Abstract
출생시, 폐 독립적으로 호흡에 적응을 가능하게 흡수 분비에서 깊은 표현형 스위치를 겪는다. 추진이 표현형을 유지하는 것은 생활 전반에 걸쳐 정상 폐포 성장과 가스 교환에 매우 중요하다. 시험 관내 연구에서 여러 폐 유체 간극의 속도에 영향을 미칠 수있는 중요한 조절 단백질, 신호 전달 분자, 및 스테로이드 호르몬의 역할을 특징으로하고있다. 그러나 생체 내 시험에서 이러한 규제 요인 산기 폐 액체 흡수를 조절하는 중요한 생리 학적 역할을 여부를 평가하기 위해 수행해야합니다. 이와 같이, 실시간 X 선 영상의 활용이 산기 폐 유체 간극 또는 폐부종을 결정하기 위해, 필드에서의 기술적 진보를 나타낸다. 여기서, 우리는 설명하고 산후 10 일 우리에 C57BL / 6 마우스에서 폐포 폐 유체 통관 및 폐포 홍수의 비율을 평가하는 방법을 설명X 선 촬영 분석을 보내고. 이 프로토콜의 성공적인 구현은 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC), 생체 작은 동물 X 선 영상 시스템 및 호환 분자 이미징 소프트웨어의 사전 승인이 필요합니다.
Introduction
출생시, 신생아 폐 충분히 환기 및 신체의 산소를 확립 유체 재 흡수 기관에 유체 분비로 전환해야합니다. 촉진 메커니즘 (또는 방해합니다) 출생시의 폐 유체의 유효 간극이 불분명. C57BL / 6 신생아 마우스 새끼에서 폐포 유체 통관 속도를 모델링하는 것은 강화하거나 유체의 흡수 속도를 감쇄 할 수 있습니다 규제 요인의 더 나은 이해로 이어질 것입니다. 또한 급성 폐 손상이나 감염의 다른 신생아 모델에 적용 할 수 있고, 호흡 곤란과 신생아에 대한 새로운 치료 전략으로 이어질 수 있습니다.
신생아 폐는 성인의 폐에 비해 소문자 때문에, 세척 또는 gravimetrical 측정에 의존 폐포 유체 통관 종래의 조치를 정확하게 신생아 폐 모델에서 폐 유체 허가를 연구하기에 적합하지 않을 수 있습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 허용하는 분석을 보여작은 동물 이미 저를 사용하여 출생 후 10 일 C57BL / 6 마우스 새끼에서 폐포 유체 통관 속도의 정확한 결정. 형광 투시 방법을 사용하는 주요 장점 중 하나는 동물 생체 내 이미징된다는 것이다. 그들은 자유롭게 호흡하고 미래의 관찰과 연구를위한이 최소 침습 분석을 복구 할 수 있습니다. 이 방법의 전반적인 목표는 신생아 폐에 폐 부종 모델, 신생아 폐의 폐포 유체 간극의 속도를 평가하는 것입니다. 감소 전략 필요한 동물의 수를 감소하면서도 실험 출력을 최대화하도록이 기술은 부분적으로 개발되었다. 이 기술은 X 선 촬영을 이용하여 폐 유체 볼륨의 우수한 검출 가능 염기성 동물의 억제 능력에 1을 취급해야; 작은 동물 수술 기관 내 점적이 작은 동물 이미 저 및 기본 이미지 분석 소프트웨어. 생체 내에서 폐 유체 볼륨을 평가하고자하는 연구자들은 (자유 BREathing는 애플리케이션에 적합한이 절차를 찾을 수 있습니다) 동물 모델을 마취. 마지막으로,이 프로토콜은 폐 염증 (3)의 고농도 산소에 의한 폐 손상, 기계 환기 및 모델을 포함 기관지 폐 이형성증의 역학적 연구에 사용 된 신생아 폐 손상의 기존의 다른 모델을 확대 할 수있다.
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Protocol
모든 실험 기술 기관 관리 및 사용위원회 지침에 따라 수행해야합니다.
1. X 선 영상 획득
- 소프트웨어 개요 (소프트웨어 설정의 개요 그림 1 참조).
- 직접 파일 탭 아래의 캡처 버튼을 선택합니다.
- 설정 드롭 다운 메뉴에서 현재 세션을 선택합니다.
- 노출 시간 아래에있는 드롭 다운 상자에서 표준 노출을 선택합니다.
- 2.00 분으로 노출 시간을 설정하고 번호 노출 1. 2 픽셀로 X 비닝과 Y 비닝을 설정합니다. 그림 1을 참조하십시오.
- 내보내기 옵션 드롭 다운 메뉴에서 최종 축적을 선택합니다.
- 조명 설정에서, 실리조명 소스 드롭 다운 메뉴에서 CT X 레이. 기본값은 KVP는 35로 설정된다.
- 대응하는 X 선 참조 파일을 적용하려면 참조 파일을 적용 드롭 다운 메뉴에 자동 선택을 선택합니다. (2 절 참조).
- 설정 설정 카메라에서 2.51로 f- 스톱을 설정합니다.
- PN10 마우스에 대한 125.64에 FOV (시야)를 설정합니다.
- 13 초점면을 설정하고, 초점면 슬라이더 옆에있는 드롭 다운 메뉴에서 X 레이를 선택합니다.
- X 레이를 들어, 여기 필터 드롭 다운 메뉴에서 0으로 배출 필터를 설정합니다.
- 다음 설정 상단에서 새로 만들기를 클릭하여 현재 세션을 저장합니다. 예를 들어, 설정 파일 획득을위한 새로운 이름을 입력, "프로토콜을 만들기위한 주피터 단일 노출 이벤트." 그림 2를 참조하십시오.
- X 선 촬영 프로토콜 만들기
- 열린 창 오른쪽의 작성 / 편집 프로토콜 버튼을 클릭합니다.
- 새로운 프로토콜 팝업 윈도우가 나타납니다, 오른쪽 상단 모서리에있는 새로 만들기 버튼을 클릭합니다
- 프로토콜 예를 들어, 아래의 "주피터 데모 의정서"를 저장하고 확인을 클릭합니다 이름을 입력합니다. (그림 3 참조).
- 프로토콜 단계에서 프로토콜 팝업 창 하단에서 전에 이미지 캡처 드롭 다운 메뉴에서 선택, 즉 1 단계는 빨간색 텍스트 강조 표시되어 있는지 확인합니다 선택되어 새로운 이미지를 캡처, 아무것도하지 않습니다.
- 캡처 설정에서 단계 1.1.12에서 최근에 생성 된 단일 노출 이벤트를 선택합니다.
- 이미지 캡처 한 후 드롭 다운 메뉴에서 대기 (초)을 선택합니다.
- 편집 버튼을 클릭, 일반팝업 상자에 전자 (180), 각 2 분 취득 후 3 분의 대기 시간을 추가하려면 확인을 클릭합니다.
- 바로 1 단계 탭을 클릭하고 중복 단계를 선택하여 1 단계 중복. 2 시간 관찰 기간 동안 23 중복을 만듭니다. (도 4 참조).
- 마지막 단계 (단계 24)에서 대기 (초)에서 아무것도하지 않는 설정 이미지 캡처 한 후 변경합니다.
- 저장 버튼을 클릭하고 프로토콜 편집기를 종료합니다.
2. 조명 참조 파일
참고 : 순서 실험을 통해 얻어진 X 선 영상 검출기 균일 변화를 자동으로 수정에 X 선 이미지에 X 선 조명 참조 파일을 적용합니다. 아래에 설명 된 절차는 생체 내 동물 이미징 시스템에서 브루 커에 고유; 다른 생체 내 이미징 시스템 할 수있다사용.
- 분자 이미징 소프트웨어를 열고 캡쳐 버튼을 클릭하여 조명 참조 파일을 생성한다.
- 팝업 메뉴를 사용하여 조명 소스의 X 선 촬영 설정을 (위의 섹션 1에서 제안 된 설정 참조) 설정 후 노출 형의 조명 참조를 선택합니다. 표준 노출이 드롭 다운 상자에서이를 확인할 수 있습니다. (그림 5 참조).
- 이미지 역에서의 모든 샘플을 제거합니다. 4 × 4 비닝 (binning)의 X 및 Y 비닝 (binning)을 설정합니다. 표 1을 참조 : 조명 참조 파일 노출 시간은 정확한 노출 시간을 결정한다.
- 를 눌러 노출.
- 아래의 참조 파일을 적용 드롭 다운 메뉴에서 자동 선택을 선택하여 참조 파일을 적용합니다. (그림 6 참조). 조명 참조 파일은 자동으로 모든 X 선 IM에인가 될같은 카메라 설정을 캡처 세. 같은 카메라 설정이 후속 실험에 사용하는 경우 2.4 반복 할 필요가 없다 - 2.1 단계.
주 : 조명 참조 파일은 이미지 획득 후에 도포되거나, 에러 메시지가 참조 파일의 자동 선택 후에 발생한 경우. 이미지> 이미지 수학> 종류 : 작업> 계산 : 조명 보정 참조 분자 이미징 소프트웨어의 탐색 패널에서 다음 명령 시리즈를 사용 후 이미지 캡처를 파일 조명을 적용합니다. 당신이 조명 참조 파일 (Y)를 적용하고자하는 입력 영상 (X)를 선택합니다. 수정 된 파일 (Z)을 이름을 바꿉니다. (그림 7 참조).
3. 동물 취급
- 동물 취득
- 상업 종축에서 임신 댐을 구입 또는 기관의 지침에 따라 세 (이상) 12 주에 집에 여성 쥐를 사육에스.
- 출생 후의 일 (PN) 10까지 수유 어머니와 함께 집 신생아 쥐.
- 동물 마취 (PN 10)
- PN 40 분까지 지속되는 장시간 마취 효과 10 마우스를 마취하는 케타민 / 크 실라 칵테일을 준비합니다. 자일 라진 75 μL (100 ㎎ / ㎖)에 케타민 (100 ㎎ / ㎖)의 500 μl를 추가합니다. 케타민 (100 ㎎ / ㎏) / 크 실라 진 (10 밀리그램 / kg) 마취 칵테일을 위해 0.9 % 식염수 용액에 1:10로 희석.
- 신생아 마우스의 무게를.
- 31 G 5/16 인치 (8mm) 바늘 3/10 주사기를 사용하여, 복강 내 주사하여 마취 체중 10 μL / g을 관리.
- 건조하고 체온의 과도한 손실을 방지하기 위해 절연 동물을 유지합니다.
4. 기관 Instillations
- 140 mM의 염화나트륨, 5 mM의 KCl을 1 mM의 CaCl2를, 10 mM의 HEPES 구성된 기관 내 식염수 준비; pH는 7.4. 이 용액의 삼투압이 있어야한다319 mosmol / kg의 H 2 O
- 마운트 수술 테이프를 사용하여 경 수술 보드에 최대 복부 측면 동물을 마취. Ensurethat 동물의 헤드는 경사면의 상부에있다.
- 동물 마취 및 수술에 대한 준비가되어 있는지 확인하기 위해 발가락 핀치를 수행합니다. 동물의 모든 외과 분야, 악기 및 흉부 영역을 소독.
- 목 (인후 지역)의 전방 - 중간 복부 측면에있는 작은 (3mm) 절개 수술 메스를 사용하여 제외하고, 크기 11 밀어 활 경근을 확인하고 기관을 시각화하고 액세스하기 위해 무딘 집게를 사용하여 기관의 근육을 전방.
- 3 μL / 중량 g을 주입 (약 10-30 ㎕의 최종 부피) 31 G 5/16 인치 (8mm) 바늘을 사용하여 노출 된 기관을 통해 식염수. 마이너 절개 동물 이미징 동안 열려 일반적으로 잘 자체를 치유한다. 절개가 마찬가지로 개방 될 수 있는지 여부를 판별하기 위해 동물 자원의 지역 사업부에 문의하십시오. 그렇지 않으면, 봉합 할 수있다필요합니다.
5. 동물 이미징
- 분명 바닥, 이동식, 동물 이미징 트레이에 복부 새끼를 놓습니다. X 선 빔 흉부 영역 위에 직접적으로 있도록 동물 센터입니다.
- 홀수 동물 집단의 경우, 트레이의 중앙에 직접 첫 번째 강아지를 배치하고, 짝수 동료가 첫 번째 강아지를 배치하기위한 다른 동물이 동물이 모두 중앙에 트레이에 배치 될 때 있도록 단지 중앙의 왼쪽.
- X 선 촬영 캐비닛에 영상 트레이를 돌아 캐비닛 문을 닫습니다.
- 마취 된 동물의 체온을 유지하기 위해 동물 열 제어 장치를 켭니다. 37의 C - 약 35의 챔버 온도를 달성하기 위해 높은 설정을 사용한다. 동물 마취 및 2 시간 이미징 절차의 기간에 걸쳐 고정되어 있는지 확인하기 위해 동물 마취 장치 (산소를 통해 전달 증발 이소 플루 란)를 켭니다.
- 실행 X 선 촬영 프로토콜
- 예를 들어, 캡처를 클릭하고 해당 프로토콜을 선택 의정서 드롭 다운 메뉴에서 "주피터 데모 프로토콜". (그림 8 참조).
- 분자 이미징 소프트웨어의 실행 선택 의정서 버튼을 클릭합니다.
주 : 팝업 창이 프로토콜 창이 사라진다 완료되면, 이미지 획득의 상태를 추적하기 위해 나타날 것이다. X 선 선량 0.3 mRem보다 <낮거나 치과 X 선에 비해 약 10 배 이하이다. 다른 X 선 절차와 마찬가지로 잔류 방사선 없다. - 2 시간 취득 세션이 완료되면, 촬상 트레이에서 동물을 제거하고 그 케이지로 복귀. 랙에 반환하기 전에 전체 복구를 위해 동물을 모니터링합니다.
6. 데이터 분석
참고 : 분자 이미징 소프트웨어는 정량 및 XR의 번역을 허용폐 유체 간극의 비율로 AY 화소 강도. 개요 아래 단계 X 선 이미지를 정상화하고 관심 (ROI)의 정의 지역에서 강도를 정량화하는 데 필요한 절차.
- 투자 수익 (ROI) 템플릿 디자인
주 : 관심 템플릿의 영역은 2 시간 동안 조사 캡처 된 X 선 화상에 특정한 작성해야하고, 실험군 사이에서 X 선 강도를 비교하기 위해 사용되어야한다. 식염수 도전 소량 일반적으로 폐 4-6의 좌상 엽에 축적하기 때문에, ROI (들)은 폐의이 부분에 집중한다.- 2 시간 세트의 첫 번째와 마지막 X- 선 이미지를 엽니 다. 제 X 선 화상의 윈도우를 선택한다.
- 탐색 도구 모음에서 수동 - 로아> 새 투자 수익 (ROI) 설정을 선택합니다.
- ROI 타원을 클릭하고 적절하게 붉은까지 정의되지 않은 마우스의 왼쪽 lung.An 투자 수익 (ROI)을 커버하는 투자 수익 (ROI)을 작성, ROI는 박사입니다 설명다른 위치 agged. 정의 된 ROI는 숫자와 함께 파란색으로 설명한다.
- 여러 새끼가 몇 군데 경우, 동일한 세트에서 더 많은 개인의 ROI를 생성하기 위해 다른 마우스의 왼쪽 폐에 빨간색, 설명 ROI 드래그를 클릭합니다. 배경 투자 수익 (ROI)을 만들 분명 배경이있는 영역에 빨간색, 설명 투자 수익 (ROI)을 끕니다.
- 직접 두 번째 갈비뼈 아래에 각 마우스의 왼쪽 폐를 통해 거짓말을하는 로아의 위치를 포인터 선택을 선택합니다.
- 상단 툴바에서 이미지 디스플레이를 클릭합니다.
- 설정된 ROI 위치를 유지하면서 마지막 X- 선 이미지를 오버레이 이미지 디스플레이 대화 상자에서 오버레이를 확인합니다. 필요한 경우, 로아의 위치를 조정하고 두 이미지에 적절한 폐 범위를 보장하기 위해 탐색 도구 모음에서 포인터 선택을 선택합니다.
- 수동 ROI 대화 상자에서 [템플릿> 템플릿으로 저장합니다. 이름 t그는 템플릿하고 확인을 클릭합니다.
- 두 이미지를 닫습니다. 변경 내용을 저장할 것인지 묻는 메시지가 나타나면 아니오를 선택합니다.
- 연구 기간 동안 촬영 한 이미지를 모두 열어 유체 허가를 분석 캡처 각각의 X 선 영상에 ROI 템플릿을 적용합니다. 열려있는 파일을 선택하여 시작> 템플릿을 수동 로아을 클릭합니다.
- 드롭 다운 메뉴에서 이전에 만든 ROI 템플릿을 선택하고 열려있는 모든 문서에 적용을 클릭합니다.
- 스프레드 시트에 이미지에서 수출 수치 ROI 데이터
- 왼쪽 상단에서 파일> 데이터 내보내기> 투자 수익 (ROI)을 클릭합니다.
- 팝업 대화 상자에서 Excel에서 표시 및 자동 열기로 확인합니다.
- 수출 모두 열기 문서를 선택합니다.
- 파일 이름을 지정하고 저장을 클릭합니다.
- 닫기 분자 이미징 소프트웨어.
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Representative Results
그림 9의 왼쪽 패널 - (10)는베이스 라인에서 몇 군데 PN (10) 마우스 폐의이다 (사전 주입). 이러한 이미지는 신생아 폐의 왼쪽 엽에 생리 식염수 과제를 성공적으로 점안을 보여줍니다. 도 9에서, 마우스의 폐는 tracheally 위에서 정의한 식염수로 주입 하였다 (섹션 2.1 참조). 그림 9의 중간과 오른쪽 패널은 5 분, 2 시간 후 점안을 얻은 동일한 마우스에서 X 레이 이미지입니다; 이 동물은 성공적으로 식염수 도전을 삭제했다. 특히,이 동물 ROI의 X 선 강도는 화소 밀도 및 폐 유체 체적 간의 역 상관 관계가 있고, 따라서 (515)에 증가 187.67; 즉, 큰 상대 값은 적은 유체 폐있다. 적은 유체 attenuati있을 때보다 X 선 에너지 (따라서 큰보고 된 값)에 흡수되는 것을 이해하는 것이 도움이 될 수도X 선을 ng를. 도 10에서, 상기 PN 열 마우스의 폐는 tracheally 산화 글루타티온을 함유하는 화합물은 상피 나트륨 채널의 활성을 차단하여 식염수 도전 폐포 유체 간극을 억제 (2.1에 기재된 식염수 재구성)을 주입시켰다 이 동물의 ROI의 수치 X 선 불투명도를 증가를 나타내는 프리 심어 후 얻은 X 선 이미징 파일로부터 감소 할 것이다. 구체적으로는, 포스트 - 점적했다 약 5 분 동물의 순 강도 - 64, 및 감소 - 다시 (182)는 ROI의 화소 강도 및 폐 유체의 양 사이의 반비례 관계를 참고; 폐의 좌상 엽 증가 된 유체는 X 선 흡착에 감쇠.
투자 수익 (ROI)의 평가 순 강도 또한 연구자 표현 할 수 있습니다 수집 소프트웨어 불구하고, 폐 유체 통관 속도의 변화의 정량적 평가를 할 수 있습니다g / cm 3의 관점에서 데이터를 원할 경우. 또한, 연구자들은 자신의 컨트롤로 각각의 동물을 사용하고 같은 t = 5 분으로 초기 시점에 모든 X 선 강도 (이오)를 정상화 및 X 선 불투명도 순 변경 (변경 즉, 측정 값을보고 할 수 있습니다 폐 유체 볼륨에서).
그림 1. 노출 설정.이 스크린 샷이 프로토콜에 사용되는 적절한 노출 설정을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
2. 설정 파일을 그림. 이 스크린 샷은 사용할 파일 설정을 생성에 중요한 단계를 보여줍니다프로토콜입니다. (그림 참조) 팝업 창은 인수 설정 파일의 새 이름을 요청합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
3. 이미징 프로토콜 그림. 이 스크린 샷은 새로운 이미징 프로토콜이 성공적으로 만들어 졌는지 여부를 결정하는 중요한 단계를 보여줍니다. (그림 참조) 팝업 창이 나타납니다 새로운 프로토콜 이름은 생성 된 프로토콜에 대한 요구됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4. 보호 해주는ocol 단계.이 스크린 샷, 인수 설정 파일을 복제 새로운 단계를 삽입하거나 이미징 프로토콜 내에서 단계를 삭제하는 바로 가기를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
5. 조명 참조 그림. 이 스크린 샷은 조명 참조 파일을 만들기위한 적절한 동물 이미징 소프트웨어의 조명 참조 명령과 적절한 설정을 나타낸다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6. 자동 선택 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7. 조명 수정.이 스크린 샷은 동물 이미징 후 발생하는 조명의 참조 파일의 해당 응용 프로그램을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 8. 프로토콜을 실행합니다. 이 스크린 샷선택한 프로토콜을 실행하는 방법을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
클리어 폐의 그림 9. X 선 영상 PN의 대표 이미지 10 폐 식염수 도전 수신하기 전에. (사전 기르을, 왼쪽 패널); 5 분 후 점안 (가운데 패널) 및 염분 도전은 건강한 폐 (오른쪽 패널)에서 삭제 한 후 2 시간. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 침수 폐 10. X 선 이미지. Represen10 폐 전에 식염수 도전을 수신하는 PN의 tative 이미지 (사전 기르, 왼쪽 패널) paracellular 용질의 이동을 억제하는 글루타티온 이황화를 포함; 글루타치온 디설파이드 (가운데 패널) 및 폐포 홍수 (오른쪽 패널)로 연결 paracellular 전송을 억제 한 후 2 시간 5 분 후 점안. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.필터 없음 = 10 초 노출 0.1mm의 = 15 초 노출 0.2mm의 = 20 초 노출 0.4 = 30 초 노출 0.8 = 30 초 노출 X 선 필터의 크기는 CR의 특정 노광 시간과 상관조명 참조 파일을 먹고. 표 1. 조명 참조 파일.이 파일은 촬상 과정에서 사용되는 X 선 필터에 따라 조명 참조 파일을 생성하는 적절한 노출 시간을보고한다.
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Discussion
X 선 촬영을하여, 신생아 폐의 선명한 영상은 폐 유체 볼륨에 대해 분석 할 수있다. 우리 7,3,11 등 (10)은 성공적으로 자유롭게 마취 호흡 동물 모델에서 폐 유체 체적의 동적 변화를 결정하는 X 선 촬영을 이용했으며,이 기술은 신생아 폐 손상의 연구 발전에 큰 가능성을 보유하고있다. (예를 들어 X 선 상 constrast 10 대조적으로) 폐 유체 량을 평가하기 위해 방법을 사용하여 하나의 중요한 이점은 최대 5 PN10 마우스 새끼 동시에 연구 시설 및 코어의 공통 장소는 촬상 시스템을 이용하여 연구 될 수 있다는 .
익사 또는 폐 축소 여부에 적절한 폐 유체 볼륨을 주액,이 프로토콜의 성공적인 구현에 중요한과 X 선 이미징 프로토콜이 적용되기 전에 실험을 모색 할 필요가있다. 이 분석의 민감도가 매우 작은 있습니다 volum의 검출을 허용X 선 검출을 통해 얻은 식염수 말이지. 우리는 식염수 10 ㎕의 부피로 주입 신생아 폐의 X 선 불투명도의 차이를 구별 할 수 있었다. 식염수 도전 흡수 할 수 없기 때문에 나트륨 채널 억제제 폐포 공역 도입되면 X 선 혼탁의 차이는 더 뚜렷 폐의 공역으로 액체를 분비하는 것을 계속한다. 식염수 부적절 대량 산소 홍수 폐 호흡을 용이하게 할 수 마취 포트를 통하여 챔버 내로 흐르는 촬상 챔버에 동물을 배치 도입되는 경우에.
X 선 촬영을 이용한 연구 결과는 폐 습윤 건조 중량비 및 단백질 농도 (4)의 검지 에반 블루 같은보다 통상적 인 방법을 사용하여 측정 폐포 유체 간극에 필적한다. 이제 이러한 접근 신생아 마우스 새끼에 적용될 수 있음을 보여준다. 이 X 선 메신저폐 유체의 양을 결정하는 에이징 방법을 쉽게 추가 영상 방식으로 결합 될 수있다. 예를 들어, 형광 마커 또는 생체 발광 프로브는 동시에 폐포에 주입하고 평가할 수있다. (형광 및 발광 프로브의 검출은 8을 설명하고,이 보고서의 범위를 벗어되었습니다). 형광 바이오 마커를 검출 할 수있는 능력과 함께 (X 선 촬영을 사용하여) 폐 유체의 볼륨을 공동 등록 할 수있는 기능이 동적 분석 및 폐 유체 클리어런스를 측정하기위한 상용 시스템을 이용하여 여러 가지 장점 중 하나이다. 간극 및 상대 폐 유체 체적을 결정하기위한 이러한 방법을 이용하는 다른 장점은 (따라서 유의 관측을 달성하는데 필요한 동물의 수를 감소시키는) 길이 연구를 수행 할 수있는 능력, 자유롭게 호흡 폐 유체 체적의 작은 변화를 검출 할 수있는 능력을 포함 , 마취, 신생아 마우스 새끼. 를 사용하는 한 한정생체 촬상 방법에서는, 그러나, 마취 폐 내의 가스 및 혈류의 분포를 변화시킬 수 있다는 것이다. 환기와 관류 (V / Q) 및 입환의 불일치 따라서 신체의 산소를 감소, 건강한 성인 자원 봉사자 (12)에 마취 증가하는 것으로 나타났다. 이는 부작용이 있지만, 고무의 산소 농도를 증가시킴으로써 보상 될 수있다. 기술적 인 관점에서, X 선 플럭스 에너지 이미징 시스템 사이의 변화는 영상 연구를 수행하기 전에 각 시스템의 최적화가 필요할 수 있습니다. 예를 들어, 더 많은 플럭스 및 / 또는 우수한 양자 효율, 검출기와 X 선 소스와 시스템의 더 높은 F / 중지 X 선 임피던스의 작은 변화를 평가할 때 하부 비닝 상태가 더 좋은 이미지 품질을 제공 할 수있다.
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Disclosures
이 문서는 브루 커 BIOSPIN 후원 모드의 전 임상 영상에 특별한 문제의 일부입니다.
Materials
Name Company Catalog Number Comments Preclinical Imaging System (In- Vivo MS FX PRO) Bruker; Billerica, MA Ketamine Ketaset; Fort Dodge Animal Health, IA 26637-411-01 Xylazine Lloyd Laboratories; Shenandoah, IA 4821 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (with Calcium and Magnesium) Lonza; Walkersville, MD 17-513F Sodium chloride Amresco; Solon, OH 241 Potassuim chloride Fisher Scientific; Fair Lawn, NJ P217-3 Calcium chloride Sigma-Aldrich; St. Loius, MO C5080 HEPES Sigma-Aldrich; St. Loius, MO H3375 0.3 ml insulin syringe with 31 G x 5/16" (8 mm) needle BD Insulin Syringe; Franklin Lakes, NJ 328438 References
Tags
의학 문제 (113) 신생아 폐,
