Introduction
Les souris sont dépendants de l'olfaction pour naviguer nouveaux environnements, trouver de la nourriture, pour reconnaître d'autres personnes, et le comportement sexuel 1-3. Il est essentiel que les enquêteurs d'établir si oui ou non les animaux de laboratoire ont un sens de l'odorat de fonctionnement avant d'administrer des tests de comportement qui impliquent la nourriture, l'interaction sociale, ou les odeurs destinés à obtenir une réponse de la souris. Anosmie ou de l'impossibilité de faire la distinction entre les différentes odeurs, peut entraîner des faux positifs ou négatifs dans une grande variété de paradigmes comportementaux, donc la capacité d'une souris pour détecter et distinguer les odeurs devraient être établis avant d'autres types de tests comportementaux sont effectuées.
Le test habituation / de déshabituation olfactive a été décrite pour la première dans les années 1980 4. Le test a été conçu pour être utilisé chez la souris par les Drs. Mu Yang et Jacqueline Crawley 5. Ceci est un test simple et peu coûteuse qui permet à l'enquêteur de l'ESTAblish qu'une souris peut détecter et différencier les odeurs. En plus de tester l'olfaction, ce test permet à l'enquêteur d'observer le comportement général de la souris et doit être fait au début d'un programme de tests. Les observations qualitatives concernant la locomotion de la souris, des signes d'anxiété, niveau d'activité, et la réponse aux odeurs sociaux contre les odeurs de nourriture peuvent signaler de nouveaux domaines dans lesquels des tests pourrait être effectuée.
Dans cet essai, des cotons-tiges trempés dans diverses odeurs sont présentés à une souris à trois reprises dans une rangée. Avec chaque présentation répétée d'une odeur, la souris sera habituer à le coton-tige, en dépensant moins de temps à étudier avec chaque présentation ultérieure. Quand une nouvelle odeur est présenté, déshabituation se produit, et une souris typique passer plus de temps à enquêter sur l'écouvillon, indiquant qu'il peut distinguer les odeurs actuels et antérieurs 5. Ce test est administré à une souris à la fois et comprend un 45 min acclimation période de suivi de 45 min de l'essai.
Bien que ce test est facile à réaliser, il peut être utilisé pour étudier les questions complexes sur le système olfactif de la souris. D'autres tests populaires de l'olfaction, tels que le test de la nourriture enfouie, établissent simplement la présence ou l'absence d'anosmie. Toutefois, le critère de discrimination et d'accoutumance olfactive permet à l'enquêteur de déterminer qu'une souris a non seulement la capacité de détecter les odeurs mais peut discriminer entre les différentes odeurs. Le motif de l'habituation et déshabituation a été utilisé pour établir que les nouveaux mutants peuvent discriminer entre 6,7 odeurs. Dans une étude surprenante, Fadool et ses collègues ont utilisé des mélanges complexes d'odeurs pour montrer que les souris avec délétion du gène ciblé du canal Kv1.3 sont «super smellers» qui peuvent discriminer les odeurs très similaires mieux que les souris normales 8.
Lors de l'examen d'un nouveau modèle de souris knock-out il est utile de Establish la présence d'un comportement normal pour les tâches sensorielles de base. Quand cela est fait au début d'un programme de tests, la discrimination fondée sur l'odeur et le test d'habituation donne un enquêteur l'occasion d'observer des comportements inhabituels. Ces observations pourraient éviter des résultats positifs ou faussement négatifs dans des essais ultérieurs qui sont attribuables à confondre caractéristiques du mutant. Comme les chercheurs continuent d'enquêter sur le comportement social la nécessité de vérifier la fonction olfactive de base devient de plus en plus importante. En plus d'examiner l'olfaction en lignées mutantes, ce test peut être utilisé pour répondre à des questions spécifiques telles que si un traitement pharmacologique augmente spécifiquement la réponse d'un animal à des stimuli sociaux ou d'odeurs si leur réponse augmente à tous les stimuli d'odeurs.
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Protocol
Les souris mâles adultes utilisés dans l'expérience suivante ont été générées et logés à l'Université Baylor à une température ambiante de 22 ° C, avec une lumière de 14 h et 10 h foncé (20:00-06h00 h) cycle diurne. Les souris ont reçu un accès ad libitum à la nourriture et de l'eau. Toutes les procédures aux souris étaient en conformité avec les Instituts nationaux de la santé Lignes directrices pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et le protocole des animaux a été approuvé par l'Université Baylor de protection des animaux et l'utilisation Comité. Les souris ont été testés en fin de matinée / début d'après midi. Pour toutes les procédures ci-dessous l'enquêteur doivent porter des gants pour éliminer les odeurs et éviter la contamination.
1. Préparation des odeurs non-sociaux
- Préparer les odeurs non-sociaux fraîches chaque jour de test.
Note: L'enquêteur doit utiliser des gants pour préparer les odeurs.- Remplissez 3 tubes de centrifugation avec 10 ml d'eau chacun.
- Pipette 100 pi d'extrait de banane dans un 15 ml & #160; tube conique et 100 ul de l'extrait d'amande dans un deuxième tube conique de 15 ml d'une dilution à 1: 100.
Remarque: Le troisième tube de 15 ml ne contenir de l'eau.
2. Préparation des odeurs sociaux
- Préparer les odeurs fraîches sociaux sur les essais du matin se produira. Obtenir odeurs sociaux de deux cages qui ne l'ont pas été nettoyés pendant au moins trois jours et contenir un nombre égal de souris. Obtenir odeurs sociaux de souris du même sexe que le sujet de test.
Note: Ce sont pour être stocké à température ambiante et doivent être utilisées dans 4-6 heures pour maintenir l'odeur forte et cohérente.- Déterminer combien odeur sociale des cotons-tiges doivent être créés: chaque souris testée sera présenté avec trois tampons des odeurs sociale 1, et trois des odeurs sociale 2.
- Préparer odeurs sociaux en essuyant un coton-tige en zigzag à travers le fond d'une cage sale. Secouez toute la literie excès accroché à la pointe.
- tampons de magasins dans de grandes jarres en verre à couvercle ou dans des béchers couverts avec du parafilm. Désigner un conteneur pour l'odeur sociale 1 et un second pour l'odeur sociale 2.
- Maintenir cages de source des odeurs à l'extérieur de la salle d'essais expérimentaux.
3. acclimatation de la souris test
- Mettez des gants et peser la souris pour être testé et placer individuellement dans une cage propre avec un couvercle métallique sur le dessus et la bouteille d'eau éliminée.
- Laisser la souris pour acclimater à la nouvelle cage pendant 45 min dans une autre pièce que la salle d'examen. Assurez-vous qu'il n'y a pas d'odeurs inhabituelles ou des bruits dans la chambre.
- Comme test prend environ 45 min, décaler les temps d'acclimatation en mettant la prochaine souris pour être testé dans une cage propre pour acclimater droit avant de tester la souris actuelle.
4. Préparation de la salle d'essai
- Placez écouvillons frais de coton, ruban de laboratoire, les flacons contenant des tampons d'odeur sociaux, les tubes de nsur-sociale odeurs, une micro-pipette, deux minuteurs, et une bouteille de déchets avec un couvercle dans la salle d'examen.
- Assurez-vous que la salle de test est raisonnablement exempts d'odeurs, les bruits forts, et la lumière vive. Ne pas porter de Cologne ou lotions parfumées.
Remarque: L'observateur ne devrait pas être le chewing-gum ou des bonbons pendant la période d'essai et doit essayer de limiter leur exposition à des aliments de forte odeur.
5. Procédure de test
- Apportez la souris acclimatés dans sa cage dans la salle d'examen et de placer la cage sur le comptoir à une hauteur qui est confortable pour la visualisation en position assise.
- Présenter chaque odeur 3 fois de suite pendant 2 minutes à chaque fois. Utilisez l'ordre de présentation qui peut être trouvé dans le tableau 1.
- Pipette 50 ul de substance odorante dans le parfum à tester à la pointe de la coton-tige et re-cap de la source de l'odeur. Soulevez le haut du fil de la cage et insérez l'extrémité non parfumé, de bois de la tige dans l'ouverture de la bouteille d'eau, Pushing à travers la longueur de la face inférieure de la toile vers le haut. Évitez de toucher le bout de coton pour quoi que ce soit, y compris les doigts, de sorte que la contamination des odeurs est évitée.
- Continuer à tirer la tige à travers l'ouverture de la bouteille d'eau jusqu'à environ 1 pouce de l'extrémité de coton pend dans la cage. Apposer la fin de l'écouvillon en bois sur le côté de la cage en utilisant du ruban de laboratoire.
Remarque: Veillez à ne pas laisser le couvercle retombe sur la cage, causant un bruit fort qui perturberait la souris de test. - Commencer immédiatement moment pendant 2 min. Utilisez une minuterie pour chronométrer la présentation de 2 min. Noter le temps cumulé passé renifler l'odeur pendant le procès de 2 min. Comptez le comportement de reniflement de l'animal à l'aide d'un chronomètre séparé. Sniffing active est définie lorsque le nez de l'animal est orientée vers la pointe de coton avec son nez ~ 2 cm ou plus près de la pointe.
- Après l'achèvement de chaque essai, soulevez le couvercle de fil et enlever le coton-tige en le tirant vers le bas par l'ONUderside du couvercle (ce qui évite la contamination des odeurs en empêchant la pointe de coton de toucher le fil). Sceller le tampon utilisé dans un 500 de la bouteille de déchets.
- Préparer et insérez le suivant écouvillon et commencez à chronométrer. Laissez environ 1 min entre chaque intervalle entre les essais. Continuer jusqu'à ce que chaque parfum a été présenté trois fois de suite, pendant 2 minutes à chaque fois.
- Une fois que la souris a terminé tous les essais, vider la bouteille de déchets contenant des tampons de coton utilisés dans une poubelle à l'extérieur de la salle d'essai. Retour de la souris à sa cage.
6. Analyse
- Analyser les données pour chaque groupe par condition de l'odeur en utilisant ANOVA à deux voies suivie par Newman-Keuls ou un test similaire post hoc pour déterminer accoutumance importante (moins de temps renifler successives mêmes odeurs), et dishabitutation (plus de temps reniflant une odeur de neuf).
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Representative Results
Suivant le protocole décrit, les résultats ont été enregistrés à l'aide de dix adultes (de jour postnatal 90-120) mâles C57BL / 6J et huit hommes FVB souche mixte fond (jour postnatal 50-70). Le test a été effectué par un seul enquêteur sur plusieurs jours. Chaque point sur les graphiques représente le temps moyen passé enquête une odeur.
Lorsque le coton-tige trempé dans de l'eau est d'abord introduit, les souris passent beaucoup de temps à étudier ce roman objet (Figure 1: trois premiers points de données). Avec chaque présentation successive, moins de temps est consacré à l'enquête l'écouvillon, indiquant accoutumance. Quand une nouvelle odeur est introduit, il ya une légère hausse dans le temps consacré à l'enquête l'écouvillon, indiquant que les souris peuvent distinguer entre la nouvelle odeur et la précédente (Figure 1: points de données d'amande). Encore une fois, à chaque présentation successive, moins de temps est consacré à l'enquête de l'odeur. Les souris montrent un important diminution en temps renifler l'écouvillon de l'eau au cours des trois essais F (2,18) = 3,8, p <0,05. Ils montrent une tendance similaire lorsque présenté à plusieurs reprises avec l'amande odeur F (2,18) = 3,6, p <0,05. Par la troisième odeur on manifeste accoutumance, mais par ce procès les animaux atteignent un effet de sol (Figure 1: points de données de la banane). L'effet de sol est lorsque le comportement est si faible que la capacité de mesurer le comportement tout inférieure est pas fiable. Ils ne montrent pas un changement au cours des trois essais lorsqu'ils sont présentés avec la banane odeur F (2,18) = 2,5, p <0,1. Cependant, une ANOVA à deux voies pour les 9 présentations d'odeur montrent un effet significatif au fil du temps F (8,72) = 3,8, p <0,001.
Le même schéma d'accoutumance et de la discrimination peut être vu avec les odeurs sociaux comme avec les odeurs non-sociaux. Cependant, les souris passent plus de temps à étudier les odeurs sociaux (Figure 2). Il ya une diminution significative du temps consacré à renifler til odeurs sociaux lorsque tous les 6 essais ont été combinées F (2,18) = 6,1, p <0,01. Cependant, il y avait un effet marginal sur la première de trois essais F (2,18) = 3,0, p = 0,076. Cela donne à penser qu'il y avait une certaine accoutumance mais pas une quantité significative de la réduction du temps de renifler la première odeur sociale. Il y avait une réduction significative de la quantité de temps que l'animal a étudié l'odeur sociale F (2,18) = 6,1, p <0,01 au cours de la deuxième présentation d'une odeur social.
Nous avons répété la méthode dans une souche FVB mixte fond masculin. Lorsque le coton-tige trempé dans de l'eau est d'abord introduit, les souris passent beaucoup de temps à étudier ce roman objet (Figure 3: trois premiers points de données). Avec chaque présentation successive, moins de temps est consacré à l'enquête l'écouvillon, indiquant accoutumance. Quand une nouvelle odeur est introduit, il ya une légère hausse dans le temps consacré à l'enquête l'écouvillon, indiquant que les souris peuvent distinguer entre la nouvelle odeur une la précédente (Figure 3: points de données d'amande). Encore une fois, à chaque présentation successive, moins de temps est consacré à l'enquête de l'odeur. Les souris montrent une diminution significative dans le temps renifler l'écouvillon de l'eau au cours des trois essais F (2,14) = 13,3, p <0,001. Ils montrent une tendance similaire lorsque présenté à plusieurs reprises avec l'odeur d'amande F (2, 14) = 12,7, p <0,001. Dans cette souche il y avait encore une différence significative entre les trois essais. Par la troisième odeur on manifeste habituation (Figure 3: points de données Banana) mais en raison de l'effet de sol, ils ne montrent pas de changement au cours des trois essais lorsqu'ils sont présentés avec la banane odeur F (2,14) = 3.04, p = 0,08. Cependant, une ANOVA à deux voies pour les 9 présentations d'odeur montrent un effet significatif au fil du temps F (8,56) = 9,6, p <0,001.
Le même schéma d'accoutumance et la discrimination n'a pas été vu avec des odeurs sociaux comme avec les odeurs non-sociaux. Il n'y avait pas significativediminution du temps passé en reniflant les odeurs sociaux lorsque tous les 6 essais ont été combinées F (5,35) = 0,16, p = 0,97. Les données suggèrent que les souris ne s'y habituent pas à des présentations répétées de deux odeurs sociaux.
Figure 1: temps moyen passé à enquêter sur les odeurs non-sociaux pour les mâles C57BL / 6J Chaque point de données représente le temps moyen consacré à l'enquête de l'animal l'odeur non-social particulier.. Les barres d'erreur représentent l'erreur standard de la moyenne. Les astérisques (*) indiquent une différence significative dans lequel le groupe affiche habituation (p <0,05).
Figure 2:. Temps moyen passé enquête odeurs sociaux pour les souris C57BL / 6J mâles Chaque point de données représente le temps moyen spen les animauxt enquêter sur l'odeur social particulier. Les barres d'erreur représentent l'erreur standard de la moyenne. Les astérisques (*) indiquent une différence significative dans lequel le groupe affiche habituation (p <0,05).
Figure 3: le temps moyen consacré à l'enquête odeurs non-sociaux pour FVB souche mixte fond mâle Chaque point de données représente le temps moyen consacré à l'enquête de l'animal l'odeur non-social particulier.. Les barres d'erreur représentent l'erreur standard de la moyenne. Les astérisques (*) indiquent une différence significative dans lequel le groupe affiche habituation (p <0,05).
Figure 4: temps moyen passé à enquêter sur les odeurs sociaux pour FVB souche mixte fond masculin chaque point de données repré.ts le temps moyen consacré à l'enquête de l'animal l'odeur social particulier. Les barres d'erreur représentent l'erreur standard de la moyenne.
| Odeur |
| Eau |
| Eau |
| Eau |
| Amande |
| Amande |
| Amande |
| Banane |
| Banane |
| Odeur sociale connaissent pas 1 |
| Odeur sociale connaissent pas 1 |
| Odeur sociale connaissent pas 1 |
| Odeur sociale connaissent pas 2 |
| Odeur sociale connaissent pas 2 |
| Odeur sociale connaissent pas 2 |
Tableau 1
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Discussion
Les résultats fournis dans le présent document sont optimales pour les souris. Les souris démontrent une réponse forte à un roman odeur, puis habituent rapidement. Une des étapes clés de cette méthode est la préparation des odeurs. L'enquêteur doit prendre grand soin d'isoler les odeurs un de l'autre pour éviter la contamination. Un autre aspect important est la présentation du coton-tige. L'enquêteur doit résoudre le meilleur emplacement de la pointe de coton de sorte que la souris peut enquêter sur la pointe, mais ne se déchire pas à la pointe. Une composante importante de l'essai est la sélection des odeurs. Nous avons présenté trois odeurs non-sociaux, mais il ne serait pas difficile d'inclure les odeurs supplémentaires. Une mise en garde est de choisir les odeurs qui sont sensiblement différents les uns des autres. On peut observer un "effet de sol" si les odeurs semblables sont présentés de manière séquentielle. En outre, les souris peuvent commencer à réduire leur réponse lorsqu'ils sont présentés avec un trop grand nombre de nouvelles odeurs. Si l'enquêteur veut inclure uneodeurs SUPPLEMENTAIRES alors il / elle peut vouloir inclure des jours supplémentaires de tests. Il faut environ une heure pour tester chaque souris. En outre, il faut résoudre la sélection des odeurs chez les souris de contrôle avant de les inclure comme condition expérimentale.
L'accoutumance olfactive / déshabituation est un test important d'inclure lors d'enquêtes sur le comportement social. Le test de comportement social à trois chambres est communément utilisé pour examiner les déficits de comportement social chez les souris. Ce test comprend un état où l'animal expérimental enquête sur un objet nouveau et une souris de roman qui sont placés sous une tasse à différentes extrémités de la chambre. Le test peut également inclure une condition où une souris selon l'invention est placé sous une coupelle et une autre souris (souris familier) est placé sous l'autre coupelle. L'enquêteur examine ensuite si la souris expérimentale peut différencier entre les deux. Depuis olfaction est les principales souris modalité sensorielle utilisent pour identifier d'autres souris 9-11, Altérées olfaction pourrait nuire à leur capacité de cette tâche. Olfaction facultés affaiblies pourrait entraîner une mauvaise interprétation des données. Par exemple, l'expérimentateur peut observer que la souris ne passe pas plus de temps avec le roman la souris par rapport à la souris familier. Cela peut paraître pour démontrer les preuves des déficits sociaux ou de la mémoire sociale altérée chez les souris testée. Cependant, une interprétation plus simple peut être que l'animal ne peut pas détecter correctement l'animal.
L'habituation / test de déshabituation olfactive a été utile dans la clarification des modèles murins de l'autisme. Un modèle de souris souvent utilisé de l'autisme est le + tf / J (BTBR) BTBR souche de souris T. Ceci est une souche pure qui a une forte validité apparente aux trois caractéristiques comportementales essentielles de l'autisme. Toutefois, une préoccupation a été de savoir si leurs déficits de comportement sociaux sont dus à un système olfactif facultés affaiblies. Yang et ses collègues ont étudié si la souche BTBR a nui à l'olfaction grâce à l'utilisation de l'habituation test / de déshabituation 12. Ils ont utilisé trois présentations de l'eau, l'odeur d'amande, banane et l'odeur de leurs odeurs non sociales. Ils ont ensuite utilisé une odeur sociale préparé à partir de 129 souches / SvlmJ et B6 souris. La souche BTBR affiché accoutumance et déshabituation aux odeurs non sociales. La souris a démontré l'habitation à la première odeur sociale, mais n'a pas montré déshabituation à la seconde odeur sociale. Une possibilité est qu'ils ne peuvent pas être en mesure de faire la différence entre les différentes odeurs sociaux. Cela pourrait nuire à leur capacité dans un test de comportement social lorsque deux stimuli sociaux sont présentés. Ceci est une considération importante lors de l'exploration de l'autisme modèles de souris différentes et pourrait fournir de nouvelles perspectives sur ce qui est altérée chez ces souris.
Accoutumance et déshabituation sont des mécanismes non associatifs base de l'apprentissage. Ces principes d'apprentissage ont été mises en évidence dans de nombreux types d'organismes simples et complexes 13,14. Toutefois, ces mécanismesde l'apprentissage ont été étudiés rarement dans le comportement olfactif de la souris, mais ce système est important de mesurer dans le cadre d'une plus grande batterie de tests comportementaux. Ce test est peu coûteux à installer et à terme, ne nécessite qu'une seule journée d'essais, et plusieurs souris peut être testé en une journée. L'objectif principal de cet essai est d'examiner la fonction olfactive. Les résultats du test peuvent aider à réduire les erreurs d'interprétation de tests de comportement sociaux et d'autres tests qui comprennent une composante de l'odeur.
Lors de l'examen le comportement de la souris dans toute tâche il ya plusieurs considérations. La souche de souris, le sexe des animaux, et l'heure du jour sont tous des facteurs qui doivent être examinés. Si l'enquêteur utilise une souche mixte alors il peut y avoir une plus grande variabilité dans le comportement d'enquête des odeurs. Nous avons présenté des données provenant d'une souche FVB mixte. Ils se sont bien comportés dans les tests d'odeurs non-sociaux (Figure 3). Bien, ils ont enquêté sur l'odeur social pour un montant élevé of temps, ils ne démontrait pas l'accoutumance à des présentations répétées d'odeurs sociaux (figure 4). Les souris peuvent avoir besoin de subir d'autres essais pour démontrer l'accoutumance. Nous avons fourni une méthode générale qui devrait être utile pour la plupart des souches. Cependant, les facteurs ci-dessus doivent être considérés lors de l'examen du comportement de toute souche pour la première fois. En examinant la performance des animaux témoins l'enquêteur peut avoir besoin d'ajuster les odeurs sélectionnés, le nombre de fois l'odeur est présenté, les conditions d'éclairage, moment de la journée pour les tests, et le sexe de l'animal. Ceci est vrai pour tout autre comportement de la souris et doit être considérée dans ce type de test. Nous avons inclus les odeurs qui sont facilement disponibles à l'achat. Si l'enquêteur craint qu'ils ne utilisent pas les odeurs pures, elles peuvent alors envisager de commander auprès de Sigma-Aldrich. Ils ont une base de données des matières premières au cours de 1600 de l'arôme. Cela permettra à l'enquêteur à utiliser une odeur pure, mais le coût peut êtreprohibitif pour certains laboratoires.
Il ya certaines conditions d'essai l'expérimentateur peut envisager. Dans de nombreux tests l'animal est acclimaté à la salle il sera testé. Dans ce protocole, nous acclimatés l'animal expérimental dans une chambre et testé dans l'autre. Cela va provoquer une certaine excitation quand il est déplacé à la nouvelle salle. Nous avons effectué la procédure de cette façon parce que si toutes les souris sont logés dans la même chambre que les souris de contrôle, puis toutes les souris seront exposés aux nouvelles odeurs. Il ya deux options que l'expérimentateur peut envisager. Le premier est ce que nous avons décrit ci-dessus. L'autre est de déplacer l'animal dans la chambre pour laisser acclimater à la salle puis commencer à tester. Après le test est terminé alors l'animal suivant placé dans la chambre, puis autorisé à acclimater. Cela est possible, mais serait presque doubler la durée de l'expérience. L'option nous avons utilisé a été de déplacer le test animal à la chambre d'essai uniquement au cours de l'expérience. Cela se traduirait par less temps d'essai. Il ya un équilibre à l'efficacité des tests et le souci de l'excitation nouveauté induite. L'expérimentateur doit déterminer qui est le mieux pour leur expérience.
Dans lequel ce protocole, une personne scores le comportement en temps réel, il est devenu de plus en plus populaire pour étudier le comportement des animaux avec des caméras pour enregistrer leur comportement. Il existe plusieurs avantages à l'utilisation d'enregistrements vidéo du comportement animal. On est qu'un enquêteur humaine dans la salle peut influencer le comportement de la souris. En effet, une étude a révélé que d'avoir un expérimentateur mâle peut influencer la sensibilité à la douleur de la souris testée 15. Une autre préoccupation est que les résultats ne sont que d'un enquêteur. Grâce à l'utilisation des enregistrements vidéo plusieurs observateurs peuvent marquer comportement. On peut alors mesurer le degré de fiabilité le score est entre les observateurs, qui se traduira par une des mesures plus cohérentes. Un autre avantage est que la vitesse de trame des vidéos peut être réduite et peut proVide une mesure plus précise du comportement. L'utilisation de caméras peut être facilement introduite dans ce procédé. La configuration dépendra de la configuration de l'espace de laboratoire. L'inconvénient de l'utilisation de caméras est que le temps de notation va augmenter de manière significative. Exiger deux ou plusieurs observateurs de marquer le comportement va augmenter le temps nécessaire pour produire les résultats. Cela permettra d'accroître la charge de travail pour le laboratoire et dans certaines situations, peut être prohibitif si le dépistage de nombreuses lignes de knock-out. Un autre inconvénient est que plus d'une caméra peut être nécessaire. La caméra sera dans une position fixe. Si la souris enquête sur l'odeur d'une manière qui interdit à l'observateur de voir l'animal, puis le procès peut avoir besoin d'être éliminé. Ceci est moins préoccupante avec une personne qui peut facilement ajuster leur point de vue de l'animal en ajustant leur ligne de mire. Cependant, la méthode décrite dans ce protocole peut facilement être ajusté pour inclure des enregistrements vidéo sans altération significative au protocole, nous DESCRibe.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
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