Abstract
وهناك حاجة إلى التكامل معقدة من الإشارات الجزيئية والكهربائية لتحويل الرحم هادئة في جهاز مقلص في نهاية الحمل. وعلى الرغم من اكتشاف المنظمين الرئيسية الرحم انقباض، لا تزال غير مفهومة تماما هذه العملية. وتوفر الفئران المعدلة وراثيا نموذج مثالي للدراسة الولادة. سابقا، كان الطريقة الوحيدة لدراسة الرحم انقباض في الماوس خارج الحي تسجيلات التوتر متساوي القياس، والتي هي دون المستوى الأمثل لعدة أسباب. يجب إزالة الرحم من بيئتها الفسيولوجية، ودورة زمنية محدودة من التحقيق هو ممكن، ويجب التضحية الفئران. وقد سمحت التطورات الأخيرة في القياس الإشعاعي للالطولية، والقياسات في الوقت الحقيقي من الضغط داخل الرحم في الجسم الحي في الفئران. هنا، وغرس لمقياس البعد داخل الرحم لقياس تغيرات الضغط في الرحم الماوس من منتصف الحمل حتى يتم وصفها التسليم. من خلال مقارنة الاختلافات في الصحافةures بين نوع البرية والفئران المعدلة وراثيا، وتأثير الفسيولوجية من الجين من الفائدة يمكن توضيح. هذه التقنية يجب الإسراع في تطوير علاجات تستخدم لعلاج اضطرابات ميوميتريال خلال فترة الحمل، بما في ذلك المخاض قبل الأوان.
Introduction
الولادة المبكرة هي السبب الرئيسي للمراضة والوفيات في البلدان المتقدمة ما حول الولادة، وهي مسؤولة عن 50٪ من الاعتلال فترة ما حول الولادة و 75٪ من وفيات ما حول الولادة 1،2. الولادة المبكرة هو متعدد الأوجه ويمكن أن يكون مجهول السبب. على الرغم من أن الكثير من البحث برز على المسارات الجزيئية والكهربائية تحويل عضل الرحم من الأنسجة هادئة إلى مقلص واحد، والفيزيولوجيا المرضية الدقيق الولادة المبكرة لا يزال بعيد المنال. كانت جميعها ترتبط الغدد الصماء، والتهابات، وتنظيم الجينات إلى الخدج العمل 3،4. ومع ذلك، مخاوف أخلاقية تحد من القدرة على إجراء البحوث حول آليات الولادة المبكرة لدى البشر.
ونظرا لهذه القيود، تحولت العديد من الباحثين على الفئران كنظام نموذج التي لدراسة علم وظائف الأعضاء من الولادة. الفئران لها gestations قصيرة استمرت ما يقرب من ثلاثة أسابيع، ويمكن بسهولة التلاعب بها وراثيا. بالإضافة إلى ذلك، عدة نماذج الماوس الوراثية لهاوضعت لتحديد مسارات الإشارات التي هي ضرورية لعمل 5. على الرغم من الاختلافات الرئيسية بين الماوس والولادة الإنسان والفئران والانسان يشتركان في العديد من نفس الآليات التي تعتبر أساسية للعمل، بما في ذلك التهاب داخل الرحم وإصابة 6. وهكذا، الفئران بمثابة أداة لا تقدر بثمن لدراسة النشاط الرحم. حتى الآن، معيار الذهب لقياس انقباض الرحم في الفئران كانت خارج الحي تسجيلات التوتر متساوي القياس. ولكن هذا يقتصر على نقطة واحدة مرة الحمل في التجربة ويتطلب إزالة الرحم من بيئتها الفسيولوجية. عامل مهم آخر هو عدد كبير من الحيوانات المطلوبة لهذه التحقيقات. وأخيرا، هذه المنهجية لا يسمح للدراسات طولية دراسة تحريض المخاض قبل الأوان والفيزيولوجيا المرضية.
التقدم المحرز مؤخرا في أجهزة القياس الإشعاعي المستخدمة لدراسة ضغط الدم يغير 7 في الفئران وكثافة العملياتضغط rauterine في الفئران 8 توسل السؤال ما إذا كان نفس التكنولوجيا يمكن أن تستخدم لدراسة التغيرات في الضغط داخل الرحم في الفئران خلال فترة الحمل. بعد استكشاف الأخطاء وإصلاحها الأولي، تم وضع طريقة لقياس بنجاح تحريض المخاض والتقدم في الماوس. يمكن لهذا النهج في الجسم الحي قياس التحول من الدولة الضغط المنخفض من الرحم هادئة للدولة وارتفاع ضغط الإرشادية للتقلصات العمل قوية. وقد كان هذا الأسلوب أيضا قادرة على الكشف عن الاختلافات ضغط كبيرة بين الفئران المعدلة وراثيا مع الولادة للخطر والفئران نوع البرية، مما يدل على تأثير الفسيولوجية في التعبير الجيني 9. يوفر هذا البروتوكول في الوقت الحقيقي، في طريقة الجسم الحي لدراسة ضغط الماوس الرحم خلال فترة الحمل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: جميع الإجراءات الحيوانية ينسجم مع المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المنصوص عليها من قبل المعاهد الوطنية للصحة. وتمت الموافقة على جميع البروتوكولات من قبل لجنة الدراسات الحيوانية في جامعة واشنطن في سانت لويس.
ملاحظة: مواد محددة والمعدات اللازمة لهذا البروتوكول وترد المواد والجدول المعدات.
1. تربية موقوتة من إناث الفئران
- تربية الإناث البالغات بين شهرين وستة أشهر من العمر في وقت نافذة 2 ساعة مع الذكور. ليست هناك حاجة ساعة تربية محددة طالما يتم الاحتفاظ بها بما يتفق لمجمل التجربة.
- تأكيد الحمل عن طريق وجود المكونات كوبولاتوري. تعيين يوم وساعة الذي ينظر إلى المكونات أولا كيوم ما بعد الجماع 0 (dpc0). تذكر ساعة محددة عند بدء تسجيل الضغط.
- إجراء العمليات الجراحية على dpc8-13. فإن شركة ظفار المحدد يعتمد على سلالة الماوس.
- لتحديد ما إذا كان الفأر هو الحامل قبل الجراحة، والمؤسسة العامةالتصوير بالموجات فوق الصوتية rform من البطن مع 40 ميغاهيرتز مجموعة خطية التحقيق بالإضافة إلى نظام التصوير قبل بالإدارة التخدير. وهذا سوف يسمح التصور من الأكياس الحمل. إذا كان نظام الموجات فوق الصوتية غير متوفرة، واستخدام وزن الماوس.
ملاحظة: زيادة الوزن لا يقل عن 2 غرام بين dpc0 وdpc8 وانتفاخ البطن يعد مؤشرا جيدا من الحمل.
2. القياس عن بعد جراحة الإعدادية
- استخدام الأوتوكلاف لتعقيم الأدوات والشاش، ومسحات القطن، والستائر الجراحية، ونصائح ماصة خلال 24 ساعة قبل الجراحة.
- سطح جراحة نظيفة مع الايثانول 70٪.
- بدوره على وسادة التدفئة (المتخصصة للقوارض) وحبة معقمة.
3. القياس عن بعد جراحة
- للتخدير، استخدم 4-5٪ الأيزوفلورين مع معدل تدفق الأوكسجين من 1-2 لتر / دقيقة.
- انتظر حتى يظهر الماوس علامات التخدير ثم حقن تحت الجلد مع البوبرينورفين (مسكن: 0.1 مل لكل 20 غرام).
- حلق البطن من الفأرة من أسفل الأضلاع وصولا الى المثانة.
- جلب الماوس إلى طاولة جراحة في مرحلة ما قبل تحسنت سادة التدفئة، وتغطية العينين الماوس، مع مرهم للعين لمنع جفاف.
- تبدأ تقنية معقمة. وضعت على قفازات معقمة والحفاظ على المجمع كما سطح العقيمة التي لوضع اليود والإيثانول الدعك.
- إزالة مقياس البعد من حزمة أو المالحة واستخدام ملقط معقم لوضعه على شاش معقم.
- استخدام حقنة (التي قدمها المورد مقياس البعد) لملء طرف القسطرة مع هلام. الضغط بلطف القسطرة خلق الضغط السلبي كافيا لاستخلاص جل في القسطرة.
- وضع غيض العقيمة على ماصة. ماصة 2 ميكرولتر من الغراء الجراحية وتعيين ماصة على سطح العقيمة.
- لتنظيف موقع الجراحية، مسحة المنطقة مع اليود ثم مع الايثانول 70٪.
- قطع حفرة في ثنى الجراحية مجرد كبيرة بما فيه الكفايةللمنطقة اللازمة لشق ومكان على الماوس.
- إجراء قرصة القدم (استجابة دواسة) لضمان تخدير الماوس تماما قبل اتخاذ شق.
- جعل عمودي خط الوسط شق صغير. التالي، وجعل شق مماثل من خلال الكامنة عضلة جدار الجسم.
- سحب بلطف الرحم خارج تجويف الجسم وتحديد موقع قرن الرحم التي تحتوي على معظم الجراء التي هي قابلة للحياة.
- اختياري - لإضافة ميرنا، وضخ ناقلات فيروسية في الطبقة العضلية من الرحم قبل الإدراج من مقياس البعد.
- إجراء شق صغير في غيض من قرن الرحم مع 3 مم قطع مقص الربيع الحافة.
- كاتب الموضوع القسطرة، دون الضغط، وبين جدار الرحم والحويصلات الجنين. إدراج القسطرة الماضي عدة الأكياس للحد من زواله عرضي. تأكد من عدم نشعر بالانزعاج الحويصلات الجنين قبل الإدراج.
- ماصة الغراء الجراحي لموقع مقياس البعد الإدراج إلى الالتزام القسطرة إلى شالقرن terine ومنع القسطرة من الانزلاق للخروج من قرن الرحم. انتظر بضع ثوان للالغراء لتصبح جامدة، وبعد ذلك وضعت بعناية الرحم إلى داخل تجويف الجسم.
- وضع مقياس البعد في تجويف الجسم على الجانب المقابل للموقع إدخال القسطرة.
- خياطة تجويف الجسم مغلقة مع 6.0 الغرز للامتصاص. أولا، هل غرزة محفظة ثم 3-4 غرز الفردية.
- خياطة الجلد باستخدام نفس الأسلوب، ولكن مع 6-0 خياطة غير قابل للامتصاص.
- ديبوكايين مسحة (مسكن موضعي) مرهم على موقع شق.
- حقن 0.3-0.4 مل من معقم المالحة تحت الجلد للمساعدة على ترطيب الحيوان.
- مراقبة الحيوانات بعد الجراحة حتى يتم مستيقظا تماما. لا تضع الماوس مرة أخرى في قفصه حتى أنها قادرة على عقد بحرية رأسه فوق الجدول كما أنواع معينة من الفراش يمكن خنق ماوس تخدير بشكل كبير. لماوس التي تم تخدير لمدة 30-45 دقيقة، وينبغي للمرء أن يتوقع التاسعالبريد الماوس ليكون مستيقظا تماما قبل 1 ساعة و 15 دقيقة.
- إذا كان أداء العمليات الجراحية إضافية، يمسح الأدوات مع الايثانول 70٪ وحبة تعقيم قبل إعادة استخدامها.
4. ما بعد الجراحة الانتعاش
- رصد التقدم المحرز بعد الجراحة اليومي في السجل. الكتالوج زيادة الوزن وفقدان ومشاهدة لالخمول، والنزيف، أو إغلاق ناقصة من شق جراحي.
- تغذية الماوس خففت طعام الماوس (~ اتساق عصير التفاح) أو متخصص الانتعاش الحمية الغذائية.
- دراسة الغرز وتأكد من عدم وسحبت خارج، ولكن حاول أن لا تعامل مع الماوس بشكل مفرط.
5. القياس تسجيل
- في يوم من الفائدة (على الأقل يومين إلى ثلاثة أيام بعد أن تعافى من عملية جراحية الماوس)، ضع مغناطيس بالقرب من الماوس لتشغيل مقياس البعد. وضع القفص الماوس على المتلقي. ضوء على المتلقي يجب أن تعمل إذا تم تنشيط مقياس البعد.
- معايرة teleme العلامة التجارية الجديدة النسب مع المعايرة الخاصة بالشركة المصنعة المقدمة. وستبقى مواصفات معايرة مقياس البعد استخدامها في مجال البرمجيات.
- في داخل البرنامج، بدء التسجيل عن طريق النقر على الحق في "الحيوان" وانقر على "بدء أخذ العينات، ومستمرة"، الذي يسمح أخذ العينات بمعدلات تصل إلى 500 هرتز. تأكد من تعيين البرنامج لحفظ وتعقبها.
ملاحظة: عندما يتحول رمز الماوس أخذ العينات الأخضر، يجري تسجيلها الضغوط. يمكن إزعاج الماوس أثناء الولادة يقطع أو تغيير العمل، لذلك نلاحظ بحذر. - بعد الولادة أو فترة زمنية من الفائدة، وإيقاف التسجيل عن طريق النقر على الحق في "الحيوان" واختيار "وقف التسجيلات، جميع". استخدام المغناطيس لإيقاف مقياس البعد لإنقاذ حياة البطارية، وبطارية مقياس البعد وعادة ما تستمر فقط لمدة 1.5 أشهر من التسجيل المتواصل.
- الموت ببطء الماوس عن طريق CO 2 جرعة زائدة واسترداد مقياس البعد. يصرح باستخدامها الجراء عن طريق قطع الرأس.
- وضع مقياس البعد في حل من 1٪ انزيم المنظفات في الماء طوال الليل منزوع الأيونات في درجة حرارة الغرفة.
- شطف مقياس البعد في الماء منزوع الأيونات وإزالة جميع الأنسجة والغراء، والحرص على عدم الضغط على القسطرة.
- احتضان مقياس البعد في 2٪ غلوتارالدهيد لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة لتعقيم.
- شطف مقياس البعد بمحلول ملحي معقم وتخزينها في المياه المالحة عقيمة حتى زرع المقبل أو ليتم إرسالها إلى الشركة المصنعة ليتم تجديدها. وينبغي تجديدها Telemeters إذا كان موجودا الأنسجة داخل القسطرة بعد التعقيم. عادة telemeters يمكن استخدام 4-5 مرات قبل أن تحتاج إلى تجديد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في الوقت الحقيقي في الضغوط داخل الرحم الجسم الحي يمكن تسجيلها باستخدام نظام الحصول على القياس عن بعد. تم استخدام أخذ العينات الضغط يقترن في وقت واحد تسجيل الفيديو من الماوس لالتقاط الوقت المحدد للتسليم كل الجرو وربط التسليم في الوقت المحدد لضغط الرحم للأم. ويمكن بعد كل النقاط البيانات يمكن رسم في جميع أنحاء تسجيل لتوليد مؤامرة (الشكل 1A) الضغط مقابل الوقت. وتظهر هذه المؤامرة النقاط خلال فترة الحمل عندما يتغير الضغط داخل الرحم وكذلك الفرق في الضغط بين دورات الظلام والضوء. بالإضافة إلى ذلك، المتوسط المتحرك لضغط الرحم يمكن رسم (الشكل 1B). وهذا مفيد لتصور بسهولة أكبر زيادات مستدامة في خاصية الضغط داخل الرحم للتقلصات المصاحبة لعملية العمل (وقد نشرت التسجيلات التي تم الحصول عليها أثناء الولادة قبل 9).
يمكن للبيانات أن تحليلها من خلال تصدير البيانات تشير إلى برامج التحليل وبلغ متوسط البيانات عبر فترة زمنية من الفائدة. عند المقارنة بين ظروف تجريبية مختلفة، مثل النوع البري مقابل الفئران المعدلة وراثيا، يوميا أو الضغوط ساعة من الفئران مختلفة يمكن المتوسط لدراسة أنماط مقلص تعتمد على الجينات في المصالح. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تحديد دلالة إحصائية في أي خلافات. يمكن فحص الضغوط داخل الرحم أثناء الولادة، أو يمكن أجرت دراسة طولية لدراسة فترة الحمل بأكملها تحت ظروف مختلفة.
القياس عن بعد داخل الرحم يمكن استخدامها لاختبار في استجابات الجسم الحي إلى وكلاء الدوائية خلال فترة الحمل. على وجه التحديد، ويسمح هذا الأسلوب في أوائل اختبار المخدرات قبل التجارب السريرية. ويمكن اختبار الاختلافات في استجابة لعوامل محددة في الفئران المعدلة وراثيا، وكذلك في الفئران غير الحوامل أو الحوامل. واحد وكيل الدوائية محددة معروفة لزيادة عنقانكماش شمال شرق، الأوكسيتوسين، يمكن تسليمها تحت الجلد كما هو موضح سابقا في نموذج الفئران 10. يمكن زرعها في مقياس البعد في نفس الوقت بمثابة مضخة التناضحي الصغيرة لتقديم بمعدل ثابت من الأوكسيتوسين. كما يمكن فحص الاختلافات في التسجيلات بين غير الحوامل (الشكل 2A) وحامل (الشكل 2B) الفئران مع إدارة الأوكسيتوسين.
تطبيق آخر محتمل القياس عن بعد داخل الرحم هو يبحث في تقلصات الرحم بعد ميرنا / shRNA إسكات البروتينات. نماذج الماوس ليست متاحة لجميع الجينات التي تعتبر ضرورية لالولادة. وبالتالي، إسكات الجينات في تركيبة مع قياسات الضغط داخل الرحم يمكن استخدامها لتحقيق البروتينات المثيرة للاهتمام. عن طريق حقن ميرنا، معربا عن ناقلات lentiviral في عضل الرحم خلال زرع مقياس البعد، ضربة قاضية الرحم محددة من الجينات في المصالح يمكن فحص، كما رأينا في الشكل 3A. وأظهرت دراسة حديثةمثال محدد مما يدل على أن قناة Kir7.1 دورا هاما في الرحم هدوء بعد استخدام كل من ميرنا والقياس عن بعد لدراسة التغييرات في الضغط داخل الرحم طوال فترة الحمل 11. تظهر اقتفاء أثر التمثيلية للسارعت ميرنا (الشكل 3A) أو Kir7.1 ميرنا (الشكل 3B) التي هدمت تعبير عن قناة البوتاسيوم Kir7.1 تسبب الضغط داخل الرحم لزيادة. هذه اقتفاء أثر تمثيلية مشابهة لما ينظر إليه في نماذج الماوس المعدلة وراثيا كما هو موضح سابقا 9.
الشكل 1: ممثل المستمر تسجيل ضغط الرحم (A) في الوقت الحقيقي البيانات الضغط داخل الرحم المسجلة في الجسم الحي بشكل مستمر لمدة أربعة أيام (15-19 DPC). (ب) المتوسط المتحرك ساعة من البيانات في (A). WHالحانات الفنار والأسود على رأس التسجيلات تشير إلى 12 ساعة ضوء والظلام دورات على التوالي. (C) والتكبير في أثر الماوس في تقلصات الفردية الجسم الحي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الضغوط داخل الرحم استجابة لاقتفاء أثر الأوكسيتوسين التمثيلية للضغط الرحم من غير الحوامل (NP) عضل الرحم (A) والحوامل في وقت متأخر (18 DPC) عضل الرحم (B) تتعرض ل5 وحدات / يوم من الأوكسيتوسين لمدة 24 ساعة وتظهر الزيادات. في الضغط في وقت متأخر من الحمل مقابل الفئران NP. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (3): قياس الضغط داخل الرحم بعد إسكات قناة البوتاسيوم التي كتبها ميرنا / shRNA (A) تخطيطي لموضع مقياس البعد ومواقع حقن lentiviruses ميرنا، معربا عن. وقد أظهرت الدراسات التي أجريت مؤخرا على اقتفاء أثر التمثيلية للضغط الرحم من عضل الرحم transduced مع (B) سارعت ميرنا أو (C) Kir7.1 ميرنا. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد اعتمدت التحقيقات في انقباض ميوميتريال على القياسات المجراة سابقا من توتر العضلات. هذه المنهجية يمكن أن تكون مفيدة للاختبار في مرحلة مبكرة من الأدوية المقوية لتوتر الرحم وضعت حديثا التي لا يمكن أن تدار على الحيوانات الحية. ومع ذلك، النهج في الجسم الحي ضرورية لفهم طوليا تطور العمل. القياسات المجراة تخدم عدة أغراض. أولا، أنها تمكن من التقاط صورة كاملة عن التغييرات في نمط مقلص الرحم خلال فترة الحمل. ثانيا، القضاء على التحيز من خارج الحي التسجيلات التي تتطلب أنسجة الرحم ليتم تحميلها إما عموديا أو أفقيا، مما يحد من فهمنا لدور كامل للطبقة العضلات الدائرية والطولية للرحم. ثالثا، أنها تسمح تسجيل ضغط الرحم في البيئة الهرمونية الذاتية، مما يجعل من الممكن لدراسة أكثر دقة الولادة في نماذج الماوس. وأخيرا، أنها تسمح لمزيد من TRالتحقيقات anslational بين نماذج الماوس والبشر كما الرحم القياس عن بعد أكثر شبها القياسات التي اتخذت في النساء الحوامل مع القسطرة الضغط داخل الرحم.
طرق للماوس الرحم القياس عن بعد من السهل تعلم، ولكن من الصعب الرئيسي. المحققون مع خبرة سابقة جراحة الماوس قد يحقق النجاح أسرع، ولكن هذا لا ينبغي أن ردع مختبرات من استخدام هذه التقنية قيمة. وقد أجريت دراسات الأصلية باستخدام الماوس الرحم القياس عن بعد من قبل مبتدئ بنجاح كبير بعد عدة محاولات، لذلك يجب أن تكون على استعداد مختبرات لأول زوجين من العمليات الجراحية للتسبب في السد لتفقد كل الأجنة. وفيما يلي بعض المؤشرات أن نأخذ في الاعتبار. كما هو الحال مع أي عملية جراحية، وأقصر مدة هي الأفضل للحيوان. وهناك عملية جراحية سريعة تحد من الجفاف والحاجة إلى جرعات إضافية من التخدير. إذا كان الباحث هو وجود الوقت الصعب الانتهاء من إجراءات قبل الماوس يستيقظ، الأيزوفلورين يمكن استخدامها للحفاظ على anesthetiz الماوسإد لفترة أطول. لقد وجدنا أيضا أن استخدام الأيزوفلورين يزيد من عدد من الجراء وقابلة للحياة ويفضل أكثر من الكيتامين. أصغر شق ممكن، فقط أكبر قليلا من جسم مقياس البعد، سوف يقلل من فرصة للجرحا غائرا في وقت لاحق، وانخفاض الوقت اللازم لخياطة الجروح، وتحسين الانتعاش الماوس. مع شق البطن صغير، وسحب الرحم خارج تجويف الجسم سيسمح لتحسين الرؤية أثناء إدخال القسطرة. عندما إعادة استخدام مقياس البعد، عامل في منحنى السابق للقسطرة عندما خيوط عليه قرن الرحم. السماح للالغراء جراحي لتتصلب تماما قبل وضع قرن الرحم إلى داخل تجويف الجسم سوف تساعد على الحفاظ القسطرة في مكان ومنع الغراء من الالتصاق إلى الأمعاء. يمكن للجسم مقياس البعد تلف الكبد إذا وضعت مرتفعة جدا، والبطن الماوس، قادر على توسيع نطاق واسع، لذلك لا تتردد في وضع مقياس البعد أقل في الجسم. وهذه الأساليب يجب أن تكون مخصصة رس تناسب احتياجات مختبرات مختلفة ونماذج الماوس مختلفة، ولكن مزايا الرحم القياس عن بعد تفوق بكثير العقبات.
هناك بعض القيود التي يجب أخذها في الاعتبار عند تنفيذ هذه المنهجية. واحدة من التحديات الرئيسية التي لا بد من التغلب عليها هي درجة من فقدان الجنين بعد زرع جهاز الإرسال. في القياس عن بعد داخل الرحم التقرير الأولي 9، كان كل SK3 T / T، والنوع البري الفئران المعدلة وراثيا درجة معينة من فقدان الجنين في قرون واحد أو كلا الرحم بغض النظر عما إذا تم اختيار هذا القرن لوضع مقياس البعد. تعظيم الاستفادة من اختيار يوم خلال فترة الحمل عندما يكون مقياس البعد كان جراحيا بإدراجه تحسن معدل لدينا من الحمل على المدى ناجحة، ولكن مجموعة كاملة من الجراء تم الحصول عليها أبدا. والجدير بالذكر أن اليوم الأمثل لعملية جراحية لSK3 T / T الفئران تختلف عن التي في النوع البري، مع نتائج الإنجابية الأفضل لوحظ في dpc12-13 لSK3 T / T الفئران مقابل dpc8-9 لWT الفئران، suggeاللدغة التي قد تحتاج بروتوكول لعملية جراحية لتعديلها لكل نموذج الفأر من الفائدة. وأشارت البيانات المتوفرة لدينا أن عدد الجراء ولادة لم تكن متطابقة مع الضغط داخل الرحم بشكل عام. نتائج الجنين لم تتحسن مع تحسن المهارات الجراحية من قبل المجرب، وغيرهم ممن نفذت هذه المنهجية في المختبرات الخاصة لاحظت أن نتائج الجنين تحسنت مع استخدام الأيزوفلورين بدلا من الكيتامين. ومن المتوقع أن كما تستخدم المزيد من مختبرات هذه المنهجية، والتكنولوجيا الارسال وبرامج التحليل داخل الرحم وسوف تصبح أكثر دقة. هذا وسوف تقدم مما لا شك فيه فائدة هذه التقنية في الدراسات الآليات التي تسهم في العمل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical Glue | 3M Vetbond | 1469SB | Tissue Adhesive--stored in Drierite |
| Absorbable 6-0 Sutures | Ethicon | J212H | Vicryl |
| Non-absorbable 6-0 Sutures | Ethicon | 8706H | Prolene |
| Water Jacket Blanket + Heating Pad | Gaymer | T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC | Specialized for rodents |
| Bead sterilizer | Keller | Z378577 | Steri 250 Sterilizer |
| Disecting Microscope | Nikon | SMZ754 | Fibre optic gooseneck external light source |
| Sterile Surgical Gloves--Latex | Cardinal Health Triflex | 2D7253 | |
| PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter | Data Sciences International | 270-0135-001 | TA11PA-C10 |
| Telemeter Reciever | Data Sciences International | 272-6001-001 | RPC-1 |
| Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum | Data Sciences International | 271-0147-141 | Analysis software |
| Diet Recovery Gel | Clear H2O | 72-01-5022 | Purified Soft Diet for Rodents |
| Tergazyme | Sigma-Aldrich | Z273287 | Enzyme detergent |
References
- Slattery, M. M., Morrison, J. J. Preterm delivery. Lancet. 360, 1489-1497 (2002).
- Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 371, 75-84 (2008).
- Keelan, J. A. Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth. Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).
- Voltolini, C., et al. Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions. Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).
- Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. Insights into parturition biology from genetically altered mice. Pediatric research. 64, 581-589 (2008).
- Rajakumar, A., et al. Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction. American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).
- Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology. Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).
- Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. ., Maner, W. L., Garfield, R. E. The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats. Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).
- Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models. Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).
- Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects. American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).
- McCloskey, C., et al. The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy. EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).
