Abstract
Thymic चयन की प्रभावकारिता को विनियमित तंत्र है कि बीमार परिभाषित रहते हैं। विवो स्वयं और विदेशी एंटीजन के लिए विशेष टी कोशिकाओं के विकास और चयन के विश्लेषण में यहाँ प्रस्तुत विधि की अनुमति देता है। दृष्टिकोण immunodeficient SCID प्राप्तकर्ताओं में विभिन्न आयु वर्ग के चूहों से ली गई Thymic ग्राफ्ट का आरोपण जरूरत पर जोर देता। समय की एक अपेक्षाकृत कम अवधि में प्राप्तकर्ताओं को पूरी तरह प्रत्यारोपित थाइमस भ्रष्टाचार से व्युत्पन्न टी कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन कर रहे हैं। केवल thymocytes अलगाव के समय में थाइमस बोने चयन से गुजरना और परिपक्व टी कोशिकाओं में विकसित। जैसे, उम्र पर निर्भर Thymic घटनाओं की एक समारोह के रूप में engrafted टी कोशिकाओं की प्रकृति और विशिष्टता में परिवर्तन का आकलन किया जा सकता है। तकनीकी विशेषज्ञता सफल Thymic प्रत्यारोपण के लिए आवश्यक है, इस विधि में विवो न्यायपालिका Thymic समारोह और / या homeostas का एक परिणाम या के कारण हैं कि विकृतियों की एक विस्तृत श्रृंखला का अध्ययन करने के लिए एक अद्वितीय रणनीति प्रदान करता हैहै।
Introduction
थाइमस टी सेल के विकास में महत्वपूर्ण घटनाओं 1 पाए जाते हैं जिसमें एक अंग है। निवासी thymocytes, टी सेल रिसेप्टर (TCR) α और β जीन की पुनर्व्यवस्था पर, थाइमस 2 के cortical और दिमाग़ी क्षेत्रों में lymphostromal और प्रतिजन पेश कोशिकाओं (एपीसी) के साथ बातचीत की एक श्रृंखला से गुजरना। Thymic सकारात्मक चयन मेजबान प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल (MHC) वर्ग मैं और द्वितीय अणुओं 2-3 के संदर्भ में प्रतिजनी पेप्टाइड्स समझते हैं कि thymocytes का निर्माण करने के लिए cortical Thymic उपकला कोशिकाओं (टीईसी) द्वारा मध्यस्थता है। इसके बाद Thymic नकारात्मक चयन दिमाग़ी टीईसी या वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) MHC वर्ग मैं और द्वितीय अणुओं 3 से बंधे स्वयं प्रोटीन से प्राप्त होता है कि वर्तमान पेप्टाइड्स के साथ एक बातचीत के द्वारा संचालित autoreactive thymocytes के मिटाने, जरूरत पर जोर देता। इन प्रक्रियाओं के अंतिम परिणाम एक व्यापक स्पेक्ट्रम के लिए प्रतिक्रिया करने में सक्षम परिपक्व सीडी 4 + और CD8 + टी कोशिकाओं का एक पूल की स्थापना हैविदेशी एंटीजन की आत्म प्रोटीन से 4 कम से कम जेट का प्रदर्शन करते हुए।
Thymic चयन घटनाओं की दक्षता Thymic परिपक्वता, मस्तिष्क और cortical टीईसी, Thymic डीसी के सबसेट रचना की आवृत्ति, और Thymic व्यापारियों 3 के स्रोत सहित कारकों की एक मेजबान से प्रभावित है। विशेष रूप से, न्यायपालिका Thymic चयन क्रमशः, बिगड़ा नकारात्मक या सकारात्मक चयन से पैदा होती है, जो स्व-प्रतिरक्षित 5 या immunodeficient विकृतियों, में परिणाम कर सकते हैं। Thymic चयन के विनियमन के आणविक घटनाओं, हालांकि, खराब समझ रहे हैं। इन विट्रो ऐसे reaggregate Thymic अंग संस्कृतियों (RTOC) के रूप में 6 दृष्टिकोण, Thymic चयन के साथ जुड़े बुनियादी घटनाओं का विश्लेषण करने के लिए उपयोगी हो सकता है, लेकिन पूरी तरह से चल रही है की गतिशीलता पुनरावृत्ति करने में विफल साबित किया है विवो घटनाओं में। नतीजतन, इस Thymic प्रत्यारोपण आधारित दृष्टिकोण विवो 7 में बेहतर अध्ययन thymocyte चयन की घटनाओं के लिए स्थापित किया गया था
इस प्रोटोकॉल immunodeficient SCID प्राप्तकर्ता चूहों में नवजात शिशु और वयस्क दाता चूहों से thymi रोपाई का वर्णन है। इस तकनीक को सकारात्मक और नकारात्मक Thymic चयन, साथ ही व्यक्तिवृत्त के दौरान विभिन्न टी सेल सबसेट के Thymic उत्पादन को नियंत्रित करने वाले तंत्र के अध्ययन के सभी देता है। सबसे हाल ही में, इस दृष्टिकोण Thymic चयन की दक्षता जल्दी autoreactive टी कोशिकाओं की वृद्धि की विकास के लिए अग्रणी चूहों में जन्म के बाद ही सीमित है कि प्रदर्शन करने के लिए प्रयोग किया जाता है, और विदेशी एंटीजन 7 के लिए एक कम टी सेल प्रदर्शनों की सूची विशिष्ट दिया गया है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
murine पढ़ाई उत्तरी कैरोलिना चैपल हिल विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है और सभी जानवरों की देखभाल IACUC दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया था।
नवजात शिशु और वयस्क Thymi की 1. तैयारी
- पूर्व दाता चूहों euthanizing करने के लिए सभी अभिकर्मकों और उपकरण तैयार करें।
- वाष्पदावी या अन्य उपयुक्त तरीके से शल्य चिकित्सा उपकरणों जीवाणुरहित। सभी शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं बाँझ शर्तों को बनाए रखने और संक्रमण से बचने के लिए एक लामिना का प्रवाह हुड के तहत किया जाना चाहिए। दाता चूहों से thymi की निकासी के लिए आवश्यक उपकरण इकट्ठे।
- बाँझ 1x पीबीएस (7.4 पीएच) के साथ एक 60 मिमी पकवान भरें और हुड के अंदर बर्फ पर जगह है। यह पहले प्रत्यारोपण के लिए दाता चूहों से excised संक्षेप दुकान thymi करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।
- नैतिक दिशा निर्देशों के अनुसार, कंपनी द्वारा गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के बाद 2 asphyxiation के कत्ल और वयस्क दाता चूहों द्वारा नवजात दाता चूहों euthanize।
- आर के लिएथाइमस के emoval: एक बाँझ शोषक कागज तौलिया पर एक पृष्ठीय लेटा हुआ स्थिति में माउस निर्धारित करना और एक चीरा बनाने से पहले 70% इथेनॉल के साथ स्प्रे।
- त्वचा के माध्यम से एक midline चीरा द्वारा पेट और वक्ष गुहा बेनकाब। वक्ष गुहा प्रकट करने के लिए छाती और forelimbs पर त्वचा मोड़ो।
- बेहतर मध्यस्थानिका बेनकाब और वक्ष गुहा पूर्वकाल के लिए डायाफ्राम और ribcage के माध्यम से दो पार्श्व चीरों बनाओ। थाइमस तुरंत ऊपर दो सफेद खण्डों के रूप में दिखाई देता है और दिल से सटे होना चाहिए।
- कैप्सूल को बाधित करने के लिए कुछ नहीं कर रही है, ठीक संदंश के साथ थाइमस आसपास के संयोजी ऊतक के अलावा छेड़ो। संदंश के साथ ribcage वापस धारण करते हुए, अंग नीचे घुमावदार संदंश स्थिति और खड़ी खींच कर थाइमस के दो पालियों निकालने के लिए संदंश की एक दूसरी जोड़ी का उपयोग करें। इस नवजात चूहों से thymi निकालने के लिए एक विदारक गुंजाइश का उपयोग किया जा सकता है।
- 60 मिमी डि में थाइमस रखेंश संयोजी स्थलडमरूमध्य के माध्यम से काटने से बर्फ और अलग Thymic पालियों पर बाँझ 1x पीबीएस (7.4 पीएच) युक्त। कैप्सूल को नुकसान नहीं कुछ कर रही है Thymic पालियों से किसी भी मलबे को हटाने, और प्रत्यारोपण के लिए वर्गों की उपयुक्त संख्या में थाइमस काटा।
- नवजात चूहों से प्राप्त thymi हेरफेर न करें।
नोट: दो प्राप्तकर्ता चूहों (प्राप्तकर्ता प्रति 1 पालि) की एक अधिकतम के लिए प्रयुक्त। - 4-6 प्राप्तकर्ता चूहों की एक अधिकतम में वयस्क चूहों से प्राप्त thymi प्रत्यारोपण। चित्र 1 में दिखाया सावधानी के रूप में, एक वयस्क Thymic पालि समझ, संदंश की एक जोड़ी का उपयोग करना, शल्य कैंची का उपयोग तीन बराबर वर्गों में थाइमस काटा।
- दोहराएँ प्रत्येक दाता माउस के लिए 1.3-1.4 कदम। उजागर कर रहे हैं thymi समय को सीमित करने के क्रम में, एक समय में 1 दाता थाइमस तैयार करते हैं।
किडनी कैप्सूल के तहत 2. थाइमस आरोपण
- तालिका 1 में सूचीबद्ध पूर्व निष्फल उपकरण इकट्ठे। उचित सड़न रोकनेवालातकनीक दूषित उपकरण या अभिकर्मकों के लिए प्रत्यारोपण-प्राप्तकर्ताओं को प्रकाश में लाने से रोकने के लिए प्रक्रिया के दौरान उपयोग किया जाना चाहिए।
- पहले प्रत्यारोपण के लिए, वजन और प्रत्येक प्राप्तकर्ता माउस को टैग करें।
- लामिना का प्रवाह हुड में विदारक माइक्रोस्कोप और संज्ञाहरण सर्किट सेट करें।
- एक बिजली के रेजर का प्रयोग, प्राप्तकर्ता माउस के बाईं ओर दाढ़ी और बाल नहीं चीरा बनाने के लिए इस्तेमाल के आसपास के क्षेत्र में रहता है सुनिश्चित करते हैं।
- Isofluorane vaporizer के चालू करें और 1-2% के बीच की एक खुराक का उपयोग करने के लिए माउस anesthetize। पूर्व पैर के अंगूठे चुटकी निम्नलिखित पलटा की अनुपस्थिति के लिए जाँच के द्वारा शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया शुरू करने के लिए उचित anesthetization का पता लगाएं।
- माउस ठीक anesthetized है, के बाद सूखापन को रोकने और इस प्रकार के रूप प्रत्यारोपण के लिए माउस को तैयार करने के लिए माउस की आंखों में पशु चिकित्सा मरहम लागू होते हैं:
- मुंडा पक्ष सामना करना पड़ रहा है, ताकि एक सही पार्श्व लेटा हुआ स्थिति में विदारक माइक्रोस्कोप के तहत माउस की स्थिति। Startiएनजी शल्य चिकित्सा के क्षेत्र के केंद्र में, povidone आयोडीन (betadine) के बाद एक डिस्पोजेबल हस्तांतरण पिपेट 70% इथेनॉल का उपयोग करते हुए एक परिपत्र गति में बांटना। एक चीरा बनाने के लिए 3 बार पूर्व इथेनॉल / betadine के इलाज को दोहराएँ।
- का प्रयोग विदारक कैंची सीधे गुर्दे के ऊपर एक 1-2 सेमी पार्श्व चीरा बनाते हैं।
- गुर्दे से सटे संयोजी ऊतक समझ और यह मांसलता के ऊपर है कि झूठ तो धीरे गुर्दे लिफ्ट मध्यम संदंश का प्रयोग। मांसलता से अधिक उजागर गुर्दे और जगह में रखने के लिए, गुर्दे इलीयुम को बाधित करने के लिए नहीं विशेष ध्यान दे रही है, गुर्दे के नीचे मध्यम संदंश की एक हाथ डालें।
- ऊतक सुखाना रोकने के क्रम में, किडनी और गुर्दे कैप्सूल के हेरफेर के पूर्ण होने तक प्रत्येक चरण के दौरान बाँझ 1x पीबीएस (7.4 पीएच) के साथ गुर्दे की सिंचाई।
- ठीक संदंश चुटकी और गुर्दे से अलग अधिवृक्क ग्रंथि के लिए सबसे बाहर का गुर्दे के किनारे के पास कैप्सूल लिफ्ट का उपयोग करना।
- एक 18 गेज का प्रयोग करेंसुई दाता थाइमस (2A चित्रा) के लिए तैयार टुकड़ा डालने के लिए काफी बड़े एक चीरा बनाने के लिए। समय के साथ भ्रष्टाचार की अव्यवस्था को रोकने के लिए जितना संभव हो छोटा सम्पुटी चीरा रखने के लिए कुछ करें।
- कैप्सूल रखने के गुर्दे से दूर खींच लिया, वहीं कैप्सूल के नीचे भ्रष्टाचार डालने और संभव है (चित्रा 2 बी) के रूप में सम्पुटी चीरा से दूर के रूप में आगे थाइमस पुश करने के लिए ठीक संदंश की एक दूसरी जोड़ी का उपयोग करें।
- गुर्दे के नीचे से संदंश निकालें, और धीरे से चीरा के माध्यम से वापस जगह में गुर्दे की वापसी।
- पेरिटोनियल दीवार suturing और एक बार बंद कर दिया betadine के लगाने से मांसलता को बंद करें। Suturing पूर्ण होने पर, डर्मिस को बंद करने और आसपास के क्षेत्र के लिए betadine के लागू करने के लिए घाव क्लिप लागू होते हैं।
- एक गर्मी दीपक का उपयोग कर गरम कर दिया गया है कि एक पिंजरे करने के लिए माउस लौटें।
- यह पूर्ण चेतना और गतिशीलता आएगा जब तक प्रत्येक पोस्ट ऑपरेटिव माउस मॉनिटर और चूहों था जगह नहीं हैT अन्य जानवरों के साथ एक पिंजरे में संज्ञाहरण निम्नलिखित बरामद नहीं किया है।
- जरूरत के रूप में पोस्ट ऑपरेटिव दर्द प्रबंधन दवाओं के साथ चूहों को समझो। इस तरह के 1.6 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में पीने के पानी में एसिटामिनोफेन के रूप में पोस्ट ऑपरेटिव दर्दनाशक दवाओं के साथ चूहों प्रदान करें।
- दोहराएँ प्रत्येक प्राप्तकर्ता माउस के लिए 2.3-2.9 कदम।
- 1 घंटे के बाद सर्जरी के भीतर सामान्य गतिविधि के लिए चूहों कि वापसी सुनिश्चित। प्रत्यारोपण की प्रक्रिया का एक परिणाम के रूप में उत्पन्न होने वाली जटिलताओं का निर्धारण करने के बाद सहकारी वजन, मोटर कौशल, साथ ही प्रत्येक माउस के पीने और भोजन की गतिविधि पर नजर रखने।
नोट: पूर्व ऑपरेटिव वजन, साथ ही बदल गतिशीलता या खाने के लिए या पीने जटिलताओं का संकेत हो सकता विफलता की तुलना में जब पोस्ट ऑपरेटिव वजन घटाने,। - पूंछ निक निर्माता विनिर्देशों के अनुसार Lympholyte सेल जुदाई मीडिया का उपयोग लिम्फोसाइटों की जुदाई के द्वारा पीछा के माध्यम से चूहों से खून बह रहा द्वारा परिधीय रक्त में टी सेल पुनर्गठन की निगरानी करें। टी सेल characteriza पूराइस तरह के एक fluorescently सक्रिय succinimidyl एस्टर के रूप में 8 टी सेल मार्कर CD3, सीडी 4, और CD8 है, साथ ही एक जीवित मृत discriminator के लिए विशिष्ट fluorescently संयुग्मित एंटीबॉडी के साथ लिम्फोसाइटों धुंधला द्वारा tion। 3 चित्र में दिखाया के रूप में विश्लेषण Singlets, जीवित कोशिकाओं, और CD3 सकारात्मक कोशिकाओं पर gating के माध्यम से पूरा किया जा सकता है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
इस प्रक्रिया की सफलता के न्यूनतम शल्य आघात के रूप में अच्छी तरह से गुर्दे कैप्सूल के नीचे भ्रष्टाचार की सही स्थिति पर निर्भर है। चित्रा 1 में दिखाया गया है Thymic भ्रष्टाचार को उचित रूप से यह सुनिश्चित करने के बाद प्रत्यारोपण के लिए Thymic वर्गों आकार करने के लिए कटौती की जानी चाहिए। चित्रा 1 में योजनाबद्ध के बाद, नवजात शिशु या वयस्क चूहों से thymi सुसंगत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य टी सेल engraftment परिणामों के साथ सफल subcapsular प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। उल्लेख किया है, गुर्दे कैप्सूल के तहत भ्रष्टाचार की उचित स्थिति के भ्रष्टाचार की लंबी अवधि के अस्तित्व, समारोह, और vascularization को बनाए रखने में महत्वपूर्ण है। चित्रा 2 में देखा, Thymic भ्रष्टाचार गुर्दे, सम्पुटी चीरा से विपरीत छोर पर, अधिवृक्क ग्रंथि (गुर्दे का अग्र) के सबसे करीब (गुर्दे के पीछे) के ऊपर रखा जाना चाहिए। एक सफल Thymic प्रत्यारोपण के लिए एक उपयुक्त हिमेटोपोयटिक पर्यावरण के साथ युग्मित, जब r कर सकते हैं30 सप्ताह के 7 से अधिक उत्पादक emain।
प्रत्यारोपण के बाद, engraftment परिधीय रक्त से प्राप्त टी कोशिकाओं के विश्लेषण के प्रवाह cytometric द्वारा मूल्यांकन किया है। 3 चित्रा और तालिका 2 एक प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता 6 सप्ताह के बाद प्रत्यारोपण में अंगों और परिधीय रक्त में मनाया टी सेल engraftment की विशिष्ट स्तर प्रदर्शित करता है। इस तकनीक का उपयोग करना, हमारे समूह पहले से नवजात शिशु और वयस्क thymi का प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में समय के साथ परिधीय रक्त में सीडी 4 + और CD8 + टी सेल पुनर्गठन के कैनेटीक्स दिखाया गया है। संक्षेप में, परिसंचारी टी कोशिकाओं के एक सप्ताह के बाद सर्जरी के भीतर परिधि में देखा जा सकता है और CD4 + और CD8 + टी सेल नंबर परिधीय टी सेल डिब्बे पूरी तरह से 5-6 सप्ताह के बाद प्रत्यारोपण 7 बजे का पुनर्गठन किया गया है जब तक वृद्धि जारी है।
चित्रा 2:। सम्पुटी चीरा और Thymic भ्रष्टाचार की नियुक्ति की स्थिति दाता थाइमस से तैयार एक उचित आकार अनुभाग गुर्दा (ए) के पीछे अंत में गुर्दे कैप्सूल में एक छोटा सा चीरा द्वारा बनाई गई subcapsular अंतरिक्ष में डाला जाता है। गुर्दे के लिए पूर्वकाल, अधिवृक्क ग्रंथि के सबसे करीब (नहीं) कल्पना और सम्पुटी चीरा से विपरीत अंत में, (बी) के रूप में दिखाया गया कैप्सूल के नीचे डाला जाता है कि भ्रष्टाचार के लिए इष्टतम स्थिति है।
परिधीय रक्त और ल्य्म्फोइड अंगों में टी सेल पुनर्गठन के माध्यम से सफल engraftment निर्धारण चित्रा 3.। प्रवाह cytometric डेटा टी सेल पुनर्गठन के प्रतिनिधि एक नायब Thymic भ्रष्टाचार के एक SCID प्राप्तकर्ता में 6 सप्ताह के बाद प्रत्यारोपण मनाया जाता है। टी सेल engraftment के समान स्तर परिधीय रक्त, तिल्ली, अग्नाशय के लिम्फ नोड (PLN) में मनाया जाता है, और mesenteric लिम्फ नोड (mln) एक Thymic भ्रष्टाचार के सफल प्रत्यारोपण के बाद।
| ललित विदारक संदंश |
| मध्यम विदारक संदंश (2) |
| ललित विदारक संदंश (घुमावदार टिप) |
| Betadine समाधान |
| 70% इथेनॉल |
| 18 गेज सुई |
| / प्रकाश स्रोत डब्ल्यू विदारक माइक्रोस्कोप |
| डिsposable स्थानांतरण pipettes (2) |
| दर्द प्रबंधन के लिए औषध: एसिटामिनोफेन |
| बाँझ पोंछे |
| ऊष्मा दीपक |
| इलेक्ट्रिक रेजर |
| Isoflurane और isoflurane vaporizer |
| स्यूचर्स (तेजी से अवशोषित, सादे आंत) |
| कैंची विदारक |
| 9 मिमी स्टेनलेस स्टील घाव क्लिप |
| घाव क्लिप हटाने के उपकरण |
| बाँझ 1X पीबीएस |
| 60 मिमी पकवान |
तालिका 1:। प्राप्तकर्ता माउस के गुर्दे कैप्सूल नीचे थाइमस प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया आवश्यक सामग्री की शल्य Thymic प्रत्यारोपण के दौरान आवश्यक सामग्री की सूची। निर्दिष्ट सामग्री की मात्रा कोष्टक में सूचीबद्ध है।
| टोटासीडी 4 टी कोशिकाओं के एल नंबर | CD8 टी कोशिकाओं की कुल संख्या | |
| खून | 1652 कोशिकाओं / υl | 351 कोशिकाओं / υl |
| तिल्ली | 11,546,617 | 4,203,299 |
| PLN | 1,241,789 | 364,918 |
| MLN | 2,182,266 | 532,059 |
एक Thymic प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता के परिधीय रक्त और ल्य्म्फोइड अंगों में मौजूद टी कोशिकाओं की तालिका 2. कुल संख्या। सीडी 4 + और CD8 + टी अंगों से बरामद कोशिकाओं की कुल संख्या के रूप में अच्छी तरह से एक नवजात शिशु Thymic प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता के परिधीय रक्त 6 सप्ताह बाद ट्रांसप्लांटेशन। इन नंबरों को आम तौर पर सफल नवजात और वयस्क Thymic प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में मनाया जाता है कि सीडी 4 + और CD8 + टी सेल cellularity के प्रतिनिधि हैं।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethanol | Decon Laboratories | 2705HC | |
| PBS | GIBCO | 14190-144 | pH 7.4 |
| Betadine Solution | Purdue Products | 67618-150-17 | |
| 18 gauge needle | BD | 305195 | |
| Sutures (1.0 metric) | Ethicon | J493G | 18" (45cm) |
| AUTOCLIP Wound Clips (9mm) | Clay Adams® Brand | 427631 | |
| Transfer pipette | Fisher Scientific | 13-711-20 | Sterile, disposable |
| Mouse anti-CD3 Ab | eBioscience | 11-0031-85 | Clone: 1452C11 |
| Mouse anti-CD4 Ab | eBioscience | 48-0042-82 | Clone: RM4-5 |
| Mouse anti-CD8 Ab | eBioscience | 25-0081-82 | Clone: 53-6.7 |
| Lancet | Medipoint | Goldenrod 4mm | |
| Pacific Orange Succinimidyl Ester, Triethylammonium Salt | Invitrogen | P30253 | |
| 96-well round botton polypropylene plates | Corning | 3365 | |
| 1.2 ml polypropylene cluster tubes | Corning | 4401 | |
| 5 ml polypropylene round-bottom tubes | BD | 352002 | |
| 40uM Nylon Cell Strainer | Falcon | 352340 | |
| 16% Paraformaldehyde Solution, EM Grade | Electron Microscopy Services | 15710 | Hazardous |
| Puralube Optical Ointment | Fisher Scientific | NC0138063 | |
| Lympholyte | Cedarlane | CL5030 | |
| 60 mm cell culture dish | Corning | 430196 | 60 mm x 15 mm, Sterile |
References
- Kappler, J. W., Roehm, N., Marrack, P. T cell tolerance by clonal elimination in the thymus. Cell. 49 (2), 273-280 (1987).
- Takahama, Y. Journey through the thymus: stromal guides for T-cell development and selection. Nat. Rev. Immunol. 6, 127-135 (2006).
- Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don’t see). Nat. Rev. Immunol. 14 (6), 377-391 (2014).
- Schwartz, R. H. Acquisition of immunologic self-tolerance. Cell. 57 (7), 1073-1081 (1989).
- Kishimoto, H., Sprent, J. A defect in central tolerance in NOD mice. Nat. Immunol. 2 (11), 1025-1031 (2001).
- Anderson, G., Jenkinson, E. J. Investigating central tolerance with reaggregate thymus organ cultures. Methods. Mol. Biol. 380, 185-196 (2007).
- He, Q., et al. Thymic development of autoreactive T cells in NOD mice is regulated in an age-dependent manner. J. Immunol. 191 (12), 5858-5866 (2013).
- Stewart, C. C., Stewart, S. J. Chapter 6. Immunophenotyping. Current Protocols in Cytometry. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).
- Rice, H. E., et al. Thymic transplantation for complete DiGeorge syndrome: medical and surgical considerations. J. Pediatr. Surg. 39 (11), 1607-1615 (2004).
- Markert, M. L., et al. Transplantation of thymus tissue in complete DiGeorge Syndrome. N. Engl. J. Med. 341, 1180-1189 (1999).
- Market, M. L., Devlin, B. H., McCarthy, E. A. Thymus transplantation. Clin. Immunol. 135 (2), 236-246 (2010).
- Wells, A. D., Li, X., Strom, T. B., Turka, L. A. The role of peripheral T-cell depletion in transplantation tolerance. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 356 (1409), 617-623 (2001).
- Albuquerque, A. S., et al. Human FOXN1-Deficiency is associated with ab double-negative and FoxP3+ T-cell expansions that are distinctly modulated upon thymic transplantation. PLoS One. 7 (5), e37042 (2012).
- Chinn, I. K., Milner, J. D., Scheinberg, P., Douek, D. C., Markert, M. L. Thymus transplantation restores the repertoires of forkhead box protein 3 (FoxP3)+ and FoxP3- T cells in complete DiGeorge anomaly. Clin Exp Immunol. 173 (1), 140-149 (2013).
- Savino, W. The thymus is a common target organ in infectious diseases. PLoS Pathog. 2 (6), e62 (2006).
