תנודות הן מאפייני רשת בסיסיים והם מווסתים על ידי מחלה ותרופות. לומד תנודות המוח פרוסה מאפשר אפיון של רשתות מבודדות בתנאים מבוקרים. פרוטוקולים ניתנים להכנת פרוסות מוח חריפות ללעורר תנודות γ CA1.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
דור של תנודות γ CA1 מקומיות על ידי גירוי Tetanic
במאמר זה
סיכום
תקציר
תנודות רשת עצביות הן תכונות חשובות של פעילות מוח בבריאות ובמחלה ויכולות להיות מווסתת על ידי מגוון רחב של תרופות בשימוש קלינית. פרוטוקול מסופק ליצור מודל לחקר תנודות γ CA1 (20 - 80 הרץ). תנודות γ אלה הן יציבים לפחות 30 דק 'ותלויים בפעילות הסינפטית מעוררת ומעכבת בנוסף להפעלה של זרמי קוצב לב. יש תנודות מגורה Tetanically מספר המאפיינים לשחזור בקלות ובכימות כוללים ספירת ספייק, משך תנודה, חביון ותדירות שתדווחנה על מצב הרשת. היתרונות של תנודות גירוי חשמלי כוללים יציבות, שחזור ורכישת אפיזודי המאפשרים אפיון חזק של פונקצית רשת. מודל זה של תנודות γ CA1 יכול לשמש כדי לחקור מנגנונים תאיים ולחקור באופן שיטתי כיצד עצבי רשת פעילות משתנה במחלה ועל ידי תרופות.פרמקולוגיה מדינת מחלה ניתן לשלב בקלות על ידי השימוש בפרוסות מוח ממודלים של בעלי חיים מהונדסים גנטי או התערבותית כדי לאפשר בחירה של תרופות שמתמקדות מנגנוני מחלה.
מבוא
תנודות רשת המוח מתרחשות בתוך תחומי תדרים שונים שתואמים למדינות התנהגותיות. במכרסמים, תנודות בהיפוקמפוס θ (5 - 10 הרץ) הם נצפו בהתנהגויות גישוש 1,2, תוך תנודות γ - עמית (20 80 הרץ) עם תהליכים קוגניטיביים שונים, כוללים תפיסה ותשומת לב 3,4. פעילות רשת γ סינכרוני גם מעורבת בפתולוגיה של הפרעות כגון 5,6 אפילפסיה וסכיזופרניה. לדוגמא, תנודות γ הם חשבו מתאימות לאזורים של מוקדי אפילפסיה קליפת המוח 5,7,8 ויכולות לשמש כסמנים של pharmacosensitivity או התנגדות, שני תחומים חשובים של חקירה באפילפסיה מחקר 9.
פרוסת המוח בהי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים על עכברים שאושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים Florey המכון.
1. הגדרה לחיתוך פרוסות המוח
- הכן פתרון חיתוך המורכב מ( מ"מ) 125 כולין-Cl, 2.5 KCl, 0.4 CaCl 2, 6 MgCl 2, 1.25 לאא 2 PO 4, 26 NaHCO 3, 20 D-גלוקוז רווי בגז carbogen (95% O 2 -5 (פתרון הקלטת aCSF)% CO 2) ונוזל השדרתי מלאכותי מורכב מ( מ"מ) 125 NaCl, 2.5 KCl, 2 CaCl 2, 2 MgCl 2, 1.25 לאא 2 PO ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
גירוי Tetanic של אוריין השכבה שנוצר תנודות γ חזקות ושחזור (35.4 ± 2.2 הרץ), ראה איור 3. על מנת להוכיח כי התנודות נוצרו בתוך רשת CA1 המקומית התשומות מCA3 נותקו על ידי החיתוך הפרוסה באזור Ca 2 באמצעות מחט G 32 כפופה. מאפייני התנודה בפרוסות לחתוך לא היו שונים מהפרוסות חתוכות (p = 0.85; פרוסות לחתוך 6.16 ± 1.1 קוצים, n = 6; פרוסות חתוכות 5.89 ± 0.8 קוצים, n = 6), מצביעים על כך שהתנודות נוצרות באופן מקומי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטה חזקה כדי ליצור תנודות γ CA1 בפרוסות מוח חריפות מתוארת. התנודות שנוצרו נובעות ממעגל מקומי מאפשר הזדמנות טובה יותר לשליטה והבנת בסיס neurophysiological של תנודות רשת 12. כל ערוצי 2 + קולטני AMPA, קולטני GABA, אני שעות ו- T-הסוג Ca נדרשים לתנודות γ במודל זה. בעוד תנודות CA1 המקומיות שתוארו כאן יכולות להיות שנוצרו חסונה זה תלוי בהבטחת שפרוסות המוח בריאה. שלב קריטי הוא ההסרה מהירה של המוח מהגולגולת, נזהרת שלא לחדור למוח בזמן ההסרה וטבילה אז מהירה ב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש המחברים אין לחשוף.
תודות
נתמך על ידי APA ל-RJH, מענק תוכנית NHMRC 400121 ל-SP, ומלגת NMHRC 1005050 ל-SP. CAR מכיר בתמיכת ה-ARC (FT0990628) ותוכנית המלגות של DOWD. מכון פלורי למדעי המוח ובריאות הנפש נתמך על ידי קרנות תשתית של ממשלת מדינת ויקטוריה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 4-(N-Ethyl-N-phenylamino)-1,2- דימתיל-6-(מתיל-אמינו) פירימידיניום כלוריד (ZD7288) | סיגמא-אולדריץ' | Z3777 | |
| ביוקולין | סיגמא-אולדריץ' | 14340 | |
| 6-ציאנו-7-ניטרוקווינוקסה-קו-2,3-דיון (CNQX) | סיגמא-אולדריץ' | C127 | |
| ניקל | סיגמא-אולדריץ' | 266965 | |
| קרבמזפין | סיגמא-אולדריץ' | C4024 | |
| (2R)-אמינו-5-פוספונופנטנו-אט (APV) | Tocris Bioscience | 0105 | |
| Retigabine | ChemPacific | 150812-12-7 | |
| כולין-Cl | סיגמא-אולדריץ' | C1879-5KG | |
| KCl | סיגמא-אולדריץ' | P9333-500G | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | S9638-250G | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S6297-250G | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653-5KG | |
| גלוקוז | סיגמא-אולדריץ' | G8270-1KG | |
| CaCl2 • 2H2O | Sigma-Aldrich | 223506-500G | |
| MgCl2 & שור; 6H2O | Sigma-Aldrich | M2670-500G | |
| אלקטרודה | זכוכית מכשיר הרווארד | GC150F-10 | |
| אלקטרודה מתכתית מגרה דו-קוטבית קונצנטרית | FHC | CBBPF75 | |
| מבודד דיגיטלי | מקבל מכשירים | דגם BJN8-9V1 | |
| דגם 1800 ampמערכות | AMG | דגם 1800 ampliifier | |
| Digitizer | National Intruments | NI USB-6211 | |
| Vibrotome | Leica | VT1200s |
מקורות
- Buzsaki, G. Theta rhythm of navigation: link between path integration and landmark navigation, episodic and semantic memory. Hippocampus. 15 (7), 827-840 (2005).
- Vanderwolf, C. H. Hippocampal electrical activity ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
