间，除去25的50毫升E3 + PTU介质从含有鱼图像深培养皿。
- 如所述（ 步骤4.3仅使用1毫升TR成25毫升E3 + PTU剩余，最终浓度200微克/毫升）麻醉的鱼。
- 鱼板放入96孔成像板和位置适当（ 步骤5.3 - 5.7）。
- 图像扫描使用适当的激光器和发射滤光片共聚焦显微镜。第一焦点上使用下微分干涉对比（DIC）的4X物镜鱼和取得的使用20X物镜与所述共焦激光扫描模式感兴趣区域的用2微秒/像素的速度和1024×600像素的宽高比的图像。收购Z-堆栈与1微米的步长，应用3帧的卡尔曼滤波模式。
- 返回到深培养皿用50毫升E3 + PTU或进入individua升井（24孔培养皿，3毫升E3 + PTU）和孵化在33°C。
7.剖析鳔
- 填有10毫升注射器利用高真空润滑脂。
- 准备2％LMA（ 步骤5.3琼脂糖8毫升E3 160毫克低熔点的）。
- 在所需的时间，麻醉鱼（ 步骤5.2）。
- 转移10鱼到1.7毫升离心管中，用1ml的E3，并通过添加200微升4毫克/毫升三卡因（最终浓度800微克/毫升）至离心管中，并温育15分钟，在室温下安乐死。
- 通过将4滴真空润滑脂中的正方形，1厘米相距上的MicroSlide（75×25毫米， 图2）制备成像载玻片。
- 将2滴2％LMA在广场中央。
- 将一条鱼在一个单独的载玻片在解剖显微镜下，并确认心脏已经停止了跳动，去除多余的水分。
- 拿起鳔通过气动导管与左镊子，它从消化道分离，并且将其放置在2％的LMA的中心其固化之前。
- 放置盖玻片（18×18 mm）公摄像载玻片的顶部并推动它直到它触及真空润滑脂以及向LMA（ 图2）。
- 在清扫10分钟的图像，如步骤6.4中所述。重复步骤7.7 - 7.11与其他鱼类。
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Representative Results
在注射后鳔
这里介绍的实验方法描述在注射C的一致剂量白念珠菌的酵母细胞在4鳔DPF斑马鱼。以前的工作与浸入式模型表明，到C的鳔免疫反应白色念珠菌是类似于哺乳动物粘膜念珠菌32。在这里，我们展示了修改后的感染的方法是比较简单的，重复性好，快速;几百斑马鱼的可以注射和内几个小时进行筛选。
所述鳔的准确和可重复的感染是由显微注射靶向器官的后部区域来完成的。注入鳔是更容易学习比幼虫或胚胎斑马鱼（ 如静脉或后脑心室），其他大多数显微注射路线。鱼注射前的准备是西米拉尔到，对于其他注射部位，不同之处在于在鳔需要被充气所以鱼是老年人。大约75％的在33℃下所提出的鱼有一个膨胀鳔由4旦（数据未显示）。需要被斜切的鳔位于下用于注入鱼的表皮以及薄肌肉层和微针。在该鱼被注入的角度（ 图3A）也大大改善了过程的速度和易用性。喷射弹丸在鳔的背面的是重要的，因为它允许所有筛选当酵母细胞的可视化，并且避免酵母细胞对鳔两侧的存在，这将歪斜的选择范围。注入朝向鳔的背面也避免了接种物通过气动导管，然后向下消化道一个可能发生的损失。验证该鱼已被注射相对容易，因为丸取代气泡和背面鳔的随后填充有介质（ 图3C）。另外，也可以注射时使用酚红，这将使得该可视化更容易。因为C的大小白念珠菌的酵母细胞（3 - 4微米），将接种的剂量被限制为低于5×10 7 CFU / ml的浓度，由于微针的堵塞。这使得注射酵母细胞1 250之间和在一个5 NL丸药。在我们的手中，注入4 NL在1-1.5×10 7 CFU /毫升给了最一致的结果。这就产生了一个范围每鱼10-50酵母细胞。缩小接种到15-25酵母细胞（ 图3B）给出了一个紧密的表型和响应。使用这些条件，喷射出的鱼的大约50％具有相应的接种物范围内具有95％以上的存活24小时后喷射（数据未示出）。另外，也可以用较低/较高的接种物保持鱼为了研究上的病原体的负担的效果疾病的发展。
所述鳔是约100 NL总体积（400×200×200微米，长x宽x高，用公式为椭圆体的体积），所以注射更高容量也是可能的（最多3个脉冲的4 NL一直使用而对鱼的生存任何显著影响;数据未显示）。
个别鱼纵向活体成像跟随主机和病原体的行为
主机和病原体的行为可以遵循的非侵入性地使用该模型数天。的能力，以图像的感染在高分辨率体内发展能够与已被用来检查粘膜念珠菌病的发病机制。嗜中性粒细胞在抵抗在小鼠和人类35-38中发挥关键作用，以念珠菌病。利用MPO：GFP斑马鱼39（嗜中性粒细胞表达绿色荧光蛋白），和C.白色念珠菌表达dTomATO红色荧光蛋白32，我们已在早期感染（ 图4）观察neutrophil- 念珠菌动力学。
嗜中性粒细胞是第一先天细胞类型被招募到粘膜感染部位和鳔与现场C.感染白色念珠菌引起的中性粒细胞（ 图4A，B）的一个快速和连续的招聘。有趣的是，中性粒细胞基本上不招募到鳔当热灭活酵母细胞注射（ 图4A，B）。
长丝注射酵母细胞和C的后迅速发展白色念珠菌继续发芽为第一个48小时后喷射（HPI）。然而，该点的长丝的数量减少（ 图4D）和酵母的比例增加后（未示出）。的能力，以遵循个体鱼非侵入性地实现这些纵向研究（24孔板组织培养皿）并突出在疾病进展和宿主反应（ 图4C）的个体差异。这样详细的研究在感染部位数天列举真菌和免疫细胞仍不切实际的鼠标。
一种快速鳔切除术来改善影像
成像免疫或上皮细胞与C的相互作用白色念珠菌在这里提出的模型比较容易。然而，在某些情况下，气泡的存在并围绕鳔，皮肤和肌肉的组织的厚度，损害详细的空间分辨率。以提高图像质量，我们已经开发出一种方法，以解剖鳔出斑马鱼和快速图像它（在10分钟内），通过共聚焦显微镜（ 图5A）的。成像的转基因鱼线，其中所述荧光普遍表达时，这是特别有用的且有多余的荧光在周围组织，如NF-κB：GFP 40或α-catenin的：黄水晶线41,42（ 图5B，C）。该技术需要灵巧和实践进行迅速，但它是可行的，完全图像的95％的所有尝试的鱼。
图1：微针形状鳔注射。微针的形状和测量的（A）的综述。从A的微针尖端的（B）的放大倍数在乙每个主要垂直线为0.2毫米。
图2：成像幻灯片 。有2％的LMA滴被放置在4个点的真空润滑脂，1厘米相距在玻片上的中间。在狄氏CTED鳔被放置在LMA的中部和盖玻片被降低上顶，直至它与在LMA与真空润滑脂接触。
图3：注射白色念珠菌在鳔仍然局部到注射部位。 （A）的微针注射白色念珠菌进入鳔的背面在4 DPF斑马鱼幼虫的方向和位置的示意图。（B）的荧光显微镜选择为15-25酵母细胞的注射小丸后代表接种3组不同的鱼。平均值和平均值的标准误差来表示，N = 17，17，和20，用于组A，B和C分别。（C）的代表性的C的图像白色念珠菌立即仁济后（氟化钙，dTom，红色荧光表达念珠菌）感染AB斑马鱼幼鱼ction。 （分别为左和右面板，）图像获取用10X和20X的目标，并且在红色通道（12和19片，分别地）与在DIC通道的单个切片最大突起的复合材料。气泡（黄色）和上皮衬里（白色）的轮廓表示在左侧面板上。比例尺代表250和50微米，分别请点击此处查看该图的放大版本。
图4：注射鳔允许宿主病原体动力学时空清扫。 （A）MPO的代表形象：GFP鱼线4旦注射活的或热灭活（HK）氟化钙，dTom在鳔和成像48 HPI。图像最大投影上的绿色复合材料第二红色通道（20片），并用DIC通道单个片。刻度条表示100μm的（B，C）。主机响应于C.白色念珠菌感染。中性粒细胞招募感染（SOI）早在6 HPI的网站，并继续在数量上增加了48小时。的可能性的图像，并保持鱼个体分开（24孔板）允许进行详细的免疫动力学来实现可视化。（D）的病原体反应。C.白色念珠菌酵母细胞发芽的第24 HPI但是从24 HPI恢复到酵母细胞。 请点击此处查看该图的放大版本。
图5：鳔夹层允许更精细的细节将被成像。吨的（A）示意图他参与的步骤在4-5 DPF斑马鱼的鳔解剖。蓝色箭头指示的与所述镊子（L代表左和R为右）拉动方向（B，C）。解剖鳔从α-catenin的代表图像：黄水晶鱼线41,42（绿色紧密连接）注入4 DPF白色念珠菌（氟化钙，dTom）和共聚焦显微镜2 HPI成像。板是在红色和绿色通道的最大突起的复合物（25切片为B和3片为C）和用于DIC在面板B.比例尺单个片100微米B和100微米和10微米的三请点击此处查看该图的放大版本。
| 体积（NL） | 1 | 2 | 3 | 4 | 五 |
| 直径（mm） | 0.124 | 0.156 | 0.179 | 0.197 | 0.212 |
表1：丸体积与直径的关系。
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Discussion
在鳔显微注射疾病模型的研究进展和限制
这里提出的模型是在Gratacap 等人描述的粘膜念珠菌浸没模型的扩展（2013）。它增加了一个控制感染时间的优点，一个高度重复性感染的剂量，并因此提高效率。我们在这里表明，允许感染动力学的非常详细的非侵入性颞文档以及鳔的更高分辨率离体成像的新方法。这些程序应有利于C的研究白色念珠菌 -innate免疫系统的相互作用动力学的黏膜。粘膜感染车型数量有限，在斑马鱼进行了描述，都局限于消化道紊乱/感染24,43。这里提出的鳔模型扩展感染的位点，以共享一些相似之处至肺，并提供一个密闭部位的器官感染，对病原体较少可能性被冲走。
存在必须掌握这些技术时必须考虑到几个重要的因素。最重要的一点是用于充气鳔的要求。这就要求鱼被老化至5旦在28℃或4单丝旦在33℃。当饲养这个较高的温度用于加速鱼的发育和更好近似生理范围的哺乳动物上皮温度（小鼠皮肤温度为33.1℃，44）。然而，需要该模型这个特定的温度范围内的限制要牢记和观察到的表型应在哺乳动物系统中更完整的解释进行验证。注射部位（后鳔）也是关键的，因为在气动导管保持在physostomous鱼公开（包括斑马鱼）和高压注射别处挠度在器官可以推病原体过去鳔并进入消化道。接种物定量，也较不准确，如果酵母细胞不是都在鳔的背面，因为在后备箱鱼的厚度使得难以显现鳔的两侧。所述鳔的解剖需要灵巧和成像需要发生后立即以避免工件由于该过程的物理创伤。
该技术的局限性主要涉及鱼的发育阶段。这限制了使用吗啉代技术，研究了几天，和击倒效果，必须仔细测试全部或部分药效区别对待。吗啉这一活动在开发后期先前已报道，我们也成功地使用吗啉在这个模型中，用有效的剪接阻塞当时仍有效的为5 DPF。使用药业的acological药物可能是在这个特定的模型一个很好的选择，因为没有限制为鱼的年龄。过去72小时受精后使用鱼有时需要比幼虫斑马鱼的工作，这取决于机构的动物护理和使用委员会更多的监督。研究的长度也受限，如斑马鱼不以高速率对在静态实验室条件45超过10天存活。另一方面，使用5幼鱼旦发展，代替年轻胚胎或幼虫允许研究，其中所有的器官，如肾脏，肝脏或胰脏的功能完全正常46-49。相比在体外细胞培养或体内鼠模型，用（抗体和化学拮抗剂激动剂）试剂的数目，在斑马鱼被限制;然而，直接添加化学品，以媒体的可能性是有利的。敲除和基因敲除斑马鱼的数量仍然有限，但RISË有针对性的基因组编辑打开的突变体的产生令人兴奋的可能性。相对容易的组合来构造的荧光报告线（细胞类型特异性或信号通路特异性）与少年斑马鱼的透明度仍是该系统的主要和独特的优势之一。
期待
斑马鱼的鳔感染模型扩展的问题的范围，可以询问有关在脊椎动物粘膜上皮宿主 - 病原体相互作用，提供感染通过上皮的入侵其他病原体的新途径，并强调该机构的实用程序，用于探测脊椎动物疾病。
感染上皮细胞在黏膜水平斑马鱼模型已经出版了探讨肠道紊乱的药物或病原体24,43的影响。然而，这种粘膜念珠菌病的模型是首次利用swimb梯，因此延伸感染的网站，可以在超出消化道斑马鱼进行调查的范围内。在鳔粘膜表面和哺乳动物肺之间的差异未完全阐明，并从这个模型更高的脊椎动物数据的解释/翻译要慎。
所述鳔感染填补当前间隙在脊椎动物感染模型和打开了一个窗口用于成像先天免疫/上皮细胞的相互作用与病原体。现在的问题，先前禁地一个不同的范围，是探索可行的。我们可以确定不同先天免疫细胞之间的相互作用与彼此以及与上皮细胞，其时空招聘，和C的性质白色念珠菌扩散和相对于免疫攻击和疾病进展中的非免疫抑制的宿主形态切换。的可能性，以图像的完整主机数小时至在GRE天在细节表示该系统的显着和重大的优势。
最后，鳔和哺乳动物肺之间的本体论和基因表达的相似进一步表明，针对本机关与基因敲除或化学药物可能揭示微生物龙互动和免疫50-52保守机制。
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Acknowledgments
作者感谢乐郑氏博士和博士托宾慷慨地提供了α-catenin的：黄水晶鱼线和比尔·杰克曼允许我们做的拍摄在他的实验室。作者承认的资金来源国立卫生研究院（资助5P20RR016463，8P20GM103423和R15AI094406）和美国农业部（项目＃ME0-H-1-00517-13）。此稿件发布为主要农林试验站出版物号3371。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.7 ml tubes | Axygen | MCT-175-C | |
| Deep Petri dishes | Fisher Scientific | 89107-632 | |
| Transfer pipettes | Fisher Scientific | 13-711-7M | |
| Yeast Extract | VWR Scientific | 90000-726 | |
| Peptone | VWR Scientific | 90000-264 | |
| Dextrose | Fisher Scientific | D16-1 | |
| Agar | VWR Scientific | 90000-760 | |
| Fine tweezers (Dumont Dumoxel #5) | Fine Science Tools | 11251-30 | |
| Wooden dowels | VWR Scientific | 10805-018 | |
| Low melt agarose | VWR Scientific | 12001-722 | |
| Flaming Brown micropipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |
| Borosilicate capillary | Sutter Instruments | BF120-69-10 | |
| MPPI-3 injection system | Applied Scientific Instrumentation | MPPI-3 | |
| Back pressure unit | Applied Scientific Instrumentation | BPU | |
| Micropipette holder kit | Applied Scientific Instrumentation | MPIP | |
| Foot switch | Applied Scientific Instrumentation | FSW | |
| Micromanipulator | Applied Scientific Instrumentation | MM33 | |
| Magnetic base | Applied Scientific Instrumentation | Magnetic Base | |
| Tricaine methane sulfonate | Western Chemical Inc. | MS-222 | |
| Dissecting microscope | Olympus | SZ61 top SZX-ILLB2-100 base | |
| Confocal microscope | Olympus | IX-81 with FV-1000 laser scanning confocal system | |
| 20X microscope objective | Olympus | UPlanSApo 20x/0.75 | |
| Roller drum | New Brunswick Scientific | TC-7 | |
| Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | |
| Glass culture tubes (16 x 150 mm) | VWR Scientific | 60825-435 | |
| NaCl | VWR Scientific | BDH4534-500GP | |
| KCl | VWR Scientific | BDH4532-500GP | |
| MgSO4 | VWR Scientific | BDH0246-500GP | |
| HEPES (Corning) | VWR Scientific | BDH4520-500GP | |
| Children clay (Play-Doh) | Hasbro | ||
| CaCl2 | Fisher Scientific | C69-500 | |
| Methylene blue | VWR Scientific | VW6276-0 | |
| PTU | Sigma | P7629-10G | |
| Petri dishes | Fisher Scientific | FB0875712 | |
| Hemocytometer (Hausser scientific) | VWR Scientific | 15170-172 | |
| Type A immersion oil | Blue Marble Products | 51935 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5424 | |
| Vortex Genie | VWR Scientific | 14216-184 | |
| Agarose (Lonza) | VWR Scientific | 12001-870 | |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | S374-500 | |
| KH2PO4 | Fisher Scientific | P285-500 | |
| Fishing wire | Stren | ||
| 96 well imaging plate (Sensoplate) | Greiner Bio-One | 655892 | |
| High vacuum grease (Dow Corning) | VWR Scientific | 59344-055 | |
| Microslide (25 x 75 mm) | VWR Scientific | 48300-025 | |
| Cover slips (18 x 18 mm), No 1.5 | VWR Scientific | 48366-045 | |
| 15 cm Petri dish (Olympus plastics) | Genesee Scientific | 32-106 | |
| Glycerol (EMD chemicals) | VWR Scientific | EMGX0185-5 | |
| 24-well culture dish (Olympus plastics) | Genesee Scientific | 25-107 | |
| Weight boats (8.9 cm) | VWR Scientific | 89106-766 |
References
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