Introduction
I topi sono dipendenti olfatto per la navigazione nuovi ambienti, trovare cibo, per riconoscere gli altri individui, e il comportamento sessuale 1-3. È essenziale che gli investigatori stabilire se animali da esperimento hanno un senso dell'olfatto funzionamento prima di somministrare test comportamentali che coinvolgono il cibo, interazione sociale, o eventuali odori destinati a provocare una risposta dal mouse. Anosmia o l'incapacità di distinguere tra diversi odori, potrebbe causare falsi positivi o negativi in una vasta gamma di paradigmi comportamentali, quindi la capacità di un mouse per rilevare e distinguere gli odori devono essere stabiliti prima che vengano eseguiti altri tipi di test comportamentali.
Il test assuefazione / Dishabituation olfattivo è stato descritto nel 1980 4. Il test è stato adattato per l'uso nei topi da DRS. Mu Yang e Jacqueline Crawley 5. Questo è un test semplice ed economico che permette al ricercatore di estáblish che un mouse in grado di rilevare e distinguere tra gli odori. Oltre ai test olfattivo, questo test permette al ricercatore di osservare il comportamento generale del mouse e dovrebbe avvenire precocemente in un regime di test. Osservazioni qualitative riguardanti la locomozione del topo, segni di ansia, livello di attività, e la risposta agli odori sociali contro gli odori degli alimenti possono segnalare nuovi settori in cui il test potrebbe essere effettuata.
In questo test, tamponi di cotone immerso in vari odori sono presentati a un mouse per tre volte consecutive. Con ogni presentazione ripetuta di un odore, il mouse abituarsi al tampone di cotone, spendendo meno tempo indagando con ogni presentazione successiva. Quando un nuovo odore è presentata, Dishabituation si verifica, e un tipico mouse trascorrere più tempo indagando il tampone, indicando che può discriminare tra gli odori attuali e precedenti 5. Questa prova viene somministrato a un topo alla volta e comprende un 45 min accperiodo limation seguita da 45 minuti di prove.
Anche se questo test è di facile esecuzione può essere usato per studiare domande sofisticate sul sistema del mouse olfattivo. Altri test popolari dell'olfatto, come il test di cibo sepolto, semplicemente stabilire la presenza o l'assenza di anosmia. Tuttavia, la discriminazione e assuefazione prova olfattiva permette al ricercatore di determinare che un mouse ha non solo la capacità di rilevare gli odori ma può discriminare tra differenti odori. Il modello di assuefazione e Dishabituation è stato utilizzato per stabilire che i nuovi mutanti possono discriminare tra odori 6,7. In uno studio sorprendente, Fadool e colleghi hanno usato miscele complesse di odori per dimostrare che i topi con delezione del gene targeting del canale Kv1.3 sono "super smellers" che possono discriminare gli odori molto simili meglio di topi normali 8.
Nell'esaminare un nuovo modello di topo knockout è utile establish presenza di un comportamento normale per compiti sensoriali di base. Una volta fatto presto in un regime di test, la discriminazione odore e prova assuefazione dà un investigatore la possibilità di osservare eventuali comportamenti insoliti. Queste osservazioni potrebbero prevenire risultati falsi positivi o negativi in prove successive che sono attribuibili a confondere caratteristiche del mutante. Come i ricercatori continuano a studiare il comportamento sociale la necessità di verificare la funzione olfattiva di base diventa sempre più importante. Oltre a esaminare l'olfatto in linee mutanti, questo test può essere utilizzato per affrontare questioni specifiche, come se un trattamento farmacologico specifico aumenta la risposta di un animale a stimoli sociali odore o se i loro aumenti di risposta a tutti gli stimoli odore.
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Protocol
I topi maschi adulti utilizzati per la seguente esperimento sono stati generati e ospitati presso la Baylor University ad una temperatura ambiente di 22 ° C, con una luce 14 ore e 10 ore scuro (20:00-6:00 h) ciclo diurno. I topi sono stati dati ad libitum l'accesso al cibo e all'acqua. Tutte le procedure per i topi erano in conformità con il National Institutes of linee guida sanitarie per la cura e l'uso di animali da laboratorio e il protocollo di origine animale è stato approvato dal Baylor University Animal Care and Use Committee. I topi sono stati testati nella tarda mattinata / primo pomeriggio. Per tutte le procedure sotto l'investigatore deve indossare i guanti per eliminare gli odori e prevenire la contaminazione.
1. Preparazione di odori Non-sociali
- Preparare gli odori non sociali freschi ogni giorno di test.
Nota: L'investigatore dovrebbe usare i guanti per preparare gli odori.- Riempire 3 tubi da centrifuga con 10 ml di acqua ciascuno.
- Dispensare 100 ml di estratto di banana in un 15 ml & #160; tubo conico e 100 ml di estratto di mandorle in un secondo tubo da 15 ml di una diluizione 1: 100.
Nota: Il terzo tubo 15 ml contiene solo acqua.
2. Preparazione di odori sociali
- Preparare gli odori sociali fresche sul avverrà il test mattina. Ottenere odori sociali da due gabbie che non sono stati puliti per almeno tre giorni e contengono numeri uguali di topi. Ottenere odori sociali da topi dello stesso sesso come cavia.
Nota: questi devono essere conservati a temperatura ambiente e deve essere utilizzato entro 4-6 ore per mantenere l'odore forte e coerente.- Determinare quanti odore sociale tamponi di cotone devono essere creati: ogni topo in fase di test si presenterà con tre tamponi da odori sociali 1, e tre da odori sociali 2.
- Preparare gli odori sociali strofinando un tampone di cotone in un zig-zag attraverso il fondo di una gabbia sporca. Scrollarsi di dosso qualsiasi biancheria da letto in eccesso aggrappato alla punta.
- Conservare tamponi in grandi vasi di vetro con coperchi o in bicchieri coperto con parafilm. Designare un contenitore per l'odore sociale 1 e un secondo per l'odore sociali 2.
- Mantenere gabbie fonte dell'odore al di fuori della sala prove sperimentali.
3. acclimatazione del mouse test
- Indossare guanti e pesare il mouse per essere testato e posizionare singolarmente in una gabbia pulita con un coperchio filo sulla parte superiore e la bottiglia d'acqua rimossa.
- Lasciare che il mouse si adatti alla nuova gabbia per 45 minuti in una stanza diversa da quella sala prove. Verificare che non vi siano odori insoliti o rumori nella stanza.
- Come test dura circa 45 minuti, scaglionare i tempi di acclimatazione mettendo il prossimo mouse per essere testato in una gabbia pulita di acclimatare destra prima di testare il mouse corrente.
4. Preparazione della camera Testing
- Posizionare tamponi freschi di cotone, nastro di laboratorio, le bottiglie contenenti tamponi odore sociali, i tubi di non-sociali odori, una micropipetta, due timer, e una bottiglia di rifiuti con un coperchio in sala prove.
- Assicurarsi che la sala prove è ragionevolmente privo di odori, rumori forti, e la luce brillante. Non indossare colonia profumate o lozioni.
Nota: L'osservatore non deve essere gomme da masticare o caramelle durante il periodo di prova e dovrebbe cercare di limitare la loro esposizione a forti alimenti odori.
5. Procedura di test
- Portare il mouse acclimatati nella sua gabbia nella stanza di prova e posizionare la gabbia sul banco ad una altezza che è comodo per la visualizzazione da seduti.
- Presentare ogni odore 3 volte di fila per 2 minuti ogni volta. Utilizzare l'ordine di presentazione che si può trovare nella tabella 1.
- Pipettare 50 ml di odorizzante nel profumo, da sottoporre alla punta del tampone di cotone e tappare la fonte dell'odore. Sollevare la parte superiore del filo della gabbia e inserire il inodore, fine di legno del tampone nell'apertura bottiglia d'acqua, pushing lunghezza attraverso dalla parte inferiore del filo verso l'alto. Evitare di toccare la punta di cotone per qualsiasi cosa, anche le dita, in modo che la contaminazione odore è evitata.
- Continuare a disegnare il tampone attraverso l'apertura della bottiglia di acqua fino a circa 1 pollice di fine cotone pende nella gabbia. Fissare la fine di legno del tampone a lato della gabbia con del nastro laboratorio.
Nota: Fare attenzione a non lasciare che il coperchio ricadere sulla gabbia, provocando un forte rumore che possa disturbare il mouse test. - Iniziare immediatamente la sincronizzazione per 2 min. Utilizzare uno timer per cronometrare il 2 min presentazione. Registrare il tempo totale trascorso ad annusare l'odore durante il processo 2 min. Contare il comportamento sniffing dell'animale utilizzando un cronometro separato. Sniffing attivo viene definita quando il naso dell'animale è orientata verso la punta di cotone con il suo naso ~ 2 cm più vicino alla punta.
- Dopo il completamento di ogni prova, sollevare il coperchio filo e rimuovere il tampone di cotone tirandolo verso il basso attraverso l'ONUderside del coperchio (questo evita la contaminazione odore impedendo la punta di cotone di toccare il filo). Sigillare il tampone utilizzato in bottiglia rifiuti una da 500 ml.
- Preparare e inserire il successivo tampone e iniziare il cronometraggio. Lasciare circa 1 minuto tra ogni intervallo inter-trial. Continuare fino a quando ogni profumo è stato presentato per tre volte di fila, per 2 minuti ogni volta.
- Una volta che il mouse ha completato tutte le prove, svuotare il flacone rifiuti contenenti i tamponi di cotone usati in un cestino al di fuori della sala prove. Ritorna il mouse per sua gabbia casa.
6. Analisi
- Analizzare i dati per ogni gruppo per condizione odore utilizzando due ANOVA seguito da Newman-Keuls o un test simile post hoc per determinare significativi assuefazione (meno tempo sniffing stessi odori successivi), e dishabitutation (più tempo annusando un odore nuovo).
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Representative Results
Seguendo il protocollo descritto, i risultati sono stati registrati usando dieci adulti (giorno postnatale 90-120) maschi C57BL / 6J e otto FVB misto sfondo ceppo maschio (giorno postnatale 50-70). Il test è stato effettuato da un singolo operatore su più giorni. Ogni punto sui grafici rappresenta il tempo medio trascorso investigare un odore.
Quando viene introdotto il tampone di cotone imbevuto di acqua, i topi trascorrono gran parte del tempo a studiare questo nuovo oggetto (Figura 1: primi tre punti dati). Con ogni presentazione successiva, meno tempo viene speso indagare il tampone, indicando assuefazione. Quando si introduce un nuovo odore, vi è un incremento nel tempo trascorso indagare il tampone, indicando che i topi possono discriminare tra il nuovo odore e quello precedente (Figura 1: punti dati mandorla). Ancora una volta, con ogni presentazione successiva, meno tempo viene speso indagare l'odore. I topi mostrano una significativa decrease in tempo annusando il tampone di acqua sopra il tre prove F (2,18) = 3.8, p <0.05. Essi mostrano un andamento simile quando ripetutamente presentato con la mandorla odore F (2,18) = 3.6, p <0.05. Con il terzo odore che stanno ancora manifestando abitudine, ma da questa prova gli animali stanno raggiungendo un effetto piano (Figura 1: punti dati Banana). L'effetto pavimento è quando il comportamento è così bassa che la capacità di misurare il comportamento qualsiasi inferiore non è affidabile. Essi non mostrano una variazione sui tre prove quando sono presentati con la banana odore F (2,18) = 2.5, p <0,1. Tuttavia, una ANOVA a due vie per tutti i 9 presentazioni di odore mostrano un effetto significativo nel tempo F (8,72) = 3.8, p <0.001.
Lo stesso modello di assuefazione e di discriminazione può essere visto con gli odori sociali come con gli odori non sociali. Tuttavia, i topi passano più tempo indagare gli odori sociali (Figura 2). Vi è una significativa riduzione del tempo trascorso sniffing tegli odori sociali quando tutti i 6 studi sono stati combinati F (2,18) = 6.1, p <0.01. Tuttavia, vi è stato un effetto marginale sul primo tre prove F (2,18) = 3.0, p = 0,076. Questo suggerisce che ci fosse qualche assuefazione, ma non statisticamente significativa quantità di riduzione del tempo di annusare l'odore di prima sociale. C'è stata una significativa riduzione della quantità di tempo l'animale indagato l'odore sociale F (2,18) = 6.1, p <0.01 durante la seconda presentazione di un odore sociale.
Abbiamo ripetuto il metodo in un misto sfondo FVB ceppo maschile. Quando viene introdotto il tampone di cotone imbevuto di acqua, i topi trascorrono gran parte del tempo a studiare questo nuovo oggetto (Figura 3: primi tre punti dati). Con ogni presentazione successiva, meno tempo viene speso indagare il tampone, indicando assuefazione. Quando si introduce un nuovo odore, vi è un incremento nel tempo trascorso indagare il tampone, indicando che i topi possono discriminare tra il nuovo odore unnd quello precedente (Figura 3: punti dati mandorla). Ancora una volta, con ogni presentazione successiva, meno tempo viene speso indagare l'odore. I topi mostrano una diminuzione significativa nel tempo annusando il tampone di acqua sopra il tre prove F (2,14) = 13,3, p <0.001. Essi mostrano un andamento simile quando ripetutamente presentato con la mandorla odore F (2, 14) = 12,7, p <0.001. In questo ceppo c'era ancora una differenza significativa tra i tre prove. Con il terzo odore che stanno ancora manifestando assuefazione (Figura 3: punti dati Banana), ma a causa dell'effetto piano non mostrano una variazione sui tre prove quando sono presentati con la banana odore F (2,14) = 3.04, p = 0.08. Tuttavia, una ANOVA a due vie per tutti i 9 presentazioni di odore mostrano un effetto significativo nel tempo F (8,56) = 9.6, p <0.001.
Lo stesso modello di assuefazione e discriminazione non è stato visto con gli odori sociali come con gli odori non sociali. Non c'era un significativodiminuzione del tempo speso ad annusare gli odori sociali quando tutte le 6 prove sono stati combinati F (5,35) = 0,16, p = 0,97. I dati suggeriscono che i topi non abituano alle ripetute presentazioni di due odori sociali.
Figura 1: tempo medio trascorso indagando odori non sociali per maschi C57BL / 6J Ogni punto rappresenta il tempo medio che l'animale ha trascorso indagando la odore particolare non sociale.. Le barre di errore rappresentano l'errore standard della media. Gli asterischi (*) indicano una differenza significativa in cui il gruppo è la visualizzazione di assuefazione (p <0,05).
Figura 2:. Tempo medio speso indagando odori sociali per maschi C57BL / 6J Ogni punto rappresenta il tempo medio delle spen animalit indagare il particolare odore sociale. Le barre di errore rappresentano l'errore standard della media. Gli asterischi (*) indicano una differenza significativa in cui il gruppo è la visualizzazione di assuefazione (p <0,05).
Figura 3: tempo medio trascorso indagando odori non sociali per il maschio mixed-background FVB ceppo Ogni punto di dati rappresenta frattempo l'animale ha trascorso indagando la odore particolare non sociale.. Le barre di errore rappresentano l'errore standard della media. Gli asterischi (*) indicano una differenza significativa in cui il gruppo è la visualizzazione di assuefazione (p <0,05).
Figura 4: tempo medio trascorso indagando odori sociali per maschio mixed-background FVB ceppo Ogni punto dati rappre.ts frattempo l'animale ha trascorso indagando la odore particolare sociale. Le barre di errore rappresentano l'errore standard della media.
| Odore |
| Acqua |
| Acqua |
| Acqua |
| Mandorla |
| Mandorla |
| Mandorla |
| Banana |
| Banana |
| Unfamiliar odore sociale 1 |
| Unfamiliar odore sociale 1 |
| Unfamiliar odore sociale 1 |
| Unfamiliar odori sociali 2 |
| Unfamiliar odori sociali 2 |
| Unfamiliar odori sociali 2 |
Tabella 1
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Discussion
I risultati forniti nel presente documento sono ottimali per i topi. I topi dimostrano una forte risposta ad un romanzo odore, quindi abituare rapidamente. Una delle fasi principali di questo metodo è la preparazione degli odori. L'investigatore deve fare molta attenzione per isolare gli odori gli uni dagli altri per evitare contaminazioni. Un altro aspetto fondamentale è la presentazione del tampone di cotone. L'investigatore deve risolvere la migliore posizione della punta di cotone in modo che il mouse può indagare sulla punta, ma non strappare alla punta. Una componente importante del test è la selezione degli odori. Abbiamo presentato tre odori non sociali, ma non sarebbe difficile da includere odori supplementari. Un avvertimento è scegliere odori che sono notevolmente diversi tra loro. Si può osservare una "effetto pavimento" se gli odori simili sono presentati in sequenza. Inoltre, i topi possono iniziare a ridurre la loro risposta quando viene presentato con troppi nuovi odori. Se l'investigatore vuole includere unodori SUPPLEMENTARI poi lui / lei può decidere di includere ulteriori giorni di test. Ci vuole circa un'ora per verificare ogni mouse. Inoltre, si deve risolvere la selezione di odori in topi di controllo prima di includerli come condizione sperimentale.
L'assuefazione olfattiva / Dishabituation è un test importante includere nell'ambito delle indagini comportamento sociale. I tre camera di prova il comportamento sociale è comunemente utilizzato per esaminare i deficit comportamentali sociali nei topi. Questo test include una condizione in cui l'animale sperimentale indaga un nuovo oggetto e un mouse romanzo che si applica una tazza a diverse estremità della camera. Il test può anche includere una condizione in cui un romanzo mouse è posto sotto una tazza e un altro mouse (topo familiare) è posta sotto l'altra tazza. L'investigatore esamina poi se il mouse sperimentale in grado di distinguere tra i due. Dal momento che l'olfatto è il principale modalità sensoriale topi utilizzano per identificare altri topi 9-11, L'olfatto alterato potrebbe pregiudicare la loro capacità in questo compito. L'olfatto compromessa potrebbe causare errata interpretazione dei dati. Per esempio, lo sperimentatore può osservare che il mouse non passa più tempo con il romanzo del mouse rispetto al mouse familiare. Ciò può apparire a dimostrare la prova di deficit sociali o compromissione della memoria sociale nei topi in fase di test. Tuttavia un'interpretazione semplice può essere che l'animale non è in grado di rilevare correttamente l'animale.
L'assuefazione / test Dishabituation olfattivo è stata utile per chiarire modelli murini di autismo. Un modello murino spesso usato di autismo è il T + tf / J (BTBR) ceppo di topi BTBR. Si tratta di un ceppo inbred che ha una forte volto validità per le tre caratteristiche fondamentali del comportamento di autismo. Tuttavia, una preoccupazione è stata se i loro deficit comportamentali sociali siano dovuti ad un sistema olfattivo compromessa. Yang e colleghi hanno esaminato se il ceppo BTBR ha compromesso l'olfatto attraverso l'uso del habituzione test / Dishabituation 12. Hanno usato tre presentazioni di acqua, l'odore di mandorle, e banana odori per loro odori non sociali. Hanno quindi utilizzato un odore sociale preparata da 129 / SvlmJ e mouse B6 ceppi. Il ceppo BTBR visualizzata assuefazione e Dishabituation agli odori non sociali. I topi ha dimostrato abitazione al primo odore sociale, ma non ha mostrato Dishabituation al secondo odori sociale. Una possibilità è che essi non possono essere in grado di distinguere tra diversi odori sociali. Questo potrebbe mettere in pericolo la loro capacità in un test di comportamento sociale quando due stimoli sociali sono presentati. Questa è una considerazione importante quando esplorare diversi modelli murini di autismo e potrebbe fornire nuove intuizioni in quello che è cambiato in questi topi.
Assuefazione e Dishabituation sono fondamentali meccanismi non associativi di apprendimento. Questi principi di apprendimento sono stati dimostrati in numerosi tipi di organismi complessi e semplici 13,14. Tuttavia, questi meccanismidell'apprendimento sono stati indagati raramente in topo comportamento olfattiva ma questo sistema è importante misurare come parte di una più grande batteria di test comportamentali. Questo test è poco costoso da installare ed eseguire, richiede solo un giorno di prove, e diversi i topi possono essere testati entro un giorno. L'obiettivo principale di questo test è quello di esaminare la funzione olfattiva. I risultati del test possono aiutare a ridurre errata interpretazione delle prove di comportamento sociali e di altri test che includono una componente odore.
Nell'esaminare il comportamento del mouse in qualsiasi compito ci sono diverse considerazioni. Il ceppo del mouse, il sesso degli animali, e ora del giorno sono tutti fattori che devono essere esaminati. Se il ricercatore utilizza un ceppo mista potrebbe esserci maggiore variabilità nel comportamento indagini degli odori. Abbiamo presentato i dati da un ceppo FVB misto. Si sono esibiti bene nelle prove odori non sociali (Figura 3). Anche se, hanno studiato l'odore sociale per una quantità elevata otempo f, non ha dimostrato assuefazione alle ripetute presentazioni di odori sociali (Figura 4). I topi possono avere bisogno di sottoporsi a più prove per dimostrare assuefazione. Abbiamo fornito un metodo generale che dovrebbe essere utile per la maggior parte dei ceppi. Tuttavia, questi fattori devono essere considerati quando si esamina il comportamento di qualsiasi ceppo per la prima volta. Esaminando le prestazioni degli animali di controllo il ricercatore può essere necessario regolare le odori selezionati, il numero di volte in cui l'odore è presentato, le condizioni di luce, ora del giorno per il test, e il sesso dell'animale. Questo vale per qualsiasi altro comportamento del mouse e dovrebbe essere considerato in questo tipo di test. Abbiamo incluso gli odori che sono facilmente disponibili per l'acquisto. Se l'investigatore è preoccupata che non usano gli odori pure allora si può prendere in considerazione ordinare da Sigma-Aldrich. Hanno un database di materie prime oltre 1.600 aroma. Ciò permette al ricercatore di utilizzare un odore puro ma il costo può essereproibitivo per alcuni laboratori.
Ci sono alcune condizioni di prova lo sperimentatore può prendere in considerazione. In molti test l'animale è acclimatati per la camera sarà testato in. In questo protocollo si acclimatati l'animale sperimentale in una stanza e testato nell'altro. Ciò causerà un po 'di eccitazione quando viene spostato nella nuova stanza. Abbiamo eseguito la procedura in questo modo, perché se tutti i topi sono alloggiati nella stessa stanza come i topi di prova poi tutti i topi saranno esposti ai nuovi odori. Ci sono due opzioni che lo sperimentatore può prendere in considerazione. Il primo è quello che abbiamo descritto sopra. L'altro è quello di spostare l'animale in camera per lasciarlo acclimatare al pronto quindi iniziare il test. Dopo la prova è completa poi l'animale successivo collocato nella stanza poi permesso di ambientarsi. Ciò è possibile, ma sarebbe quasi raddoppiare il tempo dell'esperimento. L'opzione abbiamo usato era quello di spostare la sperimentazione animale per la camera test solo durante l'esperimento. Ciò comporterebbe ltempo di prova ess. C'è un equilibrio in termini di efficienza di test e preoccupazione per l'eccitazione novità indotta. Lo sperimentatore dovrebbe determinare che è meglio per il loro esperimento.
In cui questo protocollo, una persona segna il comportamento in tempo reale, è diventato sempre più popolare per studiare il comportamento degli animali con le telecamere per registrare il loro comportamento. Ci sono diversi vantaggi per l'uso di registrazioni video di comportamento animale. Uno è che un ricercatore umano nella stanza può influenzare il comportamento del mouse. Infatti, uno studio ha trovato che avere uno sperimentatore maschio può influenzare la sensibilità al dolore dei topi in fase di test 15. Un'altra preoccupazione è che i risultati sono solo da un investigatore. Attraverso l'uso di registrazioni video più gli osservatori possono segnare il comportamento. Si può poi misurare quanto è affidabile il punteggio è tra gli osservatori, che si tradurrà in una misura più consistenti. Un altro vantaggio è che la velocità fotogramma del video può essere ridotto e può provide una misurazione più accurata del comportamento. L'uso di telecamere possono essere facilmente introdotto in questo metodo. L'impostazione dipende dalla configurazione dello spazio laboratorio. Lo svantaggio dell'utilizzo di telecamere è che il tempo di punteggio aumenta significativamente. Richiedendo due o più osservatori per segnare il comportamento aumenta il tempo necessario per produrre i risultati. Questo aumenterà il carico di lavoro per il laboratorio e in alcune situazioni può essere proibitivo se lo screening molte linee knockout. Un altro svantaggio è che più di una telecamera può essere necessaria. La telecamera sarà in una posizione fissa. Se il mouse indaga l'odore in modo che vieta all'osservatore di vedere l'animale quindi il processo potrebbe dover essere eliminati. Si tratta di meno di una preoccupazione con un individuo che può facilmente regolare la loro visione dell'animale regolando la loro linea di vista. Tuttavia, il metodo descritto in questo protocollo può essere facilmente regolata per includere registrazioni video senza significativa alterazione al protocollo che describe.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
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