Introduction
Техника, описанная разрешений визуализация в естественных условиях клеточных реакций сразу же после индукции бенгалроза фототромбоза в неповрежденной мыши. Бенгальский розовый (4,5,6,7-тетрахлор-2 ', 4', 5 ', 7'-tetraiodofluorescein) является светочувствительный краситель используется, чтобы вызвать ишемический инсульт в моделях на животных (мыши и крысы). После болюсного введения РБ через хвостовую вену и последующего освещения через разбавлять черепа с 564 нм лазерного света, тромб индукционных вызывая физиологическую инсульт 1. Метод был впервые описан Розенблюм и Эль-Саббан в 1977 году, а позже была адаптирована Уотсон в середине 1980-х годов 1,2. Вкратце, бенгальский розовый облучении зеленым светом возбуждения (561 нм лазера в нашем случае), который генерирует выработку активных форм кислорода, которые впоследствии активирует тканевой фактор, инициатор каскада свертывания крови. Индукция каскада коагуляции производит ишемическая леион, патологически отношение к клинической инсульта 3.
Ход имеет сложную патофизиологию из-за взаимодействия многих типов различных клеток, включая нейроны, глии, эндотелия и иммунной системы. Выбор лучшую технику для изучения частности клеточный процесс требует нескольких соображений. Экспериментальные методы можно в целом разделить на три категории: в пробирке, в естественных условиях и в кремнии с каждой имеющих преимущества и недостатки В пробирке исследования имеют основной недостаток удаления клеток из их естественной среды и, следовательно, не может воспроизвести эффекты, наблюдаемые в неприкосновенности,. живого животного. IN VIVO методы обеспечивают для повышения экспериментальной репликации болезненных состояний с повышенной поступательного значение. В силиконового обычно относится к компьютерному моделированию заболевания или клеточных процессов, и в то время больше используются для изучения потенциальных лекарственных взаимодействий для экзаменаPLE, любая информация, почерпнутые еще должна быть проверена в живых клетках или ткани.
Идеальная модель инсульта в лабораторных условиях должны продемонстрировать аналогичные патологические особенности тем, которые видели в человеческой популяции. В то время как существуют общие физиологические характеристики инсульта в популяции человека, есть также много различий в зависимости от типа травмы испытывал. Инсульт в человеческой популяции происходит в малых или больших окклюзии сосудов, геморрагические поражения и артерии к артерии или сердечно-эмболии, которые приводят к различным объем инфаркта, а также различия в механизмах, связанных с каждой патологии. Преимущество использования модели инсульта животное генерация воспроизводимых инфарктов, которые имитируют характеристики человеческой инсульта. Наиболее распространенные модели на животных инсульта включают окклюзии артерии с помощью: окклюзия средней мозговой артерии (эмболия или эндоваскулярные методы накаливания), какие модели дистального МСАО и модель фототромбоза. ПреимуществаD недостатки каждой модели были рассмотрены в другом месте (см 4 и 5). Глобальные ишемические модели (MCAO), в то время как относительно легко выполнить которые менее отношение к человеческой инсульта, чем координационные модели инсульта. Кроме того, эти методы сильно варьируют в индукции воспроизводимых поражений инфаркт мозга. Фототромбоза модель высокой воспроизводимостью тех пор, пока экспериментатор контролирует их эксперименты также, обеспечивая четкое преимущество над моделей MCAO. Тем не менее, из-за микрососудов оскорбление модель была описана для отображения минимального ишемической полутени, область, где клетки, как полагают, спасти, 6,7. Кроме того, Вазогенный отек и образование отека цитотоксических также может быть вызвана при облучении области изображения. Несмотря на эти ограничения техника обеспечила новый взгляд на многие физиологические процессы следующих инсульта 8, 9, 10, 11.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: Все процедуры на животных были одобрены уходу и использованию комитета Институциональная животных университета Техаса Научного центра здоровья в Сан-Антонио и согласуются с руководящими принципами прибыть.
1. Обезболивающие для корковых Подготовка
- Наведите в индукции камеры с 2-3% изофлуораном смешивается с кислородом для анестезии. Соблюдайте уменьшение частоты дыхания, как мышь наводится. Зажмите лапу мыши, чтобы определить, является ли мышь готова переехать в носовой конус. Примечание: Уровень наркотизации является важным шагом в любом в естественных условиях подготовки и уход должны быть приняты, чтобы не вызвать уровень, что вызовет глобальную ишемию.
- После того, как мышь под наркозом достаточно, передать животное в хирургии / платформы визуализации и поместить нос мыши в носовом конусе и применять 1-1,2% изофлуораном поддерживать наркозом состояние. Убедитесь, что мышь лежит на температурнымntrolled грелку, чтобы поддерживать температуру тела (37 ° С +/- 0,5 ° C) в течение оставшихся процедур. Поместите ветеринар мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
- Монитор физиологию мыши, используя систему оксиметрии импульса, используя хвост или ноги клип, поставляемый с системой. Убедитесь, что частота дыхания поддерживается между 50-65 вдохов / мин. Убедитесь, что частота сердечных сокращений остается между 300 до 450 ударов в минуту и насыщение кислородом поддерживается между 97-98%, чтобы обеспечить долгосрочное выживание животного.
- Когда мышь адекватно наркозом, брить волосы на черепе с помощью электрические ножницы, удалить остатки волос и чистой бетадином, затем этанолом тампоном. Повторите эту процедуру до трех раз, чтобы обеспечить стерильную хирургическую окружающую среду.
2. Хирургические процедуры
- С головы полностью очищенную и бритой, сделать 5 мм разрез в коже головы мыши, чтобы выявить черепно fissuВИЭ и найти брегмы.
- Используйте стерильным ватным аппликатором для удаления оставшихся фасции, покрывающей череп.
- Клей на заказ кольцо из нержавеющей стали (рис 1) с тканевым клеем к кости, лежащей теменной коры, используя стереотаксических координат брегмы: -1 до -3 мм и боковой: 2-4 мм. Примечание: Клей, как правило, устанавливает в течение 2 мин после размещения кольца на кости.
- Прикрепите кольцо стереотаксической держателя (рис 2), чтобы стабилизировать мыши и, чтобы предотвратить движение во время съемки.
- В хирургической сорт рассекает микроскопом, дрель медленно раздел 1-2 мм в черепе, используя скорость контролируется Dremel, как инструмент (Meisinger 3,9 мм сверло), убедившись, чтобы сохранить уровень площадь, как это сверлят. Добиться этого с помощью шаблона зиг-заг. Чтобы избежать перегрева устройства, установите скорость бурения на низкой и делать частые перерывы.
- При черепно череп становится хоккей в виду, по-прежнему истончениечерепа скальпелем лезвие с использованием той же схеме зигзагообразную сохранить разбавленной уровня поверхности, чтобы облегчить плавное удаление тонких слоев черепной черепа. Использование кончик лезвием скальпеля сделать небольшие линейные штрихи с легким нажимом, чтобы удалить тонкие слои кости, в то время. Продолжайте, пока не сосудистая отчетливо видна через рассекает микроскопом.
- Если экспериментатор прокалывает через перерыв или череп в процессе прореживания, усыпить животное в связи с вероятной повреждения основного мозга.
Примечание: черепа мыши примерно 300 мкм в толщину и состоит из двух тонких слоев компактной кости (один внешний и один внутренний слой) и слоем губчатой кости зажатой между двумя слоями компактной кости. Внешний слой компактной кости и большую часть губчатой кости удаляются в 5 мм области бурения, в результате чего приблизительной слоя 50 мкм из компактной кости оставшегося (см Фигура 2В). Visualizвания сосудистой будет гарантировать, что окончательный нетронутыми разбавлять черепа составляет приблизительно 50 мкм в толщину. Череп поэтому все еще присутствует, когда разбавлять этой толщины.
3. Микроскоп Настройка
- Используйте перевернутую систему микроскопа (обычный, конфокальной или системы двух фотонов), который имеет объективное инвертор. Примечание: Можно также использовать стандартный прямой микроскоп. Ограничивающим фактором будет пространство между сценой и целей. Изменения в стадии могут быть необходимы для выполнения этой установки.
- Безопасный хирургического / платформы изображений в выполненного на заказ этапе, который расположен в стороне основание микроскопа. Примечание: платформа выполнена с использованием лабораторного домкрата, чтобы вертикальное перемещение хирургическое / визуализации платформы под цели. В лаборатории разъем установлен на пластине, прикрепленной к четырех цилиндрических опор. (Смотрите рисунок 2).
- Расположите объективную инвертор, содержащий 20XЦель по черепной окна. Используйте внешний источник света, чтобы найти черепной окно, глядя через окуляры микроскопа и положение цели в области изображения. Примечание: Площадь изображения будут обозначаться присутствии сосудистой.
- Для целей на водной основе, использовать искусственную спинномозговую жидкость (ACSF) (130 мМ NaCl; 30 мМ KCl; 12 мМ КН 2 РО 4; 200 мМ NaHCO 3; 30 мМ HEPES и 100 мМ глюкозы) в качестве среды из-за возможного Утечка в полость черепа во время съемки (Рисунок 3).
4. Роза Бенгалия Краска Подготовка, управление и индукции инсульта
- Подготовьте свежий 20 мг раствора / мл бенгалроза в искусственной спинномозговой жидкости (ACSF); фильтровать и стерилизовать перед введением. Не используйте и не храните бенгалроза, когда он был смешан. Сделать свежее решение для каждого эксперимента.
- Дайте 0,1 мл в хвостовую вену инъекцию бенгалроза то время как сконсервирования черепной окно с 561 нм лазера, чтобы гарантировать адекватную введения раствора. Примечание: бенгальский розовый будет визуализирована в течение 5 секунд после инъекции в сосудистую сеть мозга. Весь сосуд должен быть заполнен бенгалроза.
- После адекватной инъекции красителя бенгальского розового выбрать подходящий сосуд для тромбоза на основе диаметра сосуда (40-80 мкм), чтобы обеспечить воспроизводимость конкретного объема поражения. Различия между артериями и венами, глядя на направлении кровотока: артерии будет двигаться от большего диаметра к судам меньшего диаметра, вены двигаться от меньшего к судам большего диаметра. Это легко сделать с помощью визуализации раз бенгальский розовый вводят.
- Измените настройку микроскопа следующим образом:
- Увеличьте время задержки. Примечание: Это будет зависеть от системы микроскопа быть использованы.
- Увеличение мощности лазера до 100%.
- Соберите изображения временной последовательности в 1 кадр / сек с помощьюМаксимальная скорость сканирования.
- Сканирование мышь, пока стабильна сгусток не образуется внутри сосуда. Примечание: Это обычно достигается в течение 5 мин непрерывного сканирования (рисунок 4).
- После индукции образования сгустка с использованием бенгальского розового, удалить мышь от области изображения обратно в рассекает микроскопом. Осторожно снимите кольцо из нержавеющей стали с черепной черепа. Осмотрите черепной окно для любого кровотечения. Если кровотечение происходит, прекратить эксперимент.
- Использование 6.0 мононити шов, чтобы закрыть разрез по черепу. Поместите мазь с антибиотиком по линии шва, чтобы предотвратить инфекцию. Вводят Buprenex (0,05 мг / кг) подкожно каждые 12 ч в течение трех дней для лечения боли.
- Верните мышь к камере регенерации после удаления из наркоза до полностью проснулся и свободно двигаться.
- Вернуться мыши на чистую клетку для дальнейшего расследования в более позднее время.
5, Продольный изображений в последующие дни
- Применять следующие методы для выполнения продольной томографии в последующие дни после фототромбоза.
- Обезболить мыши, как описано в разделе 1 методов.
- По адекватной анестезии вновь открыть головы путем удаления любых остаточных швов возобновить кожа, покрывающая ранее пробуренных поле изображения.
- Используйте стерильным ватным аппликатором для удаления оставшихся фасции, покрывающей череп.
- Клей на заказ кольцо из нержавеющей стали (рис 1) с тканевым клеем к кости, лежащей предыдущее поле изображения.
- Прикрепите кольцо стереотаксической держателя (рис 2), чтобы стабилизировать мыши и, чтобы предотвратить движение во время съемки.
- Найдите сосудистую, лежащий в основе ранее утонченную череп. Используйте хвостовую вену инъекцию FITC-декстрана, чтобы проверить наличие ранее индуцированного сгустка.
- Используйте 6.0 мононити шов, чтобы закрыть инcision по черепу. Поместите мазь с антибиотиком по линии шва, чтобы предотвратить инфекцию. Вводите Buprenex (0,05 мг / кг) подкожно каждые 12 ч в течение трех дней для лечения боли.
- Верните мышь к камере регенерации после удаления из наркоза до полностью проснулся и свободно двигаться.
6. Проверка хода индукции (Посмертное)
- В заключение исследования, проверить объем хода, используя хлорид окрашивание (TTC) 2,3,5-трифенилтетразолия, как показано на рисунке 5. Полный метод может быть найден в 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Целью этого метода было вызвать ишемический инсульт в моделях на животных (мыши и крысы) после болюсной инъекции RB через хвостовую вену и последующего освещения разбавленной черепа с 561 нм лазерного света. Изображения на рисунке 4 показывают прогрессирование образования сгустка в пределах одного судна при облучении в области 0, 1, 1,5 и 2 мин. До образования сгустка все судно белый из-за сыпучий бенгалроза. После индукции облучения сосуда существует очевидная потемнение частей судна и указывает на индукцию образования сгустка (кадры 1 и 1,5 мин). После полной окклюзии есть заметное накопление бенгальский розовый краситель (белой области), предшествующий сгусток (черная область) в пределах судна. 2 минут кадра демонстрирует полную окклюзию артерии.
Чтобы проверить наличие ишемической окрашивания ход TTC могут быть использованы. ТТС соmmonly используется пятно для обнаружения инфаркта головного мозга с образованием красного формазана продуктов TTC в здоровой ткани. Отсутствие формазана производства (белый ткани) показывает область инфаркта. Области, указанные коробки на рисунке 5 демонстрируют типичные размеры поражения, полученные 1 и 5 дней из двух отдельных животных следующие сгустка, полученного в сосуде примерно 80 мм в диаметре. Анализ изображений выполняется на ровной сканера кровать и использования программного обеспечения ImageJ. Регионы интересов может быть обращено в ImageJ, чтобы измерить площадь ударного объема для каждого мозга.
Рисунок 1:. Кольцо из нержавеющей стали Три взгляда (сверху, сбоку и снизу) показаны в кольцо из нержавеющей стали держатель, который применяется к черепу мыши, чтобы прикрепить его к стереотаксической держателя.
Рисунок 2:. Микроскоп установки платформы для визуализации RB фототромбоза хирургическое / платформа визуализации содержит держатель для анестезии трубки с головная и стереотаксической держатель для кольца из нержавеющей стали, прикрепленной к черепу животного, чтобы уменьшить движение животного во изображений. Платформа размещается на верхней части и прикреплена к лабораторного домкрата, чтобы вертикальное перемещение для позиционирования мыши под объектив микроскопа. Лаборатория домкрат затем прикрепляется к сцене микроскопа, который позволяет для горизонтального движения. Столик микроскопа помещают сверху и закреплены на четырех цилиндрических опор.
Рисунок 3: Изображение изображений / хирургического дизайна и ориентации платформы под объективной инвerter. () панели слева показывает представительный образ позиционирования наркозом мыши (анестезия носа конус кратко удалены при фотосъемке). Обратите внимание на использование пользовательского стальное кольцо для крепления черепа мыши, чтобы уменьшить вклад дыхания артефакты во всех процедурах обработки изображений. Изображение справа показывает изображение коркового окна при вскрытии микроскопом. (Б) Эскиз тонкой подготовки черепа из корональной зрения демонстрирующего слои черепа по отношению к твердой мозговой оболочки и толщины утонченной части по отношению к полной толщине черепа.
Рисунок 4: Изображение формирования бенгальский розовый сгустка Типичные изображения одного сосуда, содержащего бенгалроза краситель, который вводили через хвостовую ВЭИ.п мыши. Изображения демонстрируют прогрессирование тромба внутри сосуда после облучения области на 0, 1, 1,5 и 2 мин. Обратите внимание на накопление красителя бенгальского розового (белый), предшествующего сгусток (черный) в 2 мин кадра, демонстрируя полную закупорку артерии.
Рисунок 5: хлорид 2,3,5-трифенилтетразолия (ТТК) изображение РБ индуцированного поражения Типичные изображения показаны на 1 день и 5 после фототромбоза индукции.. Мышей умерщвляли и головной мозг быстро извлекают и разрезают на 1 мм корональных секций и окрашивали TTC в соответствии со стандартными методами. ТТС обычно используется краситель для обнаружения инфаркта головного мозга с образованием красного формазана продуктов TTC в здоровой ткани. Отсутствие формазана производства (белый ткани) показывает область инфаркта.участки, указанные коробки демонстрируют типичные размеры повреждения, полученные после сгусток, полученный в сосуде приблизительно 80 мкм в диаметре.
Рисунок 6: Схематическое представление фототромботической процедуры бенгалроза.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Возможность перевести экспериментальный хода патофизиологии от животного к человеку заявка была сталкивается с неудачей. Тем не менее, использование моделей животных, таких как модели фототромбоза, позволяет улучшить понимание хода патофизиологии и исследование новых терапевтических подходов, чтобы обеспечить нейропротекции после инсульта. Маленькие штрихи корковых и microinfarctions произведенные фототромботической модели клинически значимых субклинического или "тихой" инсульт 13-15, который имеет высокую распространенность и затрагивает приблизительно 4 процента населения Соединенных Штатов (около 11 миллионов человек) каждый год 16. Тихая инсульт не имеют классические симптомы инсульта, присутствующие в большей инсульта, такие как паралич, потеря чувствительности и сложности говоря, такие, как видно в средней мозговой артерии (СМА) окклюзии или транзиторная ишемическая атака (ТИА) 17. Кроме того, молчание инсульта отличается от лакунарной инсульта, которыйвызвано окклюзии одной проникающей артерии в более глубоких структур головного мозга или в стволе головного мозга, а также клинически проявляется с двигателем, сенсорными или смешанными дефицита 18. Пациенты с субклинической или "тихой" инсульта, как правило, не проявляют каких-либо внешних симптомов и часто не знают они даже перенес инсульт. Тихие результаты удара в субклинической снижения когнитивных функций, проявляемой дефицита в памяти, принятия решений, а также изменения в поведении. Со временем, несколько молчаливые инсульты приводят к клинически значимых признаков потери памяти, известной как сосудистого или нескольких слабоумие. Тем не менее, тихий ход повреждения головного мозга могут быть обнаружены с помощью нейровизуализации, и помещает пациента в опасности для ТИА и тяжелого инсульта в будущем 19.
Фототромбоза модель позволяет для производства воспроизводимая в естественных условиях модели тромбоза в неповрежденной, анестезии мыши с помощью светочувствительного красителя бенгальского розового (РБ) в комбинация с конфокальной микроскопии. Есть много преимуществ в естественных условиях фототромбоза модели. Одним из преимуществ этого метода является возможность заранее определить местоположение инсульта с использованием стереотаксических координат; позволяя один, чтобы изучить конкретные клеточные популяции по животных. Кроме того, воспроизводимость размера повреждений и объема хорошо контролируется с использованием этого метода, изменяя интенсивность лазерного света и управления для размера сосуда при облучении 20. Этот метод также позволяет для детального изучения изменений в пери-инфаркта синапсах и соответствующих контралатеральной коры 4. Хотя один молчит хода вызывает минимальные дефициты, воспроизводимость этой модели позволяет способности индуцировать несколько молчащих штрихов в определенных областях, которые могут быть использованы для имитации различных дисфункций головного мозга, таких как сосудистой деменции. Разработка порога между несколькими немого ударов и клинически дефицит может быть определена в SPECIFIC области мозга посредством использования этого метода, а также. Наконец, модель позволяет для продольных исследований в то же животное, позволяющих как острые, так и хронические эффекты наблюдаются.
Есть, однако, некоторые недостатки в использовании модель фототромбоза. Одним из недостатков включает производство поражением, который отмечен как имеющий малый ишемической полутени по сравнению с другими моделями фокальной инсульта 4. Во-вторых, Вазогенный и отек цитотоксический образование можно из-за повреждения, которые могут возникнуть во время индукции фототромбоза, который больше напоминает травматических повреждений головного мозга, чем фокусное инсульта 4.
При использовании модели фототромбоза есть ряд факторов, которые должны быть контролируемых в течение всего эксперимента. Очень важно, что физиологическое состояние животного контролироваться на протяжении всех процедур обработки изображений. Хорошо известно, что уровень анестезии может влиять на физиологическое улАТУС животного, с более чем обезболивающие вызывая снижение скорости сердечных сокращений и доставку кислорода к животному. Это является важным фактором, так как это приведет к снижению наличие кислорода в мозг в результате глобальной ишемии. Таким образом, использование системы для мониторинга физиологического состояния животного позволит одновременного неинвазивного записи: насыщение кислородом артериальной (SPO 2); Частота Сердцебиения; Дыхание Оцените; Импульсный Вздутие (индикатор местного кровотока и качества сигнала); Дыхание Вздутие (суррогат intraplueral давления); и температура ядра у мышей и крыс. Это становится все более важным для контроля анестезии смешивает при работе с любой моделью животного, чтобы уменьшить неожиданные смешивает в переводе экспериментальные результаты на льготы в клинической топить. Выбор, продолжительность и глубина анестезии может оказать пагубное воздействие на животной модели экспериментального инсульта. Исследования показали, что анестетики могут уменьшить инфаркта SiZE и может даже обеспечить некоторую защиту от церебральной ишемии 21-23,24. Кроме того, изменения в производстве реактивных форм кислорода была также продемонстрирована в исследовании сравнивали применение галотана и пропофола 25. Это важно в тупик, как одна из основных гипотез в гибели нейронов, связанной с инсультом является производство активных форм кислорода.
Один осложнение использованием в естественных условиях микроскопии, чтобы изучить реакцию мозга на инсульт является ограничение достижимой глубине изображения. В нашей лаборатории с использованием конфокальной микроскопии глубина изображения, которые могут быть достигнуты в диапазоне 100-200 мкм, при использовании двухфотонного микроскопа может увеличить эту глубину между 400-500 мкм. Эти смешивает в настоящее время решены путем развития целей с увеличенным рабочим расстоянием и уменьшением размера. Например, индекс преломления градиент (GRIN) микролинзы microendoscopes остроумиеч диаметр между 35-1,000 мкм и маленький доступна на сегодняшний день. Этот тип зонда не могут быть вставлены в ткань, не вызывая повреждение инвазивной и имеют низкие числовые апертуры. Из-за низкой NA разрешение ниже по сравнению с традиционными задачами 26 оптической микроскопии.
Таким образом, модель фототромбоза бенгальский розовый индуцирует инфаркт небольшого размера и полезен при изучении клеточного ответа на инфаркт в обоих острых и хронических фаз в хорошо определенной клеточной популяции. Эта модель демонстрирует существенные клеточные характеристики наблюдаются при ишемии следующей MCAO и, следовательно, является полезным в оценке нейропротекторные / neuroregenerative лечения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Rose Bengal | Sigma | 330000 | |
| Isoflurane Anesthetic | MWI Veterinary Supply | 088-076 | |
| Vetbond | 1469SB | 1469SB | |
| aCSF | 126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glucose and 26 mM NaHCO3 (pH 7.4). | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissecting Scissors | Bioindustrial Products | 500-410 | |
| Operating scissors 14 cm | Bioindustrial Products | 12-055 | |
| Forceps Dumont High Tech #5 style, straight | Bioindustrial Products | TWZ-301.22 | |
| LabJack 132X80 | Optosigma Co | 123-6670 | |
| Platform for Labjack 8X 8 | Optosigma Co | 145-1110 | |
| Ear bar holder from stereotaxic setup | Stoelting/Cyborg | 51654 | |
| Dispomed Labvent Rodent anesthesia machine | DRE, Inc. | 15001 | |
| Tech IV Isoflurane vaporizer | DRE, Inc. | 34001 | |
| F Air Canister | DRE, Inc | 80120 | |
| Bain circuit breathing tube | DRE, Inc | 86111B | |
| Rodent adapter for bain tube | DRE, Inc | 891000 | |
| O2 regulator for oxygen tanks | DRE, Inc | CE001E | |
| Rodent induction chamber | DRE, Inc | 15004C | |
| Ethicon Silk 6-0; 18 in with P-3 needle | Suture Express | 1639G | |
| Objective inverter Optical Adapter | LSM technologies | ||
| Foredom drill Dual voltage 110/120 | Foredom | 134.53 | |
| Meisinger 3.9 mm drill bit | Meisinger | (Ref#310 104 001 001 009) | |
References
- Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents. Circulation Research. 40, 320-328 (1977).
- Owens, A. P. 3rd, Mackman, N. Sources of tissue factor that contribute to thrombosis after rupture of an atherosclerotic plaque. Thrombosis Research. 129, Suppl 2. S30-S33 (2012).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2, 396-409 (2005).
- Manual of stroke models in rats. , 332 CRC Press. (2009).
- Herz, R. C., Kasbergen, C. M., Hillen, B., Versteeg, D. H., de Wildt, D. J. Rat middle cerebral artery occlusion by an intraluminal thread compromises collateral blood flow. Brain Research. 791, 223-228 (1998).
- Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism : Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 8, 474-485 (1988).
- Zheng, W., et al. Purinergic receptor stimulation reduces cytotoxic edema and brain infarcts in mouse induced by photothrombosis by energizing glial mitochondria. PloS One. 5, e14401 (2010).
- Zheng, D. M., Wewer, J., Lechleiter, J. P. 2Y. 1R. -initiated IP3R-dependent stimulation of astrocyte mitochondrial metabolism reduces and partially reverses ischemic neuronal damage in mouse. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 600-611 (2013).
- Witte, O. W., Stoll, G. Delayed and remote effects of focal cortical infarctions: secondary damage and reactive plasticity. Advances in Neurology. 73, 207-227 (1997).
- Hagemann, G., Redecker, C., Neumann-Haefelin, T., Freund, H. J., Witte, O. W. Increased long-term potentiation in the surround of experimentally induced focal cortical infarction. Annals of Neurology. 44, 255-258 (1998).
- Kramer, M., et al. TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses. Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).
- Blinder, P., Shih, A. Y., Rafie, C., Kleinfeld, D. Topological basis for the robust distribution of blood to rodent neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 12670-12675 (2010).
- Nishimura, N., Rosidi, N. L., Iadecola, C., Schaffer, C. B. Limitations of collateral flow after occlusion of a single cortical penetrating arteriole. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30, 1914-1927 (2010).
- Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 365 (2007).
- Blum, S., et al. Memory after silent stroke: Hippocampus and infarcts both matter. Neurology. 78, 38-46 (2012).
- Heinsius, T., Bogousslavsky, J., Van Melle, G. Large infarcts in the middle cerebral artery territory Etiology and outcome patterns. Neurology. 50, 341-350 (1998).
- Wardlaw, J.
- Inoue, Y., et al. Ischemic stroke under anticoagulant therapy]. Rinsho shinkeigaku. Clinical Neurology. 50, 455-460 (2010).
- Tiannan Wang, W. C., Xie, Y., Zhang, W., Ding, S. Controlling the Volume of the Focal Cerebral Ischemic Lesion through Photothrombosis. American Journal of Biomedical Sciences. 2, 33-42 (2009).
- Head, B. P., Patel, P.
- Kirsch, J. R., Traystman, R. J., Hurn, P. D. Anesthetics and cerebroprotection: experimental aspects. International Anesthesiology Clinics. 34, 73-93 (1996).
- Koerner, I. P., Brambrink, A. M.
- Gelb, A. W., Bayona, N. A., Wilson, J. X., Cechetto, D. F. Propofol anesthesia compared to awake reduces infarct size in rats. Anesthesiology. 96, 1183-1190 (2002).
- Bhardwaj, A., Castro, I. A., Alkayed, N. J., Hurn, P. D., Kirsch, J. R. Anesthetic choice of halothane versus propofol: impact on experimental perioperative stroke. Stroke; A Journal Of Cerebral Circulation. 32, 1920-1925 (2001).
- Barretto, R. P., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses. Nature Methods. 6, 511-512 (2009).
