Protocol
يجب أن تتم جميع الإجراءات الدم الرسم من قبل المتخصصين مرخصة ومعتمدة. استخدام الإنسان للبحث ينطوي على موافقة مجلس المراجعة المؤسسية أو سلطة مناسبة أخرى. احتياطات خاصة فيما يتعلق الموافقة المستنيرة وحماية الهوية مشارك يتعين أن يتبع. جميع التجارب الواردة في هذا البروتوكول تنطوي على معالجة الدم البشري و / أو منتجات الدم ومعدات الوقاية الشخصية المناسبة تحتاج إلى أن ترتديه في جميع الأوقات. ينبغي النظر في النفايات كما اقية والتخلص منها وفقا للوائح.
1. بزل الوريد
- التعرف على المريض / مشارك وتأكيد مع السجلات الموجودة. شرح الدراسة في التفاصيل والحصول على الموافقة المسبقة.
- هل لديك علبة إعداد للمريض مع أنابيب ملحوظ على سطح مستو وثابت.
- شرح الإجراءات وجعل المقعد المريض بشكل مريح مع الذراع معتمد. إعلام المريض انه او SHوه يشعرون قرصة صغيرة ويجب أن تبقى لا تزال في جميع أنحاء الداخلي.
- إرفاق الإبرة إلى محول.
- غسل اليدين وارتداء القفازات.
- تحضير الحفرة المرفقية لبزل الوريد عن طريق تنظيف مع 70٪ ايزوبروبيل في دوائر متحدة المركز من مركز إلى الخارج. يسمح الموقع لتجف في الهواء لمدة 30 ثانية.
- تحديد الوريد المناسب بالجس.
- تطبيق وقف النزف 3-4 في أعلى الموقع ثقب التأكد من أنها ليست ضيقة جدا (في حين لا يزال جس النبض الكعبري).
- أداء بزل الوريد عن طريق إدخال شطبة من الإبرة 15-30 درجة إلى الجلد في الحركة السلسة واحد. دفع أنبوب جمع الدم من خلال إبرة وجمع 9 مل من الدم الكامل.
- إزالة وقف النزف. إزالة أنبوب من الإبرة.
- سحب الإبرة وتطبيق ساحة الشاش في موقع ثقب قبل إزالة الإبرة. التخلص الإبرة في وعاء واقية مناسبة.
- نسأل المريض للحفاظ على العلاقات العامةessure في موقع ثقب.
- تسمية أنابيب
- التحقق من موقع ثقب للتأكد من توقف النزيف.
- تطبيق ضمادة لاصقة أو الشريط على الساحة الشاش، أسأل ما إذا كان المريض يشعر بخير (لا أشعر بأي ألم، تورم أو الدوار الخفيف)
- شكرا المريض / مشارك قبل تصريفها.
2. L-PRF إعداد
- مباشرة بعد جمع الدم الوريدي في الحمراء تصدرت أنبوب زجاجي جاف، وضعه في أجهزة الطرد المركزي.
- أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 12 دقيقة في RT بعد وضع توازن مناسب مضادة.
- إزالة أنبوب في نهاية الدورة. لاحظ ثلاث طبقات: الصفائح الدموية الفقراء البلازما (PPP)،-الصفائح الدموية الغنية الفيبرين (L-PRF) وقاعدة RBC (الشكل 1).
- نضح PPP باستخدام ماصة. باستخدام الملقط سحب بلطف L-PRF من ووضعه في العقيمة، مثقب شبكة معدنية.
- باستخدام مشرط جراحي، كشط الجزء الأكبر من طبقة RBC ترك بعناية برتقاليذ معطف سليمة.
- ضغط بلطف الجلطة L-PRF (باستخدام لوحة معدنية معقمة، الوزن التقريبي 225 غ) لمدة 30 ثانية. سوف يكون ضغط الصفائح الدموية البلازما الفقيرة.
- إزالة لوحة ورفع بلطف الغشاء L-PRF. غشاء L-PRF جاهزا للاستخدام في التجارب 12.
3. أحادي المحور اختبار الشد
- مكان الأغشية L-PRF (ن = 6) على ورق الترشيح لسهولة التعامل وكمة إلى "عظام الكلب" باستخدام يموت حسب الطلب المعدنية (2.75 ملم واسعة عند أضيق نقطة مع طول قياس 7.5 ملم).
- قياس سماكة من كل عينة في ثلاث نقاط واتخاذ المتوسط.
- المشاركة بعناية غشاء L-PRF في مركز السيطرة الفك من نظام الاختبار ذو محورين.
- المسيل للدموع بعناية دعامة الورق المدون لفضح غشاء L-PRF.
- برنامج الصك حتى أن رئيس متحرك يعمل بمعدل ثابت (10.0 مم / دقيقة) وتبدأ التجربة عندما L-PRF لا تزال رطبة.
- تسجيل معامل المرونة والطاقة لكسر، والتوتر في استراحة من البرامج المصاحبة للاختبار نظام أحادي المحور. وتحسب هذه القيم تلقائيا ودون حاجة للمدخلات التي يحددها المستخدم. الرجاء انظر الشكل 3.
4. خياطة الاحتفاظ القوة
- مكان الأغشية L-PRF (ن = 3) على ورقة مرشح لسهولة المناولة ومقطعة إلى عينات مستطيلة قياس (10 ملم × 25 ملم) باستخدام مشرط جراحي.
- قياس سماكة من كل عينة (متوسط 3).
- جعل ثقب صغير في وسط العينة باستخدام الفولاذ المقاوم للصدأ سلك رباط التقويمي (220 ميكرون في القطر).
- تمرير سلك رباط من خلال الثقب لتشكيل حلقة واصلاحها لآلة اختبار الشد. ضع حافة الغشاء L-PRF إلى انخفاض قبضة الفك 13.
- برنامج الصك حتى أن رئيس متحرك يعمل بمعدل ثابت (10 مم / دقيقة) وبدايةالتجربة.
- تسجيل معامل المرونة والطاقة لكسر، والتوتر في استراحة من البرامج المصاحبة للاختبار نظام أحادي المحور. وتحسب هذه القيم تلقائيا ودون حاجة للمدخلات التي يحددها المستخدم. الرجاء انظر الشكل 3.
5. فحص الصرفي
- إعداد العينات L-PRF للفحص SEM باستخدام 10 ملم خزعة الجلد لكمة ووضعها في لوحة 24-جيدا.
- غسل العينات مع PBS وإصلاح مع 2.5٪ غلوتارالدهيد (في PBS) لمدة 20 دقيقة.
- يذوى العينات عن طريق الغمر في زيادة بالتسلسل تركيزات الإيثانول (50٪، 70٪، 80٪، 90٪ و 100٪) لمدة 5 دقائق لكل منهما.
- علاج مع 0.5 مل من HMDS٪ 100 (Hexamethyldisilazane) لمدة 5 دقائق. تهوية O / N لإزالة الزائدة HMDS 14.
- جبل العينات على بذرة باستخدام الشريط على الوجهين، تفل معطف البلاتين لمدة 70 ثانية، وتدرس في المجهر الإلكتروني الماسح العاملة في لالتسارعeration الجهد 20 كيلو فولت (أو الإعداد المناسب).
6. Genipin يشابك من L-PRF، التربسين حساسية والنينهيدرين الفحص
- لإعداد genipin عبر ربط L-PRF، وشطف الأغشية مع برنامج تلفزيوني ونقع في 4 مل من 1٪ محلول genipin (في 70٪ من الإيثانول) لمدة 48 ساعة. شطف مع برنامج تلفزيوني قبل التجارب لإزالة الزائدة genipin 15، 16.
- تقييم استقرار يشابك genipin من L-PRF التي كتبها مقاومته للتحلل بواسطة التربسين. المكان L-PRF غشاء (ن = 3) وgenipin crosslinked L-PRF في 500 ميكرولتر من 0.01٪ التربسين وحضنت عند 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام مع التغيير اليومي من التربسين.
- وزن العينات في يوم 1 قبل انزيم التعرض وفي اليوم 3. الفرق في البداية والنهاية الوزن يمثل تدهور الأنزيمية 17.
- قياس كمية من عبر ربط في genipin تعامل L-PRF (G-PRF) من خلال النينهيدرين الفحص. أولا إعداد المنحنيات القياسيةالبريد باستخدام الجلايسين (1 ملم 0،031 ملم) منحنى لتأسيس العلاقة بين تركيز الأمينية الحرة حمض (FAA) والامتصاصية.
- عينات الحرارة PRF مع 1 مل من 2٪ (ث / ت) النينهيدرين لمدة 15 دقيقة في 100 درجة مئوية.
- السماح للحل لتبريد لRT وإضافة 1.5 مل من 50٪ من الإيثانول.
- تحليل الامتصاصية في 570 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي مناسبة.
- تحديد النسبة المئوية عبر ربط باستخدام صيغة أقل من 15
7. MTS تكاثر الخلايا الفحص
- تنمو MC3T3 (الماوس preosteoblasts قبي) في الحد الأدنى الضروري المتوسطة -alpha تعديل (αMEM) في T-75 قوارير حتى يتم الحصول على متكدسة أحادي الطبقة 80٪.
- إعداد جديدة، معقم L-PRF غشاء (فتح أنبوب L-PRF داخل الخلية هود الثقافة) ونقل الغشاء على طبق ثقافة الخلايا الجديدة.
- وسائل الإعلام نضح من القارورة وشطف أحادي الطبقة مع برنامج تلفزيوني، إضافة 5 مل من 0.05٪ التربسين ووضع القارورة في C الحاضنة 37 درجة لمدة 5 دقائق، ماصة محتويات القارورة في أنبوب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 5 دقيقة.
- صب طاف، بلطف الاستفادة من أنبوب لكسر بيليه الخلايا وإعادة تعليق مع 4 مل من MEM α جديدة، الاستغناء عن خليط من تعليق خلية (50 ميكرولتر) والأزرق التريبان (50 ميكرولتر) في عدادة الكريات وحساب عدد الخلايا
- البذور 4x10 5 الخلايا في غضون 10 مم حلقات الزجاج الاستنساخ وضعت على رأس الأغشية L-PRF الإبقاء على الخلايا داخل الأغشية (حلقات يمكن إزالتها بعد 24 ساعة).
- في يوم 4، وشطف يبني مع PBS ثلاث مرات لمدة 10 دقيقة.
- إضافة 1 مل من وسائل الإعلام الحرة المصل و 200 ميكرولتر MTS الكاشف إلى كل بئر واحتضان لمدة 2 ساعة على 37 درجة مئوية.
- قياس الامتصاصية من 200 مكل في 490 نانومتر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
مسح الإلكترون صورة المجهر من جلطة L-PRF في أقسام مختلفة (أعلى والمتوسطة والقاع) ويتضح طبقة في الشكل (2). كما يمكن أن يرى، ويتكون الجزء العلوي في الغالب من شبكة الليفين مع عدم وجود الخلايا. غير المخصب وطبقة وسطى مع الصفائح الدموية مع دليل على تفعيل وتحبب. الطبقة السفلى لديها مزيج من كريات الدم البيضاء وخلايا الدم الحمراء شرك داخل مصفوفة الفيبرين.
تم تقييم الخواص الميكانيكية في وضعين: ذو محورين اختبار الشد والاحتفاظ خياطة اختبار قوة. أظهرت النتائج السلوك اللزجة من L-PRF. على الرغم من أن معامل مرونة منخفض (0،47 ميجا باسكال)، والغشاء صعبة (الطاقة لكسر، 5 N · ملم)، وقادر على خضوعه لتشوه كبير (217٪، الشكل 3). بيانات من اختبار الاحتفاظ خياطة، وهو مؤشر على قدرة الغشاء إلى أن خياطة للأنسجة، اقترح صعبة إلى حد كبيرالثاني مادة تشوه (معامل 0.2 ميجا باسكال، سلالة 140٪ والطاقة لكسر-3.2 N.mm) في L-PRF (الشكل 4).
واحدة من القيود المفروضة على المنتجات الليفين في الطب التجديدي هو حياتها البيولوجية قصيرة. مصنوعة من الليفين الذاتية، L-PRF هو عرضة للانزيم تدهور ويخضع انحلال الفيبرين. من أجل تقييم مقاومة L-PRF إلى تدهور انزيم بوساطة، تعرض الطازجة L-PRF للعلاج التربسين (0.01٪) وحضنت في 37 درجة مئوية. لاحظنا تدهور كامل للL-PRF في غضون ثلاثة أيام. يشابك Genipin الأغشية L-PRF انخفض تدهور بنسبة 60٪ (الشكل 5).
تم تقييم قدرة الأغشية L-PRF لدعم نمو الخلايا عن طريق زراعة الماوس بانيات قبي على الأغشية crosslinked وuncrosslinked. خضعت جلطات Uncrosslinked التدهور على مختلف المستويات في حين احتفظت genipin crosslinked الأغشية هيكلها ودعمت جالذراع النمو (الشكل 6).
الشكل 1. خطوات في توليد L-PRF. (A) بعد الطرد المركزي من الدم الكامل في أنبوب زجاجي، وثلاث طبقات تكون مرئية. (B) بعد الصب حزب الشعب الباكستاني، يتم إزالة L-PRF باستخدام ملاقط معقمة . يتم كشط (C) وقاعدة خلايا الدم الحمراء قبالة باستخدام مشرط وضعت على صينية معدنية مثقبة (D). بعد ضغط لطيف، وتقلص PPP بها ويتم تشكيل غشاء L-PRF ثابتة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. منحنيات الإجهاد والانفعال التالية تحميل الميكانيكي للL-PRF في ذو محورين وضع اختبار الشد (A) وقوة الاحتفاظ خياطة (B). ويمثل نمط تحميل كل عينة في لون مختلف. وذو محورين بيانات اختبار الشد (A) تشير إلى وجود معامل منخفضة، وتشوه مرونة كبيرة والفشل السريع. على انتفاخ قبل خياطة (B)، L-PRF يمثل الغشاء الذي هو صعبة (منطقة تحت منحنى) وكذلك قابل للتمدد. تجمع بأس بها من بيانات تشير إلى الحد الأدنى من الاختلاف بين العينات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4. صور من الفشل الفعلي في اختبار خياطة قوة الأداء. تم تمرير 220 ميكرون سميكة الفولاذ المقاوم للصدأ سلك رباط تقويم الأسنان عن طريق الوسط من L-PRF، وتعادل لعضو الفك العلوي من آلة اختبار الشد. كان يعلق الطرف الآخر إلى انخفاض قبضة وامتدت بمعدل ثابت. لاحظ استطالة الغشاء ومقاومته للالمسيل للدموع، مما يدل على مرونة ممتازة من L-PRF.OM / ملفات / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5. تدهور الأغشية L-PRF التالية حضانة في 0.01٪ التربسين. تفككت جميع الأغشية L-PRF تماما في التربسين في غضون 3 أيام، بينما كانت genipin-crosslinked L-PRF 60٪ أكثر استقرارا. هذا يدل على أن يشابك الكيميائي يمكن أن يكون استراتيجية ناجعة لتحسين طول العمر من الأغشية L-PRF عند وضعه في الجسم الحي.
الرقم 6. تأثير L-PRF يشابك على بقاء الخلية. الصور التمثيلية للثقافة 4 يوم الخلايا MC3T3 على uncrosslinked L-PRF (A)،-crosslinked genipin L-PRF (B) لالثاني البلاستيك زراعة الأنسجة (C). Uncrosslinked L-PRF المتدهورة في الثقافة إلى حد متغير وأظهرت نشاط الخلايا مماثلة لمن البلاستيك. حافظ Genipin crosslinked L-PRF هيكلها ودعم بقاء الخلية قوية. إلى اليمين هي البيانات الكمية (+ SD) من تجارب مستقلة مع ثلاثة مكررات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
مركزات الصفائح الدموية ذاتي واعدة في مجال الطب التجديدي 18 بسبب وفرة من عوامل النمو. ومع ذلك، هذه الاستعدادات غالبا ما تفتقر إلى بنية المعرفة التي تجعل من التلاعب جراحية صعبة للغاية. وفي كثير من الأحيان، لا يتم الاحتفاظ المعلقات والمواد الهلامية على نحو فعال في موقع التسليم، مما يؤدي إلى نتائج غير متوقعة. L-PRF يمثل تقدما كبيرا في تطور الصفائح الدموية يركز في أنه هو أساسا غشاء الفيبرين حازما مع الصفائح الدموية شرك. هذه الأغشية الصلبة تمتلك التعامل مع خصائص ممتازة، ويمكن أن تخاط بشكل آمن في مكان المطلوب تشريحيا أثناء العمليات الجراحية المفتوحة. ومع ذلك، الخصائص الفيزيائية والبيولوجية غير معروفة نسبيا.
سوف L-PRF تشكيل باستمرار عند الخطوات المذكورة أعلاه التقيد التام بها (الشكل 1). أحد الاعتبارات الهامة في توليد غشاء L-PRF الجيد هو منظمة الشفافية الدوليةلي تأخير بين سحب الدم والطرد المركزي. نجاح تقنية L-PRF يعتمد كليا على سرعة جمع الدم ونقل على الفور إلى أجهزة الطرد المركزي 19، عادة في غضون دقيقة واحدة. فمن المستحيل لتوليد L-PRF جلطة منظم بشكل جيد (مع محتوى الخلية، والهندسة المعمارية مصفوفة والنمو الافراج عن عامل صورتها معين)، وإذا طال أمد حصاد الدم وليس متجانسة؛ تشكيل غير متماسكة، كتلة تفتيت صغيرة من الفيبرين مع محتوى غير معروف بدلا من ذلك.
وقد قبلت أن التفاعلات mechanobiological بين الخلايا والمصفوفة خارج الخلية (ECM) لها تأثير حاسم في جميع جوانب السلوك الخلية بما في ذلك الهجرة، وانتشار والتمايز 20،21. L-PRF، وهو نوع فريد من تجلط الدم، ويتكون في ظروف محددة ويتكون من التعقيد، شبكة متفرعة من الفيبرين. وظائف L-PRF باعتباره ECM المؤقت الذي تم تسليمه إلى أنسجة وظيفية خلال الشفاء. التعرض للمقوات echanical، نتائج الشفاء الناجحة هي التي تعتمد على السلامة الهيكلية للL-PRF، وبالتالي توضيح خصائصها الفيزيائية هو المهم. أجرينا اختبار الشد أحادي المحور (لتحديد خصائص المواد الجوهرية) واختبار الاحتفاظ خياطة (التعرف على خصائص فشل) على الطازجة L-PRF. على عكس هلام PRP أو الدم يتخثر ليس لديها هياكل محددة، L-PRF يشبه النسيج الضام كثيفة مع التعامل مع خصائص متفوقة. نحن الإبلاغ عن معامل مرونة من 0.470 ميجا باسكال (SD = 0.107) للأغشية L-PRF وتمتد مرتين طوله الأولي قبل فشل (سلالة من 215٪). هذه المباراة البيانات مع الكتابات المنشورة 22،23 الذين أفادوا صلابة منخفضة (1-10 ميجا باسكال) وسلالة عالية (تصل إلى 150٪) قبل أن يكسر. الفرق في القيم يمكن أن يكون نتيجة لاستخدام شبكة الليفين بالمقارنة مع استخدام التحليل AFM من الألياف الليفين واحد في الدراسات المذكورة أعلاه.
قوة الاحتفاظ خياطة هي جراحيامعلمة هامة من المواد الكسب غير المشروع ويتم تعريفه باعتباره القوة اللازمة لسحب الخيط من الكسب غير المشروع أو تسبب الجدار من الكسب غير المشروع فشل. تجاربنا استخدمت مباشرة عبر إجراء (على النحو المحدد ANSI 24). القوة المطلوبة لسحب سلك رباط من خلال L-PRF 3.23 N.mm (SD = 0.329). عموما، وجدنا L-PRF أن تكون صعبة ميكانيكيا، قادرة على دعم الأحمال والقدرة على التمدد ضعفي على التوتر ويحتفظ الغرز بشكل جيد جدا (بتشوهات بشكل كبير قبل تمزق).
عدم وجود استقرار وسلامة الهيكلية للL-PRF في بيئات البيولوجية يشكل قيدا رئيسيا في استخدامه في هندسة الأنسجة. سعينا لمعالجة هذه المشكلة عن طريق يشابك كيميائيا L-PRF باستخدام genipin. على عكس gluteraldehyde الذي يرتبط مع سمية، genipin هو جزيء قابلة للتحلل طبيعيا مع انخفاض السمية الخلوية. بعد العلاج genipin، كانت الأغشية مستقرة إلى حد كبير في التربسين وسوبوrted تكاثر الخلايا على مدى 4 أيام. ومع ذلك، كان crosslinked 20٪ فقط من L-PRF مع genipin (يحدده الفحص النينهيدرين). وتشير هذه البيانات أنه في حين أن يشابك الكيميائي هو استراتيجية قابلة للحياة، يجب إيجاد بدائل أخرى من يكتشفها.
وبناء على هذه النتائج، فإنه من الواضح أن L-PRF هو مادة بيولوجية جديدة مع سمات فريدة من نوعها: إعداد يمكن التنبؤ به من الدم الذاتي، بساطة البروتوكول، والهندسة المعمارية محددة، الخواص الميكانيكية للإعجاب وفرة من عوامل النمو من الصفائح الدموية تفعيلها. يسمح على تجلط الدم في ظل الظروف الفسيولوجية مع عدم التعرض لمضادات التخثر، الثرومبين خارجي وكلوريد الكالسيوم. كل هذه الخصائص تجعل L-PRF اعدة بيولوجية للتطبيقات في الطب التجديدي.
واحدة من القضايا السريرية للتعامل معها في تطبيق L-PRF هو الاختلاف في نوعية الصفائح الدموية ومكونات الدم. في الوقت الحاضر، ومن المفهوم القليل جدا عنL-PRF المتولدة من المرضى الذين يعانون من اضطرابات تجلط الدم أو المرضى على الأدوية التي تؤثر على تخثر الدم (الهيبارين، الوارفرين أو مثبطات الصفيحات). والإجابة على هذه الأسئلة مما لا شك فيه تحسين فهمنا للشفاء وكذلك المساهمة في دفع عجلة مجال الطب الشخصي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما تكشف وتؤكد أنه لا توجد صراعات معروف في المصالح المرتبطة بهذا المنشور.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Needle 19G | BD | 305186 | |
| Needle Disposal Container | Fisherbrand | 14-827-122 | |
| Red-Topped Glass Collection Tube | BD | 8020129 | |
| Gauze Pads | Tyco | 5750 | |
| Bandage | Johnson & Johnson | 5005989 | |
| Surshield | Terumo | SV*S19BL | Safety winged infusion set |
| Blood Collection Assembly | BD | 303380 | |
| Tourniquets | BD | 367203 | |
| Brand Luer Adapter | Vacutainer | L42179 | |
| Intra-Spin System | Intra-Lock International | ISS110 | Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit |
| Pipettes (Serological & Micro) | Corning | ||
| Scalpel | Exelint | 29552 | |
| MTS Bionix 200 | MTS Systems Corporation | Material testing systems | |
| MTS Test Works 4 | MTS Systems Corporation | ||
| Whatman Filter Paper | Whatman | 1004 070 | |
| SS Orthodontic ligature wire | Patterson Dental | 628-4228 | |
| 200 Proof Ethanol | Koptec | V1001 | |
| Hexamethyldisilazane (HMDS) | Aldrich | 440191 | |
| Aluminium Mounting Stubs | Ted Pella | 16324 | |
| Double Sided Carbon Tape | PELCO Tabs | 16084-1 | |
| Scanning Electron Microscope | JEOL | LV 5610 | |
| Trypsin | HyClone | SH30042.01 | |
| Cell Culture Incubator | Thermo Fisher Scientific Inc | 51026282 | |
| Antibiotic-Antimicotic | Gibco | 15240-062 | |
| Genipin | Wako | 078-03021 | |
| Cell Culture Media | Gibco | 12000-022 | Minimum Essential Medium-Alpha |
| MTS Reagent | Promega | G1118 | |
| PMS Reagent | Sigma | P9625 | |
| Spectrophotometer | BioTek | Epoch Spectrophotometer | |
| 10mm Glass Cloning Rings | Corning | 3166-10 | |
| T-75 Flask | Corning | 430641 | |
| DPBS | Corning | 55-031-PB | |
| Ninhydrin 98% | Aldrich | 454044 | |
| 24 Well Plate | Corning | 3987 | |
| Biopsy Punch | Acu Punch | P1025 | |
| Digital Micrometer | Pittsburgh | 68305 | |
| Glutaraldehyde | Sigma | G6257 | |
| 12 Well Plate | Corning | 3336 | |
| 96 Well Plate | Corning | 3596 |
References
- Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85 (6), 638-646 (1998).
- Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
- Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13 (7), 1207-1230 (2012).
- Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97 (2), 110-118 (2009).
- Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17 (6), 687-693 (2006).
- Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3 (2), 740-761 (2011).
- Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7 (10), 819-830 (2013).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).
- Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e45-e50 (2006).
- Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), 299-303 (2006).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13 (7), 1145-1152 (2012).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27 (3), 158-167 (2009).
- Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64 (2), 121-128 (2010).
- Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186 (1), 84-87 (1997).
- Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68 (3), 561-567 (2007).
- Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3 (4), (2008).
- Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
- Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine , In Tech. 319-349 (2011).
- Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110 (4), 413-416 (2010).
- Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47 (9), 1931-1932 (2014).
- Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47 (9), 1933-1940 (2014).
- Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102 (26), 9133-9137 (2005).
- Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313 (5787), 634 (2006).
- American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. , ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).
