L'isolement et la transplantation de différents âgées murins thymiques greffes.

Résumé

Ce rapport fournit une description détaillée de la transplantation de thymi murin de souris donneuses de différents âges sous la capsule rénale de receveurs de souris immunodéficientes. L’objectif de cette approche est de modéliser le développement des lymphocytes T et les événements de sélection thymique in vivo.

Résumé

Les mécanismes qui régulent l'efficacité de la sélection thymique restent mal définis. La méthode présentée ici permet dans les analyses in vivo du développement et de la sélection des cellules T spécifiques de soi et des antigènes étrangers. L'approche implique l'implantation de greffes de thymus provenant de souris âgées dans divers destinataires SCID immunodéficientes. Au cours d'une période relativement courte de temps les destinataires sont entièrement reconstituées avec des cellules T dérivées du thymus greffon implanté. Ensemencement Seulement thymocytes le thymus au moment de la sélection et de l'isolement subissent développer en cellules T matures. En tant que tel, les changements dans la nature et la spécificité des cellules T greffées en fonction de l'âge thymiques événements dépendants peuvent être évaluées. Bien que l'expertise technique est nécessaire pour la transplantation thymique succès, cette méthode fournit une stratégie unique d'étudier in vivo un large éventail de pathologies qui sont dues à un ou résultat de la fonction et / ou homeostas thymique aberranteest.

Introduction

Le thymus est un organe dans lequel les événements critiques dans le développement des cellules T se produisent ^1. Thymocytes résidents, sur réarrangement du récepteur des cellules T (TCR) α et β gènes, sont soumis à une série d'interactions avec des cellules de lymphostromal et présentant l'antigène (APC) dans les régions corticales et médullaires du thymus ^2. Sélection positive thymique est médiée par les cellules épithéliales thymiques corticales (TEC) pour produire thymocytes qui reconnaissent des peptides antigéniques dans le contexte de l'hôte du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe I et II molécules ^2-....

Protocole

Les études murins ont été approuvés par le Comité institutionnel de protection des animaux et l'utilisation (IACUC) de l'Université de Caroline du Nord à Chapel Hill et de tous les soins des animaux était en conformité avec les lignes directrices du IACUC.

1. Préparation du nouveau-né et de l'adulte Thymi

1. Préparer tous les réactifs et le matériel avant l'euthanasie souris donneuses.
2. Stériliser les instruments chirurgicaux par autoclavage ou d'autres méthodes appropriées. Toutes les interventions chirurgicales doivent être effectuées sous une hotte à flux laminaire afin de maintenir des conditions stériles et éviter la ....

Résultats

Le succès de ce procédé dépend de traumatisme chirurgical minimal, ainsi que le positionnement précis de la greffe sous la capsule du rein. Le greffon thymique doit être coupé afin d'assurer convenablement dimensionné sections thymiques pour une transplantation subséquente comme représenté sur la Figure 1. En suivant le schéma de la figure 1, thymus de souris nouveau-nés ou les adultes peut être utilisé pour la réussite de la transplantation de sous-capsulaire avec les résultats de .......

Discussion

Les événements régulant la sélection thymique sont mal compris. Des études récentes ont démontré des changements ontogènes dans l’efficacité de la sélection. Le couplage de cette approche avec différentes souris donneuses et receveuses de thymus transgéniques facilitera davantage les études visant à identifier les événements et les paramètres qui régulent la sélection thymique. Notamment, la transplantation thymique est utilisée pour le traitement et la gestion des lymphocytes T et des troubles thymiques observés par exe.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Éthanol  ;	Decon Laboratories	2705HC
PBS	GIBCO	14190-144	pH 7.4
Bétadine Solution	Purdue Products	67618-150-17
Aiguille de calibre 18	BD	305195
Sutures (1.0 métrique)	Ethicon	J493G	18" (45cm)
AUTOCLIP Clips de plaie (9mm)	Clay Adams® ; Pipette	de marque 427631
	Fisher Scientific	13-711-20	Stérile, jetable
Souris anti-CD3 Ab	eBioscience	11-0031-85	Clone : 1452C11
Souris anti-CD4 Ab	eBioscience	48-0042-82	Clone : RM4-5
Souris anti-CD8 Ab	eBioscience	25-0081-82	Clone : 53-6.7
Lancet	Medipoint	Verge d’or 4mm
Pacific Orange Succinimidyl Ester, Triethylammonium Salt	Invitrogen	P30253
96 puits rond botton plaques de polypropylène	Corning	3365
1,2 ml Tubes en polypropylène	Corning	4401
5 ml Tubes à fond rond en polypropylène	BD	352002
40uM Nylon Cell Passoire	Falcon	352340
Solution de paraformaldéhyde à 16 %,	services de microscopie électronique	15710	Pommade
optique dangereuse en puralube	Fisher Scientific	NC0138063
Lympholyte	Cedarlane	CL5030
Antenne de culture cellulaire de 60 mm	Corning	430196	60 mm x 15 mm, stérile

de transfert de qualité EM