Abstract
在这个协议中，社会动机是通过一对操作条件反射范式测量小鼠。为了进行实验，两腔梭箱分别配备有两个操作性杆（左和右）和一个食品贮器在一个室中，然后从所述第二腔室由自动闸门覆盖的线栅分割。不同的刺激小鼠，在整个旋转测试天，出任线栅背后的社会刺激，以及闸门的开启以下是唯一可见的。试验鼠进行了培训，以杠杆压，以打开门，获得刺激合作伙伴，持续15秒。获得社会报酬所需杠杆压力机的数量逐步增加对3.测试会话固定时间表结束后测试小鼠停止杆挤压，连续5分钟。最后一个增强比率或断点可作为社会动机的定量量度。对于第二个范例，叔EST小鼠进行了培训，以获得无论是食物奖励或社会报酬左右杠杆压力机之间的区分。小鼠奖励每个相应杆的每3印刷机。食品和社会奖励的数量可以比作为放置在每一个奖励值的测量。每个奖励类型的比例也可小鼠品系之间比较，并在该比率的变化可以测试会话中进行监测，以测量饱食与给定的奖励类型。这两种操作条件反射范式是社会动机自闭症和社会行为的其他疾病的小鼠模型的量化是非常有用的。
Introduction
近年来，遗传和环境因素的社会行为，包括自闭症谱系障碍，病症的联系，导致了设计的探索这些因素在社会行为中的作用的小鼠模型的发展。这创造了在小鼠的社会行为的特征的新技术，包括社会动机1的定量测量的要求。
有几个建立范例，可以用来然而展示社会动机在小鼠;他们都有自己的量化行为动机的强弱能力的严重限制。例如，一些早期行为评估包括那些从来没有见过两只小老鼠之间的社会互动的简单的观察。几个行为包括将至，下面，嗅和疏导经常测量，并且可以提供社会积极性的一个指标。这些研究最初进行大鼠2-5，再后来改编为小鼠6,7使用。习惯化/ dishabituation社会识别范例，其中试验动物反复暴露于相同的刺激动物（习惯化），然后暴露于一种新型动物（dishabituation）也提供社会动机8的测量结果。作为标签表明，典型的动物会显示给相同的刺激动物的重复存在一个习惯于行为反应，但将演示dishabituation，或返回到基线时，当暴露于新的动物。在习惯反应可能表明在测试鼠标的积极性的下降与刺激小鼠互动。社会选择范例允许测试鼠标到空室和刺激小鼠限制在不同室之间选择也被用来评估社会动机。试用通常首先将测试鼠标在一个中立的，中心室。这个任务的某些版本涉及牛逼ethering刺激老鼠一腔9。此任务的一种修改中采用的使用金属丝外壳上的刺激小鼠避免刺激动物10的束缚。最近，社会条件性位置偏爱任务被开发，其中小鼠被调节以视觉上不同的腔室与任一的存在或不存在一个社会伙伴的，然后使其探索空腔室以下调理11相关联。更多的时间在室内度过的社会配对以前发生的位置被认为是社会动机的一个指标。
所有上述范例提供与小鼠的社会表型的重要数据。然而，尽管人们可以观察到鼠标是否显示了“欲望”，寻求在上述范式社会交往，这种“欲望”， 即 ，社会的动机，实力是很难衡量的。的行为动机的强度有传统上被测量啮齿动物通过创建一种方案，其中它们具有以获得他们的动机源工作。这通常涉及啮齿动物训练在操作性范式涉及食品作为激励因素。然而，该方法以前已经用于研究社会动机大鼠，但无论是涉及获得性伴侣为雄性大鼠或，对于女性，获得自己的幼仔12,13（在Matthews 等人，2005中综述）。
此前下面描述的社会动范式的发展，只有一个社会调查的动机性动机之外使用操作性的模式小鼠12等研究。在这一系列的实验中，远交瑞士韦伯斯特小鼠进行了培训，按一个杠杆，以获得一个同性同种。在一项实验中，一个显著减少延迟开始响应的访问目标鳞状ê表现在单独圈养小鼠相比，群养小鼠建议增加的动机，寻求在这些社会孤立的小鼠的社会服务。在同一研究中的另一个实验中，比较了盐水和催产素拮抗剂（阿托西班）注入小鼠之间进行比较。有趣的是，药物注入小鼠表现出显著增加延迟时间，以应对开始访问目标服务器鼠标提示主动性降低了社会报酬在这些小鼠。
虽然这些实验代表了贵金属试图量化社会动机小鼠使用操作性条件，他们也被高度限制和在使用时的下述方法有很大提高。例如，在第一个实验中一个明显的根本缺陷上述（实际研究的实验2）是研究人员仅使用2跨测试天交替目标老鼠。此前有研究表明，社会认可，在群养老鼠可以持续至少7天从而降低社会调查与反复暴露于相同的目标14。然而，社会认可在单独圈养大鼠和小鼠中1消散- 2小时，使得社会调查的持续时间保持在基准水平，如果一个重复暴露于相同的靶是初始曝光15-17后至少2小时。单独圈养小鼠的降低延迟开始响应的报道，在马修斯社会访问等人的实验可能是缺乏跨测试天12社会识别靶小鼠的结果。这种潜在的变乱是通过使用一种新的靶小鼠在每个试验日，在下面的方法来控制对。此外，在从Matthews 等。研究两个实验如上所述，没有报告在组之间进行杠杆压力机的总数不同。这可能是在总杠杆压力机的差可能是恩，如果检测的研究人员利用的反应逐渐增加的比例，以奖励在我们下面列出的研究设计中使用。此外，访问目标小鼠手动控制被实验者，通过抬起一个盒子，覆盖了目标。用于访问目标鼠标使用一种自动控闸刀门的消除伪影的可能性由于实验者的存在。事实上，为了完全自动化的社会动操作性范式，研究设备进行了定制，详情如下。
Protocol
这项研究是经梓太平洋大学机构动物护理和使用委员会。所有涉及动物的程序进行了以下的指南实验动物的护理和使用来自美国国立卫生研究院的建议。
1.修改设备的社会动机和价对比测试范式
- 为了测试小鼠的社会行为的操作性任务，修改中心通道模块化梭箱。这些穿梭箱测量44厘米×17.3厘米和由有机玻璃和不锈钢。
- 通过安装一个线栅的门框的面修改可编程闸门。线栅应允许有限的社会接触，但不使小鼠跨越从一个腔室到另一个。
- 使用可编程闸门，将每个箱子分成两个腔：每个测量约22厘米×17.3厘米。指定一个腔室中日Ë试验箱和其他作为靶室。
- 将鼠标杠杆在相反的断头台门墙的试验室。将两个鼠标杆之间的液体食物瓢插座。
- 程序鼠标杆要么打开闸门或呈现液体食物奖励，这取决于测试的范例。
- 连接手持按钮的装置和程序，开启闸门（用于测试小鼠的手动整形）。
- 适合每个穿梭箱与一个八信道的I / R控制器横跨各室的金属网格地板监视活动。装入USB数字视频摄像机的测试室的上方，并将其连接到一台计算机。括三聚氰胺声音衰减隔间内的整个装置。
- 运行使用写在实验室定制方案操作性程序。
2.塑造小鼠，为社会动机范式
- 将测试鼠标在试验Chamber及年龄，性别相匹配的刺激小鼠的靶室。
- 训练测试鼠标按下杠杆打开使用成型或连续逼近加固到所需操作反应的方法中的闸门。在此成形过程中，通过按下编程以控制闸门手持按钮手动递送加固。
注意：加固由穿过线栅打开闸门15秒，从而允许访问刺激小鼠。 - 观察鼠标在使用相机安装在试验室上方的测试室。
- 训练每只小鼠在一系列30分钟的日常会话，直到他们证明至少有10操作性响应（杠杆压力机）中有3个连续5届的测试。通过使用随机分配班车盒旋转老鼠。
- 如果小鼠后30天的培训课程没有达到这个标准，请从实验和DESI小鼠gnate非学习者。
注：每日培训课程的数量可以延长到30取决于研究者的偏好。 - 交替成形，使得不同的小鼠用于每隔一天期间使用的刺激小鼠。
- 用70％乙醇每次训练之间穿梭清洁箱。此外，在完成用消毒清洁剂，每天测试，所有设备的下面。
3.测试中的社会动范式小鼠
- 放置在试验室训练有素的试验小鼠和年龄和性别匹配的刺激小鼠在靶室。在测试过程中，使用至少10个刺激小鼠池分配给每个测试鼠标，使刺激小鼠后，10每天测试会议只是重复。不使用成形用于在测试期间所使用的刺激小鼠。
- 程序闸门打开钢筋上的进步比进度，使得操作性重数量必要获得的15秒访问目标鼠标的社会报酬sponses（杠杆压力机）算术由3每次试验的固定速率增加。
- 程序测试会话结束时，测试鼠标停止杆挤压连续五分钟。
- 记录的最后完成的（增强）之比为断点。使用此相关的措施，因为社会动机的一个指标。测试每只小鼠连续20届每天或至少10测试阶段后，渐近性能水平观察。
- 擦拭用70％的乙醇和完成使用消毒洗涤剂每天测试的以下各个测试会话之间穿梭盒子。
社会的4价比较对战食物奖赏
- 毕竟小鼠完成的社会动模式，旨在向社会悬赏的价与食物奖励的对比任务测试这些小鼠相同。
- 计划一个杠杆打开闸门和呈现社会报酬为15秒和编程相反杆呈现的液体食物奖励15秒。
注：在本协议中所用的液体食物奖励包括淡奶甜与0.2％的蔗糖。反复呈现的0.02毫升奖励给每个小鼠制备足够量（通常是500ml）中。 - 指定测试小鼠交替杆/回报突发来控制小鼠之间潜在的杠杆偏见。因此，分配一半的小鼠每个测试组中，以左杆/食物奖励，右杆/社会应急奖励，另一半为左杆/社会回报和右杆/食物奖励应急。
- 培养小鼠与社会食物奖励的价比较。
- 将测试鼠标在试验室，并把年龄和性别匹配的刺激鼠标在靶室。
- 只作一个杠杆/每次训练期间应急奖励活跃。培训包括每天偶然性之间轮流6 1小时的会议。分配给每个鼠标测试每其他社会奖励备选会议小鼠的刺激。
- 在训练和测试用食物奖励维持其自由采食食物饮食小鼠。食物剥夺是不必要的小鼠与使用淡炼乳和蔗糖溶液18的操作条件。
- 测试小鼠与社会食物奖励的价比较。
- 编程钢筋的时间表以3固定比率：1，使每一个第三杆压被加强，而仅由它的各个相关联的奖励。
- 程序测试会运行60分钟。
- 将测试鼠标在试验室，并把年龄和性别匹配的刺激鼠标在靶室。注：在社会动机任务中使用10刺激小鼠相同的池可以再次使用，但分配到使用10天循环测试小鼠。
- 特ST小鼠在以下6天的培训，或为后续观察渐近性能水平至少每天10届20届日报。对于这个范例的主要依赖措施是杠杆压力机每个奖励类型的总数。
- 再次，擦拭用70％乙醇和下面的每个测试日使用消毒清洁剂测试会话之间穿梭箱。
Representative Results
此协议已被用于亲社会C57BL / 6J系小鼠品系与已经先前报告，以显示BTBR近交小鼠品系比较减少在社会行为10,18。它也被用于社会动机在假设已经增加或减少社会动机不同基因敲除小鼠品系的特征。以前发表的结果进行比较的C57BL / 6J和BTBR近交小鼠品系示于图1中 。这些结果表明相比于C57BL / 6J小鼠降低社会动机BTBR小鼠。韦伦比较模式也表现出减少食物动机BTBR小鼠暗示的动机行为这株（ 图1B）全面下降。
图2A呈现在C57BL / 6背景比较株野生型的兄弟姐妹和杂一些homozygo未公布的初步数据我们兄弟姐妹淘汰赛与减少或缺如蛋白质产物的基因（基因X）假设，以促进社会的动力。 图2B呈现在C57BL / 6背景比较株野生型的兄弟姐妹杂淘汰赛兄弟姐妹从降低蛋白质产品的一些未公布的初步数据一个基因（Y）假设以减少社会的动机。从这些研究的初步数据支持每个相应假说和进一步说明描述的操作性社会动机范式的值。
图1.此前公布的结果从社会动机和价比较范式。 （一）单独圈养（IH）B6小鼠，群养（GH）B6小鼠，和群养小鼠BTBR跨越最后10天测试的平均断点的社会动的任务。有共有9各组小鼠的。单独和群养B6小鼠进行的类似，但有群养B6和BTBR小鼠（T = 2.741，DF = 16，P = 0.015）之间的差异显著（B）食物奖励和社会奖励的平均数该群养B6和BTBR小鼠跨越价比较范式的最后10届。两个鼠标群体获得的不是社会的回报显著更多的食物奖励（BTBR：T = 3.551，DF = 8，P = 0.007; B6：T = 9.478，DF = 8，P <0.001）。然而，BTBR小鼠获得比B6小鼠显著较少食物奖励和也最少数量的社会奖励（叔= 3.321，自由度= 16，p值= 0.004）。图修改从参考18。
从利用的社会动范式未发表的研究图2代表性的结果。（A）平均断点（最后钢筋比）达到之前将小鼠停止杆挤压5分钟。用于基因的X，共有12个WT，7 HET和6 KO小鼠中的社会动范例进行了测试。方差分析显示基因型（F = 7.18，DF = 2，22，P = 0.004）之间的差异显著。事后杜克HSD试验表明，KO小鼠低于WT对照显著进行。（B）对于基因Y，共8 HET和6 WT小鼠进行了测试。独立样本t检验显示基因型之间的差异显著（T = 2.26，DF = 8.97，P = 0.05）。 *表示从WT小鼠显著差异在0.05 Alpha级别。
Discussion
在这篇文章中所描述的操作性的社会范式的动机是在人类疾病的小鼠模型社会行为的表征功能强大的工具。而不是让一个测试鼠标选择被动地社会的遭遇，这些范式需要从测试鼠标的努力，才能获得社会的回报。的努力，测试鼠标愿意生产，以获得社会报酬的数额提供的社会动机的定量测量。此外，通过比较价模式，激励行为可以在不同类型的奖励相比。这两个操作性范例可以用于通过呈现适当的刺激的闸刀门的另一侧，以评估性和亲动机为好。
这些社会动机范式的发展涉及到的几个关键变量的处理方法。例如，通过试点研究的时间量，社会奖励我š呈现降低从30秒到15秒。而这一次是足够的试验和刺激的小鼠之间的社会交往，今后的研究可以优化的时间量为社会奖励。同样，杠杆压力机社会回报的递增比例从5到3基于研究试点固定利率降低。
必要的天数达到渐近杆挤压行为，通过日常测试会议后的30天内进行初步评估。经测定，大部分小鼠达到渐近线7天，以便测试会话数降至20日的表现也不过波动，所以在最后10天的平均数据，确保渐近性能，同时还提供了真正的平均性能更好的指标不是更少的测试天。研究人员应监控其数据，以确保在10天的测试达到渐近性能或协议为根据需要修改。
TRA进不去会议还下调1小时至30分钟。不依赖于鼠标应变所需的培训和一些老鼠的数量可以任意指定为培训班18固定数量后nonlearners。对要达到的标准晋升的测试模式培训天数提供的社会动机的另一个指标，因此是值得跟踪。研究人员还可能要进行实验的比较价不同范式食物奖励的选项。但是，重要的是，在测试的小鼠最初训练有素使用纯粹社会报酬，然后开始价比较范例之前在社会动机范例测试。
这些操作性社会动机范例可以修改和通过测量高于上述协议表示的附加变量提高时。例如，每只小鼠在其各自的腔室的位置可以使用Cu被跟踪rrently提供商业软件。此外，可以在社会交往打进特定的行为，包括鼻对鼻的接触或超声波发声。研究人员可以进一步的实验与调整中的社会动范式或涉及缺乏社会合作伙伴，甚至涉及到后面的闸门等刺激比较试验中使用的比例，如一个同种甚至是傀儡的视频。对于比较价范式，分析动态选择跨试验可以提供关于因饱食为特定类型的奖励轮班18动机的进一步信息。
虽然这些操作性的社会动机范式提供了急需的工具，在小鼠量化社会的动机，他们确实有一定的局限性。首先，这些范式要求老鼠有认知能力，使杆挤压和社会收益之间的关联了解到。某些小鼠模型可能在认知和社交能力的缺陷使之难以利用这些范式评估社会动机。第二，社会遭遇的性质是有限的小鼠只允许跨越的线栅相互作用。然而，老鼠仍然能够成功地参与许多典型的社会行为，最值得注意的是，鼻对鼻的调查。这些方法之一最终限制是，它们是劳动密集型的，并且需要大量的时间来完成的。通过两种范例的训练和测试需要至少每日会话两个月。有些小鼠可能需要更长的时间来学习杆压关联拉伸会话所需数量。而范式当然没有资格作为高通量技术，它们生成的数据是非常有价值的，值得所需的劳动力投入。然而，为了提供特定的小鼠模型的社会行为的更充分的表征，所以建议这些范式是我们编与测量小鼠社会行为的建立等方法结合。
Disclosures
作者有没有竞争的财务权益。
Acknowledgments
我们感谢教师研究理事会梓太平洋大学的资金支持。我们也感谢施耐德阿什利，迈克尔·格雷格和汉娜样的技术支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Modular Shuttle Box | Med Associates Inc. | ENV-010MC | |
| Auto-Guillotine Door | Med Associates Inc. | ENV-010B | |
| Mouse Levers | Med Associates Inc. | ENV-3010M | |
| Liquid Dipper with Food Receptacle | Med Associates Inc. | ENV-202M-S | |
| Eight-Channel I/R Controller | Med Associates Inc. | ENV-253C | |
| Melamine Sound-Attenuating Cubicle | Med Associates Inc. | ENV-016MD | |
| MED-PC IV Software Program | Med Associates Inc. | MED-PC IV | |
| Microsoft Lifecam Camera | Microsoft | ||
| Wire Grid | Wire grids can be purchases from a hardward store. We cut wire grids from stainless steel mouse cage tops. | ||
| 70% Ethyl Alcohol | Used to clean shuttle boxes between mice. Specific brand is unnecessary. | ||
| Evaportated Milk | Carnation | 0.02 ml combined with 0.2% sucrose for each reward per mouse. We always purchase the same brand for better consistency. | |
| Sucrose | Any brand of pure granular sugar will due as it is dissolved in the evaporated milk. |
References
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