Abstract
وقد خدم التقييم النسيجي للخزعة العضلات كأداة لا غنى عنها في فهم تطور وتقدم من أمراض الاضطرابات العصبية والعضلية. ومع ذلك، من أجل القيام بذلك، تحتاج الرعاية المناسبة الواجب اتخاذها عند استئصال والحفاظ على الأنسجة لتحقيق تلطيخ الأمثل. أسلوب واحد من الحفاظ على الأنسجة ينطوي على تحديد الأنسجة في الفورمالديهايد ومن ثم دمجها مع شمع البارافين. هذا الأسلوب يحفظ التشكل بشكل جيد ويسمح للتخزين طويل الأجل في RT لكن هو مرهق ويتطلب التعامل مع المواد الكيميائية السامة. وعلاوة على ذلك، النتائج الفورمالديهايد التثبيت في مستضد عبر ربط، وهو ما يتطلب بروتوكولات استرجاع مستضد لالمناعية فعالة. على العكس من ذلك، لا يتطلب باجتزاء المجمدة التثبيت وبالتالي يحتفظ البيولوجي التشكل المستضد. يوفر هذا الأسلوب أيضا ميزة واضحة بدوره سريعة حول الوقت، مما يجعلها مفيدة بشكل خاص في الحالات التي تحتاج إلى تقييم النسيجي سريع مثل intraoperaموانع الخزعات الجراحية. نحن هنا وصف الأسلوب الأكثر فعالية لإعداد خزعات العضلات التصور مع مختلف البقع النسيجية والمناعية.
Introduction
فحص الأنسجة العضلية يلعب دورا حاسما في فهم أنواع مختلفة من الاضطرابات العصبية والعضلية 1-4. عندما جنبا إلى جنب مع تقنيات أخرى، فإنه يسمح للباحثين للحصول على فكرة أفضل عن مظاهر وتطور علم الأمراض، ويمكن أيضا أن يكون أساسيا لتقييم فعالية التدخل العلاجي 10/05. ومع ذلك، لتكون دقيقة، تحتاج الأنسجة الى الحفاظ عليها بطريقة سليمة وذلك للحفاظ على الحالة الفسيولوجية على الفور قبل الختان. وهذا يتطلب عناية كبيرة خلال إزالة والحفاظ عليها وباجتزاء، وتلطيخ.
الأنسجة يمكن إعداد بطريقتين مختلفتين للدراسة المجهرية الخفيفة. الطريقة الأولى، الفورمالين الثابتة البارافين جزءا لا يتجزأ من (FFPE) أقسام، يتطلب الأنسجة لتكون ثابتة في 10٪ الفورمالديهايد مخزنة الطبيعي قبل أن يتم دمجهم مع شمع البارافين 11،12. الخطوة تثبيت تساعد على الحفاظ على التشكل أفضل ولكن أيضا عبر الروابط والعلاقات العامة المحليةoteins مما يستلزم إجراءات استرجاع مستضد المعقدة لالمناعية والقضاء على إمكانية الأنزيمية تلطيخ على هذه المقاطع 12. أقسام المجمدة، من ناحية أخرى، لا تحتاج إلى أن يكون ما قبل ثابتة أو معالجتها. لذلك، البروتينات هي قادرة على الاحتفاظ التشكل البيولوجية الأم 13،14. وعلاوة على ذلك، الأبواب المجمدة تسمح أيضا للمرة تحول سريع، وهو في أوقات الضرورة، على سبيل المثال في التشخيص أثناء العملية من الأورام اللحمية وخزعات جراحية أخرى 15. ومع ذلك، إذا لم ينفذ بشكل سليم، وهذا الأسلوب هو عرضة للتجميد الضرر الذي يدخل تغييرات على بنية العضلات مما يجعل الأجزاء غير صالحة للفحص النسيجي. وهذه الورقة تحدد الأسلوب الأكثر فعالية لإعداد الخزعات العضلية من أجل تحقيق تلطيخ الأمثل للفحص الصحيح.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. الأنسجة الحصاد وتجميد الأنسجة العضلية
- الموت ببطء الفأر مع جرعة زائدة من الأيزوفلورين (2-كلورو-2- (difluoromethoxy) -1،1،1-trifluoro-الإيثان). تنفيذ هذه الخطوة في غطاء الدخان واستخدام أسلوب الاحتواء الثانوي مثل مجفف أو جرة الجرس تحتوي على قطعة من القطن غارقة في الأيزوفلورين.
- تأكيد وفاة خلال الضغط بحزم قاطع الطريق. استخدام أسلوب الثانوية للقتل الرحيم مثل خلع عنق الرحم.
- الرطب الفراء مع الكحول 70٪ للحد من الخلاف من جدائل الشعر فضفاضة على العضلات. قشر الجلد قبالة الطرف باستخدام ملقط غرامة مثل # 5.
- فصل بعناية عضلة الفائدة (الظنبوبي الأمامي (TA) في هذه الحالة) من العظام تحتها، بدءا من وتر وإزالتها.
- استئصال العضلات، وتغطية ذلك في أكتوبر (قطع الأمثل درجة حرارة المركبة)، ووضع عليه شقة في قالب تجميد المتاح المسمى. تأكد من أن العضلات هي في توجهاته فيزيولوجية طبيعية (الرأس إلى تايل) دون التمدد. بدلا من ذلك، تجميد العضلات على الساحات الستايروفوم صغيرة ويعلقون عليه باستخدام دبابيس الحشرات لضمان طول الصحيح للعضلات.
- هدئ 2-methylbutane (isopentane) في كوب الصلب باستخدام النيتروجين السائل. هذا يستغرق في المتوسط 3-5 دقيقة. الحفاظ على اثارة بشكل متقطع حتى تبدأ الرواسب البيضاء التي تشكل في القاع وجدران الكأس.
ملاحظة: عند حدوث ذلك، قد وصلت isopentane الأمثل درجة حرارة التجمد (-150 درجة مئوية) - تراجع القوالب التي تحتوي على عضلات في برود 2-methylbutane. تجميد العضلات الصغيرة مثل إبهام اليد الحجاب الحاجز والباسطة للأصابع (EDL) ل6-12 ثانية، والعضلات الكبيرة مثل النعلية الساق (GS) وثلاثية الرؤوس لمدة 15 - 20 ثانية. لا تجميد العضلات لفترة طويلة جدا لأن هذا قد يؤدي إلى تكسير.
- نقل الأنسجة المجمدة إلى الثلج الجاف، والسماح للتتبخر isopentane (لاحظ أن هذه العملية تستغرق في المتوسط حوالي 15-20 دقيقة). التفاف الأنسجة في رقائق الألومنيوم وتخزينها في شltra درجة حرارة منخفضة (-70 ° C إلى -80 درجة مئوية) حتى باجتزاء.
2. تضمين الأنسجة في أكتوبر لإعداد كتلة الأنسجة
- الأنسجة النقل على الجليد الجاف لcyrostat لمنع ذوبان الجليد. الأنسجة نقل إلى غرفة ناظم البرد (وضعت في -20 إلى -24 ° C لتجنب ذوبان كامل للأنسجة) والسماح لهم تتوازن لمدة 30 دقيقة.
- تحويل خليج بلتيير تبريد جرا. إذا لم يكن لديك ناظم البرد هذا التبريد، استخدم الهباء الجوي رذاذ التبريد لتجميد بسرعة أكتوبر لا تدع ذوبان العضلات في أي لحظة خلال التضمين وهذا يمكن أن يؤدي إلى تلف التجميد.
- إضافة طبقة رقيقة موحدة من أكتوبر على القرص العينة وندعه يبرد. عندما يتم تجميد أكثر من أكتوبر على الجزء السفلي في حين لا يزال السائل على الجزء العلوي، وإدراج الأنسجة في الاتجاه الصحيح (عمودي أكتوبر للقطاعات عرضية وبموازاة أكتوبر للالمقاطع الطولية). استخدام الهباء الجوي رذاذ التبريد لتجميد بسرعة أكتوبر تلمس الجزء unembeded من النسيج مع تحويلة الحرارةractor وانتظر لمدة 45 ثانية.
- إضافة طبقة رقيقة أخرى من أكتوبر حول العضلات، ورذاذ مع الهباء الجوي رذاذ التبريد واستخراج الحرارة كما في الخطوة السابقة.
- الحفاظ على إضافة أكتوبر بزيادات صغيرة وبسرعة تجميد أكتوبر باستخدام مزيج من الهباء الجوي رذاذ ومستخرج حرارة التبريد حتى يتم تغطية العضلات كلها.
- وضع مستخرج الحرارة في الجزء العلوي من كتلة الأنسجة والانتظار لمدة 5 دقائق.
3. إعداد إنشائية والتعرف على أقسام من منطقة منتصف البطن من العضلات
- جبل العينة على رأس العينة. تشديد مقبض الباب لتأمين القرص. تأكد من أن القرص العينة على اتصال جيد مع رئيس العينة.
- ضبط درجة حرارة الغرفة ما بين -21 و -24 ° C وانتظر حتى يتم تحقيق درجة الحرارة المحددة.
- ضبط إعدادات سمك (7 ميكرون)؛ تقليم الكتلة عن طريق دفع أو سحب كتلة باستخدام إعدادات الخشنة وغرامة.
- جمع المقاطعفي مرحلة ما قبل تحسنت-شرائح المجهر موجبة الشحنة عن طريق الضغط على الجزء العلوي من الشريحة على الأقسام، وذلك باستخدام التجاذب بين الشحنات المتضادة لتسهيل انضمام الأقسام خفض إلى الشريحة.
- التعرف على أقسام منتصف البطن عن طريق قياس مساحة المقطع العرضي (CSA) من الأقسام. القيام بذلك باستخدام برامج التصوير على الكمبيوتر متصلة المجهر.
ملاحظة: يتم التقاط الصور المرحلة التباين ويتم قياس محيط العضلة بأكملها من خلال وظيفة البحث عن المفقودين على برنامج حاسوبي. هذا وسوف تسفر كل من وكالة الفضاء الكندية وكذلك الحد الأدنى قطر النمس (قياس حجم الألياف مستعرضة أن يتم التعبير عن أصغر مسافة بين اثنين من الظلال متوازية على طرفي نقيض من الجسيمات) القياسات. ملاحظة: عندما تبدأ القياسات CSA وقطر الحد الأدنى النمس إلى الهضبة، تم التوصل إلى منتصف البطن. - جرد وأرشفة الشرائح في -80 درجة مئوية لمدة تلطيخ المستقبل.
ملاحظة: أكتوبر لا تحتاج إلى إزالة قبل staininز الإجراءات. بمجرد coverslipped الشرائح، وأنهم على استعداد لتكون ملطخة على الفور.
4. تلطيخ
ملاحظة: في حين خطوة بخطوة الإجراءات التفصيلية ويمكن الاطلاع على ورقة بيانات المنتج وينبغي اتباع إجراءات تلطيخ، قد تكون هناك حاجة الأمثل الشخصية للحصول على تلطيخ الأمثل.
- بسبب تصاعد وسائل الإعلام (انظر الجدول) ليست غير قابلة للامتزاج مع الماء، ويذوى الشرائح من خلال درجات متزايدة من الكحول (2 دقيقة لكل منهما في 70٪، 95٪، و 100٪ من الإيثانول) واضحة لهم مع الزيلين (100٪ لمدة 5 دقائق) لضمان الشرائح لا تصبح مبهمة مع مرور الوقت.
- ساترة الأقسام والسماح لهم الجافة. صورة مع المجهر مجهزة برامج التصوير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويمكن رؤية مجموعة المتابعة للحصاد وتجميد الأنسجة في الشكل 1. يجب أن يتم تخزين الأنسجة رفعه على الشاش غارقة في برنامج تلفزيوني لتجنب تجفيف (الشكل 1A). عندما يتم اختيار الأنسجة ليتم استخدامها للتحليل النسيجي ينبغي أن تراجع في أكتوبر وضعت على البرد العفن في الاتجاه الصحيح وأقرب إلى طول الفسيولوجية ممكن لضمان التشكل دقيقة (الشكل 1B). لا يمكن أن يتحقق من الطين isopentane مناسبة لتجميد الأنسجة عن طريق isopentane التبريد في النيتروجين السائل واثارة حتى تظهر رواسب بيضاء صغيرة في الجزء السفلي. في هذه المرحلة، وسائل الإعلام هو مناسبة لتجميد (الشكل 1C). يجب تجميد أنسجة 6-15 ثانية في isopentane المبردة اعتمادا على حجم / سمك الأنسجة (الشكل 1D). بعد تجميد، فإن العضلات تظهر أبيض طباشيري وعند هذه النقطة يجب أن يتم تخزينها على الثلج الجاف ونقل لاحقا إلى -80 <قوي> ° C الفريزر.
يتم عرض وضع ناظم البرد والمكونات اللازمة لإعداد كتلة العضلات عن طريق دمج تدريجيا الأنسجة في أكتوبر في الشكل 2، وناظم البرد يجب تعيين بين -20 و -24 درجة مئوية (الشكل 2A). أكتوبر وتجميد وينبغي أن تكون متاحة بسهولة لخلق كتلة مناسبة للباجتزاء. داخل ناظم البرد ينبغي أن يكون فرش صغيرة للتلاعب وتتسطح أقسام قطع لشريحة صنع فضلا عن ملاقط للتعامل مع كتلة الأنسجة لأنه لا ينبغي أبدا أن يكون لمست بالأيدي للتأكد من الأنسجة لا تزال مجمدة (الشكل 2B). أكتوبر ينبغي أن يضاف إلى الأنسجة لإنشاء كتلة باجتزاء ولكن ينبغي تجميدها على الفور مع تجميد ورذاذ، ثم يتم تبريده مع مزيد من الحرارة مستخرج الصورة هنا (الشكل 2C). لالمقاطع العرضية، ينبغي أن توضع الأنسجة على رأسه العينة بحيث أنها موجهة بشكل عمودي على النصل (الشكل 2D). SEينبغي تعديل ttings لتحقيق سمك الباب المطلوب (5-10 ميكرون اعتمادا على النسيج).
إذا جمدت بشكل صحيح الوجه الأنسجة ينبغي أن تكون طباشيري بيضاء في حين أن الأنسجة التي تم تجميدها بطريقة غير سليمة أو إذابة أثناء عملية التركيب ستظهر أحمر / وردي. ويبين الشكل 3 الأنسجة التمثيلية للعينات تداولها بطريقة غير سليمة (الشكل 3A) وعينات من التعامل معها بشكل صحيح (الشكل 3B) .
يتم تحديد المنطقة منتصف البطن عن طريق قياس CSA وقطر الحد الأدنى النمس باستخدام مجهر مجهزة البصريات النقيض المرحلة وبرامج تحليل الصور. يظهر لقطة تمثيلية من برامج التحليل في الشكل (4). الهيماتوكسيلين ويوزين الصور الملون من الخزعة المجمدة ومقطوع بشكل صحيح بالاضافة الى تجميد خزعة التالفة من الظنبوبي الأمامي ترد (TA) العضلات في الشكل (5). أقسام التي تتم معالجتها بشكل صحيح سوف يكون morpholo متسقةغراي وحتى تلطيخ في جميع أنحاء (الشكل 5A). معالجة غير صحيح العضلات التي يتم تجميد تلف أو قبل الأوان سوف تظهر لديهم فواصل متعددة في التشكل ولها مظهر "القمح تمزيقه" (الشكل 5B) إذابة الشكل 6 يبين غرفة ترطيب لالمناعية الأمثل. الشرائح يجب تغطيتها مع parafilm، وأبقى على منشفة ورقية مبللة، ومختومة في مربع صغير لتجنب جفاف الفروع خلال المناعية الشكل 7 يصور المناعية شريحة العينة التي تم إعدادها بشكل صحيح والملون.
يجب أن يتم تخزين الرقم 1. إعداد وإنشاء لتجميد الأنسجة المناسبة. (A) رفعه الأنسجة على الشاش غارقة في برنامج تلفزيوني. (B) الأنسجة selectedfor النسيجيةتراجع التحليل في أكتوبر وضعت على البرد العفن في الاتجاه الصحيح (من البطن إلى وتر) وأقرب إلى طول الفسيولوجية وقت ممكن. (C) الطين من isopentane مناسبة للأنسجة. ملاحظة: تظهر رواسب بيضاء صغيرة في الجزء السفلي. (D) الأنسجة المجمدة بعد انخفاضه في isopentane. ملاحظة: مظهر أبيض طباشيري الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. ضبط ناظم البرد والمكونات اللازمة لباجتزاء. مجموعة (A) ناظم البرد بين -20 و -24 ° C مع أكتوبر والهباء الجوي رذاذ التبريد متاحة بسهولة. (B) داخل الإعداد للناظم البرد الكامل مع فرش صغيرة لمعالجة وتتسطح secti قطعإضافات لشريحة صنع فضلا عن ملاقط للتعامل مع كتلة الأنسجة. (C) المجمدة كتلة الأنسجة جاهزة للتبريد مع مستخرج الحرارة (السهم الأبيض). كتلة (D) الأنسجة تعيين على تركيب رأس جاهزة للقطع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. الأنسجة التمثيلية للعضلات الحفاظ عليها بشكل صحيح وغير صحيح. (A) المجمدة بطريقة غير سليمة أو التعامل معها (B) المجمدة بشكل صحيح والتعامل مع العضلات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. تحديد مساحة المقطع العرضي للعضلة TA باستخدام برامج التصوير نيكون. لقطة من المرحلة صورة النقيض من القسم العضلات التي تم دائري باستخدام تخيل برنامج لقياس CSA وقطر النمس دقيقة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الشكل.
الرقم 5. صور الممثل أعدت بشكل صحيح وغير صحيح العضلات H & E الملون. (A) قسم معالجة بشكل صحيح. (B) تجميد تلف العضلات القسم معالجتها بشكل غير صحيح. الرجاء المبادرة القطريةCK هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 6. ترطيب الغرفة مناسبة لالمناعية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
تم ملطخة الرقم 7. عينة المناعية الشريحة من استعداد وملطخة بشكل صحيح الشريحة. الشرائح مع فيبرونكتين] (الخضراء) ودابي (الأزرق). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد استخدمت الأنسجة والمناعية كأدوات رئيسية في فهم مظاهر وتطور علم الأمراض في مختلف الاضطرابات العصبية والعضلية. تقليديا، كانت ثابتة الخزعات العضلية لأول مرة في الفورمالديهايد ثم جزءا لا يتجزأ من شمع البرافين. في حين الفورمالديهايد تثبيت يحافظ على بنية الأنسجة ويسمح تخزين الأنسجة والنقل في RT، فإنه يعطل أيضا الإنزيمات والبروتينات crosslinks يستلزم مزيدا من الخطوات لتحقيق المناعية دقيقة. يتم التخلص من هذه المشكلة مع استخدام الأبواب المجمدة ولكن يعرض هذا الأسلوب تحديات تقنية فريدة من نوعها في الحصول على نتائج تلطيخ الأمثل والدقيق 14،15 التفسير.
أولا، من الضروري أن العينات يتم تجميد مباشرة بعد الاستئصال الجراحي كما انحلال ذاتي والتحلل تبدأ قريبا بعد إزالة من الجسم. كما يجب أن يتم تجميد الأنسجة بسرعة وبدقة لكمية مناسبة من الوقت التي تختلف تبعا لحجم/ سمك الأنسجة. إذا لم يتم ذلك بشكل صحيح، وتجميد الضرر سيحدث مما يجعل الأنسجة غير مجدية لتقييم النسيجي. بعد تجميد والأنسجة يجب أن يتم تخزين فورا على الثلج الجاف، ثم نقل إلى درجة حرارة منخفضة جدا (-80 ° C) الفريزر حتى باجتزاء. من المهم أن نلاحظ أن الأنسجة لا ينبغي إزالتها من الثلاجة دون على الثلج الجاف بسبب تجميد أذاب سيضر أيضا بنية الأنسجة.
ملاحظة أخرى ذات أهمية عند إجراء تحليل النسيجي هو الحرص على تحليل دائما نفس الجزء من الأنسجة من الاهتمام لضمان الاتساق بين التحليل. ويمكن القيام بذلك عن أقسام العضلات عن طريق إجراء تحليل للmidbelly. هذا هو جزء من العضلات التي هي سمكا وبالتالي سيكون لها أكبر مساحة المقطع العرضي. من أجل ضمان كنت حقا باجتزاء وmidbelly، ينبغي أن تقاس CSA من الأقسام التالية باستخدام برنامج التصوير النسيجي. Measuremوينبغي أن يستمر الوالدان أن يكون جعلت حتى تبدأ مساحة المقطع العرضي لهضبة. بمجرد حدوث ذلك، قد وصلت الى منتصف البطن. هذا فقط جزء من نسيج ينبغي أن تستخدم للتحليل النسيجي لضمان الاتساق بين المقارنات.
بعد انتهائه باجتزاء وتم إعداد الشرائح، وينبغي السماح لهم لتجف في RT 1 - 2 ساعة. تجفيف يسمح لتمسك السليم للقسم إلى الشريحة وأيضا يمنع الماء الزائد لبلورة التالي نقل إلى -80 ° C الفريزر. من المهم أن نلاحظ أن الشرائح وينبغي أيضا إلا أن يكون التعامل معها على الثلج الجاف عند اختيار الشرائح للتحليل لمنع تجميد أذاب دورات. مرة واحدة وقد تم اختيارها الشرائح لتلطيخ، شملت بروتوكولات مع وصمة عار يجب أن يتبع لأول مرة على أساس تجريبي حتى تحقق أفضل النتائج. عند تنفيذ المناعية، فمن المهم لجعل الشرائح على يقين لا تجف في جميع أنحاء الداخلي. تجفيف الشرائح يمكن أن يؤدي إلى التفاعل عابرالصورة لتبقى على حالها بعد الحضانة. لا يمكن إزالة هذه التفاعلات خلال يغسل ويؤدي إلى تلطيخ غير محددة. ويمكن تجنب تجفيف عن طريق الحفاظ على الشرائح في جو مرطب. أداء حضانات مع القسم يغطي مع parafilm والشرائح على منشفة ورقية رطبة مختومة في المربع شريحة صغيرة غير كافية لضمان الشرائح سوف يست جافة في أي وقت أثناء العملية.
الأنسجة هو أداة أساسية في تصور مورفولوجيا وجوانب مختلفة من الأمراض. في حين تافهة إلى حد ما، فإنه من الأهمية القصوى لنأخذ عناية كبيرة في إعداد الأنسجة لاستخدامها في الأنسجة. من الاستئصال إلى تجميد، باجتزاء والتلوين، وينبغي التعامل مع الأنسجة بطريقة من شأنها أن تجنب الضرر تجميد وتسفر عن الصور الأكثر دقة ممكنة. دون تحفظها على الوجه السليم، وتلطيخ لا تعكس بدقة علم وظائف الأعضاء، وبالتالي يؤدي إلى سوء فهم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cryostat | Leica CM 1850 | Leica Microsystems Inc. | Buffalo Grove, IL 60089 U.S.A., office phone 1-800-248-0123 Alternative: Richard Allen Scientific |
| Microscope | Nikon Eclipse 50i | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064 U.S.A., Phone: 1-631-547-8500 Alternative: Olympus |
| Image analysis software | Nikon Imaging Software Basic Research | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A., Phone: 1-631-547-8500 Alternatives: Image J, Metamorph |
| Isoflurane | 14043-220-05 | JD Medical Dist. Co., Inc. | 1923 West Peoria Avenue, Phoenix, AZ 85029 U.S.A. |
| OCT | 4583 | Sakura Inc. | Torrence, CA 90501 U.S.A. Alternative source: Leica Microsystem |
| Freeze It | 23-022524 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Disposable tissue mold | 22-363-554 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Colorfrost plus slides | 9991001 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Acetone | 650501-4L | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Ethyl alcohol | HC-1300-1GL | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| 2-methyl butane | M 32631-SL | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Xylene | HC-7001GA | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Cytoseal 280 | 8311-4 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Hematoxylin Gill #3 | CS402-1D | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Eosin | 6766007 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
References
- Bonnemann, C. G., et al. Diagnostic approach to the congenital muscular dystrophies. Neuromuscular disorders : NMD. 24, 289-311 (2014).
- Caughey, J. E., Pachomov, N. The diaphragm in dystrophia myotonica. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 22, 311-313 (1959).
- Fetterman, G. H., Wratney, M. J., Donaldson, J. S., Danowski, T. S. Muscular dystrophy. I. History, clinical status, muscle strength, and biopsy findings. AMA J Dis Child. 91, 326-338 (1956).
- Platzer, A. C., Chase, W. H. Histologic Alterations in Preclinical Mouse Muscular Dystrophy. The American journal of pathology. 44, 931-946 (1964).
- Mercuri, E., et al. Muscle magnetic resonance imaging involvement in muscular dystrophies with rigidity of the spine. Ann Neurol. 67, 201-208 (2010).
- Tasca, G., et al. Different molecular signatures in magnetic resonance imaging-staged facioscapulohumeral muscular dystrophy muscles. PloS one. 7, e38779 (2012).
- Girgenrath, M., Dominov, J. A., Kostek, C. A., Miller, J. B. Inhibition of apoptosis improves outcome in a model of congenital muscular dystrophy. The Journal of clinical investigation. 114, 1635-1639 (2004).
- Kumar, A., Yamauchi, J., Girgenrath, T., Girgenrath, M. Muscle-specific expression of insulin-like growth factor 1 improves outcome in Lama2Dy-w mice, a model for congenital muscular dystrophy type 1A. Human molecular genetics. 20, 2333-2343 (2011).
- Mehuron, T., et al. Dysregulation of matricellular proteins is an early signature of pathology in laminin-deficient muscular dystrophy. Skeletal muscle. 4, 14 (2014).
- Yamauchi, J., Kumar, A., Duarte, L., Mehuron, T., Girgenrath, M. Triggering regeneration and tackling apoptosis: a combinatorial approach to treating congenital muscular dystrophy type 1 A. Human molecular genetics. 22, 4306-4317 (2013).
- Sheriffs, I. N., Rampling, D., Smith, V. V. Paraffin wax embedded muscle is suitable for the diagnosis of muscular dystrophy. Journal of clinical pathology. 54, 517-520 (2001).
- Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P. Formaldehyde fixation. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 33, 845-853 (1985).
- Maccarty, W. C. The Diagnostic Reliability of Frozen Sections. The American journal of pathology. 5, 377-380 (1929).
- Shi, S. R., et al. Evaluation of the value of frozen tissue section used as 'gold standard' for immunohistochemistry. Am J Clin Pathol. 129, 358-366 (2008).
- Turan, T., et al. Accuracy of frozen sections for intraoperative diagnosis of complex atypical endometrial hyperplasia. Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP. 13, 1953-1956 (2012).
