一个简单的临界尺寸股骨缺损模型小鼠

Introduction

据估计，一半的美国人口经历了骨折的65 ¹岁。对于那些患者的治疗骨折手术，500000过程涉及使用骨移植^2，这个数字预计将上升与人口日趋老龄化³ 。虽然骨是少数器官具有完全愈合无疤痕的能力之一，有其中过程失败^3,4是实例。根据具体情况和治疗的质量，长骨骨折的2-30％失败，从而导致非工会^3,5。虽然仍存在的定义，假关节，临界尺寸或不愈合骨损伤有些争论，一般是指不愈合覆盖主体⁶的自然寿命的伤害。为实验目的，此持续时间缩短为所需的平均大小的骨损伤完全愈合的平均时间。非工会骨骼发生病变货号危。原因，但主要的因素包括产生了极其大的差距，感染，血管差，烟草使用，或抑制osteoregenerative能力因疾病或⁷岁极端的创伤。即使非工会的成功治疗，它可以超过60,000美元的过程成本，这取决于损伤的类型和使用的⁸途径 ​​。

在温和的情况下，自体骨移植是就业。这一战略包括从损伤部位供体部位和植入恢复骨。虽然这种方法是非常有效的，可用的供体来源的骨量是有限的，该过程涉及一个附加的外科手术，这导致持续性疼痛在许多患者^9,10。另外，自体骨移植物的功效取决于患者的健康。从合成材料或加工尸体骨制作的骨代用品大量可用^11-13，但他们公顷已经显著限制，包括差的宿主-细胞粘着性，减少的骨传导性，以及用于免疫排斥¹⁴的潜力。有因此，迫切需要用于骨骼再生的技术，是安全，有效和广泛使用。

我们以改善骨再生战略的能力主要取决于模仿严重骨创伤中的试验动物的能力，但对大的骨病变的产生和稳定化在技术上是有挑战性的。在大多数情况下，严重的长骨创伤是通过建立一个缺陷，即不会自然愈合实验模仿。虽然它可以与物种¹⁵而变化，这是通过完全除去一个骨片段，它是骨的横截面¹⁶的大于1.5倍的直径的实现。骨然后用金属植入物稳定，以保持骨折边缘的正确取向，并允许流动。由于它们的小尺寸和的脆弱其长骨，建立这样的病变的小鼠都超出了大多数的研究小组的功能。因此，长骨缺损模型仅限于老鼠和较大的动物。然而，小鼠得到显著研究的优点在于，它们可以被遗传修饰并饲养作为免疫妥协菌株不拒绝人类细胞和组织。

对于人体细胞为基础的应用，免疫功能低下小鼠与吸引力，因为他们在生理上良好的特点，易家的工作，成本效益，易于分析影像学和组织学。最重要的是，免疫​​妥协小鼠中不拒绝来自不同物种，包括人类细胞。它们的小尺寸还允许非常小的数量的细胞或实验支架在整形外科应用的卷的测试。几种鼠矫形模型已报道，得到不同程度的骨稳定^17,18。这些SYSTE这导致非常高的稳定性水平，如外固定器和锁定板毫秒主要由膜内骨化愈合虽然软骨内愈合已经报道^19。与此相反，那些允许一些微观和/或宏观的运动，如那些使用未固定的或部分固定髓针，一般治愈与软骨内骨化^20,21的一个优势。延迟愈合或长骨的不愈合缺陷是特别难以实现在小鼠中，由于稳定​​化所需要的额外的水平。然而，一些方法已被报道，包括髓销与髓内钉，锁定板和外固定器^22上 。这些系统一般工作良好，但鉴于其复杂的设计，他们可以在技术上具有挑战性的安装。例如，Garcia 等^。23设计优雅联锁销系统，用于在小鼠中使用，但该方法包括切口在两个分开的部位s和股骨的大量修改，以容纳插针。这些程序在解剖显微镜下进行的。

在此，我们描述一个简单的股骨骨髓销钉与中央领设计成防止关闭3毫米的骨缺损，也描绘缺陷的原边。而销没有被固定到骨头本身，销直径髓腔导致足够的干扰和扩孔的精确大小，以尽量减少扭转运动（ 图1）。通过仔细挑选的近交的年龄，性别和应变匹配小鼠，其结果是一个高度可再生肥厚非uniondefect ²²可以很容易地进行评估放射学。另外的感兴趣的区域可以显微计算机断层摄影术（μCT） 从头骨形成和组织形态学参数的测量之后被再现地限定。引脚用现成的工具原型在我们的实验室。

图1：实验原理节段性缺损模型的图解总结。一个9-10毫米的鼠股骨的中央3毫米段被手术切除（ 左 ）。 A 3毫米长，19轨距外科钢管越过9毫米长，22克的不锈钢管和固定用粘合剂在准确的中心（ 右 ）。所得销装配到股骨的其余的近端和远端部分的与19克衣领置换骨的3毫米段（ 下面，中心 ）的髓管。

Protocol

注：此协议旨在从杰克逊实验室获得的女性裸体（怒江/ J）小鼠（18-25克，6周）。由于小鼠品系略有不同的解剖结构和增长速度方面，我们建议销的制造是优化前给收件人的应变，性别和年龄植入活的科目。如果菌株精心匹配，引脚和骨髓腔之间的过盈配合的高度重复性。住房，饮食和一般的畜牧过程不属于本协议的范围，但所有的老鼠被安置按照指南的护理和使用实验动物（ ^第 8版）和体制政策的机构动物护理和设置使用委员会（IACUC）与比较医学系（DCM），在斯科特和白色医院。

1.制造针脚

图2：销组件。 （A）中的外科钢管在装配的各个阶段和5毫米厚的明胶海绵片4毫米直径缸截止的照片。（B）的抛光装配销（ 以上 ）后，将明胶海绵圆柱体被修整，定位在钢套环（ 中 ），然后高压灭菌，从而在无菌销涂覆有干燥明胶海绵。这提高了细胞附着在损伤部位，并保持愈合（ 下文 ）。（c）一种切除股骨装有骨髓销钉的方向。（D）的销组件在各种不同的厚度的实施例和长度表明这种方法的灵活性。 （E） - μCT重建的销稳定股骨缺损示延髓销与在近端和股骨远端的小梁骨的相互作用。

1. 切9毫米长度的22克的不锈钢皮下注射管，和19克油管使用安装在旋转工具的直径23.8毫米玻璃纤维增​​强的重型切割轮3毫米的长度。用小细尖钳子固定油管（ 图2A， 上图 ）。穿戴合适的保护眼睛，并小心处理旋转工具。
2. 将少量氰基丙烯酸酯类粘合剂（约10微升）到9毫米轴的中间。通过3毫米领过9毫米轴，直到在中心和扭曲均匀分布的领子和轴之间的粘合剂。测量用一对数字卡钳的尺寸，并与图1进行比较。允许至少15小时（ 图2A， 中心 ）来设置。
3. 用220金刚砂浸渍盘，去除毛刺和过度胶水。
4. 使用旋转工具，抛光用毡抛光盘的管脚。
5. 用去离子水冲洗和干燥，COMPREssed空气。
6. 通过放置一个19克的皮下注射针头钝了新发针和推动针对白领的轴测试的完整性。确保领子可以抵抗约25克重的。
7. 冲洗在无菌过滤的磷酸盐缓冲盐水（ 图2B， 上 ）的位。确保销的轴紧贴地装配到所述股骨髓腔与对切骨（ 图2C）的边缘的领平齐。原型各种配置的研究和收件人（ 图2D）的具体用途。确保销的端部穿透到骨干的骨小梁，以最大限度地固定和提高的干涉配合（ 图2E）。
   注：建议的拟合被植入在活体小鼠（ 例如 图2C）之前对骨标本进行测试。
8. 使用4毫米直径的冲床活检切割器切断的气缸从5毫米厚的片材的外科明胶海绵。使用解剖刀修剪气缸至3毫米的长度，并通过20G的注射针沿气缸以产生孔（ 图2A， 下图 ）的长度。
   注意：我们已经发现，明胶或胶原蛋白支架在缺陷部位的定位提高了单元的保持并诱导沿着骨的轴线纵向生长。
9. 通过明胶泡沫容器上的销，以及配合所述轴环（ 图2B， 中心 ）和高压釜上的干燥周期，在120℃下在15磅。明胶海绵将干，颜色变暗（ 图2B，下同）。

2.手术技术

注：以下步骤是写观察的指南实验动物的护理和使用（ ^第 8版）中设置的所有准则。请遵守所有附加政策当地IACUC设置，确保了IACUC批准的动物使用的协议（或同等学历）到位继续进行下面的章节之前。

图3：手术器械。 （一）手术包。微型钻头（1），切割轮（2），可吸收缝合线（3），外缝线（4），手术刀片（5），解剖刀手柄（6），无菌髓销包裹在箔（7），髓深度计制作形式皮下管（8），精细鼻钳（9），鼠牙钳（10），钝针扩孔（11），针驱动器（12），小止血钳（13），精剪（14），骨膜（15），修改克恩钳（16）（B）：须出示克恩式骨交手老鼠修改。

1. 选择一种外科手术室或清洁实验室具有可关闭的门，没有通流量。消毒一个合适的工作面传热Ë与临床级四元消毒清洁剂。
2. 而戴一次性无菌手套，长袍，成立了约60×90平方厘米^的无菌区与蒸压布窗帘的消毒工作表面。
   注意：最好是有一个助手除去外包装和现在的无菌材料研究者设立现场。
3. 放置消毒加热垫安装在被单温水重新循环，盖上无菌一次性窗帘。暖珠灭菌到运行温度（250-265℃，这需要30分钟）。
4. 在无菌区，安排手术工具包（ 图3A）提供方便地访问所有组件。此外，提供无菌棉纱布（2×2英寸^2），无菌棉签，无菌钢杯（500毫升）含有无菌盐水（0.9％重量/体积），和洗必泰/异丙醇外科消毒剂喷头。
5. 组装一小旁边的无菌区域与感应腔和鼻锥体组件按照兽医的指导和用户手册的动物麻醉单元。使用临床级的氧作为气体供给和异氟醚，美国药典。

图4：手术过程。 （AC）方法和股骨的曝光。（DE）高程和削减。（FK）铰孔和髓质运河的大小。

图5：手术过程。 （AB）安装针。（CD）封闭。（E）正确定位针24小时的手术后的典型形象。

6. 放置鼠标在麻醉系统和本身的感应腔室吨的输出以2升分钟^-1 _的 O ₂和异氟醚浓度为3％（体积/体积）。
   1. 检查鼠标在1分钟内昏迷;提高浓度到4％（V / V），如果必要的。用加热垫的下方位置上取出无菌区鼠标，地点和适用的鼻锥。转印按照机构政策流向锥形，并减少异氟烷〜2.5％，等待进一步的20秒，并测试足够外科平面。通常情况下，缺乏后肢反射时，轻轻挤压足以保证足够的麻醉。
   2. 在整个过程中，有一个助手显示器强大的正常呼吸和四肢和嘴部区域的粉红色彩，以确保氧化而无意识的适当水平。按照兽医的指导和体制政策在必要时调整麻醉。应用无菌人工泪液的润滑剂软膏（15％（体积/体积）的矿物油，83％（体积/体积）的whITE凡士林）的眼睛。
7. 将鼠标到一边用后肢朝上一个新的一次性悬垂性。如果有必要，去掉毛皮用电动剃刀或脱毛霜。擦拭的部位用无菌生理盐水并删除其他的悬垂性过剩的皮毛。放置一个新的有孔的悬垂比鼠标，以便覆盖所有部分，而是整个后肢（ 图4A），但仍维持图面和爪的监测着色和呼吸。
8. 定位在股骨的近端和远端并切开皮肤为5-10毫米沿着纵向轴线（ 图4B）。从筋膜皮肤层用＃15解剖刀分开，经由股二头肌和股外侧露出外侧入到股骨。定位到这两种肌肉的隔满足（这是一排白色的组织对肌肉的粉红色的颜色）。用手术刀，仔细沿直到肌间边界剖析股骨是可见的（ 图4B）。
9. 开发切口用钝骨膜电梯以便露出在整个骨干（ 图4C）。使用电梯进一步揭露股骨的中央三分之二同时小心保持内侧上（ 图4D）的后神经血管束。轻轻刮去软组织脱用手术刀骨，并干燥，用无菌棉签或等效物。
10. 定位股骨与和卡钳如果需要标记用无菌解剖刀或标记中心，然后向近侧和向远侧马克1.5毫米从中心。轻轻抓住利用一对先前在克恩风格塑造细鼻镊子以防止在该骨过度压力股骨。
    注意：在图3B中提供精确的尺寸进行修改。最好是测试钳子上之前的一处以安乐死试样使用，以确保骨压力下不会断裂需要d代表在切割过程中固定。
11. 用细钻头配有精美的金刚石粒度的涂层切割轮（8毫米直径×0.1毫米宽），使与电梯的首次降息，以保护组织下方（ 图4E）。提高切割股骨至45°，同时紧紧握着骨干的肢体，使第二切割，拆除3毫米段。
    注：面部防护，建议在这个阶段。
12. 由钳固定骨头，仔细铰两端的髓腔用钝器23政注射器针头。使用预先制成的深度计从22克油管的长度放置在19克油管制成（ 图3A， 我 TEM 8），评估该铰髓腔的深度，并确保它为3毫米（ 图4F-K）的。如果髓腔抵抗22克深度计，用钝22克注射器针头再次令。
13. 小心地将髓销插入近端远端则髓Çavities使股骨背出其原始长度，建立稳定3毫米间隙（ 图5A，B）。如果需要的话，可以使用少量手动压力来实现杆的良好干涉配合股骨的皮质骨。确保销正好符合双方的髓状空腔并切割骨头的边缘与轴环齐平。如果还有一定的差距，铰再次用22克钝针。
14. 重新定位的肌肉和外周组织在销和关闭与一个连续吸收5-0缝合（ 图5C）。关闭皮肤切口5-7平结尼龙5-0缝线和密封，粘接手术（ 图5D）。

3.术后程序

1. 关闭切开皮肤后，退出麻醉，但允许O ₂保持流动，直到鼠标开始移动;这花费时间不超过1分钟。如果5分钟后，鼠标仍然一动不动O ₂的管理，是指对兽医机构的干预政策。
2. 当鼠标开始移动，轻轻将其传送到最好含干，蒸压床上用品笼子里。
   1. 发布冰屋型窝在每个网箱和鼠标将撤退到它，从而减少运动。检查鼠标恢复后肢的流动性意识恢复后，5-10分钟。
   2. 执行日常术后监测按照机构政策。提供在笼的地板上糊化水化和食品的第5-7天及施用镇痛和术后监测按照制度上批准策略。
      注意：我们管理0.05-0.1毫克公斤^-1丁丙诺啡²⁴ 0.25ml的生理盐水皮下注射，每日两次，第3天，此后如果鼠标没有恢复正常的效用。
3. 复苏的第一个24小时后，理解过程的现场表演动物X射线成像ř麻醉可视化管脚布局（ 图4E）。如果脚脱臼，考虑立即翻修手术。
4. 在7天的手术后，取出在麻醉状态下，房屋缝线组按照机构牧政策。
5. 2-5周后，人道地安乐死动物按照美国兽医医学协会批准用于安乐死²⁵的方法。
   注：腹腔注射市售巴比妥组合安乐死鸡尾酒是有效的，人性化，但安乐死地方机构的政策应遵循。
6. 仔细解剖掉后肢暴露股骨近端和内侧的骨盆。轻轻地从肢体的侧面按关节向内而拆卸股骨头从髋臼 （髋插座）用手术刀。切剩下肌肉和皮肤用锋利的解剖刀或微型剪刀，释放整个肢体形成的骨盆。用锋利的一对咬骨钳或剪刀沉重的，切下后肢（胫骨/腓骨）以下的膝关节约5毫米。
   注：建议所有标本分析之前储存在一个相同的方式进行。
7. 去除皮肤，但留下的肌肉到位。固定的组织，在10％缓冲的福尔马林中补充了10mM的CaCl ₂固定液1周后贮存在磷酸盐缓冲盐水补充了10mM的CaCl ₂长达1个月前成像。在4℃下进行固定和存储。另外，扫描标本没有立即固定。

标本4.分析

注：骨愈合后可通过多种方法，超出本协议的范围进行评估。以下是我们已经成功地利用标本显微（μCT）成像采用的方法。所以建议下列参数ARê测试最初，那么对于该项目的具体需要优化。

1. 塑料密封膜，它垂直位置的仪器室一层薄薄的包装样品。确保股骨垂直于试料台在整个扫描过程中。设置扫描到下列参数;电压= 29千伏，电流= 661μA，功率= 19 W，图像像素大小（微米）= 21.00; 360度旋转= YES;帧平均=（5）;在旋转步骤（度）= 1.00，随机运动=。图像保存为JPEG文件在每次扫描一个目标文件夹（ 如图6A）。
   注：扫描应该是完整的57分钟。
2. 利用重建的软件以基于以下参数的轴向图像;平滑=（4）上，不对补偿=上环神器减少=（5）上，束硬化校正（40％），CS旋转（度）= 0.00。设置输出2,000-15,000菲尔德单位。图像保存为JPEG文件在每次扫描一个目标文件夹。
3. 使用轴向图像和分析软件，通过首先设定的近端和原有缺陷远侧边限定的感兴趣区域（ROI）的区域。通过选择只包括领子的部分实现这一目标。因为轴环比所述骨髓销钉较厚，这些部分容易形成（ 图6B， 左 ）。通过绘制其周围的隔离区（带有100微米余量）和区转移到每个部分中的ROI（ 图6B， 右 ）排除从计算的衣领。
   注：惯性，三维重建和计算极性的时刻，如新骨体积（ 图6C，D），可以容易地使用的软件实现。

Representative Results

小鼠通常恢复意识和后肢的流动性撤离麻醉后5-10分钟。在第5天，最好是单独地容纳小鼠和引入环境丰富，以防止过量使用的肢体。为此，冰屋型巢减少了对鸟巢的建设，鼓励休息。我们还观察到，提供食物和水凝胶上笼的地板上的降低销位移的概率。在5天期间，镇痛应根据需要按照体制批准的政策进行给药。减重高达原始手术前重量的约15％是可能在5天的手术后期间。手术后二十四小时，X射线患肢的建议，以评估销的放置。销应完全插入近端和远端髓管与对衣领的缺陷平齐的边缘（ 图2C，2E， 图5E和图6A）。在极少数情况下（<5％的病例），引脚可以成为脱臼在愈合和动物使用的协议，初期阶段应为翻修手术，如果发生这种情况。虽然在技术上具有挑战性量化对小鼠股骨扭转运动，标本手动触诊证实，扭转和纵向运动后第7天的边际结缔组织围绕销积累。经过5天的术后监测，小鼠可以返回到标准的公用外壳按制度上批准策略。

未经治疗干预，缺陷的边缘通常在21天延伸0.5毫米但在少数情况下，新的骨生长可高达1毫米（ 图6A）。这一时期作为再生停止导致非工会缺陷的炎症和合成代谢阶段后，骨骼的生长逮捕。经过14-21天愈合，体积Ø˚F 从头骨可以从通过μCT扫描产生的轴向图像来容易地确定。使用扫描，在协议中所述轴向重建和ROI筛选程序，新骨的体积产生随时间增加，但不总为1mm ³一般超过在不存在治疗性干预（ 图6C）的相比，6- 7毫米³健侧股骨的解剖学等同区域。而以往的生物力学测试在技术上是挑战性的，由于检体的大小和固定方法的性质，惯性（PMI）​​的极性的时刻，抵抗扭转基于截面积和密度的材料制成的能力的估计，一直示代表在长骨^26,27的强度的一个合适的估计。使用这种方法，可被选择用于分析的轴向横截面在从病灶边缘不同距离。 21天后， 从头骨PMI0.25毫米FROM病灶边缘范围从0.05-0.35之间⁴毫米相比，0.02-0.08毫米⁴在病变进一步证实非工会在未经处理的情况下（ 图6D）存在的中心。未受伤的股骨在解剖学上等效的位置中的PMI通常0.5-0.7毫米⁴使用此处所描述的条件的范围内。

图6：典型的结果。股骨的第7天，第14和21后的手术（A）中的X射线扫描表明的骨B组有限的向内生长：将ROI参数容积骨测量的示意图。代表性的轴向横截面的隔离区（EX）通过销套环包括一个100微米余量排除在金属-组织界面（ 左 ）的工件的测量。全骨扫描（R飞行，顶部）展示由骨与原始骨组织排斥（EX）的套环的边缘之间的部分限定的纵向的ROI。原发病灶边缘位于使用所述销的直径和套环（ 右，下 ）之间的差的轴向段中。（℃）在第7天，第14和21交手术，无治疗性干预的典型体积测量（指具有标准偏差，n = 3时）。（D）中的PMI测量在轴向截面0.25毫米从近端和远端病灶边缘和中点（意味着与标准偏差，n = 3时）。（E）的 Masson三色染色的石蜡包埋部分（ 左 ）切断在纵向显示出骨生长，包括软骨（CA）和松质骨（B）（比例尺= 0.5毫米）。场的位置被标示在X射线扫描（ 右 ）。（F）的非decalcifiED，1日龄缺陷用苏木和伊红（比例尺= 1.0 MM）甲基丙烯酸甲酯的嵌入式冠状切面。 请点击此处查看该图的放大版本。

该组织脱钙通常使用标准条件需要10-14天，并且易于通过X射线扫描监测。最好是保持对试样某些肌肉组织脱钙期间在处理过程中，以提高稳定性。脱钙后，引脚可以小心用锋利的解剖刀允许石蜡包埋和组织学除去。的纵向部分马松染色允许软骨内骨增生可视化的软骨（CA）前缘随后松质骨（CB）（ 图6E）。而在清扫难免会发生一定的损伤，骨组织结构和结缔组织仍不清楚该引脚小心取出。可替代地，甲基丙烯酸甲酯和嵌入的非脱钙切片切片可以与代替销（ 图6F）进行。

Discussion

在此，我们描述一个简单的方法来产生使用标准实验室和兽医器械鼠股骨的临界尺寸的针稳定缺陷。而引脚和手术本身的装配要求的做法，它是指一个训练有素的生物医学研究的科学家或兽医的能力很好。

销被定位成髓管，无需额外的固定，使该过程在技术上更重要的是使用外固定器或互锁螺钉更复杂的方法是可行的。而在愈合的早期阶段，可能会出现一些扭转运动，这是通过仔细注意销直径和髓管的足够扩孔最小化，以达到在植入物和骨内膜之间的牢固的压配合。通过仔细挑选的近交品系和年龄和性别匹配的，拟合成为在几天内重复地稳健。然而，无线个的3D印刷技术的出现，因此预计扭转运动可以通过掺入粗糙表面和/或倒钩的连接位点销的更复杂的版本进一步降低。引脚制作的易用性和各种各样皮下油管尺寸的可用性还允许该技术的优化几乎所有的成年近交系小鼠，无论自然或实验骨表型。

独特的针套环设计有两个目的：（ⅰ）防止通过纵向滑动骨末端的缺陷和损坏的异常变窄，和（ii），以提供定义缺陷的原边的地标。这样，体积和PMI的测量可以很容易地用一个试样μCT扫描器进行诸如SKYSCAN 1174.实际上，该方法允许定量的水平是不容易与标准的非临界尺寸的断裂技术获得的，往往表现出变量或大便RLY定义受伤。而μCT单元优选为愈合，评价由正交的X射线图像或2D图像分析技术的客观评估的定量可代表可行的替代品。由于它们的小尺寸和相对较低的矿物质含量，鼠四肢可容易地用于组织学制备和安装为整个标本为常规形态计量学。这驳回经常面临研究人员进行大型动物骨折的组织形态学分析取样的问题。

在这里所描述的实验中，愈合时间相对较短，在3周后，其对应于骨愈合的快速，合成代谢相。此后，骨重塑是一个非常缓慢的过程^28。一般来说，如果桥接4周后没有观察到，愈合是不太可能发生，并在协议中，我们观察4周这一系统后非常少的额外的骨生长。此外，3毫米的间隙满足密钥等人的标准升^。16，用于临界尺寸的缺陷和Garcia 等人证明了窄至1.8mm的间隙不能充分10周后愈合，这可能会推迟到15周，剥离软骨膜^23。

而对于骨科研究他们的骨头的大小和脆性本严重的技术难题，使用小鼠是在许多方面是有利的。例如，存在多种允许人体细胞和蛋白质的检测，而不用担心免疫排斥反应的免疫妥协的株，和它们的小尺寸减少了需要的有价值的实验材料，细胞或化合物过量。这是由我们的最近的研究表明成人干细胞和它们的胞外蛋白的功效osteoregeneration ²⁹举例说明。小鼠比较短的寿命也存在机会为研究衰老³⁰和各种近交系的PERMIT全球基因型的研究愈合^31。也有一些疾病模型中，很容易在小鼠中建立，如糖 ​​尿病和骨质疏松症^32,33。显著值得注意的是，可以使用这种技术来促进我们的极端创伤的条件下再生骨生理学的了解许多转基因小鼠的可用性。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pin assembly
Dremel rotary tool	Dremel	8220	or equivalent
Heavy duty cut off wheel	Dremel	420
Surgical tubing 19 G	Small Parts (Amazon)	B000FMZ8LY	OD 1.07 mm, ID 0.889 mm
Surgical tubing 21 G	Small Parts (Amazon)	B000FMZ8YQ	OD 0.82 mm, ID 0.635 mm
Surgical tubing 22 G	Small Parts (Amazon)	B000FMYLZS	OD 0.719 mm, ID 0.502 mm
Surgical tubing 23 G	Small Parts (Amazon)	B000FN0SY0	OD 0.643 mm, ID 0.444 mm
Cyanoacrylate adhesive	Loctite	1365882
Emery disc	Dremel	413
Rubber polishing point	Dremel	462
Felt polishing disc	Dremel	414
Gelatin sponge	Surgifoam/Ethicon	1974
Punch biopsy cutter	Miltex	33-34
Surgery/post-operative
Warm pad and circulator pump	Stryker/Thermocare	TP700, TP700C, TPP722
Coverage quaternary spray	Steris	1429-77
Bead sterilizer	Germinator/CellPoint Scentific	Germinator 500
Anesthesia system	VetEquip Inc	901806 or 901807/901809
Isofluorane anesthetic	VETone/MWI	501017, 502017
Surgical disinfectant	Chloraprep/CareFusion	260449
Surgical tools	Fine Science Tools	various	recommend German made
Face protection	Splash Shield	4505
Rechargable high speed drill	Fine Science Tools	18000-17
Diamond cutting wheel	Strauss Diaiond	361.514.080HP
Absorbable sutures	Covidien	UM-213
Outer sutures	Ethicon	668G	or equivalent
Vetbond	3M	1469SB	or equivalent
Hydration gel	Clear H2O	70-01-1082
Diet gel	Clear H2O	72-01-1062
Buprenorphine	Reckitt and Benckser	12496-0757-01	controlled substance
Mouse igloos	Bio Serv	K3328, 3570,3327
Euthanasia cocktail	Euthasol/Virbac	710101	controlled substance
Analysis
Live animal imager	Orthoscan	FD Pulse	or equivalent
Micro-CT unit and software	Bruker	Skyscan1174	or equivalent
Sealing film/Parafilm M	VWR or Fisher	100501-338, S37441
*Generic sources are suitable for all other items such as gause, drapes, protective clothing, animal care equipment.