Introduction
फेफड़ों के प्रमुख समारोह एक जीव और वातावरण के बीच ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड का आदान-प्रदान के लिए प्रदान करना है। मनुष्यों में जन्मजात और अधिग्रहण की स्थिति की एक मेजबान बिगड़ा फेफड़ों समारोह में जो परिणाम कम फेफड़ों सतह क्षेत्र के लिए सीसा। यानी, फेफड़ों - जैसे साँस corticosteroids, bronchodilators, पूरक ऑक्सीजन, और पुरानी यांत्रिक वेंटीलेशन के रूप में चिकित्सा के एक मेजबान बिगड़ा फेफड़ों समारोह में 1-3 के परिणामों को कम करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं, इन स्थितियों के लिए आदर्श चिकित्सा कार्यात्मक फेफड़े के ऊतकों के regrowth को बढ़ावा मिलेगा उत्थान।
स्तनधारी ऊतक उत्थान अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है। अफ्रीकी काँटेदार माउस निशान गठन 4 के बिना त्वचा के बड़े क्षेत्रों को पुनर्जीवित कर सकते हैं। मानव में बाहर का जत्था चोट या विच्छेदन 5-7 निम्नलिखित पुनर्जीवित कर सकते हैं। निम्नलिखित न्यूमोनेक्टॉमी (PNX), प्रतिपूरक फेफड़ों के विकास करना, 9 चूहों, चूहों 8 में होता हैजी एस 10, और 11 मानव। परिभाषा के अनुसार, प्रतिपूरक फेफड़ों के विकास से जुड़े microcirculation में 12 के विस्तार के साथ इन बढ़े हुए airspaces की मौजूदा airspaces का न केवल विस्तार है, लेकिन फिर से दो भागों में विभाजित शामिल है। जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण इस मॉडल फेफड़ों के विकास 13 के संकेत घटनाओं के कई स्मरण दिलाता है कि प्रदर्शन किया है। चार सप्ताह माउस PNX के बाद, वायुकोशीय सतह क्षेत्र दिखावा संचालित जानवरों 14 के बराबर है। इस पांडुलिपि में, हम माउस PNX और दिखावा PNX प्रक्रियाओं का वर्णन।
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Protocol
नोट: पशु उपयोग बयान: इस अध्ययन में सभी प्रक्रियाओं अनुमोदन और सिनसिनाटी बच्चों के अस्पताल में संस्थागत पशु इस्तेमाल और देखभाल समिति (IACUC) के दिशा निर्देशों का पालन के साथ आयोजित किया गया। आठ सप्ताह पुरानी C57BL / 6J नर चूहों जैक्सन लेबोरेटरीज (बार हार्बर, इ) से प्राप्त की है और उपयोग करने से पहले एक सप्ताह के लिए acclimate करने के लिए अनुमति दी गई। सर्जरी तक, जानवरों के एक रोगज़नक़ मुक्त बाधा सुविधा में रखे और autoclaved चाउ और फ़िल्टर्ड पानी विज्ञापन libdium प्रदान किया गया। प्रत्येक माउस पिंजरे एक समर्पित हवा और पानी के साथ आपूर्ति की गई थी, और कमरों में एक 12 घंटा दिन-रात चक्र पर बनाए रखा गया। सर्जरी से वसूली के बाद, चूहों, फ़िल्टर सबसे ऊपर के साथ पिंजरों में रखा autoclaved चाउ विज्ञापन libidum प्रदान की है, और एक पानी की बोतल से पानी फ़िल्टर्ड प्रदान किया गया।
उपकरण के 1. तैयारी
- पेपर क्लिप और पिन का उपयोग कर 6 त्वचा retractors बनाओ। ट्विस्ट कागज पिनों की टांगों पर पेपर क्लिप स्ट्रेट, एलएक छोर पर एक 5 सेमी सीधे स्टील के तार eave और तार के अंत में एक भी 0.5 सेमी 'यू' आकार का हुक बनाने के।
- प्लास्टिक की चादर का उपयोग कर कुछ 15 x 15 सेमी वर्ग शल्य पर्दे बनाओ। माउस के प्रति एक ड्रेसिंग तैयार करें। प्रत्येक चादर के बीच में एक कागज टॉवर रखो।
- 12 X 12 इंच काग टाइल्स, धुंध, और कपास इत्तला दे दी swabs के एक ढेर के साथ साथ सभी सर्जिकल उपकरण जीवाणुरहित।
2. माउस तैयारी
- 2% isoflurane के साथ संज्ञाहरण प्रेरित। पशु वजन।
- एक समर्पित शल्य चिकित्सा की तैयारी क्षेत्र में बिजली शेवर साथ बाईं छाती और गर्दन क्षेत्र दाढ़ी।
- माउस की आँखों के लिए कृत्रिम आँसू मरहम की एक बूंद लागू करें।
- Chlorhexidine और isopropyl शराब के साथ गर्दन और बाईं छाती शुद्ध करना। दो बार अधिक दोहराएँ।
3. माउस ओरो-सांस की नली इंटुबैषेण और यांत्रिक वेंटीलेशन
- एक गैर बाँझ शल्य चिकित्सा तकनीशियन जगह पूर्व गर्म शल्य चिकित्सा के क्षेत्र में माउस लापरवाह है।
- पंजा चुटकी करने के लिए एक प्रतिक्रिया की कमी का दस्तावेजीकरण द्वारा संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
- शल्य पोशाक, मुखौटा, और टोपी हाथ धोने और धारण करने के बाद, बाँझ सर्जिकल दस्ताने नहीं है।
- Draping और सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग करने के बाद, गला बेनकाब करने के लिए पूर्वकाल मध्य गर्दन पर एक 1 सेमी ऊर्ध्वाधर चीरा बनाते हैं। हल्के घुमावदार, दाँतेदार 10 सेमी संदंश के साथ पट्टा मांसपेशियों को वापस लेना और एक सीधे कैंची की नोक के साथ पट्टा मांसपेशियों के प्रसार के द्वारा गला और ट्रेकिआ बेनकाब।
- मौखिक रूप से मध्य श्वासनली (चित्रा 1 ए) में एक 22 जी कुंद की नोक angiocatheter डालें और नेत्रहीन प्लेसमेंट (चित्रा 1 बी) की पुष्टि करें। संज्ञाहरण बनाए रखें और कृंतक वेंटीलेटर के माध्यम से (स्ट्रोक प्रति 225 μl; प्रति मिनट 200 स्टोक्स) 1-3 isoflurane% का उपयोग कर हवादार। 15 सेमी एच 2 ओ के दबाव सीमा को रोजगार
4. माउस Pneumonectomy
- माउस की पीठ का सामना करना पड़ के साथ सही पार्श्व decubitus स्थिति में माउस निर्धारित करनाऑपरेटर (बाईं ओर ऊपर)। एक बाँझ कपड़ा के रूप में एक आत्म सील प्लास्टिक की चादर का प्रयोग करें। टांगना के माध्यम से काटने, 4 वें और 5 वें पसलियों के बीच अंतरिक्ष में पसलियों के लिए एक 2 सेमी लंबी कटौती समानांतर बनाने के लिए कुंद इत्तला दे दी घुमावदार कैंची का उपयोग करें। कुंद टिप घुमावदार कैंची डालें और अंतर्निहित पसलियों और पसलियों के बीच मांसपेशियों से दूर त्वचा काटना।
- एक वर्ग 1.5 एक्स 1.5 सेमी शल्य खिड़की (2A चित्रा) को बेनकाब करने के लिए चार retractors के साथ त्वचा वापस लेना। काग बोर्ड को retractors सुरक्षित।
- घुमावदार संदंश का उपयोग पसलियों के नीचे काटना, और वक्ष गुहा में प्रवेश करने की घुमावदार संदंश की एक टिप का उपयोग करें।
- कुंद टिप सूक्ष्म कैंची का प्रयोग, वक्ष गुहा दर्ज करने के लिए निचले ब्लेड का उपयोग करें। विपरीत दिशा में पसलियों और दोहराने के बीच एक 0.5 सेमी चीरा बनाओ।
- शेष दो retractors का प्रयोग, पूर्वकाल-पीछे अक्ष और काग बोर्ड (चित्रा 2 बी) को retractors सुरक्षित में छाती खुला। <बाएं फेफड़े के धमनी और श्वसनी (चित्रा 3 ए, बी) उजागर कर रहे हैं जब तक बाएं हाथ में घुमावदार कुंद इत्तला दे दी संदंश का प्रयोग li> thoracotomy के माध्यम से laterally और inferiorly बाएं फेफड़े के ऊपरी हिस्से को बाएं फेफड़े समझ और विस्थापित।
- हथेली में applicator और हथेली (चित्रा -3 सी) से दूर ओर इशारा करते हुए घुमावदार टिप के शरीर के साथ दाहिने हाथ में भरी हुई टाइटेनियम संवहनी microclip applicator के होल्डिंग, वामपंथियों के पीछे पहलू की वक्रता साथ छाती में applicator के टिप स्लाइड फेफड़े और छोड़ दिया श्वसनी और फेफड़े के धमनी (चित्रा 3 डी) क्लिप।
- Applicator के निकालें लेकिन मुकर बाएं फेफड़े में रहते हैं। दाहिने हाथ के साथ कुंद टिप सूक्ष्म कैंची समझ और क्लिप के लिए श्वसनी और फेफड़े के धमनी बाहर कटौती और बाएं फेफड़े (3E चित्रा) को हटा दें।
- पसली retractors निकालें।
- Incisi को नीचा त्वचा की एक सेमी ऊपर चुटकी घुमावदार कुंद संदंश का प्रयोग करेंपर लेकिन डायाफ्राम के स्तर से ऊपर है और त्वचा के माध्यम से और बाईं वक्ष गुहा (चित्रा -4 ए, बी) में एक 24 जी angiocatheter डालें।
- वक्ष गुहा को बंद करने के 4 वें चारों ओर दो बाधित टांके और 5 वें पसलियों स्थान के लिए 5-0 Prolene सिवनी का प्रयोग करें।
- त्वचा retractors निकालें। चीरा की लंबाई के साथ त्वचा अनुमानित होते हैं और त्वचा को बंद कर दिया गोंद को संदंश के दो सेट का उपयोग करें।
- Angiocatheter के लिए एक 3 एमएल luer ताला सिरिंज कनेक्ट और कोमल चूषण लागू करने और angiocatheter वापस लेने के द्वारा अवशिष्ट हवा निकाल दें।
- गर्दन चीरा के रूप में पहले संदंश के दो सेट का उपयोग कर बंद गोंद।
5. माउस शाम Pneumonectomy
- "माउस Pneumonectomy" प्रोटोकॉल में नोट के रूप में बाएं फेफड़े बेनकाब। बाएं सीने गुहा में हवा की अनुमति घुमावदार कुंद संदंश के साथ रिब पिंजरे लिफ्ट (चित्रा 5 ए, बी)।
- बाएं यद्यपि में एक 24 जी angiocatheter रखेंबाएं फेफड़े घायल नहीं सावधान किया जा रहा से ऊपर के रूप में racic गुहा।
- 5-0 Prolene सीवन का उपयोग और फेफड़ों (चित्रा 5C) पंचर करने के लिए नहीं सावधान किया जा रहा है, 3 आरडी / 4 वें में सिवनी सामग्री के दो लंबाई और 5 वें / 6 वें पसली interspaces (चित्रा 5D) रखें। बाएं फेफड़े हर्नियेशन के जोखिम को कम करने के लिए बांधने से पहले सिवनी सामग्री के दोनों लंबाई रखें। दो बाधित टांके (चित्रा 5E) बनाने के लिए सीवन सामग्री बाँधो।
- वक्ष चीरा पर त्वचा गोंद, angiocatheter साथ अवशिष्ट हवा निकालने के लिए, और ऊपर के रूप में गर्दन चीरा गोंद।
6. पुनर्जीवन, analgesia, और रिकवरी
- Isoflurane बंद करें, और buprenorphine की 0.1 मिलीग्राम / किग्रा प्रशासन और सामान्य खारा subcutaneously के 0.5 मिलीलीटर।
- सहज respirations फिर से शुरू करते हैं, तो अंतःश्वासनलीय ट्यूब को हटा दें।
- इसे फिर से चल रहा है जब तक माउस का निरीक्षण करें। आम तौर पर resum चलनाअंतःश्वासनलीय ट्यूब को हटाने के बाद कई मिनट तों।
- / एन ओ ठीक करने के लिए एक 27 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर (humidified, 25% ऑक्सीजन) में माउस रखें।
नोट: हम सर्जरी के बाद पहले 24 घंटे के लिए पिंजरे फर्श पर पानी से गीला चाउ के कई छर्रों जगह है। - सर्जरी के बाद दो बार दैनिक तीन दिनों के लिए intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा buprenorphine की 0.1 मिलीग्राम / किग्रा प्रशासन। पशुओं को संभालने जब शल्य साइट को खोलने के लिए नहीं ख्याल रखना।
7. माउस निगरानी
- सर्जरी के बाद 1, 3, 5, और 7 दिनों में चूहों का वजन।
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Representative Results
। दोनों PNX और दिखावा न्यूमोनेक्टॉमी के लिए 100% - PNX और दिखावा संचालित माउस वजन की एक साजिश चित्रा 6 में प्रदान की जाती है हमारे हाथ में है, अस्तित्व लगातार 95 है। सही फेफड़ों-बढ़ता है फिर से इस मॉडल है और उम्मीद समय के पाठ्यक्रम में, हम Gibney एट अल। 15 और वांग एट अल की पांडुलिपियों के लिए पाठक उल्लेख कैसे के विवरण के लिए। 14
कई आम नुकसान सफलतापूर्वक माउस PNX और माउस दिखावा न्यूमोनेक्टॉमी प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करने से परहेज किया जाना चाहिए।
अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण: माउस PNX तकनीक सीखने के कई जांचकर्ताओं अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण के साथ मुश्किल है। माउस गला पूर्वकाल है और अंतःश्वासनलीय कैथेटर मुखर तार के माध्यम से पारित किया जाना चाहिए के रूप में कैथेटर घेघा में पारित करने के लिए, यह आसान है। चित्रा 1 ए में प्रदर्शन के रूप में, कुंद इत्तला दे दी कैथेटर curva निम्नलिखित के रूप में संभव पूर्वकाल के रूप में angled किया जाना चाहिएफिर midline के साथ जीभ की संरचना और धीरे दबाव के साथ श्वासनली में पारित कर दिया। मिड-सांस की नली कैथेटर स्थिति नेत्रहीन (चित्रा 1 बी) की पुष्टि की जानी चाहिए। अंतःश्वासनलीय नियुक्ति धीरे पक्ष की कैथेटर की ओर बढ़ रहा है और श्वासनली की आवाजाही के लिए देख द्वारा की पुष्टि की जा सकती है। उचित स्थिति द्विपक्षीय सीने में वृद्धि देख द्वारा की पुष्टि की है। एक वैकल्पिक तकनीक से नीचे वर्णित है।
शल्य चिकित्सा क्षेत्र रचना: एक दूसरे आम ख़तरा एक पर्याप्त thoracotomy खिड़की बनाने के लिए विफलता है। 2A चित्रा और 2 बी में सचित्र के रूप में, thoracotomy खिड़की बाएं फेफड़े के धमनी की पर्याप्त दृश्य और बाईं मुख्य स्टेम श्वसनी अनुमति देने के लिए पर्याप्त रूप से बड़े और पीछे होना चाहिए। अनुभवहीन ऑपरेटर आमतौर पर आसानी से बाएं फेफड़े वापस लेना और बाएं वृक्कनाभि का उपयोग करने के लिए अपने thoracotomy, बहुत छोटा भी पूर्वकाल, या बहुत नीचा कर देगा।
संवहनी क्लिप Applicatiपर: सही ढंग से संवहनी क्लिप को लागू करने में विफलता exsanguination में परिणाम होगा। वृक्कनाभि की उचित पहचान महत्वपूर्ण (चित्रा 3A) है। घुमावदार applicator के टिप के शरीर के भीतर क्लिप क्लिप applicator के द्वारा धारक से हटा दिया जाता है जब 3B चित्रा और -3 सी, में प्रदर्शन के रूप में, क्लिप के अंत क्लिप applicator के की नोक और क्लिप के शरीर से भरा है । Applicator के हैंडल के कोमल बंद होने क्लिप बंद हो जाएगा। क्लिप ओरिएंटेशन में किसी भी परिवर्तन अपर्याप्त क्लिप बंद करने में हो सकता है; एक क्लिप applicator के से उखाड़ फेंकना हो जाता है, तो इसलिए, एक नया क्लिप लोड किया जाना चाहिए। क्लिप को वृक्कनाभि समीपस्थ आंसू के रूप में नहीं तो इसी तरह, बाएं फेफड़े पर कर्षण कोमल होना चाहिए। applicator के घुमावदार टिप बाईं वृक्कनाभि (चित्रा 3 डी) ligate को बाएं फेफड़े की बेहतर पहलू की वक्र का पालन करना चाहिए। एक आम गलती घेघा के संयुक्ताक्षर है। चित्रा 3E में प्रदर्शन
शाम PNX के दौरान बाएं फेफड़े में चोट से बचना: अनुभवी और अनुभवहीन ऑपरेटरों की शायद सबसे आम ख़तरा दिखावा PNX दौरान फेफड़ों की चोट छोड़ दिया है। चित्रा 5 में प्रदर्शन के रूप में, ऑपरेटर सिवनी सुई के साथ फेफड़ों पंचर करने के लिए या herniated फेफड़ों की फंसाने की अनुमति नहीं thoracotomy के बंद होने के दौरान सावधान रहना चाहिए। यह प्रतिकर्षक, हवा निकासी के लिए 24 जी angiocatheter, और सिवनी (चित्रा 5A-डी) रखकर जब पसलियों लिफ्ट करने के लिए महत्वपूर्ण है। Thoracotomy के बंद होने के दौरान, बांधने से पहले सिवनी के दोनों किस्में रखकर फेफड़ों फंसाने (चित्रा 5E) के खतरे को कम करता है। आमतौर पर चार दिखावा प्रक्रियाओं प्रदर्शन करेंगे हमारी प्रयोगशाला चार से पीछा PNX हम हम बाएं फेफड़े घायल चाहिए एक PNX माउस में एक दिखावा माउस कन्वर्ट कर सकते हैं। यह नहीं है कि सभी समूहों अवशिष्ट बाएँ वक्ष हवा की निकासी करते हैं कि ध्यान दिया जाना चाहिए। हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, कोई डेटा के साथ और अवशिष्ट हवा निकासी बिना PNX की तुलना मौजूद है।
अभ्यास और अनुभव के साथ, दोनों PNX और दिखावा प्रक्रियाओं एक ही सत्र में प्रदर्शन किया जा करने के लिए दो दर्जन माउस सर्जरी अप करने के लिए अनुमति देता है 10 मिनट में पूरा किया जाना चाहिए।
1. माउस Endotracheal इंटुबैषेण चित्रा। (ए) मौखिक-सांस की नली कैथेटर midline और यह पूर्व से गला ओर उन्नत और angled है के रूप में जीभ दबाना करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। (बी) के मध्य श्वासनली में कैथेटर की उचित स्थिति नेत्रहीन पुष्टि की जानी चाहिए।"लक्ष्य =" _blank "> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
2. माउस thoracotomy चित्रा। अंतर्निहित वक्ष पिंजरे से चीरा और त्वचा की रिहाई के बाद (ए), एक 1.5 एक्स 1.5 सेमी शल्य खिड़की 4 वें और 5 में thoracotomy के निर्माण के बाद 4 वें और 5 वें पसलियों के बीच अंतरिक्ष पर केन्द्रित। (बी) बनाया जाता है वें पसली पसलियों के बीच अंतरिक्ष, retractors फेफड़ों कल्पना करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3. Pneumonectomy। (ए) को छोड़ दिया एल Ung बाईं वृक्कनाभि (सफेद तीर) प्रकट करने के लिए thoracotomy के माध्यम से घुमावदार संदंश के साथ समझा और उठाया है। (बी) संवहनी क्लिप संवहनी क्लिप applicator के की और घुमावदार applicator के टिप के भीतर टिप के साथ फ्लश बैठना चाहिए। (सी) के applicator घुमावदार टिप दूर हथेली से angled साथ दाहिने हाथ की हथेली के साथ बैठे applicator के के शरीर के साथ उंगली वें दाहिने अंगूठे और 4 के साथ आयोजित किया जाना चाहिए। (डी) बाएँ ऊपरी पालि की वक्र, संवहनी क्लिप के बाद बाएं वृक्कनाभि करने के लिए लागू किया जाता है। (ई) छोड़ दिया PNX निम्नलिखित देखा, (सफेद तीर) के बीच घेघा बस। (नाड़ी क्लिप सफेद बॉक्स द्वारा उल्लिखित) छोड़ दिया वृक्कनाभि के पीछे स्थित है का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें यह आंकड़ा।
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एयर निकासी के लिए Angiocatheter चित्रा 4. नियुक्ति। (ए) angiocatheter टिप त्वचा pierces। (बी) angiocatheter वक्ष गुहा में डायाफ्राम से ऊपर डाला जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
5. माउस शाम न्यूमोनेक्टॉमी चित्रा। नकली प्रक्रिया के दौरान (ए), प्लेसमेंट प्रतिकर्षक करने से पहले पसली बढ़त के उठाने के फेफड़ों की चोट के जोखिम को कम करता है। (ख) वे PNX के लिए कर रहे हैं के रूप में retractors जगह में छोड़ दिया जाना चाहिए। (सी) रिब पिंजरे के अवर बढ़त 24 जी angiocatheter रखकर पीढ़ी छाती के बंद होने और निम्न अवशिष्ट हवा महाप्राण के लिए इस्तेमाल किया जब उठाया जाना चाहिएत्वचा आईएनजी। (डी) रिब पिंजरे भी सिवनी प्लेसमेंट के लिए हटा लिया जाना चाहिए। (ई) बांधने से पहले thoracotomy साइट पर सिवनी की दो किस्में रखने से, फेफड़ों फंसाने के जोखिम को कम से कम है। कृपया यहां क्लिक करें का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यह आंकड़ा।
चित्रा 6 अपेक्षित वजन में कमी। समूह प्रति पांच चूहों का उपयोग करना, हम 24 घंटे के ऑपरेशन के बाद, PNX चूहों 1.5 जी (7.2%) के एक औसत खो देंगे, और नकली चूहों 1.1 जी (5.2%) के एक औसत खो देंगे कि प्रदर्शन किया। दोनों गुटों के पश्चात 3 दिन से उनके preoperative वजन आ।
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Discussion
हम तारीख को सूचना दी माउस PNX और माउस दिखावा PNX प्रक्रियाओं के सबसे विस्तृत वर्णन प्रदान की है। हम प्रक्रिया सीखने जांचकर्ताओं आमतौर पर मुठभेड़ कि आम नुकसान के कई के पाठक बारे में पता किया है, और हम इन कमियों के खिलाफ कम करने के लिए हमारी प्रयोगशाला द्वारा विकसित कई तकनीकों रेखांकित किया है। इस मॉडल का उपयोग अन्य प्रयोगशालाओं अन्य तकनीक संशोधनों विकसित या विभिन्न उपकरणों का उपयोग हो सकता है। तकनीक में अंतर का मूल्यांकन, व्यक्तिगत जांचकर्ताओं इन मतभेदों को काफी प्रयोग परिणामों को प्रभावित किया जाए या नहीं तय करने की आवश्यकता होगी।
प्रतिपूरक फेफड़ों के विकास के माउस PNX मॉडल फेफड़ों की मरम्मत और उत्थान के अन्य पशु मॉडल पर कई फायदे हैं। ट्रांसजेनिक चूहों उपलब्ध बनाने के वंश अनुरेखण की बड़ी संख्या है, अधिक अभिव्यक्ति जीन, और सबसे प्रयोगशालाओं 16 के लिए प्राप्त लक्षित जीन विलोपन प्रयोगों के सामान्य। दूसरा, mor हैवायुकोशीय फिर से विकास quantitating के लिए phometric तकनीकों 17 अच्छी तरह से वर्णित हैं। तीसरा, इस मॉडल को अपनाने की लागत उदार है। इन प्रक्रियाओं की आवश्यकता ही विशेष उपकरणों संवहनी क्लिप applicators और कुंद टिप कोहन-Vannas वसंत कैंची है। अन्य सभी उपकरण सामान्यतः एक माउस शल्य चिकित्सा कोर सुविधा के माध्यम से एक माउस शल्य चिकित्सा किट या उपलब्ध में उपलब्ध कराया जाएगा। चौथा, अनुभव के साथ, माउस PNX और दिखावा PNX प्रक्रियाओं अपेक्षाकृत जल्दी कई सर्जरी के लिए अनुमति दे रहे हैं उसी दिन पर प्रदर्शन किया जाएगा। अन्त में, अन्य पशु मॉडल, मामूली आवास की आवश्यकताओं की तुलना में माउस के छोटे आकार, और वे भी पैदा किया जा सकता है जिस आसानी से अन्य पशु मॉडलों की तुलना में बनाए रखने के लिए माउस मॉडल आसान बनाते हैं।
फेफड़ों के उत्थान के अन्य मॉडलों की तुलना में जब माउस PNX मॉडल के लिए कई नुकसान भी हैं। माउस प्रतिपूरक फेफड़ों के विकास खंड 18 पर काफी हद तक निर्भर है, प्रतिपूरक फेफड़ों बढ़नेउच्च स्तनधारियों में वें खिंचाव और बढ़ फेफड़े के रक्त के प्रवाह को 19 दोनों पर निर्भर है। मानव फेफड़ों के उत्थान इन उच्च स्तनधारियों की पुनर्योजी तंत्र की संभावना अधिक समान है, अन्वेषक मानव के लिए सीधे माउस में निष्कर्ष extrapolating सावधान रहना चाहिए। माउस श्वसन यांत्रिकी मानव श्वसन यांत्रिकी तुलना में अलग हैं। इंसानों में, अंत साँस छोड़ना कोई airflow के जो वहाँ में एक ठहराव के साथ है। मानव में अंत साँस छोड़ना पर, फेफड़ों भर्ती एक कम अनुपालन वक्ष पिंजरे के रेडियल कर्षण द्वारा बनाए रखा है। माउस श्वसन चक्र के कारण अधूरा छोड़ना करने के लिए हवा फँसाने की एक छोटी राशि में जिसके परिणामस्वरूप इस निःश्वास थामने का अभाव है। माउस एक बहुत अधिक अनुपालन वक्ष पिंजरे है, यह फेफड़ों भर्ती 20 रखता है जो इस हवा फँसाने है। माउस मॉडल के तीसरे नुकसान अपने शरीर रचना है। माउस केवल एक ही बाएं फेफड़े पालि के बाद से यह अन्य में है, के रूप में आंशिक बाईं PNX संभव नहीं हैप्रजातियों।
कई आम नुकसान सफलतापूर्वक माउस PNX और दिखावा प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करने के लिए कई महत्वपूर्ण junctures में बचा जाना चाहिए। इन महत्वपूर्ण junctures अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण, शल्य चिकित्सा क्षेत्र के सृजन, संवहनी क्लिप आवेदन, और नकली सर्जरी के दौरान बाएं फेफड़े में चोट से बचाव कर रहे हैं।
इन सर्जिकल प्रक्रियाओं के जीवित रहने के लिए असफल हो कि किसी भी चूहों के शव-परीक्षा भविष्य में शल्य चिकित्सा तकनीक में सुधार के लिए आवश्यक है। नीचे, हम कई आम कठिनाइयों का निवारण और सफलता का एक बड़ा डिग्री उपज हो सकती है कि वैकल्पिक तकनीक प्रदान करते हैं।
विफलता सफलतापूर्वक ट्रेकिआ cannulate के लिए: अन्य प्रयोगशालाओं प्रत्यक्ष दृश्य 21 के लिए की जरूरत obviates जो ओरो-सांस की नली इंटुबैषेण के लिए निलंबन और ट्रांस-सांस की नली रोशनी का उपयोग।
कठिनाई वृक्कनाभि Visualizing: एक बड़े, ठीक से रखा thoracotomy विंडो बनाने के लिए जरूरी है कि मैं हैबाएं वृक्कनाभि कल्पना करने के लिए n आदेश। प्रक्रिया दृश्य अपर्याप्त है या संवहनी क्लिप applicators के सम्मिलन के लिए अपर्याप्त जगह नहीं है के दौरान, तो thoracotomy lengthened किया जाना चाहिए और retractors repositioned। इस प्रक्रिया के दौरान रक्त का कोई पूलिंग होना चाहिए। अगर वहाँ है, अन्वेषक वह बाएं फेफड़े पर बहुत ज्यादा तनाव रखने और बाएं फेफड़े के धमनी फाड़ है या नहीं, यह निर्धारित करना चाहिए।
बाएं फेफड़े के हटाने के बाद रक्त स्राव: इस प्रक्रिया के दौरान छोटे से खून बह रहा है होना चाहिए। एक अनुचित तरीके से भरी हुई या लागू संवहनी क्लिप रक्तस्राव का सबसे आम कारण है, और उसके बाएं फेफड़े के धमनी से खून बह रहा है के साथ एक माउस euthanized किया जाना चाहिए। खून बह रहा है की इस प्रकार की होती है, तो संवहनी क्लिप और फर्म के आवेदन के समुचित लोड हो रहा है, आवेदन के दौरान भी दबाव प्रक्रिया फिर से प्रयास करने से पहले इस बात की पुष्टि की जानी चाहिए। इसी तरह, बाएं सीने में खून की खोज के साथ पश्चात मृत्यु हैअनुचित संवहनी क्लिप आवेदन की वजह से होने की संभावना है। हमारे संवहनी क्लिप तकनीक के लिए एक वैकल्पिक रेशम सीवन के साथ संयुक्ताक्षर है।
शाम सर्जरी के दौरान बाएं फेफड़े चोट: कई मायनों में, दिखावा प्रक्रिया PNX प्रक्रिया से शल्य चिकित्सा कौशल के एक उच्च डिग्री की आवश्यकता है। बाएं फेफड़े शल्य साइट नीचे 24 जी angiocatheter की प्रविष्टि के दौरान, या thoracotomy के बंद होने के दौरान, thoracotomy के दौरान घायल किया जा सकता है। प्रयोगात्मक जरूरत पर निर्भर करता है, नकली सर्जरी के दौर से गुजर चूहों PNX करने के लिए परिवर्तित किया जा सकता है। बाएं फेफड़े में चोट का एक अन्य संभावित कारण thoracotomy साइट बंद होने के दौरान herniated बाएं फेफड़े की क़ैद है। बाएं फेफड़े में चोट के साथ शाम चूहों euthanized या उनकी शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया PNX को बदल दिया जाना चाहिए या तो।
वसूली के बाद श्वसन संकट: संज्ञाहरण से वसूली के बाद श्वसन संकट के कारण दर्दनाक इंटुबैषेण, अपर्याप्त दर्द नियंत्रण, या unreco को उपजिह्वा की सूजन से आ सकता हैgnized फेफड़ों की चोट। सामान्य में, अतिरिक्त दर्द दवा के प्रशासन से राहत मिली संकट, जब तक कि जानवरों euthanized किया जाना चाहिए और निर्धारित कारण। एकाधिक इंटुबैषेण के प्रयास glottic या subglottic प्रेरणा के साथ परिणामी कठिनाई के साथ सूजन में परिणाम सकता है। उपजिह्वा hypopharynx से अलग होने के बाद शव-परीक्षा पर, एक पेटेंट glottic खोलने की कमी स्पष्ट हो जाएगा। अंतःश्वासनलीय केन्युलेशन करने के लिए वैकल्पिक तरीकों से ऊपर वर्णित हैं। अपर्याप्त दर्द नियंत्रण दर्द की दवा की अतिरिक्त खुराक के साथ संबोधित किया जा सकता है। जैसा कि ऊपर उल्लेख दिखावा शल्य प्रक्रिया सीखने जब, अनायास ही बाएं फेफड़े में चोट आम है, और अपरिचित हैं, तो श्वसन संकट और प्रयोगात्मक परिणामों में परिवर्तन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं।
अत्यधिक वजन घटाने और निर्जलीकरण: सर्जरी के बाद अत्यधिक वजन घटाने या निर्जलीकरण का अनुभव है कि चूहे एक ligated घेघा, अपर्याप्त दर्द नियंत्रण, या फ़ीड या पीने के लिए एक असमर्थता हो सकता है। घेघा जम्मू झूठउस्त बाईं वृक्कनाभि करने के पीछे है, और घेघा की बंधाव किसी भी निर्जलित माउस में शक किया जाना चाहिए। अपर्याप्त दर्द नियंत्रण piloerection, बढ़ आक्रामकता, या कम ambulation के साथ चूहों में शक किया जाना चाहिए। thoracotomy के पहले पश्चात दिन पर पिंजरे छत से निलंबित कर भोजन और पानी तक पहुँचने से चूहों को रोका जा सकता। खाने के लिए और संज्ञाहरण से वसूली के बाद नहीं पीता कि चूहे ही अधिक कमजोर और सूखे चूर्ण बन जाएगा। हम सर्जरी के बाद 24 घंटे के लिए पिंजरे के फर्श पर सिक्त भोजन रखने की सलाह देते हैं।
अंत में, प्रतिपूरक फेफड़ों के विकास के माउस न्यूमोनेक्टॉमी मॉडल फेफड़ों के उत्थान के अंतर्निहित तंत्र elucidating के लिए एक मूल्यवान मॉडल है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6 inch Vascular clip applicator | Teleflex Medical (WECK) | 137062 | |
| Horizon small titanium red clip | Teleflex Medical (WECK) | 1201 | |
| Narrow pattern 12 cm curved forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Curved serrated 10 cm Graefe forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Straight 9 cm Strabismus scissors (blunt tip) | Fine Science Tools | 14075-09 | |
| Straight 8.5 cm hardened fine scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Straight, blunt tip Cohan-Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-12 | |
| Skin glue | Gluture | 32046 | |
| 22 G Angiocatheter | |||
| 24 G Angiocatheter | |||
| 3 ml Luer lock syringe | |||
| 4 Short retractors | |||
| 2 Long retractors | |||
| 5-0 Prolene on curved cutting needle | Ethicon | 8698G | |
| 0.5 ml Syringe on 27 G needle | |||
| Normal saline | |||
| Buprenorphine | |||
| Press-n-Seal wrap | Glad Products Company | ||
| 12 x 12 inch Cork board stack | Office Depot | ||
| 70% Ethanol | |||
| Betadine | |||
| Mouse ventilator | Hugo Sachs Elektronnik | Minivent Type 845 | |
| Isoflurane vaporizer | OHMEDA | Excel 210 SE | |
| Artificial tear ointment | Puralube | NDC: 17033-211-38 |
References
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