Abstract
आणविक और इलेक्ट्रिकल संकेतों के एक जटिल एकीकरण गर्भावस्था के अंत में एक सिकुड़ा अंग में एक मौन गर्भाशय को बदलने की जरूरत है। गर्भाशय सिकुड़ना के प्रमुख नियामकों की खोज के बावजूद, इस प्रक्रिया को अभी भी पूरी तरह से समझ नहीं है। ट्रांसजेनिक चूहों प्रसव का अध्ययन करने में जो एक आदर्श मॉडल प्रदान करते हैं। इससे पहले, माउस में गर्भाशय सिकुड़ना अध्ययन करने के लिए एकमात्र तरीका कई कारणों के लिए suboptimal हैं जो पूर्व vivo Isometric तनाव रिकॉर्डिंग थी। गर्भाशय अपनी शारीरिक वातावरण से हटा दिया जाना चाहिए, जांच की एक सीमित समय के पाठ्यक्रम संभव है, और चूहों का बलिदान किया जाना चाहिए। radiometric टेलीमेटरी की हाल ही में विकास चूहों में vivo में अंतर्गर्भाशयी दबाव के अनुदैर्ध्य, वास्तविक समय मापन के लिए अनुमति दी गई है। प्रसव वर्णन किया गया है, जब तक यहां, एक अंतर्गर्भाशयी दूरमापी का आरोपण मध्य गर्भावस्था से माउस गर्भाशय में दबाव में परिवर्तन को मापने के लिए। प्रेस में की तुलना अंतर सेजंगली प्रकार और ट्रांसजेनिक चूहों के बीच ures, ब्याज की एक जीन के शारीरिक प्रभाव elucidated किया जा सकता है। इस तकनीक को अपरिपक्व श्रम सहित गर्भावस्था के दौरान myometrial विकारों के इलाज के लिए प्रयोग किया जाता चिकित्सा विज्ञान के विकास में तेजी लाने चाहिए।
Introduction
अपरिपक्व जन्म प्रसवकालीन रुग्णता और विकसित देशों में मृत्यु दर का प्रमुख कारण है; यह प्रसवकालीन रुग्णता का 50% और प्रसवकालीन मृत्यु दर 1,2 के 75% के लिए जिम्मेदार है। अपरिपक्व श्रम बहुमुखी है और अज्ञातहेतुक हो सकता है। अधिक से अधिक शोध एक सिकुड़ा एक में एक मौन ऊतक से myometrium बदलने आणविक और बिजली के रास्ते पर उभरा है हालांकि, अपरिपक्व श्रम का सही pathophysiology मायावी बनी हुई है। अंत: स्रावी, सूजन, और जीन विनियमन सभी अपरिपक्व श्रम 3,4 से जोड़ा गया है। हालांकि, नैतिक चिंताओं मानव में अपरिपक्व श्रम के तंत्र पर शोध कार्य करने की क्षमता की सीमा।
इन सीमाओं को देखते हुए कई शोधकर्ताओं प्रसव के शरीर क्रिया विज्ञान का अध्ययन करने के साथ जो एक मॉडल प्रणाली के रूप में चूहों में बदल गया है। चूहे कम gestations लगभग तीन सप्ताह तक चलने वाले और आसानी से आनुवंशिक रूप से हेरफेर किया जा सकता है। इसके अलावा, कई आनुवंशिक माउस मॉडल हैश्रम 5 के लिए आवश्यक हैं कि संकेत दे रास्ते निर्धारित करने के लिए विकसित किया गया। माउस और मानव उत्पत्ति के बीच मुख्य अंतर के बावजूद, चूहों और इंसानों अंतर्गर्भाशयी सूजन और संक्रमण के 6 सहित श्रम के लिए आवश्यक हैं कि एक ही तंत्र के कई साझा करें। इस प्रकार, चूहों गर्भाशय गतिविधि की जांच के लिए एक अमूल्य उपकरण के रूप में सेवा करते हैं। तिथि करने के लिए, सोने के मानक चूहों में गर्भाशय सिकुड़ना को मापने के लिए पूर्व vivo Isometric तनाव रिकॉर्डिंग कर दिया गया है; हालांकि, इस प्रयोग के प्रति एक गर्भावधि समय बिंदु तक ही सीमित है और इसकी शारीरिक पर्यावरण से गर्भाशय को हटाने की आवश्यकता है। एक अन्य महत्वपूर्ण कारक इन जांच के लिए आवश्यक जानवरों की एक बड़ी संख्या है। अन्त में, इस पद्धति श्रम और अपरिपक्व pathophysiology के शामिल होने की जांच अनुदैर्ध्य अध्ययन के लिए अनुमति नहीं है।
धमनी दबाव अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया radiometric टेलीमेटरी उपकरणों में किए गए हाल की प्रगति में चूहों और int में सात में परिवर्तनचूहों 8 में rauterine दबाव में उसी तकनीक का गर्भावस्था के दौरान चूहों में अंतर्गर्भाशयी दबाव में परिवर्तन का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि क्या करने के लिए प्रश्न विनती की। प्रारंभिक समस्या निवारण करने के बाद, एक विधि सफलतापूर्वक एक माउस में श्रम प्रेरण और प्रगति को मापने के लिए विकसित किया गया था। यह इन विवो दृष्टिकोण सशक्त श्रम संकुचन का संकेत उच्च दबाव राज्य के लिए मौन गर्भाशय के कम दबाव के राज्य से संक्रमण उपाय कर सकते हैं। इस विधि को भी जीन अभिव्यक्ति 9 के शारीरिक प्रभाव का प्रदर्शन समझौता प्रसव और जंगली प्रकार चूहों के साथ ट्रांसजेनिक चूहों के बीच महत्वपूर्ण दबाव मतभेदों का पता लगाने में सक्षम है। इस प्रोटोकॉल गर्भावस्था के दौरान माउस गर्भाशय दबाव का अध्ययन करने के विवो विधि में, एक वास्तविक समय प्रदान करता है।
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Protocol
नोट: राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा निर्धारित पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए दिशा-निर्देशों का अनुपालन सभी पशु प्रक्रियाओं। सभी प्रोटोकॉल सेंट लुइस में वाशिंगटन विश्वविद्यालय में जानवरों के अध्ययन समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।
नोट: इस प्रोटोकॉल के लिए विशिष्ट सामग्री और उपकरण सामग्री और उपकरण तालिका में सूचीबद्ध हैं।
मादा चूहों के 1. समय पर ब्रीडिंग
- पुरुषों के साथ एक दो घंटा समय खिड़की में उम्र के दो और छह महीने के बीच वयस्क महिलाओं नस्ल। वे प्रयोग की सम्पूर्णता के लिए लगातार रखा जाता है के रूप में विशिष्ट प्रजनन घंटा लंबे समय के रूप में की जरूरत नहीं हैं।
- एक मैथुनविषयक प्लग की मौजूदगी से गर्भावस्था की पुष्टि करें। प्लग पहले दिन के बाद सहवास 0 (dpc0) के रूप में देखा जाता है, जिस पर दिन और मानव संसाधन निर्दिष्ट। दबाव रिकॉर्डिंग शुरू करने के लिए जब विशिष्ट घंटे याद रखें।
- Dpc8-13 पर सर्जरी प्रदर्शन। सटीक डीपीसी माउस तनाव पर निर्भर करेगा।
- एक माउस सर्जरी, पीई से पहले गर्भवती है, तो यह निर्धारित करने के लिएसंज्ञाहरण प्रशासन से पहले एक इमेजिंग प्रणाली के लिए युग्मित एक 40 मेगाहर्ट्ज रैखिक सरणी जांच के साथ पेट के rform अल्ट्रासाउंड इमेजिंग। इस गर्भावधि थैलियों के दृश्य की अनुमति देगा। एक अल्ट्रासाउंड प्रणाली उपलब्ध नहीं है, तो माउस के वजन का उपयोग करें।
नोट: dpc0 और dpc8 और पेट के बढ़ाव के बीच कम से कम 2 जी की एक वजन गर्भावस्था का एक अच्छा संकेत है।
2. टेलीमेटरी सर्जरी तैयारी
- सर्जरी से पहले 24 घंटे के भीतर उपकरणों, धुंध, कपास swabs, शल्य चिकित्सा पर्दे, और विंदुक युक्तियाँ बाँझ एक आटोक्लेव का प्रयोग करें।
- 70% इथेनॉल के साथ स्वच्छ सर्जरी सतह।
- (कृन्तकों के लिए विशेष) हीटिंग पैड और मनका अजीवाणु चालू करें।
3. टेलीमेटरी सर्जरी
- संज्ञाहरण के लिए, 1-2 एल / मिनट की एक ऑक्सीजन का प्रवाह दर के साथ 4-5 isoflurane% का उपयोग करें।
- माउस anesthetization के संकेत से पता चलता है जब तक प्रतीक्षा करें और फिर buprenorphine साथ subcutaneously इंजेक्षन (एनाल्जेसिक: 20 ग्राम प्रति 0.1 मिलीलीटर)।
- मूत्राशय के लिए नीचे पसलियों के नीचे से माउस के पेट दाढ़ी।
- पूर्व गर्म हीटिंग पैड पर सर्जरी की मेज पर माउस ले आओ, और सुखाने को रोकने के लिए नेत्र मरहम के साथ माउस की आँखों को कवर किया।
- बाँझ तकनीक शुरू करो। बाँझ दस्ताने पर रखो और आयोडीन और इथेनॉल scrubs के स्थान के लिए, जिस पर एक बाँझ सतह के रूप में आवरण रहते हैं।
- पैकेज या खारा से दूरमापी निकालें और बाँझ धुंध पर जगह बाँझ संदंश का उपयोग करें।
- जेल के साथ कैथेटर टिप को भरने के लिए (दूरमापी आपूर्तिकर्ता द्वारा प्रदान की) सिरिंज का प्रयोग करें। धीरे कैथेटर में जेल आकर्षित करने के लिए पर्याप्त नकारात्मक दबाव बनाने कैथेटर निचोड़।
- पिपेट पर एक बाँझ टिप रखें। पिपेट दो शल्य गोंद की μl और एक बाँझ सतह पर पिपेट निर्धारित किया है।
- आयोडीन के साथ और फिर 70% इथेनॉल के साथ क्षेत्र झाड़ू, शल्य साइट को साफ करने के लिए।
- अभी काफी बड़े सर्जिकल कपड़ा में एक छेद में कटौतीमाउस के ऊपर चीरा और जगह के लिए आवश्यक क्षेत्र के लिए।
- माउस को पूरी तरह से एक चीरा बनाने से पहले anesthetized है सुनिश्चित करने के लिए एक पैर चुटकी (पेडल प्रतिक्रिया) प्रदर्शन करते हैं।
- एक छोटे से खड़ी midline चीरा बनाओ। अगला, अंतर्निहित शरीर दीवार मांसपेशियों के माध्यम से एक समान चीरा बनाते हैं।
- धीरे शरीर गुहा से बाहर गर्भाशय खींचने के लिए और व्यवहार्य हैं कि सबसे पिल्ले युक्त गर्भाशय सींग का पता लगाने।
- वैकल्पिक - miRNA के अलावा के लिए, दूरमापी के सम्मिलन से पहले गर्भाशय की मांसपेशियों की परत में वायरल वेक्टर इंजेक्षन।
- 3 मिमी बढ़त वसंत कैंची काटने के साथ गर्भाशय सींग की नोक पर एक छोटा सा चीरा बनाओ।
- गर्भाशय की दीवार और भ्रूण की थैलियों के बीच, फैलाएंगे बिना, कैथेटर थ्रेड। इसकी आकस्मिक हटाने को कम करने के लिए कई थैलियों पिछले कैथेटर डालें। भ्रूण थैलियों सम्मिलन से परेशान नहीं कर रहे हैं सुनिश्चित करें।
- यू करने के लिए कैथेटर पालन करने के लिए दूरमापी प्रविष्टि की साइट के लिए शल्य चिकित्सा गोंद पिपेटterine सींग गर्भाशय सींग से बाहर फिसलने से कैथेटर को रोकने और। कठोर बनने के लिए गोंद के लिए कुछ ही सेकंड प्रतीक्षा करें, और फिर ध्यान से शरीर गुहा के भीतर गर्भाशय वापस जगह है।
- कैथेटर प्रविष्टि साइट के विपरीत दिशा में शरीर गुहा में दूरमापी रखें।
- 6.0 से absorbable sutures के साथ बंद हुआ शरीर गुहा सीवन। सबसे पहले, एक पर्स सिलाई और फिर 3-4 व्यक्ति टांके करते हैं।
- उसी तकनीक का उपयोग करके त्वचा सीवन, लेकिन 6-0 गैर absorbable सीवन के साथ।
- स्वाब dibucaine (सामयिक एनाल्जेसिक) चीरा साइट पर मरहम।
- पशु rehydrate मदद करने के लिए बाँझ खारा subcutaneously की 0.3-0.4 मिलीलीटर इंजेक्षन।
- यह पूरी तरह से जाग होने तक सर्जरी के बाद पशु मॉनिटर। यह आज़ादी के रूप में बिस्तर के कुछ प्रकार के एक भारी anesthetized माउस दम कर सकते तालिका के ऊपर अपने सिर पकड़ करने में सक्षम है जब तक वापस अपने पिंजरे में माउस जगह नहीं है। 30-45 मिनट के लिए anesthetized किया गया है कि एक माउस के लिए, एक वें उम्मीद करनी चाहिएई माउस एक घंटा और 15 मिनट से पूरी तरह से जाग हो।
- अतिरिक्त सर्जरी प्रदर्शन करने वाले हैं, तो 70% इथेनॉल और मनका पुन: उपयोग से पहले बाँझ के साथ उपकरणों पोंछे।
4. के बाद सर्जरी वसूली
- एक लॉग में दैनिक बाद सर्जरी प्रगति की निगरानी। वजन बढ़ाने और घटाने की सूची और सुस्ती, खून बह रहा है, या शल्य चीरा का अधूरा बंद करने के लिए देखते हैं।
- माउस नरम माउस चाउ (~ चापलूसी की निरंतरता) या विशेष वसूली आहार खाना खिलाओ।
- टांके की जांच करने और वे बाहर निकाला नहीं कर रहे हैं सुनिश्चित करें, लेकिन जरूरत से ज्यादा माउस संभाल करने की कोशिश नहीं की।
5. टेलीमेटरी रिकॉर्डिंग
- (माउस सर्जरी से बरामद किया है कि कम से कम एक दो तीन दिन बाद) ब्याज के दिन, दूरमापी चालू करने के लिए माउस के पास एक चुंबक जगह है। रिसीवर पर माउस पिंजरे में डाल दिया। दूरमापी सक्रिय है अगर रिसीवर पर प्रकाश पर बारी चाहिए।
- ब्रांड नए teleme जांचना निर्माता विशिष्ट calibrations के साथ मंत्रियों प्रदान की है। Reused दूरमापी अंशांकन विनिर्देशों सॉफ्टवेयर में रखा जाएगा।
- सॉफ्टवेयर के भीतर, "जानवर" पर राइट क्लिक करके रिकॉर्डिंग शुरू और "शुरू नमूने, सतत," अप करने के लिए 500 हर्ट्ज की दरों पर नमूने की अनुमति देता है जो क्लिक करें। सॉफ्टवेयर बचाने के लिए और पता लगाने के लिए सेट कर दिया जाता है सुनिश्चित करें।
नोट: नमूना माउस आइकन हरे रंग बदल जाता है, जब दबावों दर्ज की जा रही है। प्रसव के दौरान माउस को परेशान करने के बीच में या श्रम परिवर्तन, इसलिए सावधानी से पालन कर सकते हैं। - ब्याज की डिलीवरी या समय की अवधि के बाद, "जानवर" पर राइट क्लिक करके रिकॉर्डिंग और "सभी, रिकॉर्डिंग बंद करो" का चयन करना बंद करो। दूरमापी बैटरी आमतौर पर केवल सतत रिकॉर्डिंग के 1.5 महीने के लिए पिछले जाएगा, के रूप में बैटरी जीवन को बचाने के लिए दूरमापी बंद करने के लिए एक चुंबक का उपयोग करें।
- सीओ 2 अधिक मात्रा द्वारा माउस euthanize और दूरमापी ठीक हो। पिल्ले कत्ल के द्वारा euthanized हैं।
- कमरे के तापमान पर विआयनीकृत पानी रात भर में 1% एंजाइम डिटर्जेंट की एक समाधान में दूरमापी रखें।
- विआयनीकृत पानी में दूरमापी कुल्ला और कैथेटर निचोड़ करने के लिए नहीं सावधान किया जा रहा है, सभी ऊतक और गोंद को हटा दें।
- बाँझ कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए 2% glutaraldehyde में दूरमापी सेते हैं।
- बाँझ खारा के साथ दूरमापी कुल्ला और अगले आरोपण जब तक बाँझ खारा में दुकान या refurbished की निर्माता को वापस भेजा जाना है। ऊतक नसबंदी के बाद कैथेटर के अंदर स्थित है अगर Telemeters refurbished किया जाना चाहिए। आमतौर पर telemeters refurbished की जरूरत से पहले 4-5 बार इस्तेमाल किया जा सकता है।
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Representative Results
विवो अंतर्गर्भाशयी के दबाव में वास्तविक समय एक टैलिमीटर अधिग्रहण प्रणाली का उपयोग करके दर्ज किया जा सकता है। माउस के एक साथ वीडियो रिकॉर्डिंग के साथ रखा दबाव नमूने प्रत्येक पिल्ला के वितरण का सही समय पर कब्जा करने और मां की अंतर्गर्भाशयी दबाव को प्रसव के समय सहसंबंधी करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। सभी डेटा बिंदुओं तो एक दबाव बनाम समय साजिश (चित्रा 1 ए) उत्पन्न करने के लिए रिकॉर्डिंग के दौरान साजिश रची जा सकता है। इस साजिश के गर्भ के दौरान अंक से पता चलता है जब अंतर्गर्भाशयी दबाव में परिवर्तन के रूप में अच्छी तरह से अंधेरे और प्रकाश चक्र के बीच दबाव में अंतर है। इसके अतिरिक्त, अंतर्गर्भाशयी दबाव के चलते औसत (चित्रा 1 बी) साजिश रची जा सकता है। यह (प्रसव के दौरान प्राप्त की रिकॉर्डिंग पहले से 9 प्रकाशित किया गया है) और अधिक आसानी से श्रम की प्रक्रिया के साथ जुड़े संकुचन की अंतर्गर्भाशयी दबाव विशेषता में निरंतर बढ़ जाती है कल्पना करने के लिए उपयोगी है।
डाटा आगे के विश्लेषण के सॉफ्टवेयर करने के लिए डेटा बिंदुओं के निर्यात और ब्याज की समय अवधि में डेटा औसत से विश्लेषण किया जा सकता है। इस तरह दैनिक ट्रांसजेनिक चूहों, या अलग चूहों से प्रति घंटा दबावों बनाम जंगली प्रकार के रूप में विभिन्न प्रयोगात्मक शर्तों, जब तुलना हित के जीन पर निर्भर सिकुड़ा पैटर्न की जांच करने के लिए औसतन किया जा सकता है। साथ ही, किसी भी मतभेद के सांख्यिकीय महत्व निर्धारित किया जा सकता है। अंतर्गर्भाशयी दबावों प्रसव के दौरान जांच की जा सकती है, या एक अनुदैर्ध्य अध्ययन विभिन्न शर्तों के तहत पूरे गर्भावधि अवधि की जांच करने के लिए आयोजित किया जा सकता है।
अंतर्गर्भाशयी टेलीमेटरी गर्भावस्था के दौरान औषधीय एजेंटों को विवो प्रतिक्रियाओं में परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। विशेष रूप से, इस विधि से पहले क्लिनिकल परीक्षण करने के लिए जल्दी दवा के परीक्षण के लिए अनुमति देता है। विशिष्ट एजेंट के जवाब में मतभेद ट्रांसजेनिक चूहों में है, साथ ही गैर गर्भवती हैं या गर्भवती चूहों में परीक्षण किया जा सकता है। ग्रीवा को बढ़ाने के लिए जाना जाता है एक विशेष औषधीय एजेंटपहले एक चूहे मॉडल 10 में वर्णित के रूप में पूर्वोत्तर के संकुचन, ऑक्सीटोसिन, subcutaneously दिया जा सकता है। दूरमापी ऑक्सीटोसिन की एक स्थिर दर देने के लिए एक माइक्रो आसमाटिक पंप के रूप में एक ही समय में प्रत्यारोपित किया जा सकता है। गैर गर्भवती (2A चित्रा) और ऑक्सीटोसिन के प्रशासन के साथ गर्भवती (चित्रा 2B) चूहों के बीच रिकॉर्डिंग में मतभेद भी जांच की जा सकती है।
अंतर्गर्भाशयी टेलीमेटरी का एक अन्य संभावित आवेदन प्रोटीन की miRNA / shRNA के मुंह बंद करने के बाद गर्भाशय के संकुचन में दिख रही है। माउस मॉडल प्रसव के लिए आवश्यक हैं कि सभी जीनों के लिए उपलब्ध नहीं हैं। इस प्रकार, अंतर्गर्भाशयी दबाव माप के साथ संयोजन में जीन मुंह बंद करने के लिए ब्याज की प्रोटीन की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इंजेक्शन लगाने के द्वारा दूरमापी का आरोपण के दौरान myometrium में lentiviral वैक्टर miRNA व्यक्त, ब्याज की एक जीन के गर्भाशय-विशिष्ट पछाड़ना चित्रा 3 ए के रूप में देखा, जांच की जा सकती है। हाल के एक अध्ययन से पता चलता हैKir7.1 चैनल हमल 11 भर अंतर्गर्भाशयी दबाव में परिवर्तन की जांच के लिए miRNA और टेलीमेटरी दोनों उपयोग करने के बाद गर्भाशय निष्क्रियता में एक महत्वपूर्ण भूमिका है कि प्रदर्शन एक विशिष्ट उदाहरण है। तले हुए miRNA (चित्रा 3 ए) या Kir7.1 miRNA (3B चित्रा) के प्रतिनिधि ट्रेसिंग पोटेशियम चैनल Kir7.1 की अभिव्यक्ति नीचे दस्तक बढ़ाने के लिए अंतर्गर्भाशयी दबाव के कारण होता है दिखाते हैं। ये प्रतिनिधि ट्रेसिंग पहले से 9 वर्णित के रूप में ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में देखा जाता है के समान हैं।
चित्रा 1: प्रतिनिधि निरंतर अंतर्गर्भाशयी दबाव रिकॉर्डिंग लगातार चार दिनों (15-19 डीपीसी) के लिए vivo में दर्ज की गई है (ए) वास्तविक समय अंतर्गर्भाशयी दबाव डेटा।। (ए) में डेटा की प्रति घंटा की औसत एवरेज (बी)। करिकॉर्डिंग के शीर्ष पर ite और काली सलाखों के क्रमश: 12 घंटा प्रकाश और अंधेरे के चक्र से संकेत मिलता है। (सी) ए विवो व्यक्ति संकुचन में माउस का पता लगाने में तेजी से बढ़ी है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: ऑक्सीटोसिन के जवाब में अंतर्गर्भाशयी दबावों गैर गर्भवती (एनपी) myometrium (ए) और 24 घंटा शो वृद्धि के लिए 5 इकाइयों / ऑक्सीटोसिन के दिन के संपर्क में (18 डीपीसी) myometrium (बी) देर से गर्भवती से अंतर्गर्भाशयी दबाव के प्रतिनिधि ट्रेसिंग। एनपी चूहों बनाम देर गर्भवती में दबाव में है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: miRNA / shRNA के द्वारा एक पोटेशियम चैनल का मुंह बंद करने के बाद अंतर्गर्भाशयी दबाव के माप दूरमापी और miRNA व्यक्त lentiviruses के इंजेक्शन की साइटों की नियुक्ति की (ए) योजनाबद्ध।। हाल के अध्ययनों से (बी) के साथ transduced myometrium से अंतर्गर्भाशयी दबाव के प्रतिनिधि ट्रेसिंग दिखाया miRNA या (सी) Kir7.1 miRNA के तले। गए इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
Myometrial सिकुड़ना की जांच मांसपेशियों में तनाव की पूर्व vivo मापन पर भरोसा किया है। इस पद्धति जानवरों जीने के लिए प्रशासित नहीं किया जा सकता कि नव विकसित uterotonic दवाओं के प्रारंभिक चरण के परीक्षण के लिए उपयोगी हो सकता है। अनुलंबीय श्रम की प्रगति को समझने के लिए हालांकि, इन विवो दृष्टिकोण जरूरी हैं। इन विवो माप कई प्रयोजनों की सेवा। पहला, वे गर्भावस्था की अवधि से अधिक गर्भाशय सिकुड़ा पैटर्न में बदलाव की एक पूरी तस्वीर का कब्जा कर सकें। दूसरा, वे गर्भाशय ऊतक की आवश्यकता है कि पूर्व vivo रिकॉर्डिंग के पूर्वाग्रह गर्भाशय के परिपत्र और अनुदैर्ध्य मांसपेशी परत की पूरी भूमिका के बारे में हमारी समझ को सीमित करने, या तो खड़ी या क्षैतिज रखा जा करने के लिए खत्म करने। तीसरा, वे इस प्रकार यह संभव अधिक सही माउस मॉडल में प्रसव अध्ययन करने के लिए कर रही है, अंतर्जात हार्मोनल वातावरण में गर्भाशय दबाव की रिकॉर्डिंग की अनुमति है। अंत में, वे और अधिक tr के लिए अनुमति देते हैंगर्भाशय टेलीमेटरी के रूप में माउस मॉडल और मनुष्यों के बीच anslational जांच और अधिक बारीकी से अंतर्गर्भाशयी दबाव कैथेटर के साथ गर्भवती महिलाओं में लिया माप जैसा दिखता है।
माउस गर्भाशय टेलीमेटरी के लिए तरीकों गुरु को जानने के लिए आसान है, लेकिन मुश्किल हो जाता है। पिछले माउस सर्जरी के अनुभव के साथ जांचकर्ता तेजी से सफलता प्राप्त कर सकते हैं, लेकिन यह इस मूल्यवान तकनीक का उपयोग करने से लैब्स रोकते नहीं होना चाहिए। प्रयोगशालाओं सभी भ्रूण कम करने के लिए बांध पैदा करने के लिए सर्जरी की पहली जोड़ी के लिए तैयार किया जाना चाहिए, ताकि माउस गर्भाशय टेलीमेटरी का उपयोग कर मूल अध्ययन, कुछ कोशिश के बाद बड़ी सफलता के साथ एक नौसिखिया द्वारा किया गया। यहाँ मन में रखने के लिए कुछ संकेत दिए गए हैं। किसी भी सर्जरी के साथ के रूप में, कम से कम अवधि जानवर के लिए सबसे अच्छा है। एक त्वरित सर्जरी निर्जलीकरण और संज्ञाहरण की अतिरिक्त खुराक लेने के लिए की जरूरत सीमित कर देगा। शोधकर्ता माउस जाग से पहले की प्रक्रिया खत्म होने के एक कठिन समय चल रहा है, तो isoflurane माउस anesthetiz रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैअब एड। हम यह भी isoflurane के उपयोग व्यवहार्य पिल्ले की संख्या बढ़ जाती है और ketamine अधिक पसंद है कि मिल गया है। बस थोड़ा बड़ा दूरमापी के शरीर की तुलना में छोटी संभव चीरा, बाद में भारी घाव की संभावना को कम सिवनी की जरूरत समय कम है, और माउस वसूली में सुधार होगा। एक छोटे से पेट चीरा के साथ, शरीर गुहा के बाहर गर्भाशय खींच कैथेटर प्रविष्टि के दौरान बेहतर दृश्यता के लिए अनुमति देगा। कैथेटर के पिछले वक्र में एक दूरमापी, कारक reusing जब गर्भाशय सींग इसे नीचे सूत्रण है। शल्य गोंद जगह में कैथेटर रखने में मदद और आंतों से चिपके से गोंद को रोकने जाएगा शरीर गुहा के अंदर वापस गर्भाशय सींग रखने से पहले पूरी तरह से कड़ा करने की अनुमति दे। बहुत अधिक रखा अगर दूरमापी शरीर जिगर को नुकसान पहुंचा सकता है, और माउस के पेट में बड़े पैमाने पर विस्तार हो रहा करने में सक्षम है, इसलिए शरीर में दूरमापी कम जगह में संकोच नहीं करते। इन विधियों टी अनुकूलित करना होगाओ विभिन्न प्रयोगशालाओं और विभिन्न माउस मॉडल की जरूरत है फिट, लेकिन गर्भाशय टेलीमेटरी का लाभ अभी तक बाधाओं पल्ला झुकना।
इस पद्धति को लागू करने के लिए जब विचार किया जाना चाहिए कि कुछ सीमाएं हैं। दूर किया जा करने के लिए है कि मुख्य चुनौतियों में से एक ट्रांसमीटर के आरोपण के बाद भ्रूण की हानि की डिग्री है। कि सींग दूरमापी नियुक्ति के लिए चुना गया था अगर अंतर्गर्भाशयी टेलीमेटरी प्रारंभिक रिपोर्ट 9 में सभी ट्रांसजेनिक SK3 टी / टी और जंगली प्रकार चूहों की परवाह किए बिना एक या दोनों गर्भाशय सींग में भ्रूण नुकसान के कुछ डिग्री था। गर्भावस्था के दौरान दिन की पसंद का अनुकूलन दूरमापी शल्य चिकित्सा सफल अवधि गर्भधारण के हमारे दर में सुधार डाला गया था, लेकिन जब पिल्ले की एक पूरी पूरक प्राप्त कभी नहीं किया गया था। विशेष रूप से, SK3 टी / टी चूहों के लिए सर्जरी का इष्टतम दिन बेहतर प्रजनन परिणामों के साथ, जंगली प्रकार में उस से मतभेद WT चूहों, Sugge के लिए dpc8-9 बनाम SK3 टी / टी चूहों के लिए dpc12-13 पर संतोष व्यक्त कियासर्जरी प्रोटोकॉल की आवश्यकता हो सकती है कि स्टिंग ब्याज की प्रत्येक माउस मॉडल के लिए संशोधित किया जाना है। हमारे डेटा जनम पिल्ले की संख्या कुल मिलाकर अंतर्गर्भाशयी दबाव के साथ संबंध स्थापित नहीं किया था कि संकेत दिया। भ्रूण परिणामों भ्रूण परिणामों isoflurane के बजाय ketamine का उपयोग के साथ सुधार ने कहा है कि सुधार हुआ शल्य प्रयोगकर्ता द्वारा कौशल, और उनकी प्रयोगशाला में इस पद्धति को लागू किया है, जो दूसरों के साथ सुधार किया था। यह और अधिक प्रयोगशालाओं इस पद्धति का उपयोग के रूप में, ट्रांसमीटर प्रौद्योगिकी और अंतर्गर्भाशयी विश्लेषण सॉफ्टवेयर और अधिक परिष्कृत हो जाएगा कि उम्मीद है। यह निस्संदेह श्रम करने के लिए योगदान है कि तंत्र के अध्ययन में इस तकनीक की उपयोगिता अग्रिम जाएगा।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical Glue | 3M Vetbond | 1469SB | Tissue Adhesive--stored in Drierite |
| Absorbable 6-0 Sutures | Ethicon | J212H | Vicryl |
| Non-absorbable 6-0 Sutures | Ethicon | 8706H | Prolene |
| Water Jacket Blanket + Heating Pad | Gaymer | T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC | Specialized for rodents |
| Bead sterilizer | Keller | Z378577 | Steri 250 Sterilizer |
| Disecting Microscope | Nikon | SMZ754 | Fibre optic gooseneck external light source |
| Sterile Surgical Gloves--Latex | Cardinal Health Triflex | 2D7253 | |
| PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter | Data Sciences International | 270-0135-001 | TA11PA-C10 |
| Telemeter Reciever | Data Sciences International | 272-6001-001 | RPC-1 |
| Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum | Data Sciences International | 271-0147-141 | Analysis software |
| Diet Recovery Gel | Clear H2O | 72-01-5022 | Purified Soft Diet for Rodents |
| Tergazyme | Sigma-Aldrich | Z273287 | Enzyme detergent |
References
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