Непрямой иммунофлюоресценции на замороженные Разделы молочной железы мыши
Summary
Косвенным протокол иммунофлюоресценции описано в этой статье позволяет обнаруживать и локализовать белков в молочной железе мыши. Полный метод ее подготовки молочных желез образцы, для выполнения иммуногистохимии, чтобы изображение на срезах тканей с помощью флуоресцентной микроскопии, и, чтобы восстановить изображение.
Abstract
Непрямой иммунофлуоресценции используется для обнаружения и определения местоположения интерес белков в ткани. Протокол, представленные здесь описывает полное и простой способ для иммунной обнаружения белков, мышь лактирующих молочную железу, принимаемых в качестве примера. Протокол для подготовки образцов ткани, особенно в отношении рассечение молочной железы мыши, ткани фиксации и замороженной ткани срезов, подробно. Стандартный протокол для выполнения непрямой иммунофлюоресценции, в том числе дополнительного шага поиска антигена, также представлены. Наблюдение меченых срезов, а также получение изображений и пост-обработки также заявил. Эта процедура дает полный обзор, из коллекции тканей животных в клеточной локализации белка. Хотя это общий способ может быть применен к другим образцов ткани, она должна быть приспособлена к каждой ткани / первичным антителом пару изучены.
Introduction
Молочная железа является нетипичным млекопитающих экзокринной орган, основной функцией которого является производство молока, чтобы кормить новорожденных. Развитие ткани молочной железы происходит главным образом после родов и характеризуется уникального процесса, в котором эпителий вторжению в окружающую строму. Эта ткань подвергается много изменений (рост, дифференцировку и регрессия), особенно во время взрослой жизни, одновременно с изменениями в репродуктивного статуса (рисунок 1). В дополнение к общей морфологии ткани, пропорции различных типов клеток, а также их расположение в молочной железе резко изменяются в течение развития 1-5.
Во время эмбрионального жизни, молочной эпителия происходит от молочных линий молоко, которое определяется небольшим утолщением и стратификации эктодермы, между передними и задними конечностями с каждой стороны от средней линии вокруг эмбрионального день 10,5 (E10.5) (рис 1А ).На E11.5, молокопровод распадается на отдельные плакодах, которые симметрично расположены вдоль линии молочной молоко воспроизводимых местах, и окружающие мезенхимы начинает конденсироваться. Плакод начинают все глубже в дерму и молочной мезенхимы организует в концентрических слоев вокруг молочной зародыше (E12.5-E14.5). По E15.5, молочной эпителий, начинает размножаться и удлиненные, чтобы сформировать первичную росток, который толкает через молочной мезенхимы к жировой ткани. Основной росток развивает полый просвет с отверстием для кожи, отмеченной формирования соска оболочки. На E18.5, то удлиняя канал превратился в жировой ткани и имеет разветвленную в небольшой arborized системы протоков охватила в жировой ткани. Разработка, по существу, арестован и в зачаточном состоянии молочной железы остается морфогенетически покоя до наступления половой зрелости. В мужской эмбрион, активация рецепторов андрогенов приводит к дегенерации почек, которые исчезаютпо E15.5. По E18, молочной развития не перестает до полового созревания 6-9.
При рождении, молочной железы таит в себе элементарное систему протоков, что продлевает и филиалы медленно (изометрической роста). В начале полового созревания, сферические структуры, расположенные на кончиках протоков называют концевой почки (TEBS), образуются из внешнего слоя клеток рака простаты и многослойной внутреннего ядра клеток (клеток тела). Эти структуры являются весьма пролиферативного и проникнуть в окружающую ткань стромы в ответ на гормональные сигналы. Распространение в результатах TEBS в протоковой удлинения, в сочетании с морфогенеза ветвления. Этот процесс приводит к созданию основного эпителиального arborized сети, исходящей из соска (рис 1B, период полового созревания). В ~ 10-12 недель после рождения, когда эпителий вторглись весь жировой ткани, ее расширение прекращается и TEBS исчезают. Развитие протоков затем подвергается динамические изменения, т.е. успехуве пролиферацию и регресс эпителиальных клеток в соответствии с эстрального цикла 10 (Рис 1В, взрослых).
С самого начала беременности, молочной ткани подвергается существенный рост и морфологические изменения, чтобы подготовиться к лактации. Молочная эпителия интенсивно пролиферируют и дифференцируются, что ведет к сильно разветвленного тубуло-альвеолярного сети. Одновременно, эпителиальных клеток молочной железы (МИК) поляризованы и способны синтезировать и секретировать молочные продукты. МИК организовать в многочисленных альвеолярных структур (ацинусов), которые окружены сократительных клеток миоэпителиальных и включены в строме, состоящей из соединительной ткани и жировой, кровеносных сосудов и нервных окончаний (Фигура 1В, беременность). Кроме того, базальные сторона MECs находится в тесном контакте с базальной мембраной (внеклеточного матрикса), и взаимодействие между этими двумя организациями плотно регулировать как морфогенез и секреторную функцию молочной железыры эпителий 11-13.
Все эти процессы опираются на действия различных экологических киев, из которых наиболее важными являются hormones14, паракринных факторов и внеклеточного матрикса. Например, прогестерон вызывает обширный боковой ветвления 15 и alveologenesis, что, в сочетании с пролактина (PRL) 16,17, продвигает и поддерживает дифференцировку альвеол. В дополнение к стероидам и PRL18, цитокинов и сигнальных путей, связанных с развитием (Wnt и Notch сигнальными путями) также участвуют в молочной приверженности клонов и развития 19-21. В конце беременности, просвета МИК начинают производить богатой белком молока, известный как молозиво в просвете альвеол. Кроме того, прогестерон действует на эпителиальной проницаемости и так как плотные соединения остаются открытыми, молозиво также в материнском кровотоке.
После родов, то Mammarу эпителий занимает почти всю молочную железу и объема имеет высокую степень организации (рисунок 2, эпителия молочной железы). Молоко производящих единиц, а именно альвеолы (Рисунок 2, альвеолы), формируются монослоя поляризованных эпителиальных молочных секреторных клеток (MESCs), с их апикальной плазматической мембраны разграничения просвет. Альвеолы организовать себя на дольки, которые сгруппированы в долях, связанных с каналами, которые истощают молоко с внешним среде (рис 2, доли). Лактации происходит, т.е.., MESCs начинают секретировать обильные количества молока, в первую очередь вызвано снижением плацентарных гормонов (главным образом прогестерон) (фиг.1В, лактации). Гены молочного белка активируются в определенном временном время хода в диапазоне от беременности лактации 9,22,23, главным образом, в ответ на PRL гипофиза, опубликованном в момент кормления грудью. Одновременно, контакты между MESCs и внеклеточного матрикса как стимулировать молочный белок SYNThesis через сигналы, которые передаются через взаимодействий между клеточными интегринов и ламинином 24,25, подавляющих апоптоз и в MESCs 26,27. Эти сигнальные пути приводит к активации молочного белка промоторов генов 28 через активацию факторов транскрипции конкретного 29. Межклеточных контактов также важны для некоторых аспектов дифференцировки, включая создание верхушечного полярности и векторной секреции молочных продуктов. Плотные соединения быстро закрыть после начала лактации и MESCs мелко организовать поглощение молекул из крови, а также синтеза, транспорта и секреции молочных компонентов, в ответ на потребности в питании новорожденных. Во время сосания, сокращение миоэпителиальных клеток, окружающих альвеолы происходит в ответ на окситоцина и приводит к выделению молока по протокам и в соске. Молоко представляет собой сложную жидкость, которая содержит белки (в основномказеин), сахара (в основном лактозы), липиды и минеральные вещества, а также биологически активные молекулы, такие как иммуноглобулины (IgA), факторов роста и гормонов. Казеины синтезируются, собраны в супрамолекулярных структур, а именно казеин мицеллы, транспортируемые вдоль секреторного пути, а затем выпущен экзоцитоза, то есть сплав казеина, содержащего секреторные везикулы (КА) с апикальной мембране мЭСК (рисунок 2).
Внутриклеточного транспорта зависит от материальных обменов между мембранных отсеков и включает в себя Растворимый N-этилмалеимид-Чувствительный Fusion (NSF) Приложение белка (SNAP) рецепторов (SNARE) 30,31. Семья SNARE белки подразделяется на везикулярного SNAREs (V-ловушки), присутствующих в мембране везикул и целевых SNAREs (т-ловушки), локализованные на целевых мембран. По сжать через их биспиральных доменов, V и Т-SNAREs собрать с образованием высокостабильный четыре спиралей комплекс, называют йе SNARE комплекс. Этот комплекс способствует сочетание двух противоположных липидного бислоя постепенно привести их в непосредственной близости 30,32. Впоследствии, Малый комплексы диссоциируют на NSF аденозинтрифосфатазы и его адаптер белка SNAP и малого белки возвращают обратно в купе происхождения 33. Интересно, что каждый белок SNARE преимущественно проживает в различных клеточных отсеках и малого спаривания может внести свой вклад в специфичность внутриклеточных событий термоядерных 34. Предыдущие исследования показывают, что, по крайней мере Синаптосомальное-ассоциированный белок 23 (SNAP23) и везикул-ассоциированный мембранный белок 8 (VAMP8) и syntaxins (STX) -7 -12 и играют важную роль в казеина экзоцитоза 35,36. Эти белки были также обнаружены в ассоциации с липидной фракции молока, т.е. молоко жировых шариков (МФГС) 37. В настоящее время преобладает модель постулирует, что цитоплазматические капли липидов (CLDs) образуются в результате накопления нейтральной лipids (главным образом триглицериды и эфиры стеринов) и холестерин, полученный от материнской диете между двумя листовок эндоплазматическая сеть (ЭР) мембраны 38-41. Большие CLDs формируются, по крайней мере частично, путем слияния меньших CLDs во время транспортировки в апикальной стороне MESCs где они будут освобождены, как MFGS (1-10 мкм в диаметре) почкованием, будучи enwrapped по MESC апикальной мембране 40-42. Кормление грудью прекращается через щенки отнимают и MESCs постепенно умирают путем апоптоза, что приводит к регрессии ткани молочной железы обратно в пубертатном состоянии (рис 1B, инволюция).
Иммунофлуоресценции (ИФ) является общим аналитическая лаборатория метод используется практически во всех аспектах биологии, и в научных исследованиях и в клинической диагностике. Если методы могут быть выполнены на срезах тканей (иммуногистохимия, IHC) или (иммуноцитохимия, ICC) Образцы клеток. Этот мощный подход основан на использовании fluorescent-меченые антитела, которые специфически связываются (прямо или косвенно) к интересующему антигену, таким образом позволяя визуализацию его распределение в тканях через флуоресцентной микроскопии. Флуоресцентных сигналов во многом зависит от качества и концентрации антител и надлежащей обработки образца. Простой непрямой иммунофлюоресценции (IIF) протокол представлен для обнаружения молочные продукты (казеин и МФГС) и белков, участвующих в секреции молочных продуктов (butyrophilin (btn1), Малый белки) на замороженных участках молочной железы мыши ткани (рисунок 3). Хотя этот протокол обеспечивает полный обзор IHC, начиная от сбора ткани для изображения после лечения, важно и дополнительных шагов, а также некоторых технических рекомендаций также представлены и обсуждены.
Protocol
Representative Results
Discussion
IHC является относительно простой и прямой экспериментальный метод локализации антигена в срезах тканей, которые в первую очередь зависит специфический эпитоп-антитело взаимодействий. Хотя большое количество протоколов используются для локализации белка на IIF, сердечник из этих проц?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы благодарны основной изображений объекта ИНРА MIMA2 (INRA, UMR1198, Жуи-ан-Жоза) и сотрудникам аппарата IERP (UE 0907, ИНРА, Жуи-ан-Жоза) для ухода за животными и удобствам. Мы хотели бы также поблагодарить IH Mather, MC Невилл и С. Туз за предоставление нам очень полезную antibodie.
Materials
| Dissection | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Pins | |||
| Ethanol | |||
| Scissors | |||
| Scalpel and adapted blades | |||
| Ice | |||
| Towel paper | |||
| Tissue sample preparation | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Phosphate Buffered Saline (pH7.4) | Sigma | P-3813 | |
| Paraformaldehyde (PFA, 32% EM grade, 100 ml) | Electron Microscopy Sciences | 15714-S | personnal protection equipment required WARNING: this product will expose you to Formaldehyde Gas, a chemical known to cause cancer |
| OCT compound/Tissue Tek | Sakura | 4583 | |
| Sucrose (D-saccharose) | VWR | 27480.294 | |
| Plastic molds | Dominique Dutscher | 39910 | |
| Liquid nitrogen | |||
| Cryostat/sample support | Leica | CM3050S | |
| Razor blades (SEC35) | Thermo Scientific | 152200 | |
| Slide box | |||
| Glass slides Superfrost/Superfrost Ultra Plus | Thermo Scientific | 10143560W90/1014356190 | |
| Brushes | |||
| IHC | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Super Pap Pen | Sigma | Z377821-1EA | |
| Permanent marker (black) | |||
| 50 mM NH4Cl in PBS | Sigma | A-0171 | |
| 0.1 M glycine in PBS | VWR | 24403.367 | |
| Antigen Retrieval solution: Tris 100 mM 5% urea pH9.6 | |||
| Heater (up to 100°C) | |||
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A7906-100G | |
| Vectashield (anti-fading mounting medium) without DAPI/with DAPI | Vector Laboratories | H-1000/H-1200 | |
| Glass coverslips 22x50mm (microscopy grade) | VWR | CORN2980-225 | |
| Nail polish | |||
| Primary antibodies | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Rabbit anti-mouse caseins (#7781; 1:50 dilution) | generously gifted by M.C. Neville (University of Colorado Health Sciences Center, USA) |
||
| Mouse anti-cytokeratin 8 (CK8, clone 1E8, 1:50 dilution) | Biolegend (Covance) | MMS-162P | |
| Mouse anti-cytokeratin 14 (CK14, cloneLL002, 1:50 dilution) | Thermo Scientific | MS-115-P0/P1 | |
| Rabbit anti-butyrophilin (1:300 dilution) | generously gifted by I.H. Mather (Department of Animal and Avian Sciences University of Maryland College Park, USA) | ||
| Rabbit anti-Stx6 (1:50 dilution) | generously gifted S. Tooze (Cancer Research UK, London Research Institute, London, UK) |
||
| Rabbit anti-VAMP4 (1:50 dilution) | Abcam | ab3348 | |
| Secondary antibodies | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Rhodamine-conjugated goat anti-rabbit IgG (H + L) (1:300 dilution) | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 111-025-003 | |
| Counterstains | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Bodipy 493/503 | Life Technologies (Molecular Probes) | D-3922 | |
| DAPI (4-6-diamidino-2-phenylindole) | Life Technologies (Molecular Probes) | D-1306 | |
| Observation/Image capture | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| conventional fluorescence microscope | Leica Leitz DMRB microscope |
Standard filters for FITC, Rhodamine and DAPI emissions, ×63 oil-immersion objective (NA 1.3), DP50 imaging camera (Olympus), CellˆF software (Olympus) |
|
| Laser Scanning Microscope (confocal microscopy) | Zeiss LSM 510 microscope |
Plan-Apochromat ×63 oil-immersion objective (NA 1.4), CLSM 510 software, Confocal facilities, MIMA2 Platform, INRA Jouy-en-Josas, France, http://mima2.jouy.inra.fr/mima2) | |
| Image treatment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| ImageJ 1.49k software | Free software |
References
- Watson, C. J., Khaled, W. T. Mammary development in the embryo and adult: a journey of morphogenesis and commitment. Development. , 135-995 (2008).
- Smith, G. H. Experimental mammary epithelial morphogenesis in an in vivo model: evidence for distinct cellular progenitors of the ductal and lobular phenotype. Breast Cancer Res Treat. 39, 21-31 (1996).
- Van Keymeulen, A., et al. Distinct stem cells contribute to mammary gland development and maintenance. Nature. 479, 189-193 (2011).
- Oakes, S. R., Gallego-Ortega, D., Ormandy, C. J. The mammary cellular hierarchy and breast cancer. Cell Mol Life Sci. 71, 4301-4324 (2014).
- Visvader, J. E., Stingl, J. Mammary stem cells and the differentiation hierarchy: current status and perspectives. Genes & development. 28, 1143-1158 (2014).
- Robinson, G. W. Cooperation of signalling pathways in embryonic mammary gland development. Nat Rev Genet. 8, 963-972 (2007).
- Cowin, P., Wysolmerski, J. Molecular mechanisms guiding embryonic mammary gland development. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2, a003251 (2010).
- Brisken, C., O’Malley, B. Hormone action in the mammary gland. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2, a003178 (2010).
- Gjorevski, N., Nelson, C. M. Integrated morphodynamic signalling of the mammary gland. Nat Rev Mol Cell Biol. 12, 581-593 (2011).
- Daniel, C. W., Smith, G. H. The mammary gland: a model for development. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 4, 3-8 (1999).
- Howlett, A. R., Bissell, M. J. The influence of tissue microenvironment (stroma and extracellular matrix) on the development and function of mammary epithelium. Epithelial Cell Biol. 2, 79-89 (1993).
- Edwards, G., Streuli, C. Signalling in extracellular-matrix-mediated control of epithelial cell phenotype. Biochem Soc Trans. 23, 464-468 (1995).
- Hennighausen, L., Robinson, G. W. Think globally, act locally: the making of a mouse mammary gland. Genes & development. 12, 449-455 (1998).
- Topper, Y. J., Freeman, C. S. Multiple hormone interactions in the developmental biology of the mammary gland. Physiol Rev. 60, 1049-1106 (1980).
- Brisken, C., et al. A paracrine role for the epithelial progesterone receptor in mammary gland development. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 5076-5081 (1998).
- Ormandy, C. J., Binart, N., Kelly, P. A. Mammary gland development in prolactin receptor knockout mice. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 2, 355-364 (1997).
- Oakes, S. R., Rogers, R. L., Naylor, M. J., Ormandy, C. J. Prolactin regulation of mammary gland development. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 13, 13-28 (2008).
- Hennighausen, L., Robinson, G. W. Information networks in the mammary gland. Nat Rev Mol Cell Biol. 6, 715-725 (2005).
- Kouros-Mehr, H., Werb, Z. Candidate regulators of mammary branching morphogenesis identified by genome-wide transcript analysis. Dev Dyn. 235, 3404-3412 (2006).
- Khaled, W. T., et al. The IL-4/IL-13/Stat6 signalling pathway promotes luminal mammary epithelial cell development. Development. 134, 2739-2750 (2007).
- Asselin-Labat, M. L., et al. Gata-3 is an essential regulator of mammary-gland morphogenesis and luminal-cell differentiation. Nat Cell Biol. 9, 201-209 (2007).
- Barcellos-Hoff, M. H., Aggeler, J., Ram, T. G., Bissell, M. J. Functional differentiation and alveolar morphogenesis of primary mammary cultures on reconstituted basement membrane. Development. 105, 223-235 (1989).
- Robinson, G. W., McKnight, R. A., Smith, G. H., Hennighausen, L. Mammary epithelial cells undergo secretory differentiation in cycling virgins but require pregnancy for the establishment of terminal differentiation. Development. 121, 2079-2090 (1995).
- Streuli, C. H., Bissell, M. J. Mammary epithelial cells, extracellular matrix, and gene expression. Cancer Treat Res. 53, 365-381 (1991).
- Streuli, C. H., et al. Laminin mediates tissue-specific gene expression in mammary epithelia. J Cell Biol. 129, 591-603 (1995).
- Boudreau, N., Sympson, C. J., Werb, Z., Bissell, M. J. Suppression of ICE and apoptosis in mammary epithelial cells by extracellular matrix. Science. 267, 891-893 (1995).
- Pullan, S., et al. Requirement of basement membrane for the suppression of programmed cell death in mammary epithelium. J Cell Sci. 109 (Pt 3), 631-642 (1996).
- Schmidhauser, C., Bissell, M. J., Myers, C. A., Casperson, G. F. Extracellular matrix and hormones transcriptionally regulate bovine beta-casein 5′ sequences in stably transfected mouse mammary cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 87, 9118-9122 (1990).
- Streuli, C. H., et al. Stat5 as a target for regulation by extracellular matrix. J Biol Chem. 270, 21639-21644 (1995).
- Sollner, T., et al. SNAP receptors implicated in vesicle targeting and fusion. Nature. 362, 318-324 (1993).
- Jahn, R., Scheller, R. H. SNAREs–engines for membrane fusion. Nat Rev Mol Cell Biol. 7, 631-643 (2006).
- Weber, T., et al. SNAREpins: minimal machinery for membrane fusion. Cell. 92, 759-772 (1998).
- Sollner, T., Bennett, M. K., Whiteheart, S. W., Scheller, R. H., Rothman, J. E. A protein assembly-disassembly pathway in vitro that may correspond to sequential steps of synaptic vesicle docking, activation, and fusion. Cell. 75, 409-418 (1993).
- McNew, J. A. Regulation of SNARE-mediated membrane fusion during exocytosis. Chem Rev. 108, 1669-1686 (2008).
- Wang, C. C., et al. VAMP8/endobrevin as a general vesicular SNARE for regulated exocytosis of the exocrine system. Mol Biol Cell. 18, 1056-1063 (2007).
- Chat, S., et al. Characterisation of the potential SNARE proteins relevant to milk product release by mouse mammary epithelial cells. Eur J Cell Biol. 90, 401-413 (2011).
- Reinhardt, T. A., Lippolis, J. D. Bovine milk fat globule membrane proteome. J Dairy Res. 73, 406-416 (2006).
- Robenek, H., et al. Butyrophilin controls milk fat globule secretion. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 10385-10390 (2006).
- Fujimoto, T., Ohsaki, Y., Cheng, J., Suzuki, M., Shinohara, Y. Lipid droplets: a classic organelle with new outfits. Histochem Cell Biol. 130, 263-279 (2008).
- Mather, I. H., Keenan, T. W. Origin and secretion of milk lipids. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 3, 259-273 (1998).
- Heid, H. W., Keenan, T. W. Intracellular origin and secretion of milk fat globules. Eur J Cell Biol. 84, 245-258 (2005).
- McManaman, J. L., Russell, T. D., Schaack, J., Orlicky, D. J., Robenek, H. Molecular determinants of milk lipid secretion. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 12, 259-268 (2007).
- de Assis, S., Warri, A., Cruz, M. I., Hilakivi-Clarke, L. Changes in mammary gland morphology and breast cancer risk in rats. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).
- Plante, I., Stewart, M. K., Laird, D. W. Evaluation of mammary gland development and function in mouse models. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).
- Galio, L., et al. MicroRNA in the ovine mammary gland during early pregnancy: spatial and temporal expression of miR-21, miR-205, and miR-200. Physiol Genomics. 45, 151-161 (2013).
- Linzell, J. L., Peaker, M. The effects of oxytocin and milk removal on milk secretion in the goat. J Physiol. 216, 717-734 (1971).
- Knight, C. H., Peaker, M., Wilde, C. J. Local control of mammary development and function. Rev Reprod. 3, 104-112 (1998).
- Walid, M. S., Osborne, T. J., Robinson, J. S. Primary brain sarcoma or metastatic carcinoma?. Indian J Cancer. 46, 174-175 (2009).
- Hue-Beauvais, C., et al. Localisation of caveolin in mammary tissue depends on cell type. Cell Tissue Res. 328, 521-536 (2007).
- McManaman, J. L., Neville, M. C. Mammary physiology and milk secretion. Adv Drug Deliv Rev. 55, 629-641 (2003).
- Mather, I. H., Jack, L. J. A review of the molecular and cellular biology of butyrophilin, the major protein of bovine milk fat globule membrane. J Dairy Sci. 76, 3832-3850 (1993).
- Heid, H. W., Winter, S., Bruder, G., Keenan, T. W., Jarasch, E. D. Butyrophilin, an apical plasma membrane-associated glycoprotein characteristic of lactating mammary glands of diverse species. Biochim Biophys Acta. 728, 228-238 (1983).
- Bock, J. B., Klumperman, J., Davanger, S., Scheller, R. H. Syntaxin 6 functions in trans-Golgi network vesicle trafficking. Mol Biol Cell. 8, 1261-1271 (1997).
- Tran, T. H., Zeng, Q., Hong, W. VAMP4 cycles from the cell surface to the trans-Golgi network via sorting and recycling endosomes. J Cell Sci. 120, 1028-1041 (2007).
- Wendler, F., Page, L., Urbe, S., Tooze, S. A. Homotypic fusion of immature secretory granules during maturation requires syntaxin 6. Mol Biol Cell. 12, 1699-1709 (2001).
- Wendler, F., Tooze, S. Syntaxin 6: the promiscuous behaviour of a SNARE protein. Traffic. 2, 606-611 (2001).
- Shitara, A., et al. VAMP4 is required to maintain the ribbon structure of the Golgi apparatus. Mol Cell Biochem. 380, 11-21 (2013).
- Thibault, C., Levasseur, M. C. . La reproduction chez les mammifères et l’homme. , 928 (2001).
- Truchet, S., Wietzerbin, J., Debey, P. Mouse oocytes and preimplantation embryos bear the two sub-units of interferon-gamma receptor. Mol Reprod Dev. 60, 319-330 (2001).
