Protocol
Forud for ethvert dyr procedure, skal den institutionelle dyr pleje og brug udvalg (IACUC) godkende protokollen. Denne protokol blev godkendt af Michigan State University IACUC.
1. Pre-lab Fremstilling af FITC-inulin Solution
- Varm 20 ml saltvand til 70 ° C og langsomt røre i 100 mg FITC-inulin (5 mg / ml FITC-inulin), indtil alt inulin er opløst.
- Cool opløsning til stuetemperatur og tilsættes 800 mg bovint serumalbumin (40 mg / ml BSA, lyofiliseret pulver, i det væsentlige globulin fri, lavt endotoksin, ≥98% renhed ved agarosegelelektroforese).
- Foretage inulin-BSA-opløsning med filtrerpapir (grad 1). Placer den filtrerede opløsning i en 20 ml sprøjte med en sprøjte-tip-filter (0,2 um) og tildækkes med folie for at beskytte mod lys.
2. Anæstesi og kirurgi
- Placer rotte i en induktion kammer fyldt med 5% isofluran at inducere anæstesi. Record body vægt (250-350 g) og placere rotten på en opvarmet kirurgisk platform designet til at opretholde 37 ° C kropstemperatur hele eksperimentet. Forsigtigt fastgøre rotte til platformen med laboratoriet tape over poterne. Vedligehold anæstesi med 1-2% isofluran med medicinsk kvalitet 100% O 2 ved luftmængde på 0,8-1,0 l / min.
- Indsæt en tilspidset kateter (intravaskulær tip OD, 2.7F) i femoralarterien for blodtryk og pulsmåling og blodprøvetagning.
- Indsætte et kateter (PE-50) i den femorale vene for inulin infusion. Fastgør kateteret til omgivende væv med 5-O flettet silke kirurgisk sutur 6.
- Fastgør det arterielle kateter til en strain gauge tryktransducer. Optag blodtryk og puls ved hjælp dataopsamlingssoftware og visning på en computerskærm i realtid. Denne teknik demonstreres i detaljer på video 6.
- Udsætte blæren via et suprapubisk incision. Skær en lillehul i spidsen af blæren og indsætte en kanyle (PE-190) med en varme tragtformet spids inde i blæren for urinopsamling. Fastgør kanylen til blæren med en pung-string sutur.
3. Urin og Blodprøvetagning
- Placer sprøjten af FITC-inulin i en sprøjtepumpe med strømningshastighed sæt med 1 ml / time pr 100 g legemsvægt (3 ml / time i en rotte vejede 300 g). Sæt sprøjten til den femorale vene kateter. Start inulinet infusion og tillade en 1-2 timers ækvilibreringsperiode. Hold sprøjten dækket med folie for at beskytte mod lys.
- Bestemme, om urin strømningshastighed er stabil og tilstrækkelig til prøveanalyse (20 pl / min) ved at indsamle en urinprøve på en i forvejen vejet hætteglas samling i et tidsrum på 10 min. Bestemme urinvolumen gravimetrisk med en digital skala. En passende urinvolumen for en 10 min samling periode er 0,2 ml. Fortsætte med at indsamle urinprøver indtil to på hinanden følgende samlinger indikerer en urin flow på 20 ul / mi eller derover.
- Pre-Drug Samples
- Indsamle en urinprøve under en 20 min periode. Indsaml en blodprøve (0,5 ml) fra det arterielle kateter ved midtpunktet af urinopsamling periode. Vær omhyggelig med at helt klart arteriekateter saltvand før indsamling af en blodprøve i en samling hætteglas indeholdende 1 U heparin. Brug indsamling hætteglas med volumen markeringer for at lette indsamlingen af 0,5 ml arterielt blod.
- Skylle det arterielle kateter med heparin-saltopløsning (20 U / ml) for at fjerne kateteret af blod (cirka. 0,1 ml). Længden af det arterielle kateter skal være så kort som muligt for at begrænse mængden af heparin-saltopløsning kræves for at tømme.
Bemærk: Udvandet blodprøver producerer unøjagtige beregninger af GFR og fraktioneret udskillelse af Na og K. - Vent 10 min, og gentag indsamlingen af en anden Pre-drug urin og blodprøve.
- Efter samling af to Pre-drug prøver, administrere et diuretikum drug, furosemid (10 mg / kg) via det arterielle kateter. Skylle det arterielle kateter med hepariniseret saltvand for at fjerne kateteret af lægemiddel. Sørge for at forhindre injektion af luft gennem det arterielle kateter. Registrere tidspunktet for furosemid injektion.
- Post-drug Samples: Ved hver af de 3 tidspunkter nedenfor, indsamler en urinprøve under en 10 min opsamlingsperiode, og en blodprøve (0,5 ml) ved midtpunktet af urinopsamling periode.
- For Post-Drug Prøve 1 - indsamle fem min efter furosemid.
- For Post-Drug Prøve 2 - indsamle ti min efter furosemid.
- For Post-Drug Prøve 3 - indsamle femten min efter furosemid.
- Når alle prøver er blevet indsamlet, aflive rotten i overensstemmelse med de institutionelle procedurer ved torakotomi og fjernelse af hjertet. Fjern begge nyrer. Decapsulate (fjern det omgivende membran) og duppes nyrerne til at fjerne overskydende blod. Nyrerne vejes.
- Mål alle urin prøvevolumener gravimetrisk med en digital skala, og optage vægte.
- Centrifuge fuldblodsprøver med en bordplade centrifuge (1.800 xg) til at adskille plasma. Overførsel plasmaprøver til små mærkede hætteglas.
- Analyser Na- og K-koncentrationer i urin og plasma prøver med en natrium / kalium-analysator.
- Måling af FITC-inulin i plasma og urin
- Fortynd pre-drug urin (fra 1: 200 til 1: 400), og post-drug urin (1:10) med HEPES-buffer (500 mM, pH 7,4).
- Tilsæt 40 pi standard eller prøve og 60 pi HEPES buffer i en plade med 96 brønde (en prøve pr brønd) og tillade at blande i 10 min, mens dækket med aluminiumsfolie.
- Generere en standardkurve for FITC-inulin til koncentrationer på 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 ug / ml (figur 1). Bestemme FITC-inulin fluorescens i prøver og standarder ved anvendelse af en mikropladelæser med excitation og emissionsbølgelængder på 485 og 538 nm.
- Monter de fluorescerende værdier for standarderne til en 4-parameter logistisk funktion regressionsanalyse. De regression funktionen parametre anvendes til at beregne FITC-inulin koncentrationen i plasma og urinprøver (tabel 1).
5. Post-lab Analyse af resultater: Beregninger
- Beregn Urin Flow Rate (UV; ml / min): [mængde urin indsamlet (ml)] ÷ [tidspunktet for indsamlingen (min)]
- Beregn glomerulære filtrationshastighed (GFR; ml / min): [Urin inulin koncentration (pg / ml) x UV (ml / min)] ÷ [Plasma inulin konc. (Ug / ml)]
- Beregn Filtreret Natrium Load (pmol / min): Plasmakoncentrationen natrium (pmol / ml) x GFR (ml / min)
- Beregn Natrium Udskillelse Rate (U Na V pmol / min): Urin natriumkoncentrationen (pmol / ml) x UV (ml / min)
- Beregn Fractional udskillelsen af natrium (FE Na;%): [U Na V (pmol / min)] ÷ [Filtreret Natrium Load (pmol / min)] x 100
- Beregn Filtreret Kalium Load (pmol / min): Plasmakoncentrationen kalium (pmol / ml) x GFR (ml / min)
- Beregn Kalium Udskillelse Rate (U K V; pmol / min): koncentration Urin kalium (pmol / ml) x UV (ml / min)
- Beregn Fractional Udskillelse af Kalium (FE K,%): [U K V (mmol / min)] ÷ [Filtreret Kalium Load (mmol / min)] x 100
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den diuretiske anvendes i laboratoriet demonstrationen var furosemid som meget hurtigt hæmmer reabsorption af Na og K filtreret af nyrerne resulterer i øget Na, K og vand udskillelse i løbet af minutter lægemiddelindgivelse. Med sit primære mekanisme, bør furosemid have minimal effekt på GFR og den filtrerede belastning af Na og K, men vil øge urin flow, og fraktioneret udskillelse af Na og K.
De repræsentative resultater i tabel 3 viser, at i en bedøvet rotte, gennemsnittet af de værdier, præ-lægemiddel for GFR var 3,2 ml / min, Na udskillelse var 0,58 pmol / min (0,1% af den filtrerede belastning), og K var udskillelsen 4,4 pmol / min (27% af det filtrerede belastning). Fem minutter efter furosemid (post-drug 1), GFR og det filtrerede belastning af Na og K var upåvirkede. Men den fraktionerede udskillelse af Na steg til 11,5%, og den fraktionerede udskillelse af K steg til 63% af de respektive filtrerede belastninger. Målingerne af MAP og HR viser, at furosemid havde minimale virkninger på MAP og HR (tabel 2).
Indeksene af nyrefunktionen vurderes i laboratoriet demonstrationen var GFR, defineres som den hastighed, hvormed plasma filtreres af nyren; den filtrerede Na og K, defineres som den hastighed, hvormed Na og K er filtreret af nyrerne; Na og K Udskillelse Rate, defineres som den hastighed, hvormed Na og K udskilles af nyrerne; og den fraktionerede Udskillelse af Na og K, defineret som procentdelen af filtrerede Na og K, der udskilles af nyrerne
Figur 1:. Inulin Standard Curve FITC fluorescens værdier er vist for standarder, der indeholder 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200 og 400 pg / ml inulin. En 4-parameter logistisk funktion regressionsanalyse genererer best-fit kurve. De regression funktionsparametre fra denne kurve blev brugt til at beregne FITC-inulin koncentrationen i plasma og urinprøver.
| FITC-Inulin fluorescens | Koncentration | Resultat | ||||
| Standard | replikere 1 | replikere 2 | Mean | ug / ml | Fortynding | ug / ml |
| Blank | 63,9 | 64,8 | 64,4 | 0,4 | 1 | 0,4 |
| 6,25 | 253,2 | 264,1 | 258,7 | 5.9 | 1 | 5.9 |
| 12.5 | 474,0 </ Td> | 491,3 | 482,7 | 12.5 | 1 | 12.5 |
| 25 | 854,8 | 881,3 | 868,1 | 24.4 | 1 | 24.4 |
| 50 | 1.617,1 | 1.618,0 | 1.617,6 | 50.3 | 1 | 50.3 |
| 100 | 2.813,1 | 2.846,1 | 2.829,6 | 101,3 | 1 | 101,3 |
| 200 | 4.367,3 | 4.588,7 | 4.478,0 | 198,2 | 1 | 198,2 |
| 400 | 6.258,0 | 6.650,0 | 6.454,0 | 401,6 | 1 | 401,6 |
| Urinprøve | ||||||
| Pre-drug 1 | 2.443,9 | 2.062,3 | 2.253,1 | 88,5 | 200 | 17700 |
| Pre-drug 2 | 2.266,5 | 1.707,0 | 1.986,8 | 76.3 | 200 | 15250 |
| Post-drug 1 | ht "> 1208,91.391,2 | 1.300,1 | 44,7 | 10 | 447 | |
| Post-drug 2 | 2.753,4 | 2.120,5 | 2.437,0 | 97.0 | 10 | 970 |
| Post-drug 3 | 2.888,3 | 3.178,0 | 3.033,2 | 124,4 | 10 | 1244 |
Tabel 1:. Sample Resultater af Inulin Assay FITC-Inulin fluorescensværdier er vist for reagensblindprøven, 7 standarder, og 5 urinprøver. Standarder og prøver blev analyseret in duplo og fortyndet efter behov. Den gennemsnitlige fluorescens for hver prøve blev anvendt til at beregne koncentrationen af inulin. Inulinet koncentrationer i disse urinprøver er medtaget i tabellen over målinger (tabel 2).
Tabel 2: Målinger konstateret i de nyrefunktion Lab Demonstration Variablerne registreret under fem tidsperioder (to Pre-drug og tre Post-drug) af nyrefunktionen lab demonstration er højre og venstre nyre vægt, betyder arterielt tryk (MAP),. hjertefrekvens (HR), prøve tid, urinvolumen, plasma og urin natrium (Na), kalium (K), og inulin koncentrationer. Urinen inulin koncentrationer blev bestemt fra inulin assayet er vist i tabel 1.
25table3.jpg "/>
Tabel 3:. Nyrefunktionsparametre Beregnet fra Indspillede Målinger Brug formlerne vist i protokollen afsnit 5, de optagne variable (tabel 2) bruges til at beregne urin flow, glomerulære filtrationshastighed (GFR), GFR / g nyre vægt, udskillelse , filtreret belastning, og fraktioneret udskillelsen af natrium (Na) og kalium (K) under to Pre-drug og tre Post-drug perioder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En passende markør for GFR måling skal opfylde fire kriterier: frit filtreres ved glomerulus, være ubundet til plasmaproteiner, og hverken absorberes eller udskilles i nephron. Inulin er en fructose polymer, som opfylder disse kriterier. Som følge heraf er den renale clearance af inulin betragtes den gyldne standard for måling GFR 7. Den viste teknik repræsenterer den traditionelle tilgang til bestemmelse af renal clearance af inulin hjælp timede urin samlinger i løbet af en konstant infusion af inulin 8,9. Traditionelle inulin målingerne er foretaget ved hjælp af anthron metode til at producere en kvantitativ kolorimetrisk bestemmelse af inulin målt ved spektrofotometer 10,11. Men i et forsøg på at lette målingen af inulin i mindre mængder urin og plasma, inulin er blevet mærket med radioaktivt 12-14, og fluorescerende mærker 15-17. Laboratoriet demonstration præsenteres i denne video used FITC-mærket inulin til måling af nyrefunktionen på grund af den manglende risiko for bestråling menneskelige og letheden ved måling FITC fluorescens 15.
Dette laboratorium demonstration er at give en begrebsmæssig forståelse af hvordan man måler nyrefunktionen til studerende med minimal laboratorie færdigheder. Derfor er fremstillingen af FITC-inulin opløsning, og kirurgisk forberedelse af dyrene pre-lab udføres af erfarne teknikere forud for starten af demonstrationen. De studerende ankommer til demonstration i slutningen af 1-2 timers inulin ligevægt periode. På dette tidspunkt, er de studerende præsenteret for en Pre-lab overblik og informeret om de procedurer, der er blevet foretaget på dyrene. To studerende er tildelt til et dyr eksperiment, og instrueret om, hvordan at indsamle blod- og urinprøver før og efter administration af vanddrivende medicin. Analysen af blod- og urinprøver udføres af erfaringer omnced teknikere og resultater leveres til de studerende for beregninger af nyrefunktionen. Resultaterne præsenteres i en Post-lab diskussion, som kan planlægges efter demonstrationen.
Der er flere kritiske trin i protokollen at forsikre gyldige svar. For det første skal FITC inulin være fuldstændig opløst, og filtreres før dyr administration. Ideelt set bør FITC inulin dialyseres i vand i 48 timer ved stuetemperatur for at fjerne tilbageværende ubundet FITC. For det andet skal plasmaprøver være fri for saltvand. Studerende instrueret om at opsamle en blodprøve, når alle af saltvand i det arterielle kateter er presset ud, og kun blod strømmer ud af kateteret. Blodprøver, der er fortyndet med saltvand vil give unøjagtige værdier for plasma inulin, natrium og kalium. For det tredje skal urin flow være stabil og tilstrækkelig til at producere nok prøve til analyse. En konstant urin strømningshastighed ved baseline er kritisk, fordi det er en indikation afen stabil eksperimentel præparat. Hvis urin flow er for lav, kan infusionshastigheden af inulin øges før prøve samlinger. Infusion af inulin, skal dog være konstant under forløbet af eksperimentet, dvs. inulin Infusionshastigheden bør ikke justeres under eksperimentet. Endelig måling af inulin fluorescens i plasma og urinprøver ved mikropladelæser er kritisk for en vellykket eksperiment. Da specifikationer mikropladelæseren vil afgøre, om prøverne kræver fortyndinger, anbefales det, at en testkørsel af inulin analysen udføres før laboratoriet demonstration i et forsøg på at optimere specifikationerne for mikropladeaflæser og sikre, at prøven fluorescens værdier inden for mid-range af standardkurven.
Mens vurderingen af nyrefunktion baseret på renal clearance af inulin betragtes som den gyldne standard, denne teknik har sine begrænsninger, fordi dyrene skal bedøves, oginstrumenteret med vaskulære og blære katetre. Anesthethetic agenter har vist sig at påvirke renal hæmodynamik og GFR 18,19; dog isofluran og inactin anvendes typisk i nyrefunktionen eksperimenter på grund af deres minimale virkninger på nyrerne 19,20. Inulin clearance teknik kræver også en konstant infusion af inulin og multiple blod- og plasmaprøver, som kan være umulige i mindre dyr såsom mus. Modifikationer af denne teknik er blevet udviklet for at muliggøre måling af plasma clearance fra en enkelt injektion af inulin i bevidste dyr 21. Disse ændringer kræver også mindre mængder af blodprøver til analyse, og giver en alternativ metode til at vurdere nyrefunktionen hos mus.
Målingen af nyrefunktionen er gældende for studier af fysiologi, patologi, toksikologi, farmakologi og sygdomstilstande. Studerende, der deltager i nyrefunktionen demonstrationen vil lære than guldstandarden teknik renal clearance af inulin til at vurdere nyrefunktionen. Ved at mestre denne teknik, vil de studerende forstå principperne i nyrefunktionen og give dem mulighed for at anvende teknikken til at deres egen forskning og afgøre, om ændringer af teknik er passende for deres studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser. Udtalelserne eller påstande, der er indeholdt heri, er de private synspunkter af forfatteren og skal ikke opfattes som tjenestemand eller som afspejler de synspunkter Institut for hæren eller det amerikanske forsvarsministerium.
Acknowledgments
Finansieringen kilde til laboratoriet demonstrationen var NIGMS tilskud: GM077119. Vi takker Dr. Joseph R. Haywood og Dr. Peter Cobbett for deres støtte til Short Couse i Integrativ og organsystemer Farmakologi. Vi takker også Ms Hannah Garver for hendes teknisk support af laboratoriets demonstration.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-0 Braided Silk Surgical Suture | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Assay Plate, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Conical Sample Tubes | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Cotton Tipped Applicators | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Data Acquisition Software | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Digital Scale | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulin | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Gauze Sponges | Covidien | 2146 | |
| Heated Surgical Bed | EZ-Anesthesia | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Isoflurane Vaporizer | EZ-Anesthesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecting Forceps | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Microplate Reader - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (for bladder catheter) | BD Medical | 427435 | |
| Pressure Transducer | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Rat Femoral Tapered Artery Catheter | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Strabismus Scissors | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Student Surgical Scissors | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Surgical Gloves | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Syringe pump | Razel Scientific | R99-E | |
| Tissue Forceps | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tissue Scissors | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Braided Silk Surgical Suture Surgical Specialties Corp SP1033 Assay Plate, 96-Well Costar 3922 Bovine Serum Albumin Sigma Chemical Co A2934-25G Centrifuge Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Conical Sample Tubes Dot Scientific Inc. #711-FTG Cotton Tipped Applicators Solon Manufacturing Co 56200 Data Acquisition Software ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Scale Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gauze Sponges Covidien 2146 Heated Surgical Bed EZ-Anesthesia EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Isoflurane Vaporizer EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Microplate Reader - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodium/Potassium Analyzer NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (for bladder catheter) BD Medical 427435 Pressure Transducer ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Rat Femoral Tapered Artery Catheter Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Strabismus Scissors Fine Science Tools 14075-11 Student Surgical Scissors Fine Science Tools 91402-12 Surgical Gloves Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Syringe pump Razel Scientific R99-E Tissue Forceps Fine Science Tools 91121-12 Tissue Scissors George Tiemann Co 105-420 |
|||
References
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).
- Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. Kidney. Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).
- Shannon, J. A., Smith, H. W. The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man. Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Sterner, G., et al. Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).
- Toto, R. D. Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance. Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).
- Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats. Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).
- Davidson, W. D., Sackner, M. A. Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies. Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).
- Symes, A. L., Gault, M. H. Assay of inulin in tissues using anthrone. Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).
- Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate. Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).
- Denton, K. M., Anderson, W. P. Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli. EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).
- Jobin, J., Bonjour, J. -P. Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps. Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).
- Lorenz, J. N., Gruenstein, E. A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin. Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).
- Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
- Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice. Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).
- Rosen, S. M. Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics. British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).
- Cousins, M. J. Anesthesia and the kidney. Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).
- Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat. Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).
- Rieg, T. A. A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice. Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).
